1.一种跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的引物对,包括上游引物和下游引物,其特征在于:所述上游引物和下游引物之间的连续互补碱基小于或等于4对,所述上游引物和下游引物3’端和5’端的4个碱基中任意两个碱基不互补,所述上游引物和下游引物,至少有一条引物不具有二级结构,引物的GC含量为45-55%,Tm值为55-58℃。
2.一种跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的试剂盒,其特征在于:含有权利要求1所述引物对的试剂盒。
3.一种跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的扩增方法,其特征在于它按照如下的步骤顺序依次进行:
(1)从样品中提取DNA为模板;
(2)利用权利要求1的引物对或者权利要求2的试剂盒中引物对作为扩增的引物,进行SRCA扩增,得到扩增产物;
(3)检测扩增产物,做出判断。
4.根据权利要求3所述的跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的扩增方法,其特征在于所述SRCA的反应体系如下:
上游引物 1μL;
下游引物 1μL;
dNTPs 2.5mmol/L each 5μL;
MgSO4 20mmol/L 1μL;
10×reaction buffer 3μL;
Bst DNA聚合酶8U/μL 1μL;
模板DNA 1μL;
二甲基亚砜 0.2μL;
ddH2O 6.8μL。
5.根据权利要求4所述的跨越式滚环核酸等温扩增目的DNA的扩增方法,其特征在于:所述SRCA扩增包括三个阶段:
预变性阶段:将权利要求4所述体系中除Bst DNA聚合酶外的其它物质加入离心管中,于94℃下加热3 min,然后立即取出离心管,冰浴2 min,冰浴结束后混匀离心管中液体;
扩增阶段:向上述离心管中加入Bst DNA聚合酶,将离心管置于孵育器中,于60-65℃下,反应90min;
终止阶段:将孵育器温度升高至80 ℃并加热5 min,使酶失活,终止反应。