用于治疗病毒感染的新核苷类似物的制作方法

专利名称：用于治疗病毒感染的新核苷类似物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的化合物，其用于治疗病毒感染。本发明还涉及包含该化合物的药物组合物、制备它们的方法以及化合物在多种医药应用中的用
途，例如治疗或预防病毒感染，特别是登革病毒(dengue virus)、黄热病病毒(yellow fever virus)、 西尼罗河病毒(West Nile vi賜)、日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)、碑媒脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus)、昆金病毒(Kunjin virus)、墨累谷脑炎(Murray Valley encephalitis)、圣路易斯脑炎(St Louis encephalitis)、奥马斯克出血热病毒(Omsk hemorrhagicfever virus)、 牛病毒性腹渴病毒(bovine viral diarrhea virus)、 齐卡病毒(Zika virus)和丙型肝炎病毒(H印atitis C virus),更特别是登革病毒和丙型肝炎病毒。背景
登革热是由四种登革病毒血清型DEN-l、 DEN-2、 DEN-3和DEN-4(其属于黄病毒科(F/flWv/nV/fle))中的一种《1起的发热疾病。该病毒最初由埃及斑蚊04eflfe "egy/^/)(—种吸食人的蚊子)传染给人。
感染产生一系列临床表现，从较弱的流行性感冒样症状至更加严重并且有时致命的出血性疾病。典型的症状包括发烧、剧烈头痛、肌肉和关节疼痛和疹。该疾病的更严重的形式是登革出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)。根据WHO, DHF存在四个主要的临^J^现(1)高烧(2)出血现象(3)血小板减少和(4)血浆泄漏。DSS被定义为DHF加上弱的疾脉以及脉压窄或寒冷引起的低血压、冷湿皮肤和多动。DHF的严重程度可以通过早期检测和干涉来降低，但是休克的患者处于死亡高风险中。
登革热在热带地区，特别是在亚洲、非洲和拉丁美洲流行，估计25亿人生活在处于感染危险的区域中。每年发生约4千万例登革热病和数十万例DHF。在新加坡，2005年的流行导致超过12000例登革热。200880003104.0
尽管是有规律的爆发，但是先前受感染的人仍然易受到感染侵袭，因为存在四种不同血清型的登革病毒，并且由这些血清型中的一种引起感染
仅对该血清型提供免疫力。相信DHF更可能发生在第二次登革热感染的患者中。正在寻找登革热、DHF和DSS的有效的疗法。
黄热病病毒(YFV)、西尼罗河病毒(WNV)、日本脑炎病毒(JEV)、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒(HCV)也属于黄病毒科。
WNV可以是无症状的，或者其在某些个体中可以导致流行性感冒样症状。在某些病例中，其导致神经学障碍、脑炎，并且在严重的病例中可以导致死亡。WNV也是通过蚊子传播的。YFV是另一种蚊子传播的病毒，其在感染的个体中可以导致严重的症状。JEV也是通过蚊子传播的，并且或者是无症状的，或者导致流行性感冒样症状，在某些病例中发展成脑炎。该疾病的急性脑炎期的特征在于惊厥、颈强直和其它症状。
HCV是血液传播的病毒，其通过血液-血液接触而传播。在该疾病的初(急性)期，大多数患者将不表现出任何症状。甚至在慢性期(即疾病持续超过6个月)，患者与患者的症状的严重程度可以不同。在长期，某些感染
的人可能发展成肝硬化和肝癌。对于HCV，目前的治疗包括干扰素a和利巴韦林(一种抗病毒药)的组合。
同样，正在寻找由这些黄病毒科病毒引起的感染的有效的疗法。
目前令人惊奇地发现某些核苷类似物用于治疗病毒感染，例如由黄病毒科病毒引起的那些感染，所述的黄病毒科病毒特别是登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒，以及本文描述的其它黄病毒科病毒。
本发明的目的是提供新的化合物。提供此类化合物例如在治疗病毒感染中的用途也是本发明的目的。
发明的公开内容
本发明提供了化合物及其药物组合物，其用于治疗病毒感染。第一方面，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐或前药
6R1
(I)
其中
X是CH或CR4;Rl是卣素、NR5R6或OR7;R2是H、卣素或NR5R6;
R3是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；
R4是烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、卣素、氰基、硝基、羟基、烷氧基、烷基硫代、氩基、烷基氨基、氣基、酰胺或烷基氧基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；
R5和R6独立地选自H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羟基、烷氧基、芳基羰基和烷基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；并且
R7是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、烷基羰基或芳基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代。
第二方面，本发明提供了式(n)化合物或其可药用盐或前药
R1
HO OH
其中
X是CH或CR4;Rl是卣素、NR5R6或OR7;R2是H、卣素或NR5R6;
R3是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；
R4是烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、卣素、氰基、硝基、羟基、烷氧基、烷基硫代、氨基、烷基氨基、羧基、酰胺或
烷基氧基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；
R5和R6独立地选自H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羟基、烷氧基、芳基羰基和烷基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；并且
R7是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、烷基羰基或芳基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代。
在以上式(I)和(H)的某些实例中，X是CH。在其它实例中，X是CR4。
在以上式(I)和(II)中，R3可以是例如H、烷基、环烷基、芳基、链烯基或炔基。在某些实例中，R3是H、低级烷基、低级链烯基或低级炔基，在某些实例中，R3是H、低级烷基或低级炔基。在某些实例中，R3是H或乙炔基。
在以上式(I)和(II)中，R4可以是例如面素、烷基、环烷基、芳基、链烯基或炔基。在某些实例中，R4是卣素、低级烷基、低级链烯基或低级炔基。在某些实例中，R4是F、 I或低级炔基，例如乙炔基。
在以上式(I)和(II)中，R2可以是例如H或NR5R6，其中R5和R6独立地选自H、烷基、链烯基和炔基。在某些实例中，R2是H。在其它实例中，R2是NH2。在其它实例中，R2是闺素。在其它实例中，R5和R6之一是H并且另一个选自烷基、链烯基和炔基。
在以上式(I)和(II)中，Rl可以是例如卤素、NR5R6或OR7，其中R7选自H、烷基、链烯基和炔基。在某些实例中，R7是低级烷基，例如甲基、乙基、丙基或丁基。在某些实例中，R7是甲基。在某些实例中，R5和R6各自独立地选自烷基、链烯基和炔基。在某些实例中，Rl是卣素、NR5R6或OR7，其中R7是H或烷基；R5和R6各自独立地选自H和烷基；R3是H或低级炔基并且R4是卣素或低级炔基。
其中R1是卣素，其可以是例如Cl或Br。在某些实例中，R1是C1。其中Rl是OR7， R7可以是H或低级垸基。在某些实例中，R7是甲基。其中Rl是NR5R6，其可以是例如NHz或NHR5，其中R5是低级烷基，例如甲基。
X可以是例如CH并且R1可以是NH2或C1。在某些实施方案中，X是CH， R1是NH2或C1，并且R2是H。
X可以是例如CR4并且Rl可以是NH2。在某些实施方案中，X是CR4并且R1是NH2，其中R4是炔基，例如低级炔基，例如乙炔基。
以上定义的式(I)或(II)化合物中的任何烷基或环烷基可以被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自囟素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。
以上定义的式(I)或(H)化合物中的任何链烯基或炔基可以被一 个或多个取代基取代，所述的取代基选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。
以上定义的式(I)或(II)化合物中的任何芳基、杂芳基或杂环基可以被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卣素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。
在某些实例中，式(I)或(II)化合物中的任何烷基、链烯基或炔基是低级烷基、链烯基或炔基。在某些实例中，式(I)或(II)化合物中的任何芳基是苯基。
一组化合物包括基本上纯的旋光异构体，其中关于所有不对称碳中心上的取代基，四氢呋喃基的立体化学(即四氢呋喃环的四个碳)与实施例1的相同。
一组化合物包括基本上纯的旋光异构体，其中关于所有不对称碳中心上的取代基，四氢呋喃基的立体化学(即四氢呋喃环的四个碳)与实施例1的相反。
在一个实施方案中，本发明提供了选自以下的化合物在另一个实施方案中，本发明提供了(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2,3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇。
在另一个实施方案中，本发明提供了(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并[2，3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇。
在另 一个实施方案中，本发明提供了 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-^J^-5-氟-吡咯并l2，3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇。
另一方面，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含以上定义的
式(i)或(n)化合物，以及至少一种可药用赋形剂，例如适合的稀释剂和/或
栽体，例如包括填充剂、粘合剂、崩解剂、流动调节剂、润滑剂、糖或甜味剂、芳香剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或緩冲剂。
另一方面，本发明提供了以上定义的式(I)或(II)化合物，其用作药物。另一方面，本发明提供了以上定义的式(I)或(II)化合物，其用于制备药物。
另一方面，本发明提供了式(I)或(II)化合物在制备用于治疗和/或预防病毒感染的药物、例如药物组合物中的用途。
另 一方面，本发明提供了式(i)或(n)化合物作为药物在例如治疗和/或预防病毒感染中的用途。
另一方面，本发明提供了以上定义的式(i)或(ii)化合物，其用于治疗和/或预防病毒感染。
另 一方面，本发明提供了以上定义的式(I)或(II)化合物在制备用于治疗和/或预防由病毒感染引起的疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了治疗和/或预防由病毒感染引起的疾病的方法，该方法包括给需要的患者施用有效量的以上定义的式(I)或(II)化合物。
另一方面，本发明提供了用于治疗和/或预防由病毒感染引起的疾病的
药物组合物，该药物组合物包含以上定义的式(i)或(n)化合物。
病毒感染是例如由黄病毒科的病毒引起的，所述的黄病毒科的病毒是例如登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病
毒性腹泻病毒、齐卡病毒、Gadgets Gully病毒(Gadgets Gully virus)、科萨努尔丛林病病毒(Kya sanur Forest disease virus)、 兰加特病毒(Langatvirus)、浪匕跃病病毒(Louping ill virus)、；皮瓦生病毒(Powassan virus)、罗亚尔农场病毒(Royal Farm virus)、卡尔希病毒(Karshi virus)、 0L丹姆病毒(Kadam virus)、 Meaban病毒(Meaban virus)、 索马勒兹碌病毒(SaumarezReefvirus)、秋歹'J尼病毒(Tyuleniy virus)、 Aroa病毒(Aroa virus)、 巴苏蜂拉病毒(Buss叫uara vius)、 Iguape病毒(Iguape virus) 、 Naranjal病毒(Naranjal virus)、 凯多各病毒(Kedougou virus) 、 Cacipacore 病毒(Cacipacore virus)、库坦戈病毒(Koutango virus)、 阿尔福病毒(Alfuyvirus)、 乌苏土病毒(Usutu virus)、雅5显^t、病毒(Yaounde virus)、克科贝拉病毒(Kokobera virus)、斯特拉特福德病毒(Stratford virus)、巴力口4匕病毒(Bagaza virus)、寸尹歹'J乌斯病毒(IIheus virus)、罗西欧病毒(Rocio virus)、以色歹'J土耳其脑脊膜脑脊髓炎病毒(Israeli turkey meningoencephalomyelitisvirus)、恩、他耶病毒(Ntaya virus)、 i旦布苏病毒(Tembusu virus)、 Sponweni病毒(Sponweni virus)、 斑齐病毒(Banzi virus)、 Bouboui病毒(Boubouivirus)、埃,杰山病毒(Edge Hill virus)、朱格拉病毒(Jugra virus)、 Potiskum病毒(Potiskum virus)、萨博亚病毒(Saboya virus)、塞皮克病毒(Sepikvirus)、乌干达病毒(Uganda virus)、威塞尔斯布隆病毒(Wesselsbron virus)、恩德培蝙蝠病毒(Entebbe bat virus)、索科洛克病毒(Sokoluk virus)、 Yokose病毒(Yokose virus)、阿普瓦病毒(Apoi virus)、考博恩里奇病毒(CowboneRidge virus)、朱蒂亚中白病毒(Jutiapa virus)、莫多克病毒(modoc virus)、 SalVieja病毒(Sal Vieja virus)、 San Perlita病毒(San Peiiita virus)、布卡拉沙蝙蝠病毒(Bukalasa bat virus)、卡勒岛病毒(Carey Island virus)、达嚷尔蝙蝠病毒(Dakar bat virus)、蒙大拿鼠耳蝙蝠白细胞脑炎病毒(Mantanamyotis leukoencephalitis virus)、 巴土穴病毒(Batu Cave virus)、粉判蝙蝠病毒(Phnom Penh bat virus)、里奥布拉伏病毒(Rio Bravo virus)、 细胞融合剂病毒(Cell fusing agent virus)、塔玛纳蝙蝠病毒(Tamana bat virus)和丙型肝炎病毒，特别是登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒，特别是登革病毒和丙型肝炎病毒。
另一方面，本发明提供了式(I)或(II)化合物与至少一种第二种药物的组合。
另一方面，本发明提供了药物组合，例如药盒，包含a)第一种药物，其是游离形式或可药用盐形式的式(I)或(II)化合物，和b)至少一种共同药物。该药盒可以包含用于其施用的"i兌明书。
在以上应用本发明化合物的方法中，式(I)或(II)化合物可以施用于包括细胞或组织的系统。在其它实施方案中，式(I)或(II)化合物可以施用于人或动物患者。
制备以上定义的式(I)或(II)化合物的方法，该方法包括将式(i)化合物或相应的环氧化物与式(ii)化合物偶联
(i)
在式(i)化合物中，基团-OY和邻近的-OH被-O-代替，<formula>formula see original document page 13</formula>得到式(iii)化合物
<formula>formula see original document page 13</formula>
其中X、 Rl、 R2和R3如以上定义的，Y表示H或烷基，例如低级烷基，例如甲基，并且Prot表示保护基，优选卡基(其任选^:一个或多个卤素取代)或苯甲酰基或曱苯酰基或甲硅烷基。如果需要，可以将式(I)化合物转化为式(I)的其它化合物。式(i)和式(ii)化合物是已知的化合物或者可以根据已知方法、例如类似于本文描述的方法制备。
本发明提供的化合物在下文中被定义为"本发明化合物"。本发明化合物包括任何形式的化合物，例如游离形式、盐形式、溶剂化物形式以及盐和溶剂化物形式。
本文所用的术语"烷基"指的是优选包含1至15个碳原子的支链或直链烃基。相同的术语适用于烷基芳基的非芳族部分。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、壬基、癸基等。烷基可以是未取代的或者任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卣素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取代的。
本文所用的术语"低级烷基"指的是包含1至6个碳原子、优选1至4个碳原子的支链或直链烷基。低级烷基的实例包括但不限于曱基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。低级烷基可以是未取代的或者任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卤素、羟基、M、烷基M、 二烷基M、烷基皿、芳基g、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取代的。术语"环烷基"指的是优选包含3至8个碳原子的饱和的或部分饱和的(非芳族)环。实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。环烷基优选是3、 5或6元环。环烷基可以是未取代的或者任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卤素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取代的。
本文所用术语"链烯基"指的是优选包含2至15个碳原子、更优选2至6个碳原子、甚至更优选2或3个碳原子并且包含一个或多个双键的支链或直链基团。链烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、壬烯基、癸烯基等。链烯基可以是未取代的或者任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自囟素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取代的。
本文所用术语"炔基"指的是优选包含2至15个碳原子、更优选2至6个碳原子、甚至更优选2或3个碳原子、并且最优选2个碳原子并且包含一个或多个三键的支链或直链基团。炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、壬炔基、癸炔基等。炔基可以是未取代的或者任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卣素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取代的。
术语"低级链烯基"和"低级炔基，，具有与以上定义的术语"低级烷基"相应的含义。低级链烯基和低级炔基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、乙炔基、丙炔基和丁炔基。低级链烯基或炔基可以是未取代的或者任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卣素、羟基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取4戈的。
本文所用的术语"烷氧基"指的是-OR,其中R是以上定义的烷基。术语"低级烷氧基，，具有与以上定义的术语"低级烷基，，相应的含义。低级烷氧基的实例包括但不限于曱氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正
14丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。低级烷氧基的典型实例包括甲氧基、乙氧基和叔丁氧基。
本文所用的术语"卣素"指的是F、 Cl、 Br或I，优选Br或Cl。本文所用的术语"芳基"指的是具有6至18个碳原子的芳族环，并且包括单环基团和多环基团，例如稠合的基团，例如二环和三环基团。优选的芳基是包含6至12个碳原子(对于单环优选6个碳原子，对于稠合的二环优选9或IO个碳原子)的那些。实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基，特别是苯基。芳基可以是未取代的或者在一个或多个环位置上被一个或多个取代基取代，所述的取代基选自卤素、羟基、氨基、烷基M、 二烷基氨基、烷基羰基、芳基羰基、氰基、硝基和叠氮基。典型地，它是未取代的。
术语"杂芳基"表示具有5至18个原子、优选5或6个原子的芳族环，环中包含至少一个杂原子，例如但不限于N、 O和S。术语"杂芳基"包括单环基团和多环基团，例如稠合的基团，例如二环和三环基团。杂芳基可以任选与 一个或多个苯环和/或另外的杂芳基环和/或脂环稠合或桥连。
术语"杂环"、"杂环烷基"或"杂环的，，表示具有5至18个原子、优选5或6个原子的饱和的或部分饱和的(非芳族)环，环中包含至少一个杂原子，例如但不限于N、 O和S。杂环可以任选与一个或多个苯环和/或另外的杂环和/或脂环稠合或桥连。
杂环和杂芳基的实例包括但不限于吗啉基、哌唤基、哌#、吡咬基、吡咯烷基、吡溱基、嘧咬基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并巧悉唑基、苯并蓉唑基、苯并吹喃基、苯并呋咱基、苯并吡峻基、苯并三峻基、苯并噻汾基、^唑基、^啉基、噌啉基、巧1咮基、异吲咮基、二氢吲哚基、咪唑基、incio!azinyl、巧l唑基、吗啉基、会鬼啉基、壹淋基、异会啉基、会峻啉基、1,2，3，4-四氢奮淋基、四氢p比喃基、四喳并p比^^、漆二唑基、噻喻基、氮杂环丁烷基、1，4-二噁烷基、六氢氮杂革基、吡啶-2-酮、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并哺、唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢异鳴唑基、二氢异嚷唑基、二氢喁二唑基、二氢嗜、唑基、二氢吡溱基、二氢吡唑基、二氢吡t基、二氢嘧咬基、二氢吡咯基、二氢会啉基、二氢四唑基、二氢逸二唑基、二氬瘗喳基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、亚甲基二氧基节基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻唑基、异噻唑基、异巧悉唑基、咪唑基、茚满基、萘吡1^
(naphthpyridinyl)、噍二唑基、噁唑基、噁唑啉、异噍唑啉、氧杂环丁烷基、吡喃基、吡漆基、吡咬并吡t基、歧"秦基、吡咯基、吡唑基、吡咯基、菲咬基、三唑基、漆吩基、呋喃基、异苯并呋喃基或四唑基，特别是含N杂环，例如吡"^基、哌梵基、嘧t基、吡咯烷基、p底噪基、异会啉基、喹唑啉基、2，2，6，6-四曱基哌^!t^基和吗淋基。
术语"烷基羰基"和"芳基羰基"包括其中羰基的碳原子与烷基或芳基部分的碳原子键合的基团。
术语"取代的"旨在描述具有取代基取代分子的一个或多个原子(例如C、 O或N)上的氢的部分。
术语"一个或多个取代基"意指至多例如3个取代基、优选一个取代基。两个或多个取代基可以是独立选择的。
多环部分包括具有两个或多个环的那些，例如环烷基、芳基、杂芳基和杂环，其中两个或多个碳是两个邻近环共有的("稠合的"环)或其中环是通过非邻近/共有原子相连的("桥连的"环)。
本文所用的术语"前药"表示式(I)或(II)化合物的药理学上可接受的衍
生物，以l更衍生物的体内生物转化产生式(i)或(n)中定义的化合物。式(i)和(II)化合物的前药可以通过修饰化合物中存在的功能团(例如羟基或制备，从而将修饰的基团在体内裂解，得到母体化合物。适合的前药包括例如酯或酰胺。
术语"盐"包括衍生自式(I)和(II)化合物的治疗活性的、无毒性的酸加成盐。酸加成盐可以是通过用适合的酸处理化合物的碱形式来获得。适合
的酸包括无机酸，例如氢卣酸，特别是盐酸、氢溴酸，硫酸、硝酸和磷酸；和有机酸，例如乙酸、羟乙酸、丙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、曱磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对曱苯磺酸、环己烷M磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸(pamoic acid)、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、乳酸、酒石酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、4-氯苯磺酸、2-M酸、樟脑磺酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基磺酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘酸和硬脂酸。
术语"保护基"表示封闭分子中官能团，以便在反应中化学选择性是可能的。适合的保护基优选是易于引入、对相关反应条件稳定并且易于除去。此类保护基是本领域技术人员已知的，并且在Theodora W Greene编写的Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)(JohnWiley & Sons Canada, Ltd)中描述。适合的保护基包括例如千基，其任选被一个或多个闺素取代(例如二氯节基)，或苯甲酰基或曱苯酰基或甲硅烷基。
术语"治疗"包括消除或减轻至少一种与所治疗的状态、疾病或障碍相关的或者由所治疗的状态、疾病或障碍引起的症状。例如，治疗可以包括消除一种或多种以下患者的病毒血症或发烧。
术语"预防"包括预防至少一种与所治疗的状态、疾病或障碍相关的或者由所治疗的状态、疾病或障碍引起的症状。例如，预防可以包括预防一种或多种以下患者的病毒血症或发烧。
术语"患者，，包括能够患有病毒感染或受到病毒感染的折磨或感染病毒感染的有才几体，例如哺乳动物例如人、猿、猴子、母牛、马、猪、绵羊、猫、狗、山羊、小鼠、兔子、大鼠和转基因非人动物。在某些实施方案中，患者是人，例如能够患有本文描述的疾病或病症或受到本文描述的疾病或病症的折磨的人，所述的疾病或病症例如由黄病毒科的病毒引起的感染，例如由登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黄病毒科病毒引起的感染。
登革病毒旨在包括任何登革病毒血清型1、 2、 3和4 "由病毒感染引起的疾病"包括患者与病毒活性相关的障碍和状态，例如病毒感染，例如在患者中由黄病毒科的病毒引起的感染，例如由登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黄病毒科病毒引起的感染。
本发明化合物的"有效量"是治疗或预防由病毒感染引起的疾病的所需或足够的量，所述的病毒感染例如由黄病毒科的病毒引起的感染，例如由登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黄病毒科病毒引起的感染，例如有效量是治疗或预防一种或多种病毒感染的症状所需的量。有效量可以取决于所用的化合物、施用方式、所需的治疗和指定的疾病以及其它因素(例如患者年龄、体重、 一般健康状况和性别)而不同。例如，本发明化合物的选择可以影响"有效量"的制定。本领域的普通技术人员将能够研究本文所描述的因素并且在没有过度的试验下确定关于本发明化合物的有效量。施用方案可以影响有效量的制定。本发明化合物可以在由病毒感染引起疾病的发作之前或之后(例如在黄病毒科的病毒引起的感染之前或之后)施用于患者。另外，数个分剂量和交错剂量可以是每天或连续施用，或者剂量可以是连续输注的，或者可以是推注的。另外，本发明化合物的剂量可以是如治疗或预防情况的紧急性所指示的按比例增加或减少。具有本领域一般^t术的医师或兽医能够容易地确定并且开出所需的有效量。例如，医师或兽医开始施用的药物组合物中所用的本发明化合物的剂量水平低于获得所需的治疗效果所需的剂量水平，并且逐渐增加剂量直至获得所需的效果。
术语"药物组合物"包括适合施用于哺乳动物、例如人的制剂，例如药物。
物转化为它们的治疗活性的、无毒性碱加成盐形式。适合的碱盐形式包括例如铵盐、碱金属和碱土金属盐，特别是锂、钠、钾、镁和钩盐，与有机
碱的盐，例如N，N，-二节基亚乙基二胺(benzathine)、 N-甲基-D-葡糖胺和羟基胺盐(hybramine)，以及与氨基酸的盐，所述的氨基酸例如精氨酸和赖氨酸。
通过用适合的碱或酸处理可以方便地将酸或碱加成盐形式转化为游离 形式。
本文中所用的术语加成盐还包括本发明化合物及其盐能够形成的溶剂 化物。此类溶剂化物包括例如7K合物和醇化物。
应当理解的是，本发明化合物可以以旋光异构体、外消旋体或非对映 异构体的形式存在。本发明的范围包括化合物的所有立体化学异构体形式。 因此，本文所用的术语"立体化学异构体形式"表示本发明化合物可以具
有的所有可能的异构体形式。特别的是，不对称碳可以具有R-或S-构型。 例如，本发明化合物的四氢呋喃基的不对称碳可以具有R-或S-构型。
还应当理解的是，本发明化合物可以以互变异构体存在。例如，本发 明化合物(其中Rl是OH或NH2，或者其中R2是NH2)可以以互变异构体 形式存在。本发明的范围包括所有此类互变异构体形式。
游离或可药用加成盐形式的本发明化合物，特别是列举的，显示出药 理学活性并且用作药物，特别用于治疗和/或预防病毒感染，例如由黄病毒 科成员引起的那些感染。化合物特别用于治疗和/或预防感染，例如由登革 病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金 病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻 病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黄病毒科病毒引起的 那些感染。
实施例1-10的化合物是优选的本发明化合物。例如已经确定本发明化 合物(包括实施例1-10的化合物)在基于细胞的黄病毒免疫(CFI)试验、基于 细胞的黄病毒细胞病变效应(CPE)试验和HCV复制子试验以及体内登革 病毒感染的小鼠模型中显示出活性。这些试验如实施例部分描述的那样进 行。
在登革病毒的CFI试验中，本发明化合物显示出ECso值小于14 ^M、 优选小于5 ^M、优选小于3 pM、更优选小于2 ^M、甚至更优选小于1 pM、 最优选小于0.8iiM。例如，实施例l的化合物的ECs。值为约0.2inM(例如 用登革病毒血清型1和登革病毒血清型4)，实施例4的化合物的ECs。值为
19约0.4 pM(例如用登革病毒血清型2)，实施例8的化合物的ECso值为约0.6 pM(例如用登革病毒血清型2)。
在黄热病病毒的CFI试验中，本发明化合物显示出ECso值小于5 |nM、 优选小于3iuM、更优选小于2^M、甚至更优选小于1.5|xM、最优选小于 0.9 |LiM。例如，实施例1的化合物的ECso值为约0.9 nM。
在西尼罗河病毒的CPE试验中，本发明化合物显示出ECso值小于5 pM、优选小于3nM、优选小于2pM、更优选小于1.5iaM、最优选小于 1.3 ^M。例如，实施例l的化合物的ECs。值为约3.75nM。
在日本脑炎病毒的CPE试验中，本发明化合物显示出ECso值小于5 ^M、更优选小于4nM。例如，实施例1的化合物的ECso值为约1.3pM。
在HCV复制子试验中，本发明化合物显示出ECso值小于5 |iM、优 选小于2 |aM、更优选小于1 nM、更优选小于0.7 pM、甚至更优选小于0.5 fiM、甚至更优选小于0.3 jiM、甚至更优选小于0.2 ^M、最优选小于0.1 pM。 例如，实施例1的化合物的ECso值为约0.1 |iM。
CFI试验是以病毒包膜蛋白质E的定量免疫检测为基础的，作为靼细 胞中病毒载量的读数。在CFI试验中，本发明化合物显示出对抗登革病毒 和黄热病病毒的活性。另夕卜，本发明化合物在CPE试验中显示出对抗日本 脑炎病毒的活性。在该试验中，本发明化合物的活性是通过评价抑制耙细 胞中病毒诱导的CPE来确定的。本发明化合物在HCV复制子试验中也显 示出对抗HCV活性。
因此，其表明对于治疗病毒感染，例如由黄病毒科的病毒引起的那些 感染，例如登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、日本脑炎病毒、蜱媒 脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、奥马斯克出血热病毒、 牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒以及本文描述的其它黄病毒 科病毒引起的感染，本发明化合物可以通过常规所用的类似的施用方式以 类似的剂量施用于更大的哺乳动物，例如人。
另外，应当理解的是，用于治疗和/或预防病毒感染的本发明化合物的 剂量范围取决于本领域技术人员已知的因素，包括所治疗的宿主、性质和 病症的严重程度、施用方式和所用的特别物质。本发明化合物的日剂量将根据所用的化合物、施用方式、所需的治疗 和指定的疾病以及其它因素(例如患者年龄、体重、 一般健康状况、病症、 先前的医疗史和性别以及医学领域中已知的因素)而不同。例如，本发明化
合物以日剂量范围约0.5 mg/kg体重至约15 mg/kg体重、例如约1 mg/kg 体重至约10 mg/kg体重施用。典型的是，对于70 kg的人，当本发明化合 物以日剂量约0.001 g至约1.5 g、例如不超过约1 g、例如约0.1 g至约0.5 g，每天至多4次施用时，可以获得满意的结果。
例如，对于实施例l的化合物，对于70 kg的人，用于治疗登革病毒 感染的指定的日剂量是约200-400 mg，优选每天施用一次。
对于药物用途，可以应用一种或多种本发明化合物，例如应用一种、 或者两种或多种本发明化合物的组合，优选一种本发明化合物。
当本发明化合物作为药物施用于患者、例如施用于哺乳动物、例如人 时，它们可以以本身施用或者作为药物组合物施用。可以将本发明化合物 配制成多种药物形式，用于这些施用目的。对于全身施用的药物，可以应 用通常所用的任何适合的组合物。可以将本发明化合物配制用于通过任何 适合途径施用，例如口服施用、非肠道施用、通过p及入喷雾剂施用、经皮 施用、鼻内施用(例如通过喷雾剂)、局部施用(例如通过散剂、软膏剂或滴 剂)、直肠施用、阴道施用、舌下施用、含服或经过植入的储库施用。在某 些实例中，本发明化合物是口服施用的。
为了制备本发明的药物组合物，将有效量的任选加成盐形式的本发明 化合物(作为活性成分)与可药用栽体以直接混合物混合。通常，制剂是通
混::制备的，然后，如果需要r将产物成;:可药用载体包括适;将本
发明化合物施用于患者的可药用材料、组合物或栽体。载体包括液体或固 体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包嚢材料，其参与将本发明化合物从 机体的一个器官或部分携带或转运至机体的另一个器官或部分。取决于施 用所需的制剂形式，载体可以采用多种形式。在一定意义上与制剂的其它 成分相容并且对患者没有危害的载体是可接受的。适合的栽体包括但不限 于糖类，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其^f生物，例如羧曱基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；西 黄蓍胶粉；麦芽；明胶；滑石粉；赋形剂，例如可可脂和栓剂石蜡；油类， 例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇 类，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类， 例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；緩冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝； 海藻酸；无热原的水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐緩冲溶液； 在口服液体制剂的情况中，水、二醇类、油类、醇类等；固体栽体例如高
岭土；其它稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂和药物制剂中所用的其它无 毒相容物质。
在组合物中还可以存在润湿剂、乳化剂和润滑剂，例如月桂基硫酸钠 和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂、 防腐剂和抗氧化剂。
可药用抗氧化剂的实例包括水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸 半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，例如 抗坏血酸棕榈酸酯、丁羟茴醚(BHA)、 丁羟曱苯(BHT)、卵磷脂、没食子 酸丙酯、a-生育酚等；以及金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、 山梨醇、酒石酸、磷酸等。
优选的药物组合物包括适合口服施用或非肠道注射施用的单位剂型的 那些。
对于口服施用，可以将化合物配制为固体或液体制剂，例如片剂、胶 嚢剂、散剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和*剂。在 制备这些口服剂型中，可以应用任何通常的药物介质，例如在口服液体制 剂的情况中，可以应用水、二醇类、油类、醇类等，或者固体载体，例如 淀粉、糖类、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。可以加入其 它组分，例如着色剂、餘朱剂或矫p木剂。由于它们易于施用，片剂和胶嚢 剂代表了最有利的口服剂量单位形式，在这种情况中可以应用固体药物栽 体。
适合口服施用的本发明制剂可以M嚢剂、扁嚢剂、丸剂、片剂、锭 剂(应用矫味的基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、散剂、颗粒剂、或在水或非水液体中的溶液剂或混悬剂，或者水包油或油包水的液体乳剂， 或者酏剂或糖浆剂，或者软锭剂(应用惰性基质，例如明胶和甘油，或蔗糖 和阿拉伯胶)和/或漱口剂等形式，每个包含预定量的本发明化合物作为活
性成分。本发明化合物还可以作为大丸剂、药糖剂(electuary)或糊剂施用。 在口服施用的本发明固体剂型(胶嚢剂、片剂、丸剂、糖锭剂、散剂、 颗粒剂等)中，将活性成分与一种或多种可药用载体(例如柠檬酸钠或磷酸 二钙)和/或任选以下物质混合填充剂或膨胀剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、 葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、 聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；保湿剂，例如甘油；崩解剂，例如 琼脂、碳酸钓、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐类和碳酸钠；溶 液阻滞剂，例如石蜡；吸收促进剂，例如季胺类化合物；润湿剂，例如鲸 蜡醇和单硬脂酸甘油酯；吸收剂，例如高岭土和皂粘土；润滑剂，例如滑 石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂^^SL酸钠以及它们的混 合物；以及着色剂。在胶嚢剂、片剂和丸剂的情况中，药物组合物还可以 包含緩冲剂。类似类型的固体组合物在软和硬填充的明胶胶嚢剂中还作为 填充剂应用，应用这些赋形剂，例如乳糖或牛奶糖以及高分子量聚乙二醇 等。
片剂可以是通过任选与 一种或多种附加成分压制或模制来制备的。压 制片可以是应用粘合剂(例如明胶或羟丙基曱基纤维素)、润滑剂、惰性稀 释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面 活性或*剂来制备的。模制片可以是通过在适合的装置中模制用惰性液 体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备的。
可以将片剂和本发明的药物组合物的其它固体剂型(例如糖锭剂、胶嚢 剂、丸剂和颗粒剂)任选压痕或与包衣和外壳、例如肠溶包衣和药物配制领 域中众所周知的其它包衣一起制备。还可以将它们配制成能够提供其中的 活性成分的緩释或控释，应用例如多种比例的羟丙基甲基纤维素以提供所 需的释放特性，其它聚合物基质、脂质体和/或微球。可以将它们通过例如 经滤菌器过滤或者通过引入无菌固体组合物形式的灭菌剂(可以将其溶于 无菌水中)或者在应用前立即引入某些其它无菌可注射介质来灭菌。这些组
23合物还可以任选包含遮光剂并且可以是仅释放活性成分的组合物，或者优 选在胃肠道的某部分，任选以延緩的方式来释放活性成分的组合物。可以 应用的包埋组合物的实例包括聚合物和石蜡。活性成分还可以是微嚢形式， 如果适合，其与一种或多种上述的赋形剂组合。
用于本发明化合物口服施用的液体剂型包括可药用乳剂、微乳剂、溶 液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除了活性成分，液体剂型可以包含本领域 常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异
丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸千酯、丙二醇、1，3-丁二醇、 油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、,油、蓖麻油和m油)、 甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨醇脂肪酸酯以及它们的混合物。
除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包含佐剂，例如润湿剂、乳化剂 和助悬剂、甜^^木剂、矫^^木剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。
除了活性化合物，混悬剂可以包含助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇、 聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、皂粘土、琼
脂和黄蓍胶以及它们的混合物。
用于直肠或阴道施用的本发明药物组合物的制剂可以作为栓剂存在， 其是通过将一种或多种本发明化合物与一种或多种适合的、无刺激性的赋 形剂或载体(包括例如可可脂、聚乙二醇、栓剂石蜡或水杨酸脂)混合来制 备的，并且其在室温下是固体，但是在体温下是液体，因此其在直肠或阴 道腔内将熔化并且释放活性化合物。
的阴道环、卫生栓、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂。 '
用于局部或经皮施用本发明化合物的剂型包拾歉剂、喷雾剂、软膏剂、 糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。可以将活性化合 物在无菌条件下与可药用栽体以及与任何可能需要的防腐剂、緩冲剂或抛 射剂混合。
除了本发明活性化合物，软青剂、糊剂、乳青剂和凝胶剂可以包含赋 形剂，例如动物和植物脂肪、油类、蜡类、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素 衍生物、聚乙二醇、硅酮、皂粘土、硅酸、滑石粉和氧化锌或它们的混合物。
除了本发明化合物，散剂和喷雾剂可以包含赋形剂，例如乳糖、滑石 粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钩和聚酰胺粉末或者这些物质的混合物。喷雾 剂还可以包含常规的抛射剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃类，例如丁 烷和丙烷。
经皮贴剂具有额外的优势，能将本发明化合物可控地递送进入机体。 此类剂型可以通过将化合物溶于或分歉于适合的介质中来制备。还可以应 用吸收增强剂以增加穿过皮肤的化合物通量。该通量的速率可以通过提供 速率控制膜或者将活性化合物*在聚合物基质或凝胶中来控制。 眼用制剂、眼膏剂、散剂、溶液剂等也包括在本发明范围内。 适用于非肠道施用的本发明药物组合物包含一种或多种本发明化合 物，与一种或多种可药用无菌等渗水或非水溶液、M液、混悬液或乳液， 或无菌粉末(其可以仅在应用前重新配制成无菌可注射溶液剂或分散剂)组 合，其可以包含抗氧化剂、緩冲剂、抑菌剂、能使制剂与预期受试者的血 液等渗的溶质或者助悬剂或增稠剂。对于非肠道组合物，栽体通常将包含 无菌水，尽管有其它成分，但是至少包括大部分，例如以有助于溶解度。 例如可以制备可注射溶液剂，其中载体包括盐溶液、葡萄糖溶液或者盐和 葡萄糖溶液的混合物。还可以制备可注射混悬剂，在这种情况中，可以应 用适合的液体栽体、助悬剂等。还包括固体形式制剂，在应用前将其转化 为液体形式制剂。
可以应用于本发明药物组合物的适合的水和非水载体的实例包括水、 乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)和它们适合的混合物、植
物油(例如^Mt油)以及可注射有机酯(例如油酸乙酯)。适合的流动性可以例 如通过应用包衣材料(例如卵磷脂)、在分散剂的情况中通过维持所需的粒 径以及通过应用表面活性剂来维持。
这些组合物还可以包含佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分狀剂。 防止微生物的作用可以通过包含多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯 曱酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)来保证。组合物还需要包含等渗剂，例如 糖、氯化钠等。另外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包含延緩吸收
25的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。
在某些情况中，为了延长药物的作用，需要延緩皮下或肌内注射的药 物的吸收。这可以通过应用具有弱水溶性的结晶或无定形物质的液体混悬 液来实现。然后药物的吸收速率取决于其溶出速率，相反，其可能取决于 晶体大小和结晶形式。可选择的是，延緩非肠道施用的药物形式的吸收通 过将药物溶于或悬浮于油性载体中而实现。
可注射储库形式通过将目标化合物的微嚢基质在生物可降解聚合物 (例如聚乳酸-乙醇酸交酯)中成型来制备。取决于药物与聚合物的比例和所 用的特别聚合物的性质，可以控制药物释放速率。其它生物可降解的聚合 物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。储库可注射制剂还通过将药物包埋于 与机体组织相容的脂质体或微乳中来制备。
本文所用的术语"非肠道施用，，或类似的表示除了肠内和局部施用之 外的施用方式，通常通过注射施用，并且包括但不限于静脉内、肌内、动 脉内、鞘内、嚢内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮 下、关节内、嚢下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射和输注。
取决于施用方式，药物组合物将优选包含0.05至99.5%重量、更优选 0.1至70%重量、更优选30至70%重量的活性成分，和0.05至99.95%重 量、更优选0.1至70%重量、更优选30至70%重量的可药用载体，所有 百分数基于总的组合物。
药物组合物还可以包含本领域已知的多种其它成分，例如润滑剂、稳 定剂、緩冲剂、乳化剂、粘度调节剂、表面活性剂或防腐剂。
为了 ^^于施用和剂量均匀，配制单位剂型的药物组合物是特别有利的。 本文所用的单位剂型指的是适合作为单一剂量的物理上分离的单位，每个 单位包含预定量的活性成分，计算该量以与所需的药物载体组合产生所需 的治疗效果。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕片或包衣片)、胶嚢剂、 丸剂、散剂包、糯米纸嚢剂、栓剂、可注射溶液剂或混悬剂等，以及它们 分开的多组分。
本发明化合物可以单独施用或与第二种药物组合施用。
另一方面，本发明提供了-本发明化合物与至少一种第二种药物的组合；
-药物组合，该药物组合包含本发明化合物与至少一种第二种药物组
合；
-药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物与至少一种第二种药 物以及一种或多种可药用赋形剂组合；
-本发明化合物与至少一种第二种药物组合，例如以药物组合或组合 物的形式，用于本文定义的任何方法，例如
-组合、药物组合或药物组合物，其包含本发明化合物和至少一 种第二种药物，用作药物；
-作为本发明化合物与至少一种第二种药物组合应用，例如以药 物组合或组合物的形式；
-在需要的患者中用于治疗和/或预防病毒感染的方法，该方法包 括共同施用、相伴或依次施用治疗有效量的本发明化合物和至少一种 第二种药物，例如以药物组合或组合物的形式；
-本发明化合物与至少一种第二种药物组合，例如以药物組合或 組合物的形式，用于制备用于治疗和/或预防病毒感染的药物。 本文所用的术语"共同施用"或类似的表示包括将所选的第二种药物 施用于单个患者，并且旨在包括治疗方案，其中第二种药物不必通过相同 的施用途径或在相同时间施用。可以将本发明化合物和任何第二种药物配 制在分开的剂型中。可选自的是，为了减少施用于患者的剂型数量，可以 将本发明化合物和任何第二种药物一起配制在任何组合中。例如，可以将 本发明化合物配制成一种剂型并且可以将第二种药物一起配制成另 一种剂 型。任何分开的剂型可以在相同时间或不同时间施用。
组合包括固定组合，其中本发明化合物和至少一种第二种药物在相同 制剂中；药盒，其中在相同包装中提供了在分开的制剂中的本发明化合物 和至少一种第二种药物，例如带有用于共同施用的说明书；以及游离组合， 其中本发明化合物和至少一种第二种药物是分开包装的，但是给出相伴或 依次施用的"i兌明书。
另一方面，本发明提供了-药物包装，除了用于组合施用的说明书之外，该药物包装包含第一
种药物(其是本发明化合物)和至少 一种第二种药物；
-药物包装，除了用于组合施用的说明书之外，该药物包装包含本发 明化合物和至少一种第二种药物；
-药物包装，除了用于组合施用的说明书之外，该药物包装包含至少 一种第二种药物和本发明化合物。
与单一治疗相比，用本发明的组合的治疗可以提供改善。 另一方面，本发明提供了
-药物组合，该药物组合包含一定量的本发明化合物和一定量的第二 种药物，其中一定量是适合产生协同治疗作用的；
-改善本发明化合物的治疗功效的方法，该方法包括共同施用(例如相 伴或依次)治疗有效量的本发明化合物和第二种药物；
-改善第二种药物的治疗功效的方法，该方法包括共同施用(例如相伴 或依次)治疗有效量的本发明化合物和第二种药物。
本发明化合物和第二种药物的组合(作为组合伴侣)可以通过任何常规 途径(例如本文对于本发明化合物所述的)施用。第二种药物可以以适合的 剂量施用，例如剂量范围类似于单独治疗所用的那些，或者例如在协同的 情况中，低于常规剂量范围。
可以适当地，例如根据，例如类似于常规方法，或者本文对于本发明 组合物所描述的那样提供本文所描述的包含本发明组合的药物组合物和包 含第二种药物的药物组合物。
两种或多种药物(例如本发明化合物和第二种药物)的有效剂量是一起 施用的，或者在可选择的或序列步骤治疗中施用，其中每个药物的有效剂 量是连续或依次施用的。通常，第一种选择典型地优于可选择的治疗，因 为其对病毒诱导多重同时存在的应激。给定的剂量将取决于药物的吸收、 失活和排泄速度以及其它因素。应当注意的是，剂量值还将随所减轻的病
症的严重程度而不同。应当进一步理解的是，对于任何特别的患者，特别 剂量方案和时间表可以根据个体需要和施用或指导组合物施用的人的职业 判断随时间而调整。在实施这些方法中所需的日剂量将取决于例如所用的本发明化合物、 宿主、施用方式、所治疗的病症的严重程度而不同。以上描述了口服施用 于患者的适合的日剂量和单位剂型。在剂型中第二种药物的量可以变化很 大，并且可以通过常规试验来确定。例如，取决于所需的药理作用，本发 明化合物和第二种药物的剂量指定为大约相同数量级，例如对于相同化合 物，施用一半，例如单独或与另一种化合物施用。
术语"第二种药物"表示化学治疗药物，其可能是或可能不是式(I)或
(n)化合物，特别是除了式(i)或(n)化合物之外的任何化学治疗药物。
例如，本文所用的第二种药物包括例如具有抗病毒活性、特别是抗黄 病毒科活性、最特别是抗登革热或丙型肝炎活性的药物，例如蛋白酶抑制
剂、核苷/核苷酸类似物、病毒i^v抑制剂、病毒聚合酶抑制剂、免疫调节
剂、抗体和逆转录酶抑制剂。此类抗病毒药物包括但不限于利巴韦林、阿 糖腺苷、阿昔洛韦、更昔洛韦、扎那米韦、磷酸奥司他韦、泛昔洛韦、阿 扎那韦、金刚烷胺、去羟肌苷、依法韦伦、膦甲酸、茚地那韦、拉米夫定、 奈非那韦、利托那韦、沙奎那韦、司他夫定、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、齐
多夫定、替比夫定(telbivudine)、干扰素，例如干扰素-a-2a或干扰素-a-2b， 例如Intron⑧A、 Roferon 、 Avonex⑧、Rebif⑧或Betaferon ,复合干扰
素、淋巴细胞样干扰素、干扰素T或结合水溶性聚合物或人白蛋白的干扰
素，例如a-干扰素白蛋白(albuferon);拉米夫定，美国专利第6,812,219号 和WO 2004/002422 A2中公开的化合物(将该公开的全部内容并入本文作 为参考)；抗纤维化药物，例如N-苯基-2-嘧咬-胺衍生物，例如伊马替尼； 免疫调节剂，例如麦考酚酸、其盐或前药，例如麦考酚酸钠或麦考酚酸吗 乙酯；或S1P受体激动剂，例如FTY720或其任选磷酸化的类似物，例如 EP627406A1、 EP778263A1、 EP1002792A1、 WO02/18395、 WO02歸95、 WO 02/06268、 JP2002316985、 WO03/29184、 WO03/29205、 WO03/62252 和WO03/62248中乂^开的(将该公开的全部内容并入本文作为参考)。
其它第二种药物包括但不限于镇痛药和抗炎化合物，例如NSAID。其 它第二种药物的实例包括但不限于对乙酰氨基酚、阿司匹林、双7JC杨酯、 二氟尼柳、布洛芬、酮洛芬、萘丁美酮、吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸、吲咮美辛、舒林酸、托美丁、依托度酸、酮咯酸、奥沙普秦和塞来昔布； 呋痿米；维生素K;碳酸氩盐；钩；止吐药，例如多潘立酮、曱氧氯普胺、 溴必利和阿立必利；雷尼替丁；西咪替丁；法莫替丁；尼扎替丁；雷尼替 丁；罗沙替丁；米索前列醇；恩前列素；埃索美拉唑；兰索拉哇；奥美拉
唑；泮托拉唑；雷贝拉唑；替那拉唑；甘珀酸；硫糖铝；哌仑西平；抗惊 厥药，例如乙酰唑胺、阿普唑仑、异戊巴比妥、卡马西平、加巴喷丁、氯 氮萆、氯巴占、氯美噻唑、氯硝西泮、卡马西平、地西洋、苯妥英、双丙 戊酸钠、丙戊酸钠、乙琥胺、氟桂利溱、磷苯妥英、左乙拉西坦、拉莫三 溱、劳拉西泮、普瑞巴林、硫酸镁、苯巴比妥、咪达唑仑、奥卡西平、朴 米酮、氨己烯酸、托吡酯、丙戊酸、丙戊酰胺、唑尼沙胺、佐匹克隆；和 J难激素，例如倍美力。
本发明化合物可以例如与另外的丙型肝炎病毒调节化合物(其是或不 是式(I)或(II))组合用于治疗患者的丙型肝炎病毒相关障碍。
WO 2005/042020(将其全部内容并入本文作为参考)描述了多种丙型肝 炎病毒抑制剂和细胞色素P450( "CYP")抑制剂的组合。任何适合的CYP 抑制剂可以与本发明化合物组合应用。这些CYP抑制剂包括但不限于利托 那韦(WO 94/14436，将其全部内容并入本文作为参考)、酮康唑、醋竹桃霉 素、4-甲基吡唑、环孢菌素、氯美噻唑、西咪替丁、伊曲康唑、氟康唑、 咪康唑、氟伏沙明、氟西汀、奈法唑酮、舍曲林、茚地那韦、奈非那韦、 氨普那韦、呋山那韦、沙套那韦、洛匹那韦、地拉韦啶、红霉素、VX-944 和VX-497。优选的CYP抑制剂包括利托那韦、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢菌素和氯美噻唑。
测量化合物抑制CYP活性的能力的方法是已知的(参见例如US 6,037,157和Yun等人，Drug Metabolism & Disposition(药物^R谢与分布)， 第21巻，第403-407页(1993);将其并入本文作为参考)。例如，可以将用 于评价的化合物与0.1、 0.5和1.0 mg蛋白质/mL或者其它适合浓度的人肝 微粒体(例如可商购获得的混合的特征肝微粒体)在产生NADPH体系的存 在下培养0、 5、 10、 20和30分钟或其它适合的时间。对照培养是在没有 肝微粒体的存在下进行0和30分钟(三份)。样品可以在化合物的存在下分析。产生化合物代谢线性速率的培养条件将被用作其它研究的指导。可以 应用本领域已知的试验来确定化合物代谢的动力学(Km和Vmax)。可以确定
化合物的消除速率并且根据Michaelis-Menten动力学，通过应用 Lineweaver-Burk、 Eadie-Hofstee或非线性回归分析来分析数据。
然后进行代谢抑制试验。例如，可以将化合物(一个浓度，^Km)与混合 的人肝孩史粒体在CYP抑制剂(例如利托那韦)不存在或存在下、在以上确定 的条件下培养。正如所公认的，对照培养可以包含与用CYP抑制剂培养相 同浓度的有机溶剂。可以定量样品中的化合物的浓度，并且可以确定母体 化合物的消除速率，速率表示为对照活性的百分数。
评价个体中共同施用本发明化合物和CYP抑制剂的影响的方法也是 已知的(参见例如US2004/0028755;将其并入本文作为参考)。任何此类方 法可以与本发明结合用于确定组合的药物代谢动力学影响。然后选择将从 本发明的治疗中获益的个体。
因此，本发明的一个实施方案提供了施用CYP3A4的抑制剂和本发明 化合物的方法。本发明的另一个实施方案提供了施用同工酶 3A4( "CYP3A4")、同工酶2C19( "CYP2C19")、同工酶2D6( "CYP2D6")、 同工酶1 A2("CYP1 A2")、同工酶2C9("CYP2C9")或同工酶2E1("CYP2E1") 的抑制剂的方法。
应当理解的是，在人体内能广泛观察到CYP3A4活性。因此，涉及抑 制同功酶3A4的本发明的实施方案将预期可应用于大范围的患者。
因此，本发明提供了以下方法，其中CYP抑制剂与本发明化合物在相 同的剂型或分开的剂型中一起施用。
如以上所示，所用的关于第二种药物的日剂量将取决于例如所用的化 合物、宿主、施用方式和所治疗的病症的严重程度而不同。例如，拉米夫 定可以以日剂量100mg施用。聚乙二醇化的干扰素可以每周1至3次、优 选每周1次以总的周剂量范围200至1000万IU、更优选500至1000万IU、 最优选800至1000万IU非肠道施用。由于可以应用的第二种药物的不同 类型，量可以变化4艮大，并且可以通过上述的常规试验确定。
目前治疗丙型肝炎的护理标准是聚乙二醇化的干扰素a和利巴韦林的组合，其中推荐剂量是1.5吗/kg/wk聚乙二醇化的干扰素ot-:2b或l洲峰/wk 聚乙二醇化的干扰素a-2a，对于基因型1的患者，每天加上1000至1200 mg 利巴韦林，施用48周；或者对于基因型2/3的患者，每天加上800 mg利 巴韦林，施用24周。
本发明化合物和第二种药物可以通过任何常规途径施用，特别是肠内 施用，例如口服，例如以饮用的溶液剂、片剂或胶嚢的形式，或者非肠道 施用，例如以可注射溶液剂或混悬剂的形式。
干扰素与水溶性聚合物的结合物意指特别包括与聚环氧烷均聚物例如
聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化的多元醇、它们的共聚物和它们 的嵌段共聚物的结合物。作为可选择的基于聚环氧烷的聚合物，可以应用 有效的无抗原材料，例如右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚乙 烯醇、基于碳水化合物的聚合物等。此类干扰素-聚合物的结合物在美国专 利第4,766,106、 4,917,888号、欧洲专利申请第0 236 987号、欧洲专利申 请第0 510 356号和国际申请^>布第WO 95/13090号中描述，将其公开的 全部内容并入本文作为参考。由于聚合物4务饰充分地降低了抗原响应，因 此外来干扰素无需完全是自体的。用于制备聚合物结合物的干扰素可以由 哺乳动物提取物(例如人、反刍动物或牛干扰素)制备，或者重组制备。优 选的是干扰素与聚乙二醇的结合物，也称为聚乙二醇化的干扰素。
特别优选的干扰素结合物是聚乙二醇化的a-干扰素，例如聚乙二醇化 的干扰素-a-2a、聚乙二醇化的干扰素-a-2b;聚乙二醇化的复合干扰素或 聚乙二醇化的纯化的干扰素a产品。聚乙二醇化的干扰素-a-2a例如在欧洲
的，例如商品名为PEGASYS (Hoffmann-La Roche)。聚乙二醇化的干扰 素-ot-2b例如在欧洲专利975，369(将其全部内容并入本文作为参考)中描述 并且是可商购获得的，例如商品名为PEG-INTRON A⑧(Schering Plough)。 聚乙二醇化的复合干扰素在WO 96/11953(将其全部内容并入本文作为参 考)中描述。优选的聚乙二醇化的a-干扰素是聚乙二醇化的干扰素-a-2a和 聚乙二醇化的干扰素-a-2b。还优选聚乙二醇化的复合干扰素。
其它优选的第二种药物包括干扰素的融合蛋白，例如干扰素-a-2a、干
32扰素-a-2b、复合干扰素或纯化的干扰素-a产品的融合蛋白，它们每种是与 另一种蛋白质融合的。某些优选的融合蛋白包括美国专利6，973，322和国际 公布WO02/60071 、 WO05/003296和WO05/077042(Human Genome Sciences)中描述的干扰素(例如干扰素-a-2b)和白蛋白。优选的与人白蛋白 结合的干扰素是a-干扰素白蛋白(Human Genome Sciences)。
环孢菌素类(其强力地与亲环蛋白结合，但是没有免疫抑制)包括美国 专利5,767,069和5，981，479中叙述的那些环孢菌素类，并且将其并入本文 作为参考。[Mellef-环孢菌素是优选的非免疫抑制的环孢菌素。某些其它 环孢菌素f汴生物在 WO2006039668(Scynexis)和 WO2006038088 (Debiopharm SA)中描述，并且将其并入本文作为参考。当环孢菌素在混合 淋巴细胞反应(MLR)中的活性不超过环孢菌素A的活性的5%，优选不超 过2%时，环孢菌素被认为是非免疫抑制的。混合淋巴细胞反应是由T. Meo 在"Immunological Methods(免疫学方法)"，L. Lefkovits和B. Peris编辑， Academic Press, N.Y.第227-239页(1979)中描述。将Balb/c小鼠(雌性， 8-10周)的脾细胞(0.5xl(^个)与0.5xl(^个辐照的(2000 rads)或丝裂霉素C 处理的CBA小鼠(雌性，8-10周)的脾细胞共同培养。辐射的同种异型细胞 诱导Balb/c脾细J包的增殖响应，其可以通过掺入DNA中的标记前体测量。 由于刺激细胞是受辐射的(或丝裂霉素C处理的)，因此它们对Balb/c细胞 的增殖没有响应，但是保留了它们的抗原性。将试验化合物在MLR中测 得的ICs()与环孢菌素A在平行试验中测得的进行比较。另外，非免疫抑制 的环孢菌素缺乏抑制CN和下游NF-AT通路的能力。[Melle、环孢菌素是 本发明优选应用的非免疫抑制结合亲环蛋白的环孢菌素。
利巴韦林(l-P-D-呋喃核糖基-l-l，2，4-三唑-3-甲酰胺)是合成的、非干扰 素诱导的、广谱抗病毒核苷类似物，商品名为Virazole(The Merck Index, 第11版，编辑Budavar， S， Merck & Co" Inc., Rahway， NJ，第1304页， 1989)。美国专利第3,798,209和RE29，835号(将其全部内容并入本文作为 参考)公开和要求了利巴韦林。利巴韦林在结构上与鸟苷类似，并且具有体 外对抗数种DNA和RNA病毒(包括黄病毒科)的活性(Gary L. Davis, Gastroenterology 118:S104-S114， 2000)。其它组合包括本发明化合物与非免疫抑制的结合亲环蛋白的环孢菌
素、与麦考酚酸、其盐或前药和/或与S1P受体激动剂(例如FTY720)的那些组合。
可以与本发明化合物組合应用的第二种药物的另外的实例包括(1)干扰素，包括干扰素a-2a或2b和聚乙二醇化的(PEG)干扰素a-2a或2b，例:^:
(a) Intron-A⑧，干扰素a-2b(Schering Corporation, Kenilworth， NJ);
(b) PEG-Intron ，聚乙二醇化的干扰素a-2b(Schering Corporation,Kenilworth, NJ);
(c) Roferon ,重组干扰素a画2a(Hoffmann-La Roche, Nutley， NJ);
(d) Pegasys ,聚乙二醇化的干扰素a-2a(Hoffmann画La Roche, Nutley，
NJ);
(e) Berefor ， 可获得的干扰素a-2(Boehringer IngelheimPharmaceutical, Inc., Ridgefield， CT);
(f) Sumiferon ,纯化的天然a干扰素的混合物(Sumitomo， Japan);
(g) Wellferon ,淋巴细胞样干扰素a nl(GlaxoSmithKline);
(h) Infergen ， 复合a干扰素(InterMune Pharmaceuticals, Inc.,Brisbane, CA)
(i) Alferon , 天然a干扰素的混合物(Interferon Sciences, and PurdueFrederick Co., CT);
①Viraferon ;
(k)复合ct干扰素，来自Amgen， Inc., Newbury Park, CA。其它形式的干扰素包括干扰素P、 y、 T和①，例如Serono的Rebif(干扰素P-la)、 Viragen的Omniferon(天然干扰素)、Ares-Serono的REBIF(干扰素(3-la)、 BioMedicines的co干扰素、Amarillo Biosciences的口月艮干扰素a、与水溶性聚合物或人白蛋白结合的干扰素，例如ot-干扰素白蛋白(Human Genome Sciences)、抗病毒药物、复合干扰素、羊或牛干扰素-T。干扰素与水溶性聚合物的结合物指的是特别包括与聚环氧烷均聚物例如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物和其嵌段共聚物的结合物。作为可选择的基于聚环氧烷的聚合物，可以应用有效的无抗原材料，例如右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、基于碳水化合物的聚合物等。由于聚合物修饰充分地降低了抗原反应，因此外来干扰素无需完全是自体的。用于制备聚合物结合物的干扰素可以由哺乳动物提取物(例如人、反刍动物或牛干扰素)制备，或者重组制备。优选的是，干扰素与聚乙二醇的结合物，也称为聚乙二醇化的干扰素。
(2) 利巴韦林，例如来自Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa的利巴韦林(l-P-D-呋喃核糖基-lH-l，2，4-三唑-3-甲酰胺)；来自ScheringCorporation, Kenilworth, NJ的Rebeto條和来自 Hoffmann-La Roche,Nutley， NJ的Copegus ;以及在研的新利巴韦林类似物，例如Valeant的Levovirin和Viramidine。
(3) 蓉峻烷衍生物，其在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的反相HPLC试验中显示出相关抑制(Sudo K.等人，/4w"v/m/ / ew"rcA， 1996， 32，9-18)，特别是化合物RD-l-6250(具有被长烷基链取代的稠合的肉桂酰基)、RD4 6205和RD4 6193。
(4) 塞唑烷和苯曱酰苯胺，其在KakiuchiN.等人，丄F￡^S1"&/^421，217-220; Takeshita N.等人，爿wa/y/c"/肌oc/ie附/^j， 1997， 247， 242-246中鉴定。
(5) 菲醌，其在SDS-PAGE和放射自显影试验中具有对抗蛋白酶的活性，其是从链霉菌属物种(A/r/;to附j;c" w.)的发酵培养基中分离的，Sch68631(Chu M.等人，r"r"/ie^wi Z^股ra， 1996， 37， 7229-7232)和Sch
351633，其是从灰黄青霉菌(/^附'"'///"附^/5 /"/^1附)中分离的，其在闪烁
迫近试验中显示出活性(Chu M.等人，5/卯rg""/c做rfAf^Z/drtfl/ C7^附/W/j￡" 9， 1949-1952)。
(6) 蛋白酶抑制剂；实例包括基于底物的NS3蛋白酶抑制剂(Attwood等人，爿wrt'v/ni/ /7印"V/e ^Ww"v^(抗病毒肽衍生物)，PCT WO 98/22496，1998; Attwood等人，Jw//w>"/ C/re附/st/j a/icf Ote附o,/rem/y;(抗病毒化学和化学治疗)1999， 10， 259-273; Attwood等人，尸r印am,/ow 騰。/画"o鎖V/ ^7v""Ves flw a",《'-v/m/ age"to(作为抗病毒药物的^^酸衍生物的制备和用途)，德国专利公布DE 19914474; Tung等人，/wA/6/tors ^"Vie/7rofcflses1， /7flW/cw/"/7y /re/m故/s1 C v/rws17V5^ pro/ea5^(丝氨酸蛋白酶、特另'J是丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制剂)；PCT WO 98/17679)，包括a酮酰胺类和肼基脲类，以及能终止亲电子物质(例如硼酸和磷酸酯)的抑制剂(Llinas画Brunet等人，份戸故/s C /w/r/6/tor /7e/7ftVfc flw"/ogMes(丙型肝炎抑制剂肽类似物)，PCT WO 99/07734)正在研究之中。
基于非底物的NS3蛋白酶抑制剂，例如2，4，6-三羟基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等人，必/oc/re附/5T"/ ffwd 5—/r戶'ca/ / &yea/rACV 附附朋/airtVm51， 1997, 238 643-647; Sudo K.等人，Jwriv/m/ C/re附/欲j; a dC7^附W/icfl/^, 1998,9， 186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前者在酰胺上被14碳链取代和后者具有对苯氧基苯基也正在研究之中。
Sch 68631(菲醌)是丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂(Chu M等人，7Wm/^^wi37:7229-7232， 1996)。在同一个作者的另 一个实例中，Sch 351633(从真菌灰黄青霉菌中分离的)鉴定为蛋白酶抑制剂(Chu M.等人.B^wgaw/c A/^//c/"a/ C/re附/5t/j丄Cers 9:1949-1952)。通过i殳i十基于高分子水蛭蛋白酶抑制剂c的选择性抑制剂，已经获得对抗丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的納摩尔能力。水蛭蛋白酶抑制剂c(从水蛭中分离)是数种丝氨酸蛋白酶例如灰色链霉菌(S. griseus)蛋白酶A和B、 V-胰凝乳蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶)的有效的抑制剂(Qasim M.A.等人，肠c/i簡,一 36:1598-1607， 1997)。
公开用于治疗丙型肝炎病毒的蛋白酶抑制剂的美国专利包括例如美国专利第6,004,933号，Spruce等人(将其全部内容并入本文作为参考)，其公开了一类用于抑制丙型肝炎病毒内肽酶2的半胱氨酸蛋白酶抑制剂；美国专利第5，9卯，276号，Zhang等人(将其全部内容并入本文作为参考)，其公开了丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的合成抑制剂；美国专利第5,538,865号，Reyes等人(将其全部内容并入本文作为参考)。作为丙型肝炎病毒的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的肽类7>开于WO 02/008251(Corvas International,Inc.)以及WO 02/08187和WO 02/008256(Schering Corporation)中，(将其全部内容并入本文作为参考)。丙型肝炎病毒抑制剂三肽公开于美国专利第6，534，523、 6,410,531和6,420,380号(Boehringer Ingelheim)以及WO02/060926(Bristo1 Myers Squibb)中，(将其全部内容并入本文作为参考)。作为丙型肝炎病毒的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的二芳基肽类公开于WO02/48172(Schering Corporation)中，(将其并入本文作为参考)。作为丙型肝炎病毒的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的咪唑啉酮公开于WO02/18198(Schering Corporation)和WO 02/48157(Bristo1 Myers Squibb)中，(将其全部内容并入本文作为参考)。WO 98/17679(Vertex Pharmaceuticals)和WO 02/48116(Bristo1 Myers Squibb)也公开了丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂(将其全部内容并入本文作为参考)。
丙型肝炎病毒NS3-4A丝氨酸蛋白酶抑制剂，包括BoehringerIngelheim的BILN 2061、 Vertex的VX-950、 Schering-Plough的SCH 6/7以及目前处于临床前研究的其它化合物。
基于底物的NS3蛋白酶抑制剂，包括a酮酰胺类和肼基脲类，以及能终止亲电子物质(例如硼酸和磷酸酯)的抑制剂；基于非底物的NS3蛋白酶抑制剂，例如2，4，6-三羟基-3-硝基-苯曱酰胺衍生物，包括RD3-4082和RD3-4078,前者在酰胺上被14碳链取代并且后者具有对苯氧基苯基；以及Sch68631、菲醌、丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂。
Sch 351633(从真菌灰黄青霉菌中分离)被鉴定为蛋白酶抑制剂。水蛭蛋白酶抑制剂c(从水蛭中分离)是数种丝氨酸蛋白酶(例如灰色链霉菌蛋白酶A和B、 a-胰凝乳蛋白酶、类胰凝乳蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶)的有效的抑制剂。
美国专利第6004933号(将其全部内容并入本文作为参考)公开了一类用于抑制丙型肝炎病毒内肽酶2的半胱氨酸蛋白酶抑制剂；丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的合成抑制剂；丙型肝炎病毒抑制剂三肽；二芳基肽，例如丙型肝炎病毒的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂；作为丙型肝炎病毒的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的咪唑啉二酮。
噻唑烷和苯甲酰苯胺。噻唑烷衍生物，其在用NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的反相HPLC试验中显示出相关抑制，特别是化合物RD-16250(具有被长烷基链取代的稠合的肉桂酰基)、RD4 6205和RD46193。
菲醌，其在SDS-PAGE和放射自显影试验中具有对抗蛋白酶的活性，其是从链霉菌属物种的发酵培养基中分离的，Sch 68631和Sch 351633，其是从灰黄青霉菌中分离的，其在闪烁迫近试验中显示出活性。
(7)丙型肝炎病毒NS5B RNA-依赖性RNA聚合酶的核苷或非核苷抑制剂，例如WO 2004/002422 A2中公开的2'-C-甲基-3，-0-L-缬氨酸酯吹喃核糖基胞苷(Idenix)(将其全部内容并入本文作为参考)、R803(Rigel)、JTK-003(Japan Tabacco)、 HCV画086(ViroPharma/Wyeth)和目前处于临床
前研究的其它化合物；
胶霉毒素和天热产物浅蓝菌素；
2，-氟核苷；
WO 02/057287 A2、 WO 02/057425 A2、 WO0謂121、 WO 01/92282和美国专利第6,812,219号公开的其它核苷类似物，将其公开的全部内容并入本文作为参考。
Idenix Pharmaceuticals在国际公布第WO 01/卯121和WO 01/92282
号中公开了支链核苷在治疗虫媒病毒(包括丙型肝炎病毒)和瘋病毒中的用途(将其全部内容并入本文作为参考)。特别的是，Idenix公布中公开了治疗人和其它宿主动物的丙型肝炎感染(以及虫媒病毒和瘟病毒)的方法，该方法包括施用有效量的生物活性1，、 2，、 3，或4，-支链(3-D或(3-L核苷或其可药用盐或前药，单独施用或与另一种抗病毒药物组合施用，任选在可药用载体中。某些优选的生物活性l，、 2，、 3，或4，-支链(3-D或(3-L核普(包括替比夫定)在美国专利6,395,716和6,875,751中描述，将每个并入本文作为
参考o
其它公开了某些核苷类似物在治疗丙型肝炎病毒中的用途的专利申请
包括BioChem Pharma， Inc.(现在为Shire Biochem， Inc.)提交的PCTCA00/01316(WO 01/32153 ; 2000年11月3日提交)和PCT/CA01/00197(WO 01/60315; 2001年2月19日提交)；Merck & Co., Inc.提交的PCT/US02/01531(WO 02/057425; 2002年1月18日提交)和PCT/US02/03086(WO 02/057287; 2002年1月18日提交)；Roche提交的
38PCT/EP01/09633(WO 02/18404; 2001年8月21日公布)；以及Pharmasset，Ltd的PCT公布第WO 01/79246(2001年4月13日提交)、WO02/32920(2001年10月18日提交)和WO 02/48165，(将其公开的全部内容并入本文作为参考)。
Emory University的PCT公布第WO 99/43691号(将其公开的全部内容并入本文作为参考)，标题为"2，-氟核苷"，公开了某些2，-氟核苷在治疗丙型肝炎病毒中的用途。
Eldrup等人(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16thInternational Conference on Antiviral Research (2003年4月 27 日，Savannah, GA))描述了 2，-修饰的核苷在抑制丙型肝炎病毒中的结构活性关系。
Bhat等人(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae， 2003 (OralSession V， Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16th International conferenceon Antiviral Research (2003年4月27日，Savannah, Ga); p A75)描述了作为丙型肝炎病毒RNA复制的可能的抑制剂的核苷类似物的合成和药物代谢动力学性质。作者报道了 2，-修饰的核苷在基于细胞的复制子试验中显示出有效的抑制活性。
Olsen等人(Oral Session V， Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16thInternational Conference on Antiviral Research (2003年4月 27 日,Savannah, Ga)p A76)还描述了 2，-修饰的核苷对丙型肝炎病毒RNA复制的作用。
(8) 核苷酸聚合酶抑制剂和胶霉毒素(Ferrari R等人，/o"rmi/ o/Wra/o^v, 1999， 73， 1649-1654)，和天然产物浅蓝菌素(Lohmann V，等人，W油gy， 1998， 249， 108-118)。
(9) 丙型肝炎病毒NS3解旋酶抑制剂，例如ViroPhama的VP—50406和Vertex的化合物。其它解旋酶抑制剂(Diana G.D.等人，0 附/w"mfe，co附/7w7/o"s1 附"/ro^fe/or fmj^附e"f /re/ fl故/s C(治疗丙型肝炎的化合物、组合物和方法)，美国专利第5,633,358号(将其全部内容并入本文作为参考)；Diana G.D.等人，t/mVflrives, /;Aflr簡acewtor/ c0附/7asitow幼e ,re^附ew/0//^/7"ft他C(p底咬f汴生物、其药物组合物以及它们在治疗丙型肝炎中的用途)，WO 97/36554)。
(10) 反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(S-ODN)，与病毒的5，非编码区(NCR)中的伸展序列(Alt M.等人，7/e/7 to/0gj， 1995， 22， 707-717)，或核苷酸326-348(包括NCR的3，末端)和位于丙型肝炎病毒RNA的核心编码区的核普酸371-388(Alt M.等人，爿/tA/vm F/w/o^v， 1997， 142， 589-599;Galderisi U.等人，/ow/7ifl/o/CW/m/"/ 尸/^wWo^j， 199， 181， 251-257)互补；例如Isis Pharm/Elan的ISIS 14803、 Hybridon的反义序列、AVI bioPharma的反义序列。
(11) IRES-依赖性翻译的抑制剂(Ikeda N等人，爿ge^/o〃/^/^evew^Ai
^Tfl^ie"f 6 / /^/7"故/s C(预防和治疗丙型肝炎的药物)，日本专利>^布
JP-08268890; Kai Y等人,尸/"eve"A》rt朋</ 6>/v/m/ fZ/s^ases^病毒疾
病的预防和治疗)，日本专利公布JP-10101591);例如Isis Pharm/Elan的ISIS 14803、 Anadys的IRES抑制剂、Immusol的1RES抑制剂、PTCTherapeutics的乾向的RNA化学。
(12) 核酶，例如核酸酶4氐抗的核酶(Maccjak， D丄等人，i/e/mto/^yl"9， 30，摘要"5)和美国专利第6，0"，077号(Barber等人)和美国专利第5，869，253和5,610,054号(Draper等人)中指出的那些(将其全部内容并入本文作为参考)，例如RPI的HEPTAZYME。
(13) 直接对抗丙型肝炎病毒基因组的siRNA。
(14) 任何其它机制的丙型肝炎病毒复制抑制剂，例如ViroPharama/Wyeth的VP50406、 Achillion， Arrow的抑制剂。
(15) 丙型肝炎病毒生命周期中的其它靶标(包括病毒ii^、组装和成熟)的抑制剂。
(16) 免疫调节剂，例如IMPDH抑制剂、麦考酚酸、其盐或前药、麦考酚酸钠或麦考酚酸吗乙酯或美泊地布(Merimebodib)(VX-497);胸腺素a-l(SciClone的日达仙)；或S1P受体激动剂，例如FTY720或其类似物，任选磷酸化。
(17) 抗纤维化药物，例如N-苯基-2-嘧淀-胺衍生物，伊马替尼(Glivec)、Indevus的IP-501和InterMune的干扰素y-lb。
(18) Intercell, Epimmune/Genecor， Merix， Tripep (Chron-VacC)的治疗疫苗；Avant的免疫疗法(Therapore); CellExSys的T细胞疗法；STL的单克隆抗体XTL-002、 Anadys的ANA 246和ANA 246。
(19) 其它各种化合物，包括l-M-烷基环己烷(美国专利第6,034,134号，Gold等人)、烷基类月旨(美国专利第5,922,757号，Chojkier等人)、维生素E和其它抗氧化剂(美国专利第5,922,757号，Chojkier等人)、金刚烷胺、胆酸(美国专利第5,846,99964号，Ozeki等人)、N-(膦酰基乙酰基)画L-天冬氨酸(美国专利第5，830，卯5号，Diana等人)、苯二甲酰胺(美国专利第5,633,388号，Diane等人)、聚腺苷酸衍生物(美国专利第5,496,546号，Wang等人)、2，，3，-双脱氧肌苷(美国专利第5,026,687号，Yarchoan等人)、苯并咪唑类(美国专利第5,891,874号，Colacino等人)、植物提取物(美国专利第5，837，257号，Tsai等人;美国专利第5，725，859号，Omer等人;和美国专利第6,056,961号)和哌啶类(美国专利第5,830,905号，Diana等人)；将其全部内容并入本文作为参考。还包括角鲨烯、替比夫定、N-(膦酰基乙酰基)-L-天冬氨酸、苯二曱酰胺、聚腺苷酸衍生物、糖基化抑制剂和非特异细胞保护药(能阻止由病毒感染引起的细胞损伤)。
(20) 目前在临床前或临床研究中用于治疗丙型肝炎病毒的任何其它化合物，包括白细胞介素-10(Schering-Plough)、 Endo Labs Solvay的金刚烷胺(盐酸金刚烷胺制剂(Symmetrel))、 Idun Pharma的胱天蛋白酶抑制剂IDN-6556、 Chiron的HCV/MF59、 NABI的CIVACIR(丙型肝炎免疫球蛋白)、Maxim的CEPLENE(组胺二氯化物)、Idun PHARM的IDN-6556、Tularik的T67(P-孩i管蛋白抑制剂)、Innogenetics的针对E2的治疗疫苗、Fujisawa Hdathcare的FK788、 Trimeris的IdB1016(Siliphos， 口月艮水飞蓟宾-磷酯酰胆碱砩脂复合物(phytosome))(融合抑制剂)、Immtech的Dication 、 Aethlon Medical的hemopurifier、 United Therapeutics的UT231B。
(21) TlR7(toll样受体)的嘌呤核苷类似物拮抗剂，由Anadys开发，例如Isotorabine(ANA245)和它的前药(ANA975)，其在欧洲申请EP348446和EP636372、国际公布WO03/045968、 WO05/121162和WO05/25583以及美国专利6/973322中描述，将每个并入本文作为参考。
(21) 非核苷抑制剂，由Genelabs开发并且在国际公布WO2004/108687、 WO2005/12288和WO2006/076529中描述，将每个并入本文作为参考。
(22) 其它第二种药物(例如，非免疫调节或免疫调节化合物)，其可以与本发明化合物组合应用，包括但不限于WO 02/18369中说明的那些，将其并入本文作为参考。
另一方面，本发明提供了方法，该方法包括施用本发明化合物和另一种抗病毒药物、优选抗黄病毒科、例如抗登革热或抗丙型肝炎病毒药物。此类抗病毒药物包括但不限于免疫调节剂，例如a、 (3和5干扰素、聚乙二醇化的衍生的干扰素-a化合物和胸腺素；其它抗病毒药物，例如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定；其它丙型肝炎蛋白酶抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；黄病毒科生命周期中的其它靶标的抑制剂，包括解旋酶、聚合酶和金属蛋白酶抑制剂；内部核糖体ii^抑制剂；广谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂(例如，美国专利5,807,876、 6,498,178、 6,344,465、6,054,472、 WO 97/40028、 WO 98/40381、 WO 00/56331的化合物，以及麦考酚酸及其衍生物，并且包括但不限于VX-497、 VX-148和/或VX-944);或任何以上的组合。
本发明组合的每个组分可以是分开、 一起或以其任何组合来施用的。技术从业人员所公认的是，干扰素的剂量典型地以IU来测量(例如，约400万IU至约1200万IU)。
每个组分可以以一个或多个剂型施用。每个剂型可以以任何顺序施用于患者。
应当理解的是，本文公开的任何亚范围(例如关于X、 Rl、 R2、 R3、R4、 R5、 R6和/或R7)可以与本文公开的任何其它亚范围组合，以产生进一步的亚范围。
以下通用方法可以用于制备式(I)和(II)化合物。参考以下描述的特别实施例，本发明的特别化合物的制备对于本领域技术人员来说是显而易见的。对于本文没有特别描述的任何特别方法，其可以以常规或已知的方法或以与已知方法类似的方法来进行。通用方法1
中间体化合物1-4可以根据通用方法1制备，并且与任何适合的碱基团偶联以获得本发明化合物。通用方法1应用二保护的(在4-羟基和5-羟基甲基取代基)4-羟基-5-羟基甲基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯，例如(3R，4R，5R)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-5-(2，4-二氯苄基氧基甲基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯作为原料。乙酸酯基团是在碱性条件下除去的，例如应用NaOMe或另一种适合的碱，例如醇钠或碳酸钾。氧化步骤可以应用任何适合的氧化剂/条件(例如Swern氧化、TEMPO或Dess-Martin过碟烷)进行，以获得呋喃-3-酮。转化为亚炔基可以应用适合的格氏试剂(例如炔基卣化镁，例如炔基溴化镁，例如乙炔基溴化镁)或用有机锂试剂(例如炔基锂试剂，例如乙炔基锂)来完成。可以将化合物1-4与任何适合的碱基团偶联，所述的碱基团例如腺噤呤或鸟噤呤衍生物，其中X:N、 CH或CR4， Rl，=闺素、NR5R6或OR7， R2， = H、卣素或NR5R6，并且R3、 R4、 R5、R6和R7如本文定义的。在某些实例中，X可以是CH。在其它实例中，X可以是CR4。在某些实例中，R4可以是囟素，例如F或I。在其它实例中，R4可以是炔基，例如乙炔基。在某些实例中，Rl，可以是卣素，例如Cl。在其它实例中，Rl，可以是氨基或烷氧基，例如甲氧基。在某些实例中，R2，可以是H。 ^/碱类似物的其它实例包括例如4-氯-7H-吡咯并2，3-dl嗜啶、4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dj嘧啶、4-氯-5-碘-吡咯并l2，3-dl嘧啶、7H-吡咯并[2，3-dj嘧啶-4-基-异吲哚-l，3-二酮和4-氯-5-乙炔-吡咯并2，3-d]嘧咬。保护基可以例如应用适合的路易斯酸(例如BCb)除去，以获得所需的核苷类似物。
43<formula>formula see original document page 44</formula>
r1. r2和r3如本文定义的
通用方法1步骤1: (3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯节基氧基甲基)-4-(2，4-二氯 苄基氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇(I-2)
在(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯-节基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2画甲 氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯1-1(10 g， 19.1 mmol)的MeOH(150 mL)溶液中加 入30。/oNaOMe的MeOH溶液(5.37mL， 28.6 mmol， 1.5当量)，并且将反 应在室温下搅拌30分钟。将反应混合物浓缩并且溶于乙酸乙酯(180 mL) 中，用1 NHC1溶液和饱和的盐水洗涤，干燥(无水Na2S04)并且浓缩，获 得(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯节基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-曱氧基-四 氢呋喃-3-醇1-2，为淡黄色油状物。将获得的粗化合物用于下一步而无需 进一步纯化。
通用方法1步骤2: (4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千 基氧基)-2-甲氧基-二氢呋喃-3-酮(I-3)
在-78。C下，在冷却的草酰氯(2.15mL,25.1 mmol， 1.3当量)的DCM(20 mL)溶液中加入DMSO(2.85 mL， 36.5 mmol, 1.9当量)的DCM(30 mL)溶 液，并且在-78。C下搅拌30分钟。然后緩慢加入(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯千基 氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇1-2(9.6 g， 18.8 mmol， 1当量)的DCM(50mL)溶液，并且在-78。C下搅拌约2小时。然后， 将三乙胺(15.8 mL， 114 mmol, 6.0当量)加入至反应混合物中并且緩慢达 到室温并且搅拌l小时。反应完成后，将混合物用水(100 mL)和DCM(50 mL)稀释。将DCM层分离并且用1 N HC1溶液和饱和的盐水洗涤，干燥(无水Na2S04)、浓缩并且通过快速色谱(己烷乙酸乙酯=70:30)纯化，得到 (41^，51^-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-甲氧基-二氢呋 喃-3-酮I-3，为淡黄色油状物。
通用方法1步骤3: (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯 节基氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇(I-4)
在冷的(0。C)0.5 M乙炔基溴化镁(R3 = -H)的THF溶液(137.5 mL， 68.5 mmol， 5当量)中加入(4R，5R)-5-(2，4-二氯节基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧 基)-2-甲氧基-二氩呋喃國3-酮1-3(6.6 g, 13.7 mmol， 1当量)的THF(15 mL) 溶液，并且在相同温度下搅拌3小时。将反应混合物用冷的饱和的NH4C1(50 mL)猝灭并且用乙酸乙酯(2x60 mL)萃取。将有机层用1 N HC1溶液和饱和 的盐水洗涤，干燥(无水Na2S04)、浓缩并且通过快速色镨(己烷乙酸乙酯 =85:15)纯化，得到(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(3，5-二氯千基氧 基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇1-4，为淡黄色形式。
通用方法1步骤4: (211，311，41^，51^)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-011嘧啶-7-基)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-5-(2，4-二氯苄基氧基曱基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇(I-5)
在(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯苄基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-3-乙炔 基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇1-4(500 mg, 1 mmol， 1当量)的干燥的DCM(5 mL)溶液中加入33。/oHBr-AcOH(0，88mL， 5 mmol， 5当量)溶液，并且在 室温下搅拌1.5小时。原料消耗后，将反应混合物真空蒸发(l mbar， 35°C)， 获得溴化物中间体，为稠的油状物。然后将其溶于干燥的乙腈(10mL)中。 在另一个烧瓶中，在先前在室温下搅拌0.5小时的4-氯吡咯并2，3-d]嘧啶 (R,， = C1， R2， = H， X = CH)(153.0mg， 1 mmol， 1当量)和NaH(200 mg， 5 mmol， 5当量)在乙腈(15 mL)中的混合物中加入以上获得的溴化物中间 体溶液，并且将反应混合物在室温下搅拌18小时。将溶剂除去并且用乙酸 乙酯(60mL)稀释，用水、盐水洗涤，干燥(无水Na2S04)并且浓缩，获得稠 的液体。将粗产物通过快速色语(己烷乙酸乙酯=80:20)纯化，得到 (2R，3R，4R，5R)_2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-4-(2，4- 二氯千基氧 基)-5-(2，4-二氯苄基氧基曱基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇1-5，为淡黄色固体。
45通用方法1步骤5: (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢-呋喃-3，4-二醇(I-6)
在冷的(-78。C)(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-dl嘧啶-7-基)-4-(2，4画 二氯苄基氧基)-5-(2，4-二氯苄基氧基甲基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇1-5(150 mg， 0.24 mmol， 1当量)的干燥DCM(20 mL)溶液中滴加入l M BC13的 DCM溶液(2.4 mL， 2.4 mmol， 10当量)，并且在-78。C下搅拌约5小时。 将反应混合物在0。C下用MeOH(15 mL)猝灭，并且搅拌30分钟。将溶剂 蒸发并且和硅胶(4 mL)—起干燥，将在硅胶上的粗产物通过快速色语 (DCM:曱醇=卯:10)纯化，得到(211，311，411，511)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-111嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-3,4-二醇1-6，为棕色泡沫状物。
通用方法1步骤6: (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2，3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-3，4-二醇(1)
将(2R，3R,4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲 基-四氢呋喃-3,4-二醇1-6(96 mg， 0.31 mmol, 1当量)和NH3.H20(R1 = NH2)(10 mL的28-30%氨水)的混合物在玻璃压力管中在100。C下加热5小 时。将反应混合物浓缩至干燥，并且通过制备HPLC纯化，梯度为在水中 的乙腈30分钟内从0%至35%。将纯的级分合并并且冻干，获得 (2R,3R，4R，5R)-2-(4-氨基-吡咯并2，3-d嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四 氢呋喃-3，4-二醇(X:CH， R1=NH2， R2 = H， R3 = H)I，为淡黄色泡沫状 物。
通用方法2:制备中间体二保护的(在4-羟基和5-羟基甲基取代 基)-(3R，4R，5R)-3-炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-2，3，4-三醇(II國l)
中间体化合物可以根据下述的通用方法2a、 2b或2c制备。 通用方法2a应用二保护的(在4-羟基和5-羟基甲基取代基)4-羟基-5-羟基曱基-2-曱氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯，例如(3R，4R，5R)-4-(2,4-二氯千基氧 基)-5-(2，4-二氯千基氧基曱基)-2-甲氧基-四氢-呋喃-3-乙酸酯作为原料。乙 酸酯基团是在碱性条件下除去的，例如应用NaOMe或另一种适合的碱， 例如醇钠或碳酸钾等。氧化步骤可以应用任何适合的氧化剂/条件(例如 Swern氧化、TEMPO或Dess-Martin过珙烷)来进行，以获得吹喃-3-酮。
46转化为亚炔基可以应用适合的格氏试剂(例如炔基囟化镁，例如炔基溴化 镁，例如乙炔基溴化镁)或用有机锂试剂(例如炔基锂试剂，例如乙炔基锂) 来冗成。
通用方法2b应用三保护的(在2-羟基、4-羟基和5-羟基曱基取代基)四 氢呋喃-3-醇，例如l，3，5-三-0-苯曱酰基-a-D-呋喃核糖作为原料。氧化步骤 可以应用任何适合的氧化剂/条件(例如TEMPO、 Dess-Martin过碘烷或 Swern氧化)来进行，以获得呋喃-3-酮。转化为亚炔基可以如通用方法2a 描述的来完成，应用适合的格氏试剂(例如炔基卣化镁，例如炔基溴化镁， 例如乙炔基溴化镁)或用有机锂试剂(例如炔基锂试剂，例如乙炔基锂)。2-保护基的选择性除去可以在碱性条件下应用K2C03/MeOH进行。
依照通用方法2c，可以将可商购获得的二丙酮-D-葡萄糖用作原料。氧 化步骤可以应用任何适合的氧化剂/条件(例如TEMPO、 Dess-Martin过碘 烷或Swern氧化)来进行，以获得呋喃-4-酮。转化为亚炔基可以如通用方 法2a和2b描述的来完成，应用适合的格氏试剂(例如炔基卣化镁，例如炔 基溴化镁，例如乙炔基溴化镁)或用有机锂试剂(例如炔基锂试剂，例如乙 炔基锂)。3-羟基可以应用任何适合的试剂来保护，例如2，5-二氯千基溴、 2，4-二氯节基溴、烯丙基卣化物或曱硅烷基囟化物。类似地，4-羟基和5-羟基甲基取代基上的羟基可以应用任何适合的试剂来保护，例如苯甲酰基 卣化物、曱苯酰基卣化物等。
通用方法2a
R8' = 2,4- 二氯苄基 R3如本文定义的通用方法2a步骤1: (3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯苄基氧基甲基)-4-(2，4-二氯
千基氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇
在在MeOH(150 mL)中的(3R，4R，5R)-5-(2，4- 二氯节基氧基甲 基)_4-(2，4-二氯千基氧基)-2-曱氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯(10 g， 19.1 mmol)中 加入30。/。NaOMe的MeOH溶液(5.37 mL， 28.6 mmol)，并且将反应在20 。C下搅拌30分钟。将反应混合物浓缩并且溶于IPAC(100 mL)中，用1N HC1溶液(50 mL)和水(50 mL)洗涤并且浓缩，获得(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯节 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯节基氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇，为淡黄色油状
物。将获得的粗化合物用于下一步而无需进一步纯化。
'H-NMR(CDCl3， 400MHz): 6 7.43(d， J=8.1Hz， 1H)， 7.35-7.31(m， 3H)， 7.23(dd， J = 2.1， 4.0 Hz， 1H)， 7.21-7.10(dd， J=2.1， 4.0Hz， 1H)， 4.92(d, J = 4.6 Hz， 1H)， 4.77(d， J=13.4Hz， 1H)， 4'68(d， J=13.4Hz, 1H); 4.60(d, J=13.0Hz， 1H)， 4.56(d， J=13.0Hz， 1H), 4.25(q， J=4.0Hz， 1H)， 4.19(dd， J=6.8， 4.8 Hz， 1H)， 3.86(dd， J=6.9，7.0 Hz， 1H)， 3.60(d， J=10.5Hz， 2H)， 3.48(s， 3H); 13C-NMR(CDC13， 100MHz): & 134.2， 134.1， 133.9， 133.5， 133.4， 129.9， 129.8， 129.1， 129.08， 127.11， 127.08， 102.8, 81.6， 77.4， 72.0， 70.8, 70.0， 69.5， 55.6(— 个碳重叠)；ESI-MS:计算值C20H20Cl4O5(M+NH4+， 480.0);实测值498.0。
通用方法2a步骤2: (4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千 基氧基)-2-甲氧基-二氢呋喃-3-酮
在在水浴中的(3R，4S，5R)-5-(2，4-二氯爷基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基 氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇(9.20 g， 19.08 mmol)的无水CH2C12(70 mL) 和三氯异氰尿酸(4.88 g， 21 mmol)的溶液中加入TEMPO(160 mg， 0.95 mmol)。反应混合物变成黄色悬浮液并且在20。C下搅拌1小时。将反应通 过HPLC确定完成，并且过滤。将溶剂蒸发并且加入曱苯(100mL)。将有 机相用饱和的NaHC03溶液(50 mL)和HC1水溶液(l N， 50 mL)洗涤。将 有机层干燥(MgS04)，过滤并且浓缩，获得(4R，5R)-5-(2,4-二氯千基氧基甲 基)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-2-甲|^-二氢呋喃-3-酮，为淡绿色油状物，将其 直接用于下一步。
通用方法2a步骤3: (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇(I-4)
在冷的(-20。C)(4R，5R)-5-(2，4-二氯节基氧基甲基)-4-(2，4-二氯苄基氧 基)-2-甲氧基-二氢呋喃-3-酮(9.16 g， 19.07 mmol)的干燥THF(20 mL)溶液 中滴加入0.5M炔基溴化镁(例如，其中R3-H,炔基溴化镁是乙炔基溴化 镁)的THF溶液(57.2 mL， 28.6 mmol)。将黄色反应混合物在相同温度下搅 拌l小时，并且用饱和的NH4C1(50 mL)摔灭，并且用IPAC(2x70 mL)萃 取。将有机层用水(50mL)洗涤，浓缩，获得(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯苄基氧 基甲基)-4-(2,4- 二氯千基氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇 (I-4)(R3=H)，为深红色油状物，将其直接用于下一步。
通用方法2a步骤4: (3R，4R,5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯 节基氧基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2，3-二醇
将(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯节基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-3-乙炔 基-2-曱氧基-四氢呋喃-3-醇(1-4)(9.65 g， 19.08 mmol)的TFA和水(30 mL:1.5 mL)溶液加热至55。C。红色溶液变成黑色溶液，并且在相同温度下搅拌24 小时。将溶剂蒸发，并且用DCM(70 mL)稀释。将有机层用饱和的 Na2CO3(50mL)、水(50 mL)洗涤并且浓缩，获得黑色油状物。将净且产物通 过柱色谱(庚烷:EA 2:1)纯化，获得(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯苄基氧基甲 基)-4-(2，4-二氯-节基氧基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2，3-二醇，为红色油状物(两 种端基异构体的混合物)。(约1.4:1，基于NMR分析和HPLC分析)。 ESI-MS:计算值QnH,8Cl4O5(M+NH4+，4卯.0);实测值508.0。<image>image see original document page 49</image>通用方法2b步骤1: (2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲酰基氧基-5-苯甲酰基 氧基曱基-二氢呋喃-3-酮
将1，3，5-三-0-苯甲酰基-a-D-呋喃核糖(10.0 g， 21.62 mmol， 1.0当量) 溶于二氯甲烷(60 mL)中，并且在冰下冷却。加入三氯异氰尿酸(5.52 g， 23.80 mmol， 1.1当量)，然后加入催化量的TEMPO。将冰浴除去，并且将混合 物在室温下搅拌1小时，然后在Cdite⑧上过滤。将有机相用饱和的Na2C03 水溶液洗涂，然后用1 N HC1和盐水洗涤。将有机层干燥(MgS04)并且将 溶剂蒸发，获得(2R，4R，5R)-2，4-二苯甲酰基氧基-5-苯甲酰基氧基甲基-二氢 呋喃-3-酮，为白色泡沫状物。lH-NMR(400MHz， CDC13): 3 8.13-8.01(m， 6H)， 7.65-7.37(m， 9H)， 6.20(d, 1H， J = 1.2Hz)， 5.88(dd， 1H， J = 1.2Hz， 8.8Hz), 5.05(m， 1H， J = 1.2Hz, 4Hz， 8.8Hz)， 4.84(dd， 1H， J = 4Hz， 12.4Hz)， 4.65(dd， 1H， J = 4Hz， 12.4Hz)。
通用方法2b步骤2: (2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲酰基氧基-5-苯甲酰基 氧基甲基-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇
在N;j下，在干燥的三颈烧瓶中^V CeCl3(23.6 g， 95.48 mmol， 4,4 当量)和THF(100mL)，将其冷却至-50。C。历经20分钟，加入1 M乙炔基 溴化镁(186.8 mL, 93.4 mmol， 4.3当量)。将悬浮液在-50。C下搅拌1.5小 时。历经10分钟，加入(2R，4R，5R)-2,4-二苯甲酰基氧基-5-苯甲酰基氧基曱 基-二氢呋喃-3-酮(10.0 g， 21.7 mmol， 1.0当量)的THF(80 mL)溶液。加入 后，将悬浮液在-50。C下搅拌4小时。将反应用饱和的NH4C1(200 mL)猝灭。 温至环境温度后，将反应混合物过滤并且用CH2C12(200 mLx3)萃取。将有 机相经无水Na2S04干燥并且浓缩，获得泡沫状(2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲 酰基氧基-5-苯甲酰基氧基甲基-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇。 1H-NMR(400MHz， CDC13): S 8.05-8.01(m， 6H)， 7.65-7.37(m， 9H)， 6.59(s， 1H)， 5.53(d， 1H， J = 2.8Hz)， 4.80-4.77(m， 1H)， 4.70(dd， 1H， J = 5.2Hz， 12Hz). 4.65(dd， 1H， J = 6Hz， 12Hz)， 3.02(bs， 1H)， 2,65(s， 1H)。
可选择的是，可以应用步骤2中描述的相同方法，除了反应温度是-30 °C并且反应时间是3小时，应用(2R，4R，5R)-2，4-二苯甲酰基fu^-5-苯甲酰 基氧基甲基-二氬吹喃-3-酮(1.0g， 2.17mmo1, 1.0当量)、1 M乙炔基溴化镁(13 mL， 6.51 mmol, 3当量)、CeCl3(1.77 g， 7.16 mmol， 3.3当量)和 THF(18 mL)，获得(2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯曱酰基氧基-5-苯甲酰基氧基甲 基-3-乙炔基-四氢呋喃-3-酮。
通用方法2b步骤3: (2R,3R，4R，5R)-4-苯曱酰基氧基-5-苯甲酰基氧基 曱基-3-乙炔基-四氢呋喃-2，3-二醇
将中间体(2R，3R，4R，5R)-2，4-二苯甲酰基氧基-5-苯甲酰基氧基曱基-3-乙炔基-四氢-呋喃-3-醇(2.048 g， 4.21 mmol, 1.0当量)溶于曱醇(IO mL)和 THF(10mL)中。加入K2C03(176 mg， 1.26 mmol， 0.3当量)，将反应在环 境温度下搅拌2小时，在硅胶上过滤，浓缩并且通过快速色镨纯化，获得 (2R，3R，4R，5R)-4-苯甲酰基氧基-5-苯甲酰基氧基甲基-3-乙炔基-四氢呋喃 -2，3画二醇，为泡沫状物。lH-NMR(400MHz， CDC13): S 8.06画7.96(m， 4H)， 7.54-7.26(m， 6H)， 5.88(d， 0.26H， J = 6.4Hz)， 5.54(s， 0.72H), 5.53(d， 0.72H， J =5.2Hz)， 5.41(s， 0.28H), 5.28(bs， 1H)， 4.67-4.49(m， 3H)， 4.22(bs， 1H)， 2.67(s， 0.26H), 2.59(s， 0.71H); 13C-匪R(100MHz， CDC13): S 166.74， 166.61， 165.74， 165.66， 133.79， 133.71， 133.52， 133.33， 133.24， 130.11， 130.05， 130.02, 129.89, 129.81， 129.44， 129.41, 128.86， 128.75， 128,57， 128.41， 128.36， 81.87， 80.07, 79.23， 77.89， 77.21， 76.61， 76.39， 75.77， 75.58， 72.83， 65.29， 64.26。
通用方法2e
51OR8' OH l卜1
通用方法2c步骤1: 1，2:5，6-二-O-异亚丙基-0t-D-核己呋喃-3-酮糖 将二丙酮-D-葡萄糖(2.0 g， 6.9 mmol)溶于CH2C12(40 mL)中。加入 Dess-Martin过珙烷(7.5 g， 13.8 mmol， 2.0当量)并且将反应在室温下搅拌 过夜。然后加入10%Na2S2O3溶液(20 mL)和饱和的NaHC03溶液(20 mL) 并且将反应搅拌15分钟直至有机层变成澄清溶液。加入另外40 mL CH2C12，并且将CH2Ch层分离，用NaHCO;j溶液(20 mL)、盐水(20 mL) 洗涤，干燥(Na2S04)，过滤并且浓缩，获得粗中间体1，2:5，6-二-0-异亚丙 基-a-D-核己呋喃-3-酮糖。将粗中间体1，2:5，6-二-0-异亚丙基-a-D-核己吠 喃-3-酮糖用曱苯(2x25 mL)共沸蒸馏，溶于曱苯(20 mL)并且用于下一步。
通用方法2c步骤2: 1，2:5，6-二-0-异亚丙基-3-C-乙炔基-a-D-异呋喃糖 (allofuranose)
将在甲苯(20 mL)中的中间体1，2:5，6-二-0-异亚丙基-a-D-核己呋喃-3-酮糖(1.82g， 6.9mmo1， 1当量)冷却至0。C，然后加入0.5 M乙炔基溴化镁的THF溶液(55.2 mL， 27.6 mmol， 4当量)，并且将混合物在室温下搅拌 1小时。将反应用10。/。NH4Cl溶液(40mL)猝灭，并且将粗产物在乙酸乙酯 (100mL)和7JC相之间分配。将7jC相进一步用乙酸乙酯(3x20mL)萃取，并且 将合并的乙酸乙酯用盐水(40mL)洗涤，干燥(Na2S04)，过滤并且浓缩至干 燥，获得粗中间体l，2:5，6-二-0-异亚丙基-3-C-乙炔基-a-D-异呋喃糖，为淡 黄色泡沫状物。
通用方法2c步骤3:3-C-乙炔基-l,2:5，6-双-0-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯苄基)-a-D-异呋喃糖
将中间体1，2:5，6-二-0-异亚丙基-3-C-乙炔基-a-D-异呋喃糖(2.84 g， 10 mmol)溶于DMF(15mL)中并且在冰下冷却。加入NaH(600 mg， 60%的油 M液，15mmo1， 1.5当量)并且将反应搅拌2分钟，然后加入2，5-二氯千 基溴(3.6 g， 15 mmol， 1.5当量)并且将混合物在室温下搅拌3小时。加入 乙酸乙酯(120mL)，并且用1 N HCl(3x25 mL)、盐水(2x25 mL)洗涤，干 燥(Na2S(Xt)，过滤并且浓缩至干燥，获得粗中间体3-C-乙炔基-l，2:5，6-双 -O-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯千基)-a-D-异呋喃糖，为淡黄色油状物。
通用方法2c步骤4: 3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2,5-二氯 千基)-a-D-异呋喃糖
将粗中间体3-C-乙炔基-l，2:5，6-双-0-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯节 基)-a-D-异呋喃糖(5.91 g， 10 mmol)溶于乙腈(50 mL)中。加入5体积％ H2S04溶液(12 mL)并且将混合物在室温下搅拌过夜。加入NaOAc溶液(O.l M， 20 mL)并且将混合物真空蒸发。在溶液残留物中加入乙酸乙酯(120 mL)。将乙酸乙酯层用饱和的NaHC03溶液(2x25mL)、盐水(2x25 mL)洗 涤，干燥(Na2S04)，过滤并且浓缩，获得粗中间体3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲 基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯千基)-a-D-异呋喃糖。
通用方法2c步骤5: 3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯 爷基)-5，6-双(4-曱基苯曱酸酯)-a-D-异呋喃糖-二苯甲酸月旨
将粗中间体3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯节 基)-a-D陽异p夫喻糖(5.6 g， 10 mmo l)溶于乙腈(30 mL)中。加入吡咬(7.9 mL， lOOmmol, 10当量)，然后加入对甲苯酰氯(3.11 mL， 30 mmol， 3当量)。将反应在55。C下搅拌3小时并且真空浓缩。加入乙酸乙酯(120 mL)并且用 1 NHCl溶液(3x25mL)、盐水(2x25 mL)洗涤，干燥(Na;jS04)，过滤并且浓 缩至干燥，获得粗中间体3-C-乙炔基-l，2-0-(l-甲基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯 辛基)-5，6-双(4-甲基苯甲酸酯)-a-D-异呋喃糖，为油状物。
通用方法2c步骤6: 3-C-乙炔基-3-0-(2，5-二氯千基)-5，6-双(4-曱基苯 甲酸酯)-D-阿洛糖
将粗中间体3-C-乙炔基-l，2-0-(l-曱基亚乙基)-3-0-(2，5-二氯节基)-双 (4-甲基苯曱酸酯)-a-D-异呋喃糖(7.4 g， 10 mmol)溶于乙腈(35 mL)中，加 入用7 mL水稀释的50。/oHBF4的水溶液(6.3 mL， 50 mmol， 5当量)。将 反应混合物在60。C下搅拌3小时。将乙酸乙酯(200 mL)加入至反应混合物 中并且用饱和的NaHC03溶液(2x30 mL)、 1 N HC1溶液(2x30 mL)、盐水 (2x30mL)洗涤，干燥(Na2S04)，过滤，浓缩并且通过快速色镨(己烷乙酸 乙酯=70: 30)纯化，获得3-C-乙炔基-3-0-(2，5-二氯千基)-5，6-双(4-甲基苯曱 酸酯)-D-阿洛糖，为白色泡沫状物(4.41 g， 7.36 mmol，历经四步产率 73.6°/o)。 1H-NMR(CDC13): 3 7.92-7.80(m, 4H)， 7.38(d， 0.79H, J = 2.4 Hz)， 7.34(d， 0.23H, J = 2.1 Hz)， 7.30醫7.09(m， 6H)， 5.84-5.60(m, IH)， 5.51(d, 0.76H, J = 3.9 Hz )， 5.40(d， 0.22 H， J = 1.5 Hz)， 4.94-4.50(m， 5H)， 4'29(d， 1H， J = 4.2 Hz)， 2'87(s， 0.23H)， 2.80(s， 0.76H)， 2.34(s， 6H)。 13C-NMR(CDC13): & 166.71， 166.59， 165.66, 165.63， 144.08， 143.88， 136.59， 136.41， 133.01， 132.98. 131.59， 131.25， 130.61， 130.48， 129.97， 129.91， 129.75， 129.45， 129.30， 129.26, 129.22， 127.16， 127.06， 102.76, 96.78， 81.53， 81.25， 80.91， 80.83， 80.67， 80.55， 80.21， 77.83， 77.74， 76.81， 76.70， 72.10， 71.24， 65.67， 65,61， 64.07， 63.84， 21.80,21.78。
通用方法2c步骤7: 2-C-乙炔基-2-0-(2，5-二氯千基)-3，5-双(4-甲基苯 曱酸酯)-D-核糖
将中间体3-C-乙炔基-3-0-(2，5-二氯节基)-5，6-双(4-甲基苯甲酸酯)-D-阿洛糖(2.20 g， 3.67 mmol)溶于乙腈(20 mL)中并且冷却至0。C。加入高碘 酸(1.25g， 5.50 mmol， 1,5当量)的H2O(5.0 mL)溶液，并且将反应搅拌30 分钟。加入乙酸异丙酯(50mL)，并且用饱和的NaHCO3溶液(50mL)、 5% 石克代碌L酸钠水溶液(30 mL)、盐水(30 mL)洗涤，干燥(Na;jS04)，过滤并且
54浓缩至干燥。将MeOH(20mL)加入至油状残留物中并且冷却至0。C。加入 三乙胺(1.09mL， 7.84 mmol， 2.1当量)，并且将反应在4。C下搅拌60小时。 加入乙酸乙酯(200 mL)，并且将有机相用1 N HCl溶液(2x40 mL)、盐水 (2x30mL)洗涤，干燥(Na2S04)，过滤，浓缩并且通过快速色镨(己烷乙酸 乙酯=75:25)纯化，获得标题化合物，为淡黄色糊状物。1H-NMR(CDC13): 3 7.99-7.84(m， 4H)， 7.51(d， 0.53H， J = 2.4 Hz)， 7.33(d， 0.43H, J = 2.4 Hz)， 7.28-7.10(m， 6H)， 5.94(d, 0.53H, J = 5.7 Hz)， 5.73(d, 0.43H, J = 4.2 Hz)， 5.57(s， 0.45H)， 5.46(s， 0.53H)， 4.98-4.85(m， 2H)， 4.80-4.54(m， 3H)， 2.81(s， 0.48H), 2.80(s, 0.40H)， 2.44-2.34(m， 6H)。 13C-NMR(CDC13):《166.65， 166.47， 165.62， 165.44， 144.89, 144.73， 144.07， 144.05， 137.64， 136.75， 133.04， 130.82， 130.46， 130.24， 130.21， 130.10， 130.06， 129.60， 129.51， 129.29， 129.26， 129.06, 128.94， 128.60， 128.39, 127.14， 127.12， 126.31， 126.13， 100.36， 100.34， 81.54， 80.24， 80.07, 79.51， 78.64， 78.48， 76.89， 76.60， 76.45， 66.34， 65.38， 64.76， 64.25,21.95， 21.88。
通用方法2c步骤8: (3R，4R，5R)-4-(4-曱基苯甲酰基lL&)-5-(4-甲基苯 甲酰基氧基甲基)-3-乙炔基-四氢-p夫喃-2，3-二醇
将中间体2-C-乙炔基-2-0-(2，5-二氯千基)-3，5-双(4-曱基苯甲酸酯)-D-核糖(1.H3 g, 1.95 mmol)溶于CH2C12(30 mL)中并且冷却至-35。C(邻二甲苯 和干冰，加入乙腈)。加入lMBCl3的CH2Cl2溶液(15.6mL， 15.6 mmol， 8当量)，并且将混合物在-35。C下搅拌3小时。将冷的曱醇(IO mL)加入至 反应中，然后加入KHC03粉末(3.9 g， 39.0 mmol， 20当量)。搅拌10分 钟后，将混合物过滤。加入CH2C12(30 mL)和1 N HC1溶液(20 mL),并且 将两层分离。将水层进一步用CH2C12(20 mL)萃取。将合并的<:112(:12溶液 用盐水(15mL)洗涤，千燥(Na2S04)，过滤，浓缩并且通过快速色谱(己烷: 乙酸乙酯=70:30)纯化，获得(311，41^，511)-4-(4-曱基苯甲酰基氧基)-5-(4-曱基 苯甲酰基氧基甲基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2，3-二醇，为白色泡沫状物。原料 可以回收。1H-NMR(CDC13): S 7.96-7.84(m， 4H)， 7.28-7.10(m， 4H)， 5.80画5,30(m， 2H)， 4.70-4.45(m， 3H), 2.67(s， 0.16H)， 2.59(s， 0.63H)， 2.44-2.34(m， 6H)。 13C-NMR(CDC13): 8 166.80， 166.61， 165.79， 165.67， 144.93， 144.78， 144.10， 144.07， 130.20， 130.08， 130.02， 129.50， 129.47， 129.26129.22， 127.02， 126.27， 101.73， 100.18， 81.85， 80.07， 79.57， 78.47， 76.75， 76.50， 76.13， 75.63， 73.07， 65.10， 64.16， 21.91， 21.84。
通用方法3:由中间体二保护的(在4-羟基和5-羟基曱基取代 基):(3R，4R，5R)-3-炔基-5-羟基甲基-四氢呋喃-2，3，4-三醇(II-l)制备本发明化 合物
应用任何适合的磺酰氯(例如Ms-Cl或Ts-Cl)或磺酸酐(例如Ms-O-Ms 或Ts-O-Ts)可以将化合物II-l转化为环氧化物。将该环氧化物与适合的碱 或碱类似物偶联，获得核苷类似物。尽管通用方法3描述了碱类似物4-氯 -7H-吡咯并[2，3-dj嘧啶，应当理解的是，可以应用任何适合的碱基团，例 如腺噤呤或鸟嘌呤类似物，其中X=N、 CH或CR4， Rl，^卣素、NR5R6 或OR7， R2，=H、卣素或NR5R6并且R3、 R4、 R5、 R6和R7如本文定 义的。在某些实例中，X可以是CH。在其它实例中，X可以是CR4。在 某些实例中R4可以是卤素，例如F或I。在其它实例中R4可以是炔基， 例如乙炔基。在某些实例中Rl，可以是囟素，例如C1。在其它实例中，Rl， 可以是氨基或烷氡基，例如甲氧基。在某些实例中R2，可以是H。 >^碱类 似物的其它实例包括例如4-氯-7H-吡咯并2，3-d嘧啶、4-氯-5-氟-吡咯并 [2，3_(11嘧啶、 一氯-5-碘-吡咯并[2，3-d]嘧啶、7H-吡咯并2，3-dl嘧啶-4-基-异 吲咪-l，3-二酮和4-氯-5-乙炔-吡咯并[2，3-d嘧啶。偶联步骤可以应用任何适 合的试剂(例如适合的碱，例如NaH)进行。保护基R8，可以是任何适合的 保护基，例如2，4-二氯千基或2，5-二氯千基、甲苯酰基、苯甲酰基或千基。 这些可以通过适合的试剂(例如应用BCl3或适合的碱，例如甲醇钠)除去。20
FV-2,4-二氯苄基、甲笨酰基、笨甲跣基或苄基
X = N, CH或CR4
R，'=卣素，NR5R6或OR7
FV = H, d秉或NR5R6
R3, R4, R5, R6和R7如本文定义的
通用方法3步骤1: 1,2-脱7jC-2-C-乙炔基-3，5-双(4-曱基苯曱酰基)-a-D-吹喃核糖
将中间体(3只，41^，511)-4-(4-甲基苯甲酰基氧基)-5-(4-甲基苯甲酰基氧基 甲基)-3-乙炔基-四氩-呋喃-2，3-二醇(11-1)(304 mg， 0.74 mmo)溶于 CH2C12(4 mL)中。加入三乙胺(308.4 ^L, 2.22 mmol， 3当量)并且将混合 物加热至30。C。历经10分钟，滴加入曱磺酸酐(167.6mg， 0.96 mmol, 1.3 当量)的CH2C12(1 mL)溶液。将反应在40。C下搅拌2.5小时并且加入 CH2C12(50 mL)。将CH2Cl2溶液用H20(2x5 mL)、盐水(IO mL)洗涤，千 燥(NazS04)，过滤并且浓缩至干燥，获得粗中间体1，2-脱水-2-C-乙炔基-3，5-双(4-甲基苯曱酰基)-oc-D-呋喃核糖。
通用方法3步骤2: (2议，31^，41^511)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-(11嗜咬-7-基)_4_(4_甲基苯甲酰基氧基)-5-(4-甲基苯甲酰基氧基曱基)-3-乙炔基-四氢 呋喃-3-醇
在装有4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(227.3 mg， 1.48mmo1, 2当量)的干燥烧瓶中加入NaH(59.2mg， 60。/o的油^t液，1.48 mmol， 2当量)和乙腈 (4 mL)，搅拌10分钟。加入溶于乙腈(2 mL)中的粗中间体1，2-脱水-2-C-乙炔基-3，5-双(4-曱基苯曱酰基)-a-D-呋喃核糖(383mg， 0.74mmo1, 1当量) 并且将反应在50。C下加热15小时。通过加入1 N HC1溶液将混合物中和 至pH7.0，并且真空蒸发。将乙酸乙酯(50mL)加入至残留溶液中并且将其 用1 NHCl溶液(8mL)、 H20(8 mL)、盐水(IO mL)洗涤，千燥( 32804)， 过滤并且浓缩至干燥，获得粗中间体(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-dl 嘧咬-7-基)-4-(4-曱基苯曱酰基氧基)-5-(4-曱基苯甲酰基氧基甲基)-3-乙炔基 -四氢呋喃-3-醇(434 mg)。
通用方法3步骤3: (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-dl嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-3，4-二醇
将粗中间体(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)-4-(4-甲基 苯甲酰基氧基)-5-(4-甲基苯甲酰基氧基甲基)-3-乙炔基-四氢-呋喃-3-醇(434 mg， 0.74 mmol)溶于MeOH(5 mL)和CH2Cl2(5 mL)中。加入30%甲醇钠 的曱醇溶液(1.38 mL， 7.4 mmol， 10当量)，并且将混合物在室温下搅拌 15分钟。通过加入lNHCl溶液将混合物中和至pH7.0，并且真空蒸发至 干燥，通过快速色镨(CH2Cl2:MeOH-92:8)纯化，获得(21^，311，411，511)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-3，4-二醇。 1H-NMR(CDC13): 3 8.58(s， 1H)，謹(d， 1H， J = 3.9 Hz)， 6.68(d， 1H， J = 3.9 Hz)， 6.49(s， 1H)， 4,51(d， 1H， J = 9.0 Hz)， 4.20國3.75(m， 3H)， 2.51(s， 1H)。 ESI-MS:计算值C13H12ClN3O4(309.05);实测值310.3。
通用方法3步骤4: (211，311，411，5议)-2-(4-氨基-吡咯并[2，3-(11嘧咬-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇
将(2R，3R^R，5R)-2-(4-氯-吡咯并2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲 基-四氢呋喃-3，4-二醇(198.0 mg， 0.64 mmol)和NH3.H2O(30 mL)的混合物 在玻璃压力管中在100。C下加热5小时。将反应混合物浓缩至千燥并且通 过快速色谱(CH2Cl2:MeOHN80:20)纯化，获得(2R，3R,4R，5R)-2-(4-氨基-吡 咯并12，3-dj嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-3，4-二醇，为淡黄色 固体。1H匪R(300MHz， MeOD): 6 8.07(1H， s)， 7.48(1H， d， J = 3.9 Hz)，6'58(1H, d， J = 3.6 Hz)， 6.29(1H， s)， 4.49(1H， d， J = 8.4 Hz)， 4.08-3.96(2H， m)， 3.90-3.75(lH， m)， 2.52(1H， s) 。 1H NMR(300MHz， DMSO-d6): 3 8.05(1H, s)， 7.41(1H, d， J = 3.6 Hz)， 6.97(2H， s), 6.55(1H， d， J = 3.6 Hz)， 6.23(1H， s)， 6.16(1H， s), 5.61(1H， d， ，J = 7.5 Hz)， 5.13(1H， t, J = 4.9 Hz)， 4.33(1H， t, J = 7.8 Hz), 3.卯-3.70(2H， m)， 3.78-3.68(lH， m)， 3.01(1H， s)。 13C NMR(75MHz， DMSO-d6): S 157.4， 151.6, 150.1， 121.6， 102.4， 99.6， 89.6, 82.1， 81.8， 76.5, 75.8,74.0,59.7。 ESI画MS:计算值C13H14N4O4(290.1);实 测值291.2。 实施例
本发明参考以下实施例进行描述。应该理解的是，本发明并不限制于 这些实施例。 缩略语
DMSO二甲亚砜
THF四氢吹喃
DMAP4-二曱基氨基吡啶
醒R核磁共振
TEA三乙胺
MS质谱
DMF二曱基甲酰胺
DCM二氯甲烷
PBS磷酸緩冲盐溶液
FBS胎牛血清
HRP辣根过氧化物酶
TMB3，3，，5，5，-四甲基联苯胺
DMEMDulbecco改良的Eagle培养基
I.制备本发明化合物 实施例1
(2R，3R，4R,5R)-2-(4-氨基-吡咯并l2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱 基-四氢呋喃-3，4-二醇<formula>formula see original document page 60</formula>
标题化合物根据通用方法1由可商购获得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-2-曱氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯 吡咯并[2，3-dj嘧啶制备。
可选择的是，该化合物根据通用方法2a、 2b或2c和通用方法3制备。
黄色固体。1H醒R(300MHz， MeOD): 3 8，07(1H， s), 7.48(1H， d， J = 3.9 Hz)， 6.58(1H， d， J = 3.6 Hz)， 6.29(1H， s)， 4.49(1H, d， J = 8.4 Hz)， 4.08-3.96(2H, m)， 3.90-3.75(lH， m)， 2.52(1H， s) 。 1H NMR(300MHz， DMSO-d6): 3 8.05(1H， s)， 7.41(1H， d， J = 3.6 Hz)， 6.97(2H， s)， 6.55(1H， d， J =3.6 Hz)， 6.23(1H, s)， 6.16(1H， s)， 5.61(1H， d， J = 7.5 Hz)， 5.13(1H， t， J = 4.9 Hz)， 4.33(1H， t， J = 7.8 Hz)， 3.90-3,70(2H， m)， 3.78曙3.68(1H， m)， 3.01(1H， s)。 13C匪R(75MHz， DMSO-d6): 6 157.4， 151.6， 150.1， 121.6, 102.4， 99.6， 89.6， 82.1， 81.8, 76.5， 75.8， 74.0， 59.7 。 ESI國MS : 计算值 C13H14N404(2卯.1);实测值291.2(M+l)。
laJD: +160.0。(ATAGO AP-100旋光计；甲醇溶剂；100mm观察管； 23.4。C;波长589腿)。
实施例2
(2R，3R,4R，5R)-2-(4-氯-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇
<formula>formula see original document page 60</formula>
标题化合物根据通用方法1由可商购获得的(3R,4R，5R)-5-(2,4-二氯节基氧基曱基)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯
吡咯并[2 ，3-d]嘧啶制备。
可选择的是，该化合物根据通用方法2a、 2b或2c和通用方法3制备。 白色固体。lH陽NMR(300MHz， MeOH-d4): S 8.59(1H， s), 8.01(1H, d， J
=4.2 Hz)， 6.69(1H， d， J = 3.9 Hz)， 6.49(1H， s)， 4.50(1H， d， J = 9.3 Hz)，
4.06-3.99(2H， m)， 3.87画3.82(1H， m)， 2.52(1H， s) 。
ESI-MS: 计算值
C13H12ClN3O4(309.2);实测值310.6(M+l)。
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基 曱基-四氩呋喃-3,4-二醇
标题化合物才艮据通用方法2a或2b和通用方法3由可商购获得的 (3R,4R，5R)-5-(2，4-二氯千基氧基甲基)-4-(2，4-二氯千基氧基)-2-甲氧基-四 氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dl嘧啶制备。
1H NMR(300MHz， MeOD): S 8.60(1H， s)， 7.92(1H， d， J = 2.1 Hz)， 6.54(1H， d， J = 2.1 Hz)， 4.46(1H， d， J = 8.7 Hz)， 4.05-3.95(2H， m)， 3.90-3.80(lH，m)，2.56(lH，s)。 ESI-MS:计算值C13HllClFN3O4(327.0); 实测值328.2。
(211，311，411，511)-2-(4画氨基-5-氟-吡咯并12，3画d j嘧啶-7-基)-3画乙炔基-5画羟 基曱基-四氢呋喃-3，4-二醇
标题化合物才艮据通用方法2a或2c和通用方法3由可商购获得的 (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯节基氧基甲基)-4-(2,4-二氯节基氧基)-2-甲氧基-四
实施例3
实施例4氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dj嘧啶制备。
1H醒R(300MHz， MeOD): 3 8.08(1H， s)， 7.39(1H， d， J = 2.1 Hz)， 6，34(1H， d， J = 2.1 Hz)， 4.44(1H， d， J = 9.0 Hz)， 4.05-3.95(2H， m), 3.85-3.75(lH， m)， 2.58(1H， s)。 ESI-MS:计算值C13H13FN4O4(308.1);实 测值309.2。
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氯-5-碘-吡咯并[2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基 曱基-四氢呋喃-3，4-二醇<formula>formula see original document page 62</formula>
标题化合物才艮据通用方法1由可商购获得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯节 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-2-曱氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯 -5-碘-吡咯并l2，3-d嘧咬制备。
可选择的是，该化合物根据通用方法2a和通用方法3制备。 白色固体。'H-NMR(300MHz, DMSO-d6): 3 8.69(1H， s)， 8.36(1H， s)， 6.39(1H， s)， 6,33(1H, s)， 5.70(1H， d， J = 7.60 Hz)， 5.33(1H， t， J = 4.85 Hz)， 4.34(dd， J = 8.94， 7.47 Hz， 1H)， 3.92國3.81(2H， m)， 3.71-3,64(1H， m)， 3.04(1H s)。
ES1-MS:计算值C,3HuClIN304(435.6);实测值436.1.2(M+l)。 13C醒R(75MHz， DMSO-d6): S 151.67， 151.32, 144.28， 133.96， 117.00, 90.85， 83.06， 82.08， 77.46， 76.61， 73.85， 59.54， 53.76。
(2R，3R，4R，5R)-3-乙炔基-5-羟基甲基-2-(5-碘-4-甲氧基-吡咯并[2，3-dJ 嘧啶-7-基)-四氢呋喃-3，4-二醇<formula>formula see original document page 62</formula>
实施例5
实施例6标题化合物根据通用方法1由可商购获得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯千 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯苄基氧基)-2-曱氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯 -5-碘-吡咯并[2，3-€1嘧啶制备，然后通过用甲醇处理将氯代化合物转化为曱 氧基化合物。
可选择的是，该化合物根据通用方法2a和通用方法3制备。
白色固体。'H曙NMR(300MHz， DMSO-d6): S 8.44(1H， s)， 7.97(1H, s), 6.28(2H, s), 5.66(1H， d， J = 7.34 Hz)， 5.24(1H， t， J = 4.73 Hz)， 4.33(t， J = 7.76， Hz， 1H)， 4.05(3H， s)， 3.88-3.79(2H， m)， 3.67-3.62(lH， m)， 3.03(1H， s)。 ESI-MS:计算值C14H14IN305(431.2);实测值432.1.2(M+l)。
13C NMR(75MHz, DMSO-d6): S 162.82， 152.19， 144,62， 144.54， 144.41， 129.81， 107.02， 82.79, 82,26， 76.58， 73.98， 59.68, 54.37， 51.69。
实施例7
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟 基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇
标题化合物才艮据通用方法1由可商购获得的(3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯爷 基氧基甲基)-4-(2，4-二氯-苄基氧基)-2-甲fL^-四氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯—5-碘-吡咯并12，3-dl嘧啶制备。
可选择的是，该化合物根据通用方法2a和通用方法3制备。
白色固体。'H-NMR(300MHz， DMSO-d6): S 8.10(1H， s)， 7.75(1H， s)， 6.62(2H， bs)， 6.20(2H， d， J = 2.38 Hz)， 5.60(1H， d， J = 7.38 Hz), 5.18(1H， t， J =5.18 Hz)， 4.31(dd， J = 8.64， 7.47 Hz， 1H)， 3.84-3.76(2H， m)， 3.65國3.64(1H， m)， 3.07(1H， s)。 ESI-MS:计算值C13H13IN404(416.2);实测值417.2(M+1)。
13C匪R(75MHz， DMSO-d6): 6 157.80， 150.71， 144.96， 127.45， 103.48， 90.16， 82.63， 82.49， 77.31， 76.50， 74.18， 59.85， 52.29。
实施例8
(21^，311，411,511)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并[2，3-司嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢-呋喃-3，4-二醇
HO
标题化合物根据通用方法2a和通用方法3由可商购获得的 (3R，4R，5R)-5-(2，4-二氯苄基氧基甲基)-4-(2，4-二氯-苄基氧基)-2-曱氧基-四 氢呋喃-3-乙酸酯1-1和4-氯-5-乙炔-吡咯并[2，3-d嘧啶或4-氯-5-三甲基甲硅 烷基乙炔基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶制备。
可选择的是，标题化合物和实施例9和10化合物是由 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并12，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲 基-四氢呋喃-3，4-二醇(实施例7)制备的。在干燥并且预冷的25 mL圆底烧 并瓦中加入溶于无水THF(l.O mL)和无7JC DMF(0.5 mL)、三乙胺(0.04 mL， 0.288 mmol)、三甲基甲硅烷基乙炔(0.024 mL ， 0.173 mmol)中的 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并[2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲 基-四氢呋喃-3，4-二醇(0.060 g， 0.144 mmol)、碘化铜(1)(0.006 g， 0.028 mmol)、四(三苯膦)钯(0)(0.016 g， 0.014 mmol)。将反应混合物在0。C至室 温下、在氩气下搅拌30分钟。将溶剂真空除去，并且将获得的残留物溶于 曱醇(0.60 mL)和30%氨溶液(0.60 mL)中。将产生的反应混合物在室温下搅 拌1小时。将溶剂真空除去。将获得的粗残留物通过反相制备HPLC在 Atlantis C"柱(250x20mm)上纯化，梯度为5至95%在水中的乙腈。将包 含所需产物的级分分离，蒸发并且从水中冻干，获得(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并[2，3-dl嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基甲基-四氢-咬喃 一3，4-二醇(实施例8)、 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并l2,3-dl嘧咬 -7-基)-3-丁-1，3-二炔基-5-羟基曱基-四氢-呋喃-3，4-二醇(实施例9)和 (2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并2，3-d嘧啶-7-基)-3-丁-l,3-二炔基5-羟基甲基-四氢-呋喃-3,4-二醇(实施例10)，为白色固体。
白色固体。，H-NMR(300MHz， DMSO-d6): 8 8.14(1H， s)， 7.88(1H， s)， 6.62(1H， bs)， 6.26-6.20(2H， m)， 5.70(1H， bs)， 5.25(1H， bs)， 4.33(d， J = 8.79Hz， 1H)， 4.26(1H， s)， 3.85-3.62(4H， m), 3,06(1H， s)。
ESI-MS:计算值C15H14IN404(314.3);实测值315.3(M+1)。 实施例9
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并2，3-d嘧啶-7-基)-3-丁-l，3-二炔基-5-羟基甲基-四氢-呋喃-3，4-二醇
标题化合物如以上实施例8描述的制备。
白色固体。1H-NMR(300MHz， DMSO-d6): 8 8.15(1H， s)， 7.92(1H， s)， 6.60(2H， bs)， 6.21(1H， s)， 5.80(1H， bs)， 5.25(1H， bs)， 4.36(d， J = 9.08 Hz， 1H) 4.28(1H， s)， 3.88-3.78(2H， m)， 3.67-3.62(2H， m), 3.54(1H， s)。
ESI-MS:计算值C17H14N404(338.3);实测值339.3(M+1)。
实施例10
(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-碘-吡咯并2，3-dl嘧啶-7-基)-3-丁-l，3-二炔 基-5-羟基甲基-四氢-呋喃-3，4-二醇
标题化合物如以上实施例8描述的制备。
白色固体。ESI-MS:计算值ClsH13IN4O4(440.2);实测值441.2(M+1)。 实施例11:合成碱基团
尜氯-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶是可商购获得的。4-氯-5-氟-吡咯并[2，3-dl 嘧咬可以3口 X Wang， P P Seth， R Ranken， E E Swayze和M T Migawa， Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 23:1， 161-170中描述的合成。 7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-4-基-异吲哚-l，3-二酮可以如M M Bio， F Xu， M Waters, J M Willimas, K A Savery， C J Cowden, C Yang， E Buck, Z J Song, D M Tschaen， R P Volante， R A Reamer, E J J Grabowski， J. Org.Chem. 2004， 69, 6257-6266中描述的合成。4-氯-5-碟-吡咯并[2，3-d嘧^和 4-氯-5-乙炔-吡咯并[2，3-d嘧啶可以由以下描述的4-氯-7H-吡咯并[2，3-dj嘧 咬合成。其中如通用方法3描述的，将碱7H-吡咯并[2，3-d嘧咬-4-基-异p引 咮-l，3-二酮与糖基团偶联，保护基可以在偶联步骤之后在碱性条件下(例如 l-丁基胺，在甲醇中)除去(例如在65。C下加热12小时)。从而可以获得相应 的4-氨基-吡咯并12，3-d嘧咬-7-基核苷。
实施例ll.l:在用铝箔避光的250 mL圆底烧瓶中，加入溶于无水DMF 中的4-氯-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶1(2.15 g， 14.0 mmol)和N-碟琥珀酰亚胺 (3.37 g， 14.98 mmol)。将反应混合物在室温下、在氮气下搅拌16小时。 将溶剂真空除去，并且将残留物溶于二氯曱烷(250 mL)中。将反应混合物 用盐水(50mL)洗涤，并且将有才几层分离，经Na2S04千燥并且真空浓缩。 将粗残留物通过快速色傳在硅胶上纯化，并且用60。/。在环己烷中的EtOAc 洗脱。将包含所需产物的级分(TLC)合并并且蒸发，获得4-氯-5-碘-吡咯并 12，3-dl嘧啶，为淡黄色固体。
ESI画MS:计算值C6H3C1IN3(279.4);实测值280.07(M+1)。 实施例11.2:在用铝箔避光的250 mL圆底烧瓶中，加入溶于无水 THF(60 mL)、无水DMF(20 mL)和三乙胺(0.64 mL， 4.65 mmol)的4-氯画5-碘-7H画吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.3 g， 4.6mmo1)、 ^Ht铜(1)(0.17 g， 0.93 mmol)、 三甲基曱珪烷基乙炔(0.96 mL， 6.97mmol)和四(三苯膦"巴(0)(0.26 g， 0.23 mmol)。将反应混合物在室温下、在氮气下搅拌16小时。将溶剂真空除去， 并且将残留物溶于二氯甲烷(250 mL)中。将反应混合物用水(3x50 mL)洗 涤，并且将合并的有机层经Na2S04干燥并且真空浓缩。将粗残留物通过 快速色谱在珪胶上纯化，并且用70。/。在环己烷中的EtOAc洗脱。将包含所需产物的级分(TLC)合并并且蒸发，获得4-氯-5-三甲基甲硅烷基乙炔基 -711-吡咯并2，3-^嘧啶，为黄褐色白色固体。
'H國NMR(300MHz， DMSO-d6): 3 12.92(1H， s)， 8.62(1H， s)， 8.06(1H， s), 0.23(9H， s)。
ESI-MS:计算值CnH，2ClN3Si(249.7);实测值250.2(M+l)。 或者将4-氯-5-三甲基曱硅烷基乙炔基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶直接用于 偶联步骤，如通用方法3中所示，在该情况中，三甲基甲硅烷基是在偶联 反应条件下裂解的，或者应用例如氨、NaOH或KOH通过脱甲硅烷基反 应可以将其转化为4-氯-5-乙炔-p比咯并2，3-d嘧啶。 II.本发明化合物的抗病毒活性
本发明化合物具有对抗黄病毒科的多种成员的活性。本发明化合物的 活性可以在标准体外和体内试验中显示。
50y。有效浓度(ECso)是降低50%的病毒所产生的信号的试验化合物的 浓度。其是应用非线性回归分析计算的，应用变量斜率S形的剂量响应曲 线和商购的软件，例如Prism或ActivityBase。
实施例12
基于细胞的黄病毒属(FlavMrus)免疫检测(CFI)试验 将BHK21或A549细胞用胰蛋白酶消化、计数并且在Hams F-12培 养基(对于A549细胞)或添加2。/。胎牛血清和1%青霉素/链霉素的 RPMI-1640培养基(对于BHK21细胞)中稀释至2xl()5个细胞/mL。将2xl04 个细胞/孔分布在透明的96-孔组织培养板中，并且在37°C、 5。/。C02下放 置过夜。第二天，将细胞在多种浓度的试验化合物的存在下、在37。C和 5。/。C02下、在相同培养基中以0.3复合感染(MOI)用病毒感染1小时。将 包含病毒和化合物的培养基除去，用仅包含试验化合物的新鲜培养基替代 并且在37°C、 5。/。C02下再培养48小时。将细胞用PBS洗涤一次并且用冷 的甲醇固定10分钟。用PBS洗涤两次后，将固定的细胞用包含1%FBS 和0.05吐温-20的PBS在室温下封闭1小时。然后加入浓度为1:20至 1:100(在包含1%FBS和0,05吐温-20的PBS中)的一抗溶液(4G2)达3小时。 然后将细胞用PBS洗涤3次，然后与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗鼠
67IgG(Sigma， 1:2000稀释)培养1小时。用PBS洗涤3次后，将50 pL 3,3，，5，5，-四甲基联苯胺(TMB)底物溶液(Sigma)加入至每孔中达2分钟。将反应通过 加入0.5 M硫酸来终止。将板在450 nm处读取吸光度，用于病毒载量定量。 测量后，将细胞用PBS洗涤3次，然后用碘化丙咬培养5分钟。将板在 TecanSafire读板仪(激发537 nm，发射617nm)中读数，用于细胞数量定 量。剂量响应曲线是用平均吸光度对试验化合物浓度的对数来绘制的。EC5() 是通过非线性回归分析来计算的。可以应用阳性对照，例如N-壬基-脱氧 野尻霉素。
实施例13
基于细胞的黄病毒属致细胞病变作用(CPE)试验
为了试验对抗西尼罗河病毒或日本脑炎病毒，将BHK21细胞用胰蛋 白酶消化并且在添加2%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的RPMI-1640培养 基中稀释至浓度为4xl()5个细胞/mL。为了试验对抗登革病毒，将Huh7 细胞用胰蛋白酶消化并且在添加5。/。胎牛血清和1%青霉素/链霉素的 DMEM培养基中稀释至浓度为4xl()5个细胞/mL。将50 细胞悬浮液 (2xl04个细胞)/孔分布在96-孔底部透光的PIT聚合基质板(Nunc)中。将细 胞在培养基中、在37。C、 5。/。C02下培养过夜，然后以MObO,3用西尼罗 河病毒(例如B956菌林)或日本脑炎病毒(例如Nakayama菌林)或者以 MOI=l用登革病毒(例如DEN-2 NGC菌林)，在不同浓度的试验化合物的 存在下感染。将包含病毒和化合物的板进一步在37。C、 5。/。C02下培养72 小时。培养结束后，将100iaLCellTiter-Glo⑧试剂加入至每孔中。将内容 物在定轨振荡器上混合2分钟，以诱导细胞裂解。将板在室温下培养10 分钟，以稳定发光信号。发光读数是应用读板仪记录的。可以应用阳性对 照，例如N-壬基-脱氧野尻霉素。
实施例14
基于细胞的丙型肝炎病毒(HCV)复制子试验
将包含HCV复制子的细胞(Huh-luc/neo-ET)保持在包含2 mM L-谷氨 酸盐、0.1 mM非必需氨基酸溶液、10%热灭活的胎牛血清和250 mg/mL Geneticin⑧、G418硫酸盐溶液的DMEM培养基中。将细胞保持在20至80。/。的融合并且用胰蛋白酶(0.05。/。)/EDTA溶液进行胰蛋白酶消化。胰蛋 白酶消化后，将细胞重新悬浮于添加的DMEM无酚红的培养基(添加2 mM L-谷氨酰胺、0.1 mM非必需氨基酸溶液、10。/。热灭活的胎牛血清和1 mM 丙酮酸钠的DMEM无酚红的培养基)中，并且以420 g离心沉淀5分钟。 计算细胞密度并且用无酚红的培养基稀释至lxl05个细胞/mL。
制备两套板，白色不透光96-孔板用于荧光素酶读数，96-孔透明板用 于细胞毒性测量。将每个孔4妾种IO，OOO个细胞/孔，并且在37。C、 5%C02 下培养过夜。培养后，将培养基吸出并且加入添加多种浓度化合物的无酚 红的培养基，并且将板进一步在37。C、 5。/。C02下再培养48小时。作为阳 性对照，可以应用例如NM107(2，-C-曱基胞苷)。
为了测量荧光素酶活性，将板从培养箱中取出，使得它们平衡至室温 达30分钟，并且荧光素酶活性是在加入100 |uL根据厂商说明书制备的 Britelite⑧(PerKin Elmer)后测量的。
III.本发明化合物在登革热感染的小鼠模型中的抗病毒活性
实施例15
本发明化合物在登革热感染的小鼠模型体内也显示出活性(Schul等人， Journal of Infectious Diseases 2007; 195:665-74)。简而言之，将AG129小 鼠(B&K Universal Ltd, Hull, UK)饲养在单独通风的笼里(TechniPlast， Italy)并且应用6至10周龄。将小鼠腹膜内注射0.4 mL TSV01登革病毒2 悬浮液。血样是在异氟烷麻醉下通过后眼眶穿刺获取的。将血样收集在包 含终浓度为0.4%的柠檬酸钠的试管中，并且立刻以6000 g离心3分钟， 获得血浆。将20 nL血浆稀释在780 RPMI 1640培养基中并且迅速冻 存在液氮中，用于噬菌斑试验分析。剩余的血浆用于细胞因子和NSl蛋白 质水平测定。小鼠l艮成登革病毒血症在数天内上升，在感染后第3天达 到峰值。
为了试验抗病毒活性，将本发明化合物溶于介质液中，例如10%乙醇、 30%PEG300和60%05\￥(5%葡萄糖水溶液)；或6 N HC1(L5当量):l N NaOH(pH调节至3.5):100 mM柠檬酸盐緩冲液pH 3.5(0.9 %v/v : 2.5 %v/v : 96.6%v/v)。将36只6-10周龄的AG129小鼠分成6组，每组6只小鼠。如以上描述的，将所有的小鼠用登革病毒感染(O天)。组l通过口服 管饲法施用200 mL/只小鼠0.2 mg/kg的本发明化合物， 一天两次(早晨一 次、傍晚一次)，从0天开始连续3天(首剂量恰好在登革热感染前给药)。 组2、 3和4以相同方法分别施用1 mg/kg、 5 mg/kg和25 mg/kg本发明化 合物。可以应用阳性对照，例如抗病毒化合物或(2R，3R，4R，5R)-2-(2-氨基-6-羟基-嘌呤-9-基)-5-羟基甲基-3-甲基-四氢-呋喃-3,4-二醇，采用先前组的相 同方法通过口服管饲法施用200 pL/只小鼠。另外一组仅用介质液体处理。
感染后第3天，约100 ^L血样(用柠檬酸钠抗凝)是在异氟烷麻醉下通 过后眼眶穿刺从小鼠中获取的。血浆是通过离心从每个血样中获得的，并 且迅速冻存于液氮中，用于噬菌斑试验分析。将收集的血浆样品通过噬菌 斑试验分析，如Schul等人，Journal of Infectious Diseases 2007; 195:665-74 中描述的。细胞因子也如Schul等人，Journal of Infectious Diseases 2007; 195:665-74中描述的进行分析。NSl蛋白质水平应用Platelia⑧试剂盒 (BioRad Laboratories)分析。抗病毒作用是通过细胞因子水平和/或NSl蛋 白质水平的减少来指示的。
本发明化合物以剂量为5-50 mg/kg(—天两次)显示出剂量响应抑制， 与对照组相比，获得病毒血症降低约5-100倍、例如约10-60倍、例如约 20-30倍。例如，实施例1的化合物以剂量为25mg/kg(—天两次)显示出剂 量响应抑制，获得病毒血症降低约20倍。
IV.用于登革热临床试验的临床试验方案
临床试验例如以以下方法进行。I期研究是在64位健康成年志愿者中 进行随机的，安慰剂可控的剂量增加试验，以评价单个和多个口服剂量后 的安全性、耐受性和药物代谢动力学。基于登革病毒血症典型地持续5-7 天，进行7天给药。食物对血浆药物水平的影响是在一个同期组志愿者中 评价的。
IIa期研究是随机的、安慰剂可控的剂量增加试验，以评价本发明化合 物在急性登革热成年患者中的抗病毒活性。有3个同期组，总共约60个个 体。将适合的住院患者在发病的48小时内随机分入药物或安慰剂组，以提 供观察抗病毒或临床作用的最好机会。每天给药或根据药物的药物代谢动力学性质所示的给药，至多3天。临床、血液学、生物化学和病毒学的指 标每天测量4次，直至退热后72小时。主要的试验室终点是病毒血症消退 的时间。主要的临床终点M烧消退的时间。病毒血症消退的及时显著的 降低是成功的说明。次要的测量可以包括NS1抗原血症消退的时间、血小 板减少症恢复的时间以及任何静脉内补液的需求。
应当理解的是，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的并且关 于它的多种修饰或变化将提供给本领域技术人员以建议，并且包括在本申 请书的精神和范围内以及附属权利要求的范围内。
权利要求
1.式(I)化合物或者其可药用盐或前药其中X是CH或CR4；R1是卤素、NR5R6或OR7；R2是H、卤素或NR5R6；R3是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；R4是烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、卤素、氰基、硝基、羟基、烷氧基、烷基硫代、氨基、烷基氨基、羧基、酰胺或烷基氧基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；R5和R6独立地选自H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羟基、烷氧基、芳基羰基和烷基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；并且R7是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、烷基羰基或芳基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代。
2.权利要求1中要求的化合物，其是式(II)化合物或者其可药用盐或 前药<formula>formula see original document page 3</formula>其中X是CH或CR4; Rl是卣素、NR5R6或OR7; R2是H、卣素或NR5R6;R3是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基或杂芳基， 它们每个任选被一个或多个取代基取代；R4是烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环烷基、杂芳基、闺素、 氰基、硝基、羟基、烷氧基、烷基硫代、氨基、烷基氨基、羧基、酰胺或烷基氧基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；R5和R6独立地选自H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环烷基、杂环 烷基、杂芳基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、羟基、烷氧基、芳基羰基和 烷基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代；并且R7是H、烷基、链烯基、炔基、芳基、环垸基、杂环烷基、杂芳基、 烷基羰基或芳基羰基，它们每个任选被一个或多个取代基取代。
3.化合物，其选自
4. (211，311，411，511)-2-(4-氨基-吡咯并[2，3-(1嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基 曱基-四氢呋喃-3，4-二醇。
5. (2议，311，411，51^)-2-(4-氨基-5-乙炔基-吡咯并2，3-d嘧啶-7-基)-3-乙炔 基-5-羟基甲基-四氢呋喃-3，4-二醇或(2R，3R，4R，5R)-2-(4-氨基-5-氟-吡咯并 [2，3-dj嘧淀-7-基)-3-乙炔基-5-羟基曱基-四氢呋喃-3，4-二醇。
6. 药物组合物，该药物组合物包含权利要求1至5中任意一项要求的 化合物或者其可药用盐或前药，与可药用赋形剂、稀释剂或栽体组合。
7. 权利要求1至5中任意一项要求的化合物或者其可药用盐或前药， 其用作药物。
8. 权利要求1至5中任意一项要求的化合物或者其可药用盐或前药在 制备用于治疗和/或预防由病毒感染引起的疾病的药物中的用途。
9. 治疗和/或预防由病毒感染引起的疾病的方法，该方法包括给需要的 患者施用有效量的权利要求1至5中任意一项的化合物。
10. 权利要求8中要求的用途或权利要求9中要求的方法，其中病毒 感染是由选自以下的病毒引起的登革病毒、黄热病病毒、西尼罗河病毒、 日本脑炎病毒、蜱媒脑炎病毒、昆金病毒、墨累谷脑炎、圣路易斯脑炎、 奥马斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、齐卡病毒和丙型肝炎病毒。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)的核苷化合物，其具有多种医药应用，例如用于治疗和/或预防病毒感染。
文档编号A61P31/12GK101600726SQ200880003104
公开日2009年12月9日 申请日期2008年2月7日 优先权日2007年2月9日
发明者J·杜赖斯瓦米, Y·L·陈, 正 尹 申请人:诺瓦提斯公司