一种含氟基团的白藜芦醇衍生物及制备方法和用途与流程

本发明涉及一种药物，特别是一种含氟基团的白藜芦醇衍生物及制备方法和用途。

背景技术：

白藜芦醇是1940年首次从毛叶藜芦的根中获得的，现已经在21个科，31个属中的72种植物中发现。它是广泛存在于自然界的一种植物抗毒素，主要来源于虎杖、葡萄、花生等植物中，是一种生物活性很强的天然多酚类物质。白藜芦醇药理作用的发现源于“法国悖论”(frenchparadox)现象：含有白藜芦醇的葡萄酒能使高热量及高脂肪饮食的法国人维持较低的心血管疾病发病率。迄今已发现，白藜芦醇具有抗氧化、抗衰老、抗炎、降血脂、心血管保护、免疫调节作用等多种药理学作用。据报道，白藜芦醇还是化学预防和抗癌试剂。白藜芦醇的抑制癌细胞增殖活性与细胞周期阻滞相关，可以诱导细胞凋亡死亡或细胞衰老。低剂量白藜芦醇的处理可通过诱导早衰来抑制肿瘤细胞的增殖，而不是通过细胞凋亡诱导。另外，高浓度白藜芦醇抑制细胞的衰老。

然而，白藜芦醇及其它多酚类物质的生物利用度均较低。无论在人类或者啮齿类动物，白藜芦醇吸收入血液后，其血浆浓度一般在30min内就达到高峰；但白藜芦醇及其它多酚类物质的生物利用度均较低，如口服25mg反式白藜芦醇其血浆浓度峰值仅为2μmol/l，半衰期约8-14min。白藜芦醇的低生物利用度是其不能在生物体内充分发挥其生物活性的主要障碍，不能将其有效的细胞内效应在生物体内重现。所以，白藜芦醇代谢稳定性的提高是白藜芦醇生物活性进一步研究的重点。

技术实现要素：

为了提高白藜芦醇的生物利用度，本发明提供了一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物。本发明的白藜芦醇衍生物具有良好的人肺癌a549细胞抗增殖活性，并且低浓度化合物处理即可得到杰出的g1细胞周期阻滞，诱导癌细胞早衰。

本发明目的是由以下技术方案实现的：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下通式(i)：

r¹＝3，5-dioh，r²＝4′-f，4′-cf3，4′-ocf3

r¹＝3，4-dioh，r²＝4′-f，4′-cf3，4′-ocf3

r¹＝4-oh，r²＝4′-f，4′-cf3，4′-ocf3

其中，r¹为羟基；r²为氟、三氟甲基、三氟甲氧基。

本发明还提供了一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下制备步骤：

(a)使用叔丁基二甲基硅氧基进行羟基苯甲醛(4-oh，3，4-dioh，3，5-dioh)的羟基基团保护(4-otbs，3，4-diotbs，3，5-diotbs)；

(b)醛基经硼氢化钠还原为苯甲醇；

(c)苄醇经三溴化硼溴化为苄溴；

(d)苄溴在亚磷酸三乙酯作用下得到苄基膦酸二乙酯；

(e)苄基膦酸二乙酯与含氟基团取代的苯甲醛或4-otbs修饰的苯甲醛经witting-hornor反应构建二苯乙烯结构，得到含氟基团取代的白藜芦醇衍生物。

进一步的，本发明的一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，还可以由以下技术方案实现：

所述叔丁基二甲基硅醚作为羟基保护基。

所述步骤(a)的溶剂包括n，n-二甲基甲酰胺，催化剂包括n，n-二异丙基乙胺，反应温度包括-10～10℃，反应时间包括1～3小时，淬灭剂包括冰水；所述步骤(b)的溶剂包括甲醇，反应温度包括10～40℃，反应时间包括1～3小时；所述步骤(c)的溶剂包括二氯甲烷，反应温度包括-10～10℃，反应时间包括0.5～2小时；所述步骤(d)在氮气保护条件下，反应温度包括100～200℃，反应时间包括1～3小时。

所述步骤(e)的溶剂包括无水n，n-二甲基甲酰胺，反应温度包括-10～10℃，反应时间包括0.1～2小时；升温至10～40℃，继续反应12～48小时；调节ph所用酸包括稀盐酸，调节ph后反应时间包括0.1～1小时，干燥剂包括无水硫酸钠。

所述步骤(e)的反应温度包括0℃，反应时间包括0.5小时；升温至室温，继续反应24小时；调节ph所用酸包括稀盐酸，调节ph后反应时间包括0.5小时，加入乙酸乙酯进行萃取；合并有机相后水洗，干燥剂包括无水硫酸钠。

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下反应步骤：

(a)将羟基苯甲醛25mmol溶于n，n-二甲基甲酰胺45ml中，加入n，n-二异丙基乙胺，其中n，n-二异丙基乙胺与羟基苯甲醛中所含羟基的摩尔比包括2～1∶1；将反应体系冷至0℃，缓慢加入叔丁基二甲基氯硅醚，其中，叔丁基二甲基氯硅醚与羟基苯甲醛中所含羟基的摩尔比包括2～1∶1，继续反应2小时；冰水淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯，分层后，有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗和水洗，继续用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到产物硅氧基苯甲醛；

(b)将步骤(a)所得产物溶于甲醇65ml中，冷至0℃，分批加入硼氢化钠30.5mmol，缓慢升温至室温，继续搅拌2小时，向反应体系中加入等体积饱和食盐水，减压旋蒸除去大部分甲醇；加入乙酸乙酯进行萃取，有机相经稀盐酸溶液洗、水洗，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得到产物硅氧基苯甲醇；

(c)将步骤(b)所得产物溶于二氯甲烷100ml中，冷至0℃；滴加三溴化磷27.5mmol，搅拌反应1小时，在冰水浴下，慢慢滴加碳酸氢钠溶液进行反应淬灭；分离有机相，并用碳酸氢钠溶液洗、水洗，再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到产物甲基硅氧基苄溴；

(d)将步骤(c)所得产物与亚磷酸三乙酯27.5mmol于圆底烧瓶中，氮气保护并与160℃回流2小时，反应物倒入冰水中，加入乙酸乙酯进行萃取；有机相水洗，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩得到苄基膦酸二乙酯粗产品；

(e)将对氟苯甲醛2.0mmol和步骤(d)所得产物2.6mmol溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，冷至0℃；加入氢化钠10mmol，氮气保护，于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜；将反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌0.5小时；加入乙酸乙酯进行萃取；合并有机相后水洗，无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品。

进一步的，本发明还提供了一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的用途，该衍生物在制备治疗肺癌的药物中的应用。

进一步的，本发明还提供了一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的用途，该衍生物作为治疗肺癌的白藜芦醇类先导物的应用。

本发明的有益效果

本发明以苯甲醛为原料，经witting-horning反应进行二苯基乙烯结构的构建，以叔丁基二甲基硅醚进行羟基保护，避免了常见的甲氧基醚脱保护使用三溴化硼或吡啶盐酸盐。药理实验结果表明，3,5-二羟基-4-三氟甲氧基取代的白藜芦醇衍生物对人肺癌a549细胞的抗增殖活性明显优越于天然活性分子白藜芦醇，其活性是母体分子白藜芦醇的4倍，3,5-dioh-4’-ocf3修饰的白藜芦醇衍生物对人肺癌a549细胞具有杰出的g1细胞周期阻滞作用，可有效的诱发a549细胞早衰。有机含氟化合物在农药、医药和材料等领域已经有着非常重要的应用。与非氟取代的衍生物相比较，含氟取代物常常具有更好的溶解性和脂溶性，从而显示出更好的膜渗透性和生物利用度；因其更难以被氧化从而具有更好的代谢稳定性。因此，制备含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物及研究其对人肺癌a549细胞的抗增殖作用，对指导前药的发现及先导化合物的设计，具有重要意义。

附图说明

图1为化合物101的氢谱。

图2为化合物101的碳谱。

图3为化合物101的氟谱。

图4为化合物102的氢谱。

图5为化合物102的碳谱。

图6为化合物102的氟谱。

图7为化合物103的氢谱。

图8为化合物103的碳谱。

图9为化合物103的氟谱。

图10为化合物104的氢谱。

图11为化合物104的碳谱。

图12为化合物104的氟谱。

图13为化合物105的氢谱。

图14为化合物105的碳谱。

图15为化合物105的氟谱。

图16为化合物106的氢谱。

图17为化合物106的碳谱。

图18为化合物106的氟谱。

图19为化合物107的氢谱。

图20为化合物107的碳谱。

图21为化合物107的氟谱。

图22为化合物108的氢谱。

图23为化合物108的碳谱。

图24为化合物108的氟谱。

图25为化合物109的氢谱。

图26为化合物109的碳谱。

图27为化合物109的氟谱。

图28为细胞周期阻滞图。

图29为诱导细胞早衰图。

图30为本发明的一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的结构通式。

图31为本发明的一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法反应式。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯的制备

3,5-二羟基苯甲醛(25mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(45ml)中，加入n,n-二异丙基乙胺(75mmol)；反应体系冷至0℃，缓慢加入叔丁基二甲基氯硅醚(tbscl，60mmol)，并继续反应2小时；冰水淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯；分层后，有机相继续用饱和碳酸氢钠溶液洗和水洗，继续用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苯甲醛；产物重溶于甲醇(65ml)中，并冷至0℃；分批加入硼氢化钠(30.5mmol)，并缓慢升温至室温，继续搅拌2小时；反应体系中加入等体积饱和食盐水，减压旋蒸除去大部分甲醇；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)，有机相继续稀盐酸溶液洗、水洗，并无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苯甲醇；产物重溶于二氯甲烷(100ml)中，并冷至0℃；滴加三溴化磷(27.5mmol)，并继续搅拌反应1小时；在冰水浴下，慢慢滴加碳酸氢钠溶液进行反应淬灭；分离有机相，并用碳酸氢钠溶液洗、水洗；再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄溴；3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄溴与亚磷酸三乙酯(27.5mmol)与圆底烧瓶中，氮气保护并与160℃回流2小时；反应物倒入冰水中，加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相并水洗，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩得到3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯粗产品8.35g，产率66.2％(四步)。

(e)-3,5-二羟基-4’-氟二苯乙烯(化合物101)的制备

对氟苯甲醛(2.0mmol)和3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护；于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜；反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.32g，产率69.6％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.25(s,2oh),7.64(m,2h),7.21(t,j＝8.8hz,2h),7.07(d,j＝16.4hz,1h),7.02(d,j＝16.4hz,1h),6.44(d,j＝2.0hz,2h),6.17(t,j＝2.0hz,1h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):163.18(d,jc-f＝245.43hz),158.93,139.07,134.04(d,jc-f＝3.03hz),129.27(d,jc-f＝2.02hz),128.76(d,jc-f＝8.08hz),127.05,116.00(d,jc-f＝22.22hz),105.06,102.73；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-114.51。

实施例2

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯的制备

制备步骤及方法同实施例1。

(e)-3,5-二羟基-4’-三氟甲基二苯乙烯(化合物102)的制备

对三氟甲基苯甲醛(2.0mmol)和3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取x2；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.41g，产率73.2％。¹h-nmr(400mhz,cdcl3),δh(ppm):7.62(d,j＝8.8hz,2h),7.58(d,j＝8.8hz,2h),7.05(s,2h),6.60(d,j＝2.0hz,2h),6.32(t,j＝2.0hz,1h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):158.53,141.16,138.12,131.85,126.91,126.25,125.42,125.39,105.01,102.90；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-60.84。

实施例3

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯的制备

制备步骤及方法同实施例1。

(e)-3,5-二羟基-4’-三氟甲氧基二苯乙烯(化合物103)的制备

对三氟甲氧基苯甲醛(2.0mmol)和3,5-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.36g，产率60.8％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.29(s,2oh),7.71(d,j＝8.8hz,2h),7.35(d,j＝8.00hz,2h),7.09(s,2h),6.46(d,j＝2.0hz,2h),6.19(t,j＝2.0hz,1h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):158.97,147.84,138.84,136.93,130.67,128.51,126.69,121.64,119.23,105.24,103.00；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-56.83。

实施例4

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯的制备

3,4-二羟基苯甲醛(25mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(45ml)中，加入n,n-二异丙基乙胺(75mmol)；反应体系冷至0℃，缓慢加入叔丁基二甲基氯硅醚(tbscl，60mmol)，并继续反应2小时。冰水淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯；分层后，有机相继续用饱和碳酸氢钠溶液洗和水洗，继续用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苯甲醛。产物重溶于甲醇(65ml)中，并冷至0℃；分批加入硼氢化钠(30.5mmol)，并缓慢升温至室温，继续搅拌2小时。反应体系中加入等体积饱和食盐水，减压旋蒸除去大部分甲醇；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)，有机相继续稀盐酸溶液洗、水洗，并无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苯甲醇。产物重溶于二氯甲烷(100ml)中，并冷至0℃；滴加三溴化磷(27.5mmol)，并继续搅拌反应1小时。在冰水浴下，慢慢滴加碳酸氢钠溶液进行反应淬灭；分离有机相，并用碳酸氢钠溶液洗、水洗；再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄溴。3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄溴与亚磷酸三乙酯(27.5mmol)与圆底烧瓶中，氮气保护并与160℃回流2小时。反应物倒入冰水中，加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相并水洗，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩得到3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯粗产品7.52g，产率59.6％(四步)。

(e)-3,4二羟基-4’-氟二苯乙烯(化合物104)的制备

对氟苯甲醛(2.0mmol)和3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.30g，产率65.2％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.59(s,1oh),7.59(dd,j＝5.6and8.8hz,2h),7.42(d,j＝8.8hz,2h),7.19(t,j＝8.8hz,2h),7.11(d,j＝16.4hz,1h),7.03(d,j＝16.8hz,1h),6.79(d,j＝8.8hz,2h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):162.86(d,j＝244.82hz),157.70,134.55(d,j＝3.13hz),128.77(d,j＝2.32hz),128.40,128.22,128.14,124.30,115.96(d,j＝21.51hz),115.94；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-115.29。

实施例5

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯的制备

制备步骤及方法同实施例4

(e)-3,4-二羟基-4’-三氟甲基二苯乙烯(化合物105)

对三氟甲基苯甲醛(2.0mmol)和3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.38g，产率67.9％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.66(s,1oh),7.74(d,j＝8.4hz,2h),7.67(d,j＝8.4hz,2h),7.47(d,j＝8.4hz,2h),7.32(d,j＝16.4hz,1h),7.11(d,j＝16.4hz,1h),6.79(d,j＝8.4hz,2h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):158.29,142.14,131.78,128.77,127.92,126.85,125.92(q,j＝3.84hz),123.85,116.02；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-60.76。

实施例6

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯的制备

制备步骤及方法同实施例4

(e)-3,4-二羟基-4’-三氟甲氧基二苯乙烯(化合物106)的制备

对三氟甲氧基苯甲醛(2.0mmol)和3,4-二(叔丁基二甲基硅氧基)苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.31g，产率52.2％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.65(s,1oh),7.64(d,j＝8.8hz,2h),7.43(d,j＝8.4hz,2h),7.31(d,j＝8.0hz,2h),7.18(d,j＝16.4hz,1h),7.05(d,j＝16.4hz,1h),6.78(d,j＝8.4hz,2h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):158.02,147.46(d,j＝1.72hz),137.48,130.18,128.51,128.19,128.00,123.89,121.71,116.01；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-56.89。

实施例7

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物的制备方法，包括如下步骤：

4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯的制备

对羟基苯甲醛(25mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(45ml)中，加入n,n-二异丙基乙胺(37.5mmol)；反应体系冷至0℃，缓慢加入叔丁基二甲基氯硅醚(tbscl，30mmol)，并继续反应2小时。冰水淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯；分层后，有机相继续用饱和碳酸氢钠溶液洗和水洗，继续用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到4-叔丁基二甲基硅氧基苯甲醛。产物重溶于甲醇(65ml)中，并冷至0℃；分批加入硼氢化钠(30.5mmol)，并缓慢升温至室温，继续搅拌2小时。反应体系中加入等体积饱和食盐水，减压旋蒸除去大部分甲醇；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)，有机相继续稀盐酸溶液洗、水洗，并无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到4-叔丁基二甲基硅氧基苯甲醇。产物重溶于二氯甲烷(100ml)中，并冷至0℃；滴加三溴化磷(27.5mmol)，并继续搅拌反应1小时。在冰水浴下，慢慢滴加碳酸氢钠溶液进行反应淬灭；分离有机相，并用碳酸氢钠溶液洗、水洗；再用无水硫酸钠干燥并减压浓缩得到4-叔丁基二甲基硅氧基苄溴。4-叔丁基二甲基硅氧基苄溴与亚磷酸三乙酯(27.5mmol)与圆底烧瓶中，氮气保护并与160℃回流2小时。反应物倒入冰水中，加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相并水洗，用无水硫酸钠干燥，并减压浓缩得到4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯粗产品6.04g，产率67.4％(四步)。

(e)-4-羟基-4’-氟二苯乙烯(化合物107)的制备

对氟苯甲醛(2.0mmol)和4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.27g，产率63.1％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.048(s,2oh),7.59(dd,j＝5.6and8.4hz,2h),7.18(t,j＝8.8hz,2h),7.04(m,2h),6.93(d,j＝16.4hz,1h),6.87(dd,j＝1.6and8.4hz,1h),6.74(d,j＝8.0hz,1h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):162.82(d,j＝244.72hz),145.99,145.80,134.54(d,j＝3.13hz),129.14(d,j＝2.32hz),128.95,128.22(d,j＝7.88hz),124.17,118.92,116.08,115.92(d,j＝21.41hz),113.709；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-110.62。

实施例8

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯的制备的制备

制备步骤及方法同实施例7。

(e)-4-羟基-4’-三氟甲基二苯乙烯(化合物108)

对三氟甲基苯甲醛(2.0mmol)和4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.385g，产率72.9％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.19(s,1oh),8.97(s,1oh),7.74(d,j＝8.0hz,2h),7.664(d,j＝8.4hz,2h),7.247(d,j＝16.4hz,1h),7.02(d,j＝2.0hz,1h),7.01(d,j＝16.4hz,1h),6.92(dd,j＝2.0and8.0hz,1h),6.74(d,j＝8.4hz,1h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):146.20,145.43,141.72(d,j＝1.21hz),131.75,128.04,126.42,125.40(d,j＝3.64hz),125.36,123.29,119.12,115.68,113.65；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-60.76。

实施例9

一种含氟基团修饰的白藜芦醇衍生物，具有如下结构式：

4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯的制备的制备

制备步骤及方法同实施例7。

(e)-4-羟基-4’-三氟甲氧基二苯乙烯(化合物109)的制备

对三氟甲氧基苯甲醛(2.0mmol)和4-叔丁基二甲基硅氧基苄基膦酸二乙酯(2.6mmol)溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，并冷至0℃；加入氢化钠(10mmol),并进行氮气保护。于冰水浴中搅拌反应0.5小时，升温至室温并搅拌过夜。反应液倒入冰水中，稀盐酸调至ph为5并搅拌半个小时；加入乙酸乙酯进行萃取(x2)；合并有机相后水洗(x2)，并无水硫酸钠干燥；减压浓缩后硅胶柱层析纯化，得产品0.32g，产率53.9％。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δh(ppm):9.18(s,1oh),8.98(s,1oh),7.66(d,j＝8.8hz,2h),7.33(d,j＝8.4hz,2h),7.12(d,j＝16.4hz,1h),7.01(d,j＝2.0hz,1h),6.97(d,j＝16.4hz,1h),6.89(dd,j＝2.0and8.0hz,1h),6.75(d,j＝8.0hz,1h)；¹³c-nmr(101mhz,dmso-d6),δc(ppm):147.38(d,j＝1.62hz),146.27,145.82,137.44,130.54,128.71,127.97,123.74,119.19,116.09,113.87；¹⁹f-nmr(dmso-d6),δc(ppm):-56.84。

实施例10

mtt评价化合物对人肺癌a549细胞增殖的抑制作用

1)取3x10⁴cells/mla549细胞100μl接种于到96孔板中，在5％co2，37℃环境下用rpmi-1640培养基孵育24小时。

2)换取90μl新鲜培养基，加入10μl不同浓度的白藜芦醇或白藜芦醇衍生物作用48小时。

3)弃去培养基，每孔加入110μlmtt溶液(5μg/ml,即0.5％mtt)继续作用4小时。

4)弃去培养基，加入100μldmso并置于摇床上低速震荡，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570nm处检测各孔的吸光值。

5)细胞存活率按下面公式进行计算：

细胞存活率(％)＝加药组od/对照组od×100％

实验结果见下表，

表.白藜芦醇及其衍生物对a549细胞的增殖抑制活性

结论：3,5-二羟基-4-三氟甲氧基白藜芦醇衍生物(103)对人肺癌a549细胞的增值抑制活性为26.2μm，明显优越于天然产物白藜芦醇(127μm)，可以用作治疗肺癌的白藜芦醇类先导物。这应该与三氟甲氧基团修饰的化合物具有更良好的膜渗透性、细胞吸收性和稳定性有关。

实施例11

细胞周期阻滞：

1)2ml的a549细胞以2.5×10⁵cells/ml的密度加入到六孔板中，预培养24小时；

2)吸除培养基，换上1.8ml新鲜的培养基，并加入0.2ml药物进行培养24小时；

3)细胞药物处理完毕，培养基被吸除；a549细胞层使用pbs洗涤(去除血清)，并胰酶消化，收集细胞于含血清的培养基中；

4)离心并用pbs洗涤两次；加入75％乙醇4℃固定细胞至少18小时；

5)固定完毕，细胞离心并pbs洗涤离心两次；接着以10⁶cells/ml的密度重悬于pbs中；

6)加入灭活的rnase(100μg/ml)(煮沸灭活过的)于37℃孵育30min，以消化细胞内的rna；再加入染色液pi(50μg/ml)，在4℃孵育1小时。

7)混匀细胞后，流式细胞仪获取分析。

实验结果见图28。

结论：对照组的细胞周期分布为：g0/g1期为60.7％，s期为262.7％，g2/m期为16.6％。与对照组相比，25μm白藜芦醇的处理是细胞周期阻滞在s期；随浓度增大50、75μm白藜芦醇的处理，s期的百分比下降，g0/g1期的比例回升。而3,5-二羟基-4-三氟甲氧基白藜芦醇衍生物(103)将细胞周期成功的阻滞在g0/g1期，并且具有一定的浓度依赖性。g0/g1细胞周期的阻滞是细胞早衰的一个重要特征。

实施例12

诱导细胞早衰：

1)2ml的a549细胞以500cells/well加入到六孔板(预铺玻璃片)中，预培养24小时；

2)吸除培养基，换上1.8ml新鲜的培养基，并加入0.2ml药物进行培养3天；

3)细胞药物处理完毕，换上2ml新鲜的培养基，并继续培养7天；

4)吸除培养基，pbs洗两次，加入1毫升染色固定液(2％甲醛)，室温固

定10分钟；

5)吸除细胞固定液，用pbs洗涤细胞3次，每次3分钟。

6)吸除pbs，每孔加入1毫升染色工作液(1mg/ml5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-d-吡喃半乳糖苷溶于含5mm亚铁氰化钾、5mm铁氰化钾和2mm氯化镁的pbs溶液中)，于37℃孵育过夜；(用保鲜膜封住6孔板防止蒸发)

7)去除染色工作液，加入2毫升pbs，取出玻璃片并进行普通光学显微镜下观察。

实验结果见图29。

结论：药物处理致衰活性的测定具有浓度依赖性，50μm白藜芦醇可导致a549早衰；而3,5-二羟基-4-三氟甲氧基白藜芦醇衍生物(103)可于更低的浓度(10、15μm)导致早衰。有效的低浓度药物处理意味着可以使用更少量的量达到预期的治疗效果，也意味着具有更少的副作用。

以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。