一种卵囊藻专用培养基及卵囊藻纯种液的制备方法与流程

本发明涉及水产养殖水质调控和水体环境治理技术领域，具体涉及一种卵囊藻专用培养基及卵囊藻纯种液的制备方法。

背景技术：

卵囊藻(oocystis)属于绿藻门(chlorophyta)，共球藻纲(trebouxiophyceae)，小球藻目(chlorellales)，卵囊藻科(oocystaceae)。植物体为球形或者是椭圆形的球形群体，群体通常是由2、4或8个细胞组成，在群体外有一层果胶质构成的胶质包被。藻细胞为椭圆形或者卵圆形，细胞长10-19μm，宽9-13μm，一般情况下产生2、4、8或16个似亲孢子。卵囊藻主要分布于河口和水产养殖池塘等富含有机物的水体中，具有持续时间长和种群稳定等特点，能降低水体中的氨氮、亚硝酸盐等有害因子的浓度，提高水中的溶氧，从而使水环境处于良性的平衡状态，抑制弧菌的生长。

目前的对虾养殖方式主要以工厂化养殖池、高位池、土池等海水或半咸水养殖为主。对虾养殖业是我国海水养殖业的支柱产业，而我国在发展对虾养殖的过程中，始终受到水质污染和对虾病害问题的威胁。通过生物技术调控养殖水域中微生物群落的结构与功能来处理水质和预防疾病，是对虾养殖生态防病的重要内容。卵囊藻广泛存在于南方对虾养殖池，种群稳定，适应能力强，可调控和改善养殖环境并防止对虾疾病。

传统的卵囊藻培养方式是采用开放水泥池培养，其培养规模大，产量高，但缺点是：(1)易污染，占地面积大，受天气影响大，不易掌控，而且藻细胞生长缓慢、倍增时间长、一次性投资大而产量低，不适用于扩种阶段；(2)传统方式所培育的卵囊藻藻相不够稳定，易老化和倒藻，其用于对虾等养殖池塘特别是养殖中后期时，会出现池塘水质不稳定，藻相不利于对虾的生长，发生倒藻现象，死亡的藻类会产生大量藻毒素，进而导致对虾等海产品的死亡；(3)传统方式所培育的卵囊藻难以在常温下进行长时间的存储和运输，给使用造成不便。这些导致卵囊藻难以在实际生产中得到大规模的应用。

技术实现要素：

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种最适宜于卵囊藻生长的卵囊藻专用培养基及采用该培养基获得卵囊藻纯种液的制备方法，所制备的卵囊藻纯种液可用于选育和培育高活性且抗逆性强的卵囊藻。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

提供一种卵囊藻专用培养基，由以下配比的组分制成：

所述卵囊藻专用培养基的比重为1.010～1.016，ph值为8.0～8.4。

上述技术方案中，所述卵囊藻专用培养基，由以下配比的组分制成：

上述技术方案中，所述无菌海水的制备方法为：将海水经陶氏超微过滤装置过滤后，加入有效氯含量为50％的强氯精15～25ppm，充气2h使药物充分溶解，然后停止充气，沉淀24h后，加入硫代硫酸钠5～10ppm中和剩余的氯，并用淀粉碘化钾液测定无菌海水中的氯含量，控制无菌海水中不残留有效氯成份。

本发明还提供一种卵囊藻纯种液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、卵囊藻纯种的分离

由高产对虾养殖池中采集出卵囊藻样品，然后显微镜下分离并选取卵囊藻细胞；

步骤二、纯种卵囊藻的培育

将步骤一选取的卵囊藻细胞，接种至上述的卵囊藻专用培养基中，在温度为23～28℃、光照1800～2000lx的条件下连续充气培养纯化，12～18天后卵囊藻浓度达到65-75万个/ml时，停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液。

本发明的有益效果是：

本发明的纯种卵囊藻培养液的制备方法是采用高产对虾养殖池中分离出的卵囊藻纯种，将其接种至专用培养基中，在温度为23～28℃、光照1800～2000lx的条件下连续充气培养纯化，12～18天后卵囊藻浓度达到65-75万个/ml时，停止充气，沉淀后排去上层清液，即获得卵囊藻纯种液；其中专用培养基是由无菌海水1000ml和营养素(包括硝酸钾、磷酸二氢钾、三氯化铁、维生素b1、维生素b12、氨基酸培藻素、植物细胞分裂素、九二0植物生长激素)制成，为卵囊藻培育提供一种专用营养配方和最适温度、盐度、酸碱度等理化因子培育条件，所制备的卵囊藻纯种液可用于选育和培育高活性且抗逆性强卵囊藻，该卵囊藻藻相稳定、不易老化和倒藻的优点，能够长期保持养殖池的水质处于良性的平衡状态，从而有利于对虾等海产品的生长，提高养殖产量和产品质量，提高养殖效益。

具体实施方式

结合以下实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

一种卵囊藻纯种液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、卵囊藻纯种的分离

由高产对虾养殖池中采集出卵囊藻样品，然后显微镜下分离并选取卵囊藻细胞。

步骤二、纯种卵囊藻的培育

(1)按以下配比，制备卵囊藻专用培养基：

所制备的卵囊藻专用培养基的比重为1.011，ph值为8.1。

其中，无菌海水的制备方法为：将海水经陶氏超微过滤装置过滤后，加入有效氯含量为50％的强氯精20ppm，充气2h使药物充分溶解，然后停止充气，沉淀24h后，加入硫代硫酸钠7ppm中和剩余的氯，并用淀粉碘化钾液测定无菌海水中的氯含量，控制无菌海水中不残留有效氯成份。

(2)制备卵囊藻纯种液：

将步骤一选取的卵囊藻细胞，接种至上述卵囊藻专用培养基中，并在温度为25℃、光照2000lx的条件下连续充气培养纯化，15天后卵囊藻浓度达到65-75万个/ml时，停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液。

实施例2：

一种卵囊藻纯种液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、卵囊藻纯种的分离

由高产对虾养殖池中采集出卵囊藻样品，然后显微镜下分离并选取卵囊藻细胞；

步骤二、纯种卵囊藻的培育

(1)按以下配比，制备卵囊藻专用培养基：

所制备的卵囊藻专用培养基的比重为1.014，ph值为8.0。

其中，无菌海水的制备方法为：将海水经陶氏超微过滤装置过滤后，加入有效氯含量为50％的强氯精15ppm，充气2h使药物充分溶解，然后停止充气，沉淀24h后，加入硫代硫酸钠5ppm中和剩余的氯，并用淀粉碘化钾液测定无菌海水中的氯含量，控制无菌海水中不残留有效氯成份.。

(2)制备卵囊藻纯种液：

将步骤一选取的卵囊藻细胞，接种至上述卵囊藻专用培养基中，并在温度为23℃、光照1800lx的条件下连续充气培养纯化，12天后卵囊藻浓度达到65-75万个/ml时，停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液。

实施例3：

一种卵囊藻纯种液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、卵囊藻纯种的分离

由高产对虾养殖池中采集出卵囊藻样品，然后显微镜下分离并选取卵囊藻细胞；

步骤二、纯种卵囊藻的培育

(1)按以下配比，制备卵囊藻专用培养基：

所制备的卵囊藻专用培养基的比重为1.013，ph值为8.2。

其中，无菌海水的制备方法为：将海水经陶氏超微过滤装置过滤后，加入有效氯含量为50％的强氯精25ppm，充气2h使药物充分溶解，然后停止充气，沉淀24h后，加入硫代硫酸钠10ppm中和剩余的氯，并用淀粉碘化钾液测定无菌海水中的氯含量，控制无菌海水中不残留有效氯成份。

(2)制备卵囊藻纯种液：

将步骤一选取的卵囊藻细胞，接种至上述卵囊藻专用培养基中，并在温度为28℃、光照1900lx的条件下连续充气培养纯化，18天后卵囊藻浓度达到65-75万个/ml时，停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液。

实施例4：

一种卵囊藻纯种液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、卵囊藻纯种的分离

由高产对虾养殖池中采集出卵囊藻样品，然后显微镜下分离并选取卵囊藻细胞。

步骤二、纯种卵囊藻的培育

(1)按以下配比，制备卵囊藻专用培养基：

所制备的卵囊藻专用培养基的比重为1.010，ph值为8.4。

其中，无菌海水的制备方法为：将海水经陶氏超微过滤装置过滤后，加入有效氯含量为50％的强氯精22ppm，充气2h使药物充分溶解，然后停止充气，沉淀24h后，加入硫代硫酸钠9ppm中和剩余的氯，并用淀粉碘化钾液测定无菌海水中的氯含量，控制无菌海水中不残留有效氯成份。

(2)制备卵囊藻纯种液：

将步骤一选取的卵囊藻细胞，接种至上述卵囊藻专用培养基中，并在温度为26℃、光照2000lx的条件下连续充气培养纯化，16天后卵囊藻浓度达到65-75万个/ml时，停止充气，沉淀后排去上层清液，获得卵囊藻纯种液。

最后应当说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。