本发明属于药物合成领域，具体涉及一类新型四肽环氧丙烷衍生物及其在药效学上的应用。
背景技术：
：目前，恶性肿瘤仍然是威胁人们生命的主要疾病之一。癌症的治疗目前虽然已经取得了很大的进步，但还未能从根本上治疗癌症。目前上市的抗癌药物虽然具有一定的疗效，但它们大多是细胞毒药物，具有严重的毒副作用。因此，如何从有效的肿瘤靶点出发来研究靶向性的新型抗癌药物成为医药工作者的当务之急。泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasomepathway，简称upp)能够调控参与细胞周期控制的蛋白质的水平，这一途径与癌症、心脑血管疾病及神经系统退行性疾病的发病等都有重要的关系。使用一些有效的抑制剂来抑制这一途径过度降解重要的蛋白质将会为上述疾病的治疗提供新的思路。卡非佐米(carfilzomib)用于治疗之前接受至少2种药物(包括硼替佐米和免疫调节剂治疗)的多发性骨髓瘤(mm)，是新一代的高度选择性不可逆蛋白酶体阻断剂，于2012年7月20日由美国食品与药物管理局(fda)批准上市。多个临床研究证实卡非佐米单药或与其他药物联合治疗均具有较强的抗mm作用，毒性小，尤其外周神经病变发生率较低，耐受性好，安全性高。技术实现要素：发明目的：针对上述技术问题，本发明目的提供一种结构新颖的且具有抑制蛋白酶体功能的环氧酮类化合物。它们作为20s蛋白酶体抑制剂，能阻断肿瘤细胞增殖，诱发肿瘤细胞凋亡，从而可用于人和动物的多种疾病如恶性肿瘤的治疗和预防。本发明的另一目的是提供一种上述化合物的制备方法。本发明还有一个目的是提供一种上述化合物在制备抗肿瘤药物方面的应用。技术方案：本发明公开了一种四肽环氧丙烷衍生物或其药物可接受盐，其结构如式i所示，其中：r1为取代或非取代的c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基、芳基或者杂环芳基；r2为取代或非取代的c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基、芳基或者杂环芳基；r3为取代或非取代的c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基、芳基或者杂环芳基；r4为取代或非取代的c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基、芳基或者杂环芳基；z选自以下片段：p为氢，或者为取代或非取代的c1～10的烷基、c1～10的烷氧基、苯基、萘基、四氢萘基、杂环烷基或杂环芳基。优选，所述r1、r2、r3和r4为取代基团时，其中取代基为c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、羟基、巯基、氨基、取代氨基或卤素；p为取代基团时，其中取代基为c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、卤素或c1～4的卤代烷基。优选，所述杂环烷基具有3，4，5，6或7个成环原子；所述芳基具有4，5，6，7，8，9或10个成环原子；所述杂环芳基具有4，5，6，7，8，9或10个成环原子。r1优选为c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基或杂环基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基等含杂原子的芳香基团，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基或卤素取代；r1更优选为c1～10的烷基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、取代氨基或卤素取代；r1最优选为吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、硝基或卤素取代。r2优选为c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基或杂环基、苯基、萘基或吲哚基、噻唑基、苯并噻唑基等含杂原子的芳香基团，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、取代氨基或卤素取代；r2更优选为c1～10的烷基、c3～6的环烷基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基或卤素取代；r2最优选为c1～10的烷基、c3～6的环烷基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、硝基或卤素取代。r3优选为c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基或杂环基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基等含杂原子的芳香基团，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、取代氨基或卤素取代；r3更优选为c1～10的烷基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基或卤素取代；r3最优选为吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、硝基或卤素取代。r4优选为c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基或杂环基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基等含杂原子的芳香基团，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基、取代氨基或卤素取代；r4更优选为c1～10的烷基、苯基、萘基、吲哚基、噻唑基、噻吩基、苯并噻吩基、咪唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、硝基、羟基、巯基、氨基或卤素取代；r4最优选为c1～10的烷基、苯基、噻唑基，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、硝基或卤素取代。优选，z选自以下片段：p为氢或c1～10的烷酰基、c1～10的烷氧基、芳基或杂环基(如含有杂原子n、s或o)，或者任选地被c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、卤素或c1～4的卤代烷基取代；p优选为氢、吗啉基、异恶唑基、苯基、萘基、四氢萘基、n-丙氧基或异丙氧基。本发明r1、r2、r3、r4和p基团中的“任选地被取代”是指r1、r2、r3、r4和p的基团可以被这些基团取代，也可以不被这些基团取代，即并不仅限于被所列举的这些基团取代的情况，也包括不被所列举的这些基团取代的情况。这种表达方式与“r1为取代或非取代的c1～10的烷基、c3～6的环烷基或杂环烷基、苯基、萘基或吲哚基，其中取代基为c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、羟基、巯基、氨基、取代氨基或卤素”的表达方式相同，但是取代或非取代的限定并非仅狭义地指c1～10的烷基，而是扩大到所有所述的基团，即包括取代或非取代的c3～6的环烷基或杂环烷基、取代或非取代的苄基、取代或非取代的萘基、取代或非取代的吲哚基等，其中取代基为c1～4的烷基、c1～4的烷氧基、氰基、羟基、巯基、氨基或卤素。所述“r1为取代或非取代的c1～10的烷基、c3～6的环烷基、杂环烷基、芳基或者杂环芳基”，是指：例如r1为取代的c1～10的烷基时，该烷基的某些基团还被其他基团取代，r1为非取代的c1～10的烷基时，该烷基的基团没有被其他基团取代。术语“烷基”用于表示饱和烃基，c1～10的烷基是指含有1～10个碳原子的饱和烃基，c1～4的烷基是指含有1～4个碳原子的饱和烃基。术语“环烷基”指非芳族碳环基，包括环化的烷基。环烷基可以包括二环或多环系统。环烷基的例子包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，c3～6的环烷基是指含有3～6个碳原子的环烷基。术语“苄基”是指苯甲基，取代的苄基是指在苄基的苯环上至少一个氢原子被非氢部分取代，苄基的取代基可以是卤素，-cn，-oh，-sh，-nh2，1-6个碳的直链或支链烷基，1-6个碳的取代的直链或支链烷基。术语“杂环烷基”是指非芳族杂碳环基，包括环化的烷基，其中一个或多个成环碳原子被杂原子例如o，n或s原子取代。本发明杂环烷基优选具有3，4，5，6或7个成环原子。术语“杂环芳基”是指含有杂原子o、n或s的环状芳香基团，如呋喃、噻吩、苯并噻吩、吡咯、噻唑、恶唑、咪唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、喹啉、异喹啉、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、吖啶等。本发明杂环芳基优选具有4，5，6，7，8，9或10个成环原子。“烷氧基”是指-o-烷基基团，其碳原子数一般为1～10个。烷氧基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基(如，n-丙氧基和异丙氧基)，t-丁氧基等。“芳基”是指芳族碳环基，包括单环或多环芳烃例如苯基，萘基，蒽基，菲基等。本发明芳基优选具有4，5，6，7，8，9或10个成环原子。“芳氧基”是指-o-芳基，而芳基的概念如上所述，芳氧基最优选的例子是苯氧基。“卤素”包括氟，氯，溴和碘。本发明化合物中的r1、r2、r3、r4基团取代的氨基酸(合成用原料)可以为消旋体，也可以具有光学活性，本发明中的r1、r2、r3、r4基团取代的氨基酸优选为s构型。本发明优选的化合物为：本发明还公开了所述四肽环氧丙烷衍生物或其药物可接受盐的制备方法，其总的制备路线为：该反应式中各基团p，r1，r2，r3，r4,z的定义如前所述，式(i-1)，(i-2)在缩合剂作用下反应得到式(i-3)，式(i-3)在三氟乙酸作用下生成(i-4)。式(i-4)，(i-5)在缩合剂作用下生成式(i-6)，式(i-6)在三氟乙酸作用下生成(i-7)，其中式(i-7)再和p基团取代的羧酸在肽缩合剂的作用下反应生成式(i-8)，式(i-8)在lioh和水作用下生成(i)。以下详述本发明化合物的制备方法：p，r1，r2，r3，r4,z的定义如前所述。化合物(i)的制备方法包括如下的步骤：1)式(i-1)结构的氨基酸和式(i-2)结构的氨基酸甲酯在缩合剂作用下得到式(i-3)结构的化合物；2)式(i-3)结构的化合物溶于dcm后，加入三氟乙酸，反应生成式(i-4)结构的化合物。3)式(i-4)结构的化合物和式(i-5)结构的氨基酸在缩合剂作用下缩合生成式(i-6)结构的化合物。4)式(i-6)结构的化合物和三氟乙酸反应得到式(i-7)结构的化合物；5)式(i-7)结构的化合物和化合物(i-8)在缩合剂作用下缩合生成式(i-9)结构的化合物。6)式(i-9)结构的化合物经皂化反应得到(i)结构的化合物。最后将化合物(i)和(ii)在一定的缩合剂存在下反应生成(ⅲ)。所用缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(缩写为edc.hcl)，或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷缩写为(pybop)，1-羟基苯并三氮唑(缩写为hobt)。本发明还提供了所述四肽环氧丙烷衍生物或其药物可接受盐在制备治疗炎症、癌症、过度增殖性疾病或者免疫相关性疾病的药物方面的用途。此外，还提供了四肽环氧丙烷衍生物或其药物可接受盐在改变生物体中蛋白酶体产生的各种抗原肽方面的用途。酶抑制剂的用途有多种蛋白酶体抑制的生物效应。据报道，在细胞水平上，用各种蛋白酶体抑制剂处理细胞后，出现多泛蛋白化蛋白的累积、细胞形态变化和细胞凋亡。抑制蛋白酶体也被建议作为一种可能的抗肿瘤治疗策略。在抗肿瘤化合物筛选中首先鉴定出epoxomicin，证实了蛋白酶体是抗肿瘤化疗药物靶。因此，这些化合物可用于治疗癌症。还把抑制蛋白酶体与抑制nf-κb激活和稳定p53水平联系起来。因此，本发明化合物还可用于抑制nf-κb激活以及稳定细胞培养物中的p53水平。由于nf-κb是炎症的关键调节因子，所以它是抗炎治疗干预的富有吸引力的靶。因此，本发明化合物可用于治疗慢性炎症相关性疾病，包括但不限于copd、银屑病、支气管炎、肺气肿和囊性纤维化。本公开化合物可用于治疗蛋白酶体的蛋白水解功能直接介导的病症(例如肌肉废用)或者通过蛋白酶体加工的蛋白质(例如nf-κb)间接介导的病症。蛋白酶体参与蛋白质(例如酶)的快速消除和翻译后加工，所述蛋白质涉及细胞调节(例如细胞周期、基因转录和代谢途径)、胞间通讯和免疫反应(例如抗原呈递)。下文阐述的具体例子包括；β-淀粉状蛋白和调节蛋白，例如细胞周期蛋白、tgf-β和转录因子nf-κb。本发明的其它实施方案涉及恶病质和肌肉萎缩病。蛋白酶体降解成熟网织红细胞和生长中成纤维细胞内的许多蛋白。在缺乏胰岛素或血清的细胞中，蛋白水解速率几乎加倍。抑制蛋白酶体可减少蛋白水解作用，由此减少肌肉蛋白损失以及肾或肝的氮负荷。本发明抑制剂可用于治疗癌症、慢性传染病、发热、肌肉废用(萎缩)和去神经、神经损伤、禁食、酸中毒相关性肾衰竭、糖尿病和肝衰竭等疾病。参见例如goldberg的美国专利5,340,736。因此，本发明的实施方案包括以下方法：降低细胞的肌肉蛋白降解速率；降低胞内蛋白降解速速率；降低细胞的p53蛋白降解速速率；以及抑制p53相关性癌生长。上述方法都包括使细胞(体内或体外，例如患者的肌肉)与有效量的本发明化合物(例如药物组合物)接触。蛋白酶体加工的另一种蛋白是rel蛋白家族的成员nf-κb。rel家族的转录激活蛋白可以分为两组。第一组需要蛋白酶解加工，包括p50(nf-κb1，105kda)和p52(nf-κ2、100kda)。第二组不需要蛋白酶解加工，包括p65(rela、rel(c-rel)和relb)。同二聚体和杂二聚体均可由rel家族成员形成；例如，nf-κb是p50-p65杂二聚体。iκb和p105在磷酸化和泛蛋白化后，这两种蛋白分别被降解和加工，从而产生活性nf-κb，nf-κb从细胞质转运到细胞核。泛蛋白化p105也由纯化的蛋白酶体加工(palombella等，cell(1994)78：773-785)。活性nf-κb与其它转录激活因子以及例如hmgi(y)形成立体特异性增强子复合物，诱导选择性表达特定基因。nf-κb调节涉及免疫、炎症反应和有丝分裂事件的基因。例如，免疫球蛋白轻链κ基因、il-2受体α链基因、i类主要组织相容性复合体基因以及编码例如il-2、il-6、粒细胞集落刺激因子和ifn-β的许多细胞因子基因的表达都需要nf-κb(palombella等，cell(1994)78：773-785)。本发明部分实施方案包括影响il-2、mhc-i、il-6、tnfα、ifn-β或任何其它前述蛋白的表达水平的方法，每种方法都包括给予患者有效量的本公开化合物。包括p50的复合体是急性炎症反应和免疫反应的快速介质(thanos，d.和maniatis，t.，cell(1995)80：529-532)。nf-κb还参与编码e-选择蛋白、p-选择蛋白、icam和vcam-1的细胞粘附基因的表达(collins，t.，lab.invest.(1993)68：499-508)。本发明一个实施方案是抑制细胞粘附(例如e-选择蛋白、p-选择蛋白、icam或vcam-1介导的细胞粘附)的方法，该方法包括使细胞与有效量的本发明化合物(或药物组合物)接触，或者给予患者有效量的本发明化合物(或药物组合物)。胞内蛋白水解产生用于呈递给t淋巴细胞的小肽，从而诱导i类mhc介导的免疫应答。免疫系统筛选被病毒感染或已经历癌转化的自体细胞。一个实施方案是抑制细胞的抗原呈递的方法，该方法包括使细胞与本发明化合物接触。本发明化合物可以用于治疗免疫相关性疾病，例如变态反应、哮喘、器官/组织排斥反应(移植物抗宿主病)和自身免疫疾病，包括但不限于狼疮、类风湿性关节炎、银屑病、多发性硬化和炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和节段性回肠炎)。因此，另一实施方案是抑制患者免疫系统的方法(例如抑制移植排异反应、变态反应、自身免疫疾病和哮喘)，该方法包括给予患者有效量的本发明化合物。再一个实施方案是改变由蛋白酶体或其它具有多催化活性的ntn产生的抗原肽库的方法。例如，如果20s蛋白酶体的pgph活性被选择性抑制，由该蛋白酶体产生并用mhc分子呈递到细胞表面的抗原肽组，不相同于没有任何酶抑制作用或者例如该蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶样活性被选择性抑制这两种情况任一种所产生和呈递的抗原肽组。某些蛋白酶体抑制剂在体外和体内阻断泛蛋白化nf-κb的降解和加工。蛋白酶体抑制剂还阻断iκb-α降解和nf-κb激活(palombella等，cell(1994)78：773-785；traenckner等，emboj.(1994)13：5433-5441)。本发明一个实施方案是抑制iκb-α降解的方法，该方法包括使细胞与本发明化合物接触。另一实施方案是降低nf-κb在细胞、肌肉、器官或患者中的细胞含量的方法，该方法包括使细胞、肌肉、器官或患者与本发明化合物接触。需要蛋白酶解加工的其它真核转录因子包括通用转录因子tfiia、单纯疱疹病毒vp16辅助蛋白(宿主细胞因子)、病毒诱导性ifn调节因子2蛋白以及结合膜的固醇调节元件结合蛋白1。本发明的其它实施方案是影响细胞周期蛋白依赖性真核细胞周期的方法，该方法包括使细胞(体外或体内)与本发明化合物接触。细胞周期蛋白涉及细胞周期调控。蛋白酶体参与细胞周期蛋白的降解。细胞周期蛋白的实例包括有丝分裂细胞周期蛋白、g1细胞周期蛋白和细胞周期蛋白b。细胞周期蛋白的降解使得细胞退出一个细胞周期阶段(例如有丝分裂)，而进入另一个阶段(例如分裂)。人们认为所有的细胞周期蛋白都与p34.sup.cdc2蛋白激酶或相关激酶缔合。蛋白水解靶向信号定位于氨基酸42-raalgnisen-50(降解框)。有证据表明，细胞周期蛋白被转化为易被泛蛋白连接酶破坏的形式，或者细胞周期蛋白特异性连接酶在有丝分裂期间被激活(ciechanover，a.，cell，(1994)79：13-21)。抑制蛋白酶体可抑制细胞周期蛋白降解，从而抑制例如细胞周期蛋白相关性癌症中的细胞增殖(kumatori等，proc.natl.acad.sci.usa(1990)87：7071-7075)。本发明一个实施方案是治疗患者增殖性疾病(例如癌症、银屑病或再狭窄)的方法，该方法包括给予患者有效量的本发明化合物。本发明还包括治疗患者细胞周期蛋白相关性炎症的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的本发明化合物。另外一些实施方案是影响癌基因蛋白的蛋白酶体依赖性调节的方法以及治疗或抑制癌生长的方法，每种方法都包括使细胞(体内，例如患者体内，或者体外)与本发明化合物接触。hpv-16和hpv-18-衍生的e6蛋白在粗制网织红细胞裂解物中刺激p53的atp-和泛蛋白-依赖性缀合和降解。已经证实，具有突变不耐热e1的细胞系中隐性癌基因p53在非许可温度下累积。高水平的p53可能导致细胞凋亡。由泛蛋白系统降解的原癌基因蛋白实例包括c-mos、c-fos和c-jun。一个实施方案是治疗p53相关性细胞凋亡的方法，该方法包括给予患者有效量的本发明化合物。最后，本发明化合物还可作为诊断试剂(例如用于诊断试剂盒或临床实验室)，用于筛选ntn水解酶(包括蛋白酶体)加工的蛋白(例如酶、转录因子)。本发明化合物还可作为研究用试剂用于特异性结合x/mb1亚基或α链以及抑制与其相关的蛋白水解活性。例如，可以测定蛋白酶体其它亚基的活性(及其特异性抑制剂)。大多数细胞蛋白在成熟或激活期间都要进行蛋白酶解加工。本文公开的酶抑制剂可用于测定细胞、发育或生理过程或输出量是否受到特定ntn水解酶的蛋白水解活性的调节。一种这样的方法包括获取生物体、完整细胞制备物或细胞提取物；使所述生物体、细胞制备物或细胞提取物接触本发明化合物；使接触了本发明化合物的生物体、细胞制备物或细胞提取物发信号，然后监测所述过程或输出量。本发明化合物的高度选择性允许在特定的细胞、发育或生理过程中快速、准确地消除或影响ntn(例如20s蛋白酶体)。本发明还提供了一种药物组合物，其包含所述四肽环氧丙烷衍生物或其药物可接受盐以及药物可接受载体。给药根据待治疗疾病和患者的年龄、健康状况和体重，按照本文所述方法制备的化合物可以按各种不同的形式给药，这是本领域众所周知的。例如，当化合物准备用于口服给药时，它们可以配制为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂或糖浆剂；或者用于胃肠外给药时，可以配制为注射剂(静脉内、肌内或皮下)、输注制剂或栓剂。通过眼粘膜途径给药时，它们可以配制为滴眼剂或眼膏剂。这些制剂可以通过常规方法制备，必要时，活性成分可以与任何常规添加剂或赋形剂(例如粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、增溶剂、悬浮剂、乳化剂、包衣剂、环糊精和/或缓冲剂)混合。尽管剂量将取决于患者的症状、年龄和体重、所要治疗或预防的疾病的性质和严重程度、给药途径和药物形式，但是一般来讲，本发明化合物对成人患者的推荐日剂量为0.01mg-2000mg，可作为单剂量或多个分剂量给予。与载体混合制备单剂量形式的活性成分量通常是可产生治疗效果的化合物量。就特定患者上的治疗效果而言，获得最佳疗效的精确给药时间和/或组合物剂量将取决于具体化合物的活性、药代动力学和生物利用度、患者的生理状况(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、一般身体状况、对特定剂量的反应以及药物类型)、给药途径等。无论如何，以上的准则可用作精确调整疗法的基础，例如确定最佳的给药时间和/或给药剂量，这仅仅需要常规的实验，包括监测患者和调节剂量和/或给药时间。本文所用术语“药物可接受”是指那些配体、原料、组合物和/或剂型在合理的医疗判断范围内，适合与人体组织和动物组织接触，而不会有过度的毒性、刺激性、变态反应或者其它问题或并发症，同时具有合理的利益/风险比。本文所用术语“药物可接受载体”是指药物可接受原料、成分或溶媒，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。所有载体都必须是“可接受的”，即与制剂的其它制剂成分是相容的，并且对患者没有害处。可用作药物可接受载体的部分实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉以及取代或未取代的β环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可油和栓剂用蜡；(9)油，例如花生油、棉子油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二元醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏液(ringer’ssolution)；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；(21)药物制剂中使用的其它无毒相容性物质。在某些实施方案中，本发明药物组合物是非致热的，即在给予患者后不会引起明显的体温升高。术语“药物可接受盐”是指抑制剂的相对无毒的无机酸加成盐和有机酸加成盐。这些盐可以在抑制剂的最终分离和纯化时在原位制备，或者使游离碱形式的纯化抑制剂单独与合适的有机酸或无机酸反应，然后分离由此形成的盐。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘甲酸盐(naphthylate)、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐、月桂基磺酸盐和氨基酸盐等。(参见例如berge等，(1977)“pharmaceuticalsalts”，j.pharm.sci.66：1-19)。在其它情况下，用于本发明方法的抑制剂可包含一个或多个酸性官能团，因此，能够与药物可接受碱形成药物可接受盐。在这些情况下，术语“药物可接受盐”是指抑制剂的相对无毒的无机碱加成盐和有机碱加成盐。这些盐同样可以在抑制剂的最终分离和纯化时在原位制备，或者使游离酸形式的纯化抑制剂单独与合适的碱(例如药物可接受金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)、氨或者药物可接受有机伯胺、仲胺或叔胺反应。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括锂盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐和铝盐等。可用于形成碱加成盐的代表性有机胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等(参见例如berge等，出处同上)。组合物中也可以加入润湿剂、乳化剂和润滑剂(例如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、增香剂、防腐剂和抗氧剂。药物可接受抗氧剂例子包括：(1)水溶性抗氧剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧剂，例如棕榈酸维生素c酯、丁羟茴醚(bha)、丁羟甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。适合口服给药的制剂可以为胶囊剂、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用经调味的基质，通常用蔗糖和阿拉伯树胶或西黄蓍胶)、散剂、颗粒剂，或者为水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂，或者为水包油或油包水的液体乳剂，或者为酏剂或糖浆剂，或者为软锭剂(使用惰性基质，例如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯树胶)和/或为漱口剂等，所有剂型都包含预定量的抑制剂作为活性成分。组合物还可以大丸剂、冲剂或糊剂给药。在口服固体剂型中(胶囊剂、片剂、丸剂、糖锭、散剂、颗粒剂等)，活性成分与一种或多种药物可接受载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下任何载体：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、环糊精、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯树胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉、木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶解迟延剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如乙酰醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸附剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；(10)着色剂。在为胶囊剂、片剂和丸剂时，药物组合物还可包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可以在软质和硬质填充明胶胶囊剂中用作填充剂，使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。片剂可以通过压制或模制制备，任选使用一种或多种助剂。压制片剂可以使用粘合剂(例如明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂制备。通过将惰性液体稀释剂润湿的粉末状抑制剂混合物在合适的机器中模压，可制备模制片剂。片剂和其它固体剂型(例如糖锭、胶囊剂、丸剂和颗粒剂)可以任选被刻痕或者制备为具有包衣和外壳，例如肠溶衣和制药领域公知的其它包衣。它们也可以配制为用于缓释或控释活性成分，使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、脂质体和/或微球体以提供所需释放速率。它们可以通过例如以下方式灭菌：通过细菌过滤器过滤，或者掺入无菌固体形式的灭菌剂，它可以在临用前溶于无菌水或某些其它无菌注射介质。这些组合物还可任选包含遮光剂，可以是仅仅或者优先在胃肠道某些部位释放活性成分的组合物，并且任选采用延迟释放方式。可以使用的包埋组合物例子包括聚合物和蜡。活性成分也可为微胶囊形式，适当时，具有一种或多种上述赋形剂。口服液体剂型包括药物可接受乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分以外，液体剂型还可以包含本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油类(尤其是棉子油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯和它们的混合物。除惰性稀释剂以外，口服组合物还可包含辅剂，例如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、香味剂和防腐剂。除活性成分以外，混悬剂还可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、西黄蓍胶和它们的混合物。直肠或阴道给药制剂可以为栓剂，可通过将一种或多种抑制剂与一种或多种无刺激的合适赋形剂或载体混合而制备栓剂，所述赋形剂或载体包括例如可可油、聚乙二醇、栓剂用蜡或水杨酸酯，它们在室温下是固体，而在体温下是液体，因此，将在直肠或阴道腔中熔融，释放活性剂。适合阴道给药的制剂还包括阴道栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，这些制剂中包含本领域已知的合适载体。局部或透皮给予抑制剂的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。活性成分可以在无菌条件下与药物可接受载体和任何必需的防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。除抑制剂以外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可包含赋形剂，例如动物和植物油脂、油类、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉、氧化锌或它们的混合物。除抑制剂以外，散剂和喷雾剂还可包含赋形剂，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末或者这些物质的混合物。喷雾剂还可包含常用的抛射剂，例如含氯氟烃和挥发性无取代烃，例如丁烷和丙烷。抑制剂还可通过气雾剂给予。这可以通过制备含有所述组合物的水性气雾剂、脂质体制剂或固体颗粒而实现。可以使用非水的(例如碳氟化合物抛射剂)悬浮液。优选采用声波雾化器，因为它们能够最小化可引起化合物降解的剪切力。通常，通过将药物的水性溶液或悬浮液与常规的药物可接受载体和稳定剂一起配制，制备水性气雾剂。载体和稳定剂根据具体组合物的要求而变化，但是通常包括非离子型表面活性剂(吐温、pluronic、山梨聚糖酯、卵磷脂、cremophor)、药物可接受助溶剂(例如聚乙二醇)、无害蛋白(如血清白蛋白)、油酸、氨基酸(例如甘氨酸)、缓冲剂、盐、糖或糖醇。气雾剂通常用等渗溶液制备。在控制给予身体抑制剂方面，透皮贴剂具有更多的优势。将药物溶于或分散于合适介质中可制备这样的剂型。还可以使用吸收促进剂来增加抑制剂穿过皮肤的通量。这样的迁移速率可以通过速率调控膜控制，或者通过将抑制剂分散到聚合物基质或凝胶中来控制。适合胃肠外给药的本发明药物组合物包含一种或多种抑制剂以及一种或多种药物可接受无菌水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液，或者在临用前可重建为无菌注射溶液或分散液的无菌粉末，它们可包含抗氧剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预定接受者血液等渗的溶质、悬浮剂或增稠剂。可在本发明药物组合物中使用的合适水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、它们的合适混合物、植物油(例如橄榄油)和注射用有机酯，例如油酸乙酯。适当的流动性可以通过例如以下方式维持：使用包衣材料(例如卵磷脂)，对分散体可维持其所需的粒径，以及使用表面活性剂。这些组合物还可以包含辅剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。加入各种不同的抗细菌剂和抗真菌剂可以防止微生物作用，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。组合物中也可能需要张力调节剂例如糖、氯化钠等。另外，通过加入延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)可延长注射药物制剂的吸收。在某些情况下，为了延长药物效果，需要减缓皮下或肌内注射药物的吸收速率。例如，通过将药物溶解或悬浮于油溶媒来延迟胃肠外给予的药物的吸收。通过在生物可降解聚合物(例如聚交酯-聚乙交酯)中形成抑制剂的微胶囊基质来制备注射贮库制剂。根据药物与聚合物的比例和所用的具体聚合物性质，可以调控药物的释放速率。其它生物可降解聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酐)。也可通过将药物包封于与身体组织相容的脂质体或微乳中，制备贮库注射制剂。药物制剂可以通过口服、胃肠外、局部或直肠给药。当然，是以适合各种给药途径的剂型给予。例如，它们以片剂或胶囊剂形式给予，通过注射剂、吸入剂、洗眼剂、软膏剂、栓剂、输液剂给予；用洗剂或软膏剂局部给予；用栓剂直肠给予。优选口服给药。本文所用术语“胃肠外给予”是指除肠内和局部给药以外的给药方式，通常是指注射和输注给予，注射包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内和胸骨内注射。本文所用术语“全身给予”和“外周给予”是指配体、药物或其它物质不是直接给予进入中枢神经系统，这样它们进入患者全身，并且因此经历代谢或其它类似过程，例如皮下给予。这些抑制剂可以给予人或其它动物用作治疗目的，可采用任何合适的给药途径，包括口服、经鼻(例如用喷雾剂)、直肠、阴道内、胃肠外、脑池内和局部(例如用散剂、软膏剂或滴剂，包括口腔含服和舌下给药)。不管选择哪种给药途径，本发明抑制剂(可以使用其合适的水合形式)和/或本发明药物组合物可以通过本领域已知的常规方法配制为药物可接受剂型。可以改变本发明药物组合物活性成分的实际剂量水平，从而针对具体患者、组合物和给药方式，获得活性成分实现所需治疗反应而不会使患者中毒的有效量。药物可接受混合物中本发明化合物的浓度将根据多种因素变化，包括所给予化合物的剂量、所用化合物的药代动力学特征和给药途径。一般来讲，本发明组合物可作为含约0.1-10％w/v本发明化合物的水溶液剂提供，用于胃肠外给药。典型剂量为每天约0.01mg/kg体重至约50mg/kg体重，分1-4次给予。各分剂量中可以包含相同或不同的本发明化合物。给药剂量一定是有效剂量，有效剂量将取决于多种因素，包括患者的总的健康状况、所选化合物的制剂和给药途径。本发明另一方面提供联合疗法，其中一种或多种其它治疗药物与本发明蛋白酶体抑制剂一起给予。这类联合疗法可以通过同时、序贯或单独给予治疗各组分实现。在某些实施方案中，本发明化合物与一种或多种其它蛋白酶体抑制剂联合给予。在某些实施方案中，本发明化合物与化疗药联合给予。合适的化疗药可包括天然产品，例如长春花属生物碱(即长春花碱、长春新碱和长春瑞滨)、紫杉醇、表鬼臼毒素(epidipodophyllotoxin)(即依托泊苷、替尼泊苷)、抗生素(更生霉素(放线菌素d)、柔红霉素、多柔比星和伊达比星)、蒽环霉素类、米托蒽醌、博来霉素、普卡霉素(光辉霉素)和丝裂霉素、酶(l-天冬酰胺酶，它系统性代谢l-天冬酰胺，清除不能合成自己的天冬酰胺的细胞)；抗血小板药；抗增殖/抗有丝分裂的烷基化剂，例如氮芥类(氮芥、环磷酰胺及其类似物、美法仑、苯丁酸氮芥)、氮丙啶类和甲基三聚氰胺类(六甲蜜胺和噻替派)、磺酸烷基酯类(白消安)、亚硝基脲类(卡莫司汀(bcnu)及其类似物、链佐星)、trazenes-达卡巴嗪(dacarbazinine)(dtic)；抗增殖/抗有丝分裂类抗代谢药例如叶酸类似物(甲氨蝶呤)、嘧啶类似物(氟尿嘧啶、氟尿苷和阿糖胞苷)、嘌呤类似物及相关抑制剂(巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和2-氯脱氧腺苷)；芳香酶抑制剂(阿那曲唑、依西美坦和来曲唑)；铂配位络合物(顺铂、卡铂)、丙卡巴肼、羟基脲、米托坦、氨鲁米特；组蛋白去乙酰酶(hdac)抑制剂(曲古抑菌素、丁酸钠、apicidan、辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilidehydroamicacid))；激素(即雌激素)和激素类激动剂，例如促黄体生成激素释放激素(lhrh)激动剂(戈舍瑞林、亮丙瑞林和曲普瑞林)。其它化疗药物可包括氮芥、喜树碱、异环磷酰胺、他莫昔芬、雷洛西芬、吉西他滨、诺维本或者前述药物的任何类似物或衍生物。在某些实施方案中，本发明化合物与细胞因子联合给予。细胞因子包括但不限于干扰素-γ、-α和-β、白细胞介素1-8、10和12-粒细胞单核细胞集落刺激因子(gm-csf)、tnf-α和-β、tgf-β。在某些实施方案中，本发明化合物与类固醇联合给予。合适的类固醇包括但不限于21-乙酸基孕烯醇酮、阿氯米松、阿尔孕酮、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松、氯倍他索、氯可托龙、氯泼尼醇、皮质酮、可的松、可的伐唑、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯(difuprednate)、甘草次酸、氟扎可特、氟氯奈德、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、醋酸氟轻松、氟可丁丁酯、氟可龙、氟米龙、醋酸氟培龙、醋酸氟泼尼定、氟泼尼龙、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、福莫可他、哈西奈德、丙酸卤倍他索、卤米松、氢化可的松、氯替泼诺碳酸乙酯、马泼尼酮、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙、糠酸莫米松、帕拉米松、泼尼卡酯、泼尼松龙、泼尼松龙25-二乙基氨基醋酸酯、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松、强的松龙戊酸酯、泼尼立定、利美索龙、替可的松、曲安西龙、曲安奈德、苯曲安奈德、己曲安奈德和它们的盐和/或衍生物。在某些实施方案中，本发明化合物与免疫治疗剂联合给药。合适的免疫治疗剂包括但不限于mdr调节剂(维拉帕米、伐司朴达(valspordar)、比立考达、tariquidar、laniquidar)、环孢菌素、沙利度胺和单克隆抗体。单克隆抗体可以是裸单克隆抗体或者缀合单克隆抗体，例如利妥昔单抗、托西莫单抗、阿仑单抗、依帕珠单抗、替伊莫单抗、吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)、贝伐单抗、西妥昔单抗、埃罗替尼和曲妥珠单抗。具体实施方式第一部分化合物的合成本发明的化合物的制备可按照如下过程实施：一、化合物(i)的制备1、化合物(i-3)的制备：将化合物(i-1)，hobt溶解在无水dcm中在-5℃搅拌10min后，在此温度下加入edihcl，搅拌15～20min，再加入化合物(i-2)搅拌15～20min，随后加入dipea搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用稀hcl，碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物(i-3)。2、化合物(i-4)的制备：将化合物(i-3)溶解在无水dcm中，在-5℃下缓慢滴加tfa，搅拌0.5小时候后，升到室温搅拌3小时后检测。反应完毕，浓缩反应液得到棕红色油状物，缓慢加入甲基叔丁基醚剧烈搅拌得到白色固体，过滤得到化合物(i-4)。3、化合物(i-6)的制备：将化合物(i-5)，hobt溶解在无水dcm中在-5℃搅拌10min后，在此温度下加入edihcl，搅拌15～20min，再加入化合物(i-4)搅拌15～20min，随后加入dipea搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用稀hcl，碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物(i-6)。4、化合物(i-7)的制备：将化合物(i-6)溶解在无水dcm中，-5℃下缓慢滴加tfa，搅拌0.5小时后，升到室温搅拌3小时后检测。反应完毕，浓缩反应液得到棕红色油状物，缓慢加入甲基叔丁基醚剧烈搅拌得到白色固体，过滤得到化合物(i-7)。5、化合物(i-9)的制备：将p基团取代的羧酸(i-8)，hobt溶解在无水dcm中在-5℃搅拌10min，在此温度下加入edihcl，搅拌15～20min，再加入化合物(i-7)搅拌15～20min，随后加入dipea搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用稀hcl，碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物(i-9)。化合物(i)的制备：将化合物(i-9)溶解在meoh/h2o中，0℃下滴加lioh水溶液，搅拌2小时，升到室温反应一定时间，加水并用盐酸调ph到6-7，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得化合物(i)。二、化合物(ii)的制备1、化合物(ii-2)的制备：将化合物(ii-1)、hobt溶于dcm，加入edc.hcl，-5℃搅拌15min后，加入二甲羟胺盐酸盐，15min后加入dipea，低温下反应25min，室温反应结束后，用dcm萃取，有机相用1nhcl洗，5％nahco3洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂得到化合物(ii-2)。2、化合物(ii-3)的制备：将化合物(ii-2)用四氢呋喃溶解，-20℃下，滴加乙基溴化镁，滴毕升至室温反应，结束后，缓慢滴加1n稀盐酸淬灭反应，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩得化合物(ii-3)。3、化合物(ii-4)的制备：将化合物(ii-3)用四氢呋喃溶解，加入乙酸哌啶盐和哌啶，分批加多聚甲醛，回流3h后，加适量水后用乙酸乙酯萃取，分别用1n稀盐酸，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩后得化合物(ii-4)。4、化合物(ii-5)的制备：化合物(ii-4)溶于甲苯，加异丙醇铝、异丙醇，50℃反应，反应结束后用水和乙酸乙酯萃取，用1n稀盐酸，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩后得化合物(ii-5)。5、化合物(ii-6)的制备：化合物(ii-5)溶于dcm，然后加入乙酰丙酮钒，氮气保护下，冰浴冷却至0℃，缓慢滴加过氧叔丁醇。反应结束后，加适量水后用二氯甲烷萃取，分别用饱和硫代硫酸钠，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩纯化后得化合物(ii-6)。6、化合物(ii-7)的制备：化合物(ii-6)溶于二甲基亚砜，加入二异丙基乙胺，冰浴下分批加入吡啶三氧化硫，升至室温反应，反应至完全，加适量水后用乙酸乙酯萃取，分别用1n稀盐酸，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩后得化合物(ii-7)。7、化合物(ii)的制备：将化合物(ii-7)溶解在无水dcm中，在-5℃下缓慢滴加tfa，搅拌0.5小时候后，升到室温搅拌3小时后检测。反应完毕，浓缩反应液得到棕红色油状物，缓慢加入甲基叔丁基醚剧烈搅拌得到白色固体，过滤得到化合物(ii)。三、化合物(iii)的制备化合物(iii)的制备：将化合物(i)，hobt溶解在无水dcm中在-5℃搅拌10min后，在此温度下加入edihcl，搅拌15～20min，再加入化合物(ⅱ)搅拌15～20min，随后加入dipea搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用稀hcl，碳酸氢钠溶液，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物(ⅲ)。以下以具体化合物的合成来描述本发明的化合物制备过程：一、酸片段的制备：以n-2-吗啉乙酰基-l-噻唑丙氨酰基-l-亮氨酰基-l-苯丙氨酸的制备为例:将化合物1(3.22g,13.91mmol),hobt(2.82g,20.87mmol)溶解在无水dcm(100ml)中，在-5℃搅拌10min后，在此温度下加入edihcl(4.0g,20.87mmol)搅拌15～20min，再加入化合物2(3.0g，13.91mmol)搅拌15～20min，随后加入dipea(10ml,62.60mmol)搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入冰水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用0.4nhcl，5％naco3碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物3。将化合物3(6.79g,17.29mmol)，溶解在无水dcm(100ml)中，在-5℃下于缓慢滴加tfa(11.37ml)，搅拌0.5小时后，升到室温搅拌3小时。反应完毕，浓缩反应液得到棕红色油状物，缓慢加入甲基叔丁基醚剧烈搅拌得到白色固体，过滤得到化合物4。将化合物5(5g,18.4mmol),hobt(3.73g,27.6mmol)溶解在无水dcm(100ml)中在-5℃搅拌10min后，在此温度下加入edihcl(5.32g,27.6mmol)搅拌15～20min，再加入化合物4(7.48g,18.4mmol)搅拌15～20min，随后加入dipea(20ml,124.2mmol)搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入冰水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用0.4nhcl，5％naco3碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物6。将化合物6(6.6g,12.1mmol)溶解在无水dcm(100ml)，-5℃下缓慢滴加tfa(10ml)，搅拌0.5小时后，升到室温搅拌3小时。反应完毕，浓缩反应液得到棕红色油状物，缓慢加入甲基叔丁基醚剧烈搅拌得到白色固体，过滤得到化合物7。将化合物8(2.67g,18.4mmol),hobt(3.74g,27.6mmol)溶解在无水dcm(100ml)中在-5℃搅拌10min后，在此温度下加入edihcl(5.32g,27.6mmol)搅拌15～20min，再加入化合物7(7.48g,18.4mmol)搅拌15～20min，随后加入dipea(12.16ml，73.6mmol)搅拌20分钟，移至室温反应。反应完全后，倾入冰水中，用dcm萃取，合并有机相后分别用0.4nhcl，5％naco3碳酸氢钠，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物9。将化合物9(9.6g,16.7mmol)溶于meoh/h2o(200ml/50ml)中，0℃下滴加lioh·h2o(1.01g,23.38mmol)在h2o(10ml)溶液，搅拌2小时，升到室温反应一定时间，加水并用盐酸调ph到6-7，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，得到化合物10，收率89％,m.p.:177-178；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ0.81–0.73(m,3h),0.85(t,j＝10.2hz,3h),1.25(d,j＝4.5hz,2h),1.60–1.49(m,j＝7.1hz,1h),2.19(s,8h),2.70(s,2h),3.27(s,2h),3.79(d,j＝12.5hz,2h),4.33(s,1h),4.67(s,1h),4.79(s,1h),7.13(s,1h),7.26–7.15(m,4h),7.27(s,1h),7.41(s,1h),8.49(s,1h),8.65(s,1h),8.71(d,j＝4.9hz,1h)；ms(esi)m/z:674.0[m+h]+.。本发明中所有酸片段化合物的合成方法和10相似。合成的具体化合物及其名称如下表。二、胺片段的制备：以化合物(s)-2-氨基-4-甲基-1-((r)-2-甲基环氧乙烷-2-基)戊-1-酮2,2,2-三氟乙酸盐(38)的制备为例：将化合物31(10.0g,43.23mmol)、hobt(5.8g,43.23mmol)溶于dcm(100ml)，加入edc.hcl(11.65g,64.85mmol)，-5℃搅拌15min后，加入二甲羟胺盐酸盐(4.21g,43.23mmol)，15min后加入dipea(13.97g,108.08mmol)，低温下反应25min，室温反应结束后，用dcm萃取，有机相1nhcl洗，5％nahco3洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂得到化合物32。称取n-叔丁氧羰酰基-l-亮氨酸-n’-甲氧基-n’-甲酰胺32(0.5mol)置于反应瓶中，用500ml四氢呋喃溶解，-20℃下，滴加乙基溴化镁(2.0m，750ml)，滴毕升至室温过夜。缓慢滴加1n稀盐酸淬灭反应，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩得33。称取33(0.4mol)，用400ml四氢呋喃溶解，加入乙酸哌啶盐(1.5mol)和哌啶(1.0mol)和多聚甲醛(2.0mol)，回流3h后，再加入多聚甲醛(2.0mol)，tlc检测反应至完全，加适量水后用乙酸乙酯萃取，分别用1n稀盐酸，饱和食盐水洗涤1次，有机相干燥浓缩后得34。称取异丙醇铝(0.3mol)和异丙醇(3mol)，加入200ml甲苯及34(0.3mol)，用100ml甲苯溶解，室温下滴加进反应体系，滴毕，于50℃反应，tlc检测反应至完全，加适量水后用乙酸乙酯萃取，分别用1n稀盐酸，饱和食盐水洗涤1次，有机相干燥浓缩后得35。称取35(0.2mol)，加200ml二氯甲烷溶解，然后加入乙酰丙酮钒(0.04mol)，氮气保护下，冰浴冷却至0℃，缓慢滴加过氧叔丁醇，加倍强力搅拌过夜，tlc检测原料消失，加适量水后用二氯甲烷萃取，分别用饱和硫代硫酸钠，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩纯化后得36。将36(0.12mol)溶于100ml二甲基亚砜，加入二异丙基乙胺(0.24mol)，冰浴下分批加入吡啶三氧化硫(0.24mol)，升至室温反应，tlc检测反应至完全，加适量水后用乙酸乙酯萃取，分别用1n稀盐酸，饱和食盐水洗涤，有机相干燥浓缩后得37。将化合物37(1.0g,3.69mmol)溶解在无水dcm(10ml)，中在-5℃下于缓慢滴加tfa(3ml)，搅拌0.5小时候后，升到室温搅拌3小时后检测。反应完毕，浓缩反应液得到棕红色油状物，缓慢加入甲基叔丁基醚剧烈搅拌得到白色固体，过滤得到化合物38。本发明中39～42合成方法和38合成方法类似。合成的具体化合物及其名称如下表。三、式(ⅲ)化合物的制备以n-2-吗啉乙酰基-l-噻唑丙酰-l-亮氨酰-l-苯丙酰-l-亮氨酰-甲基环氧乙烷(43)的制备为例：将化合物10(7g，10.55mmol)、hobt(21.3g，15.83mmol)溶于dcm，加入edchcl(3g，15.83mmol)，-5℃搅拌15min后，加入39(2.8g,10.55mmol)，15min后加入dipea(4ml，4.75mmol)，低温下反应25min，室温反应结束后，用dcm萃取，有机相1nhcl洗，5％nahco3洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂得到化合物43，收率30％，m.p.:108-109℃；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ0.80(-ch3,ddd,j＝15.3,9.0,4.9hz,6h),0.90(-ch3,dt,j＝8.5,4.2hz,6h),1.25(-ch3,s,3h),1.28(-ch,d,1h),1.33(-ch,d,j＝4.1hz,1h),1.50(-ch2,d,j＝3.9hz,2h),1.64(-ch2,s,2h),2.48(-ch3,t,3h),2.87(-ch2,d,j＝5.1hz,1h),3.05–2.97(-ch2,m,3h),3.26–3.07(-ch2,m,2h),3.37–3.27(-ch2,m,2h),3.72(-ch2,t,4h),4.31–4.20(-ch,m,1h),4.74–4.49(-ch,m,3h),6.42(-conh,d,j＝7.1hz,1h),6.57(-conh,d,j＝8.1hz,1h),7.12(-ph,d,j＝1.9hz,1h),7.15(-ph,s,1h),7.17(-ph,d,j＝1.4hz,1h),7.25–7.19(-ph,m,3h),7.27(-ph,d,j＝3.1hz,1h),8.36(-conh,d,j＝6.4hz,1h),8.78(-conh,d,j＝2.0hz,1h)；13cnmr(101mhz,cdcl3)δ16.63,21.20,21.54,22.89,23.29,24.65,24.97,29.61,32.59,36.93,39.88,40.32,49.98,52.19,52.25,52.75,53.74,53.8858.96,61.70,66.84,116.18,126.71,128.39,129.12,136.96,152.36,153.42,170.66,170.73,170.88,171.78,207.87；ms(esi)m/z:714.0[m+h]+,736.1[m+na]+；hrmscalcdforc36h52n6nao7s,[m+na]+735.35504,found735.35104.。本发明中所有化合物的合成方法与43类似。合成的具体化合物及其名称如下表。第二部分抑制蛋白酶体活性测定一、蛋白酶体抑制活性本发明利用荧光多肽底物suc-leu-leu-val-tyr-amc(简写suc-llvy-amc，suc表示琥珀酰基，amc表示7-酰胺-4-甲基香豆素)来测定蛋白酶体的糜蛋白酶样酶活性。本发明所用的蛋白酶体为人红细胞20s蛋白酶体，酶、荧光底物及测试缓冲液均购自enzo公司。实验体系为16μl，其中底物8μl，蛋白酶体4μl(0.8ng)，最终浓度为50μm，药物(抑制剂)4μl，最终浓度为2×10-6m～4.88×10-10m,最后一个浓度是0m，实际配置浓度为8×10-6m～1.95×10-9m，最后一个浓度是0m。具体实验过程如下：1、药物配置：称取药物，加入dmso溶解至浓度为10-2m。用移液枪吸取2μl加至98μldmso得到2×10-4m，然后再从2×10-4m浓度药物中吸取8μl加入198μlh2o中得到8×10-6m，利用同样的方法得到2×10-6m、5×10-7m、1.25×10-7m、3.12×10-8m、7.8×10-9m、1.95×10-9m浓度的药物，最后一个浓度0m为不加药。2、底物制备：将25mg荧光多肽底物溶解于654μldmso中，得到50mm储备液，于-20℃保存，使用时稀释500倍，每份样品中加入8μl，使得反应体系中的最终底物浓度为50μm。3、反应体系制备：用缓冲溶液将20s蛋白酶体由2ng/μl稀释成浓度为8ng/μl的溶液，加入到384孔荧光酶标板中，每孔加入4μl，再在每孔中加入4μl待测样品，使用已上市药物carfilzomib为阳性对照药，37℃下反应15min。反应结束后，每孔加入8μl荧光底物，37℃避光反应1小时，利用360nm/460nm荧光酶标仪(bmglabtechpolarstaroptimamicroplatereader)检测荧光值。4、数据处理计算扣除本底物后不同浓度的药物作用下所得产物的荧光值,运用graphpadprism软件，计算药物对蛋白酶体抑制的ic50浓度。化合物编号ic50(nm)化合物编号ic50(nm)化合物编号ic50(nm)4322.3057>20007144.3144354.175824.687218.024523.295917.767312.884634.416023.437429.464740.896114.9575>20004826.70629.737620.614930.976317.8677>200050812.166415.5478na5151.526520.157961.765230.606612.3580164.715352.796727.37carfilzomib11.425462.4168na5511.566921.455617.247016.31二、细胞株抑制活性本发明利用的检测液为单溶液细胞增殖检测盒，来自promega公司；所用的细胞为u266，rpmi8226。实验体系为110ul，其中含有细胞悬液90μl，检测液10μl，药物(抑制剂)10μl，其终浓度为4.54×10-8m～1.77×10-9m，最后一个浓度是0m，实际配置浓度为5×10-7m～1.95×10-8m，最后一个浓度是0m。具体实验过程如下：1、药物配置：准确称量药物，加入dmso溶解至10-2m。用移液器吸取1μl加至199μldmso得到5×10-5m，然后从5×10-5m浓度药物中吸取3.3μl加326.7μl无血清的rpmi1640培养基得到5×10-7m，1.5倍梯度稀释，得到3.3×10-7m、2.2×10-7m、1.48×10-7m、9.87×10-8m、6.58×10-8m、4.38×10-8m、2.92×10-8m、1.95×10-8m浓度的药物，最后一个浓度0m为不加药。2、细胞悬液配置：细胞分别计数后，稀释配置u266为1×104个/孔，rpmi8226为1×104个/孔。3、反应体系制备：96孔荧光酶标板中每孔加入细胞悬液90μl，孵育24h；然后每孔中加入10μl待测样品，使用已上市药物carfilzomib为阳性对照药，孵育24h；反应完毕后，每孔加入10μl检测液，孵育2-3h，490nm荧光酶标仪(bmglabtechpolarstaroptimamicroplatereader)检测吸光度。4、数据处理计算扣除本底后不同浓度药物作用下所得产物的吸光度,运用graphpadprism软件，计算药物对细胞毒性的ic50浓度(nm)。部分化合物的结果如下表：编号rpmi8226u266b1编号rpmi8226u266b14327.5924.467054.3745.385542.2250.887187.4480.985625.5236.947277.7056.875946.9545.487323.2616.456035.2833.17452.9055.956114.6923.18carfilzomib39.0935.726764.9150.81三、化合物毒性比较本发明中化合物43和73在尾静脉给药剂量15mg/kg下，2组各5只icr实验鼠未出现死亡等严重的毒副作用，给药后一周体重略有降低，但第10天后体重恢复；而对照药carfilzomib在给药剂量10mg/kg下，给药一次后5只icr实验鼠全部死亡，因此本发明中的化合物毒性明显低于对照化合物。具体实验过程如下：1、药物配制称取0.2110g的一水合柠檬酸置于烧杯中，用量筒量取100ml生理水缓慢加入烧杯中，溶解后转移至容器中，配置成10mm柠檬酸缓冲液。称取4mg的受试物至于烧杯中，用量筒量取4ml的10mm柠檬酸缓冲液加入烧杯，调ph到2-3后，超声至受试物溶解后，得到1mg/ml的受试物溶液。称取4mg的carfilzomib粉末置于研钵中，加入少量10％磺丁基-β-环糊精研磨，用10mm柠檬酸缓冲液加至4ml，得到1mg/ml的carfilzomib受试物溶液。2、给药方案种系：icr小鼠性别：雄性周龄：6-8周；卫生级别：spf级来源/产地：上海西普尔-必凯实验动物有限公司3、监测指标：自给药之日起每日定时测量小鼠体重，观察呼吸、活动力、毛色、以及死亡情况等。4、数据处理：统计小鼠体重，通过spss19.0进行相应计算，分析组间差异。四、溶解度实验将本发明中化合物43、73和carfilzomib分别溶解在ph2.0磷酸缓冲液、ph4.0醋酸缓冲液、ph6.8磷酸缓冲液和纯水中，形成饱和溶液。采用hplc进行定量测定饱和溶解度，结果见下表。实验数据表明，化合物43和73在不同ph的溶媒和水中溶解性明显好于阳性药carfilzomib。本发明中所设计的化合物的治疗剂量可以根据给药的方式、治疗的用途、病人的健康状况以及医生的处方而决定。组合药物中本发明所设计的化合物的浓度和所占比例将随多种因素而改变，包括给药途径、给药剂量以及化学特性(如疏水性)。例如，本发明所设计的化合物可以提供于用于非肠道给药的含大约0.1到10％w/v化合物的水性生理缓冲液中。一些常规的剂量范围为每天大约1μg/kg到1g/kg。在具体实施方案中，剂量范围从每天大约10μg/kg体重到100mg/kg体重。剂量会根据给药途径、病人的健康状态、疾病或失调的类型和进展程度、化合物的相对生物学效价以及赋形剂的配方而改变。有效的剂量可以从体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线推算出。当前第1页12