一种检测硫醇的新型近红外比率荧光探针及其制备方法和应用与流程

本发明属于分析化学技术领域，尤其涉及一种检测硫醇的新型近红外比率荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术：

生物体内的硫醇如半胱氨酸(cys)，高半胱氨酸(hcy)，谷胱甘肽(gsh)在生理和病理过程中起着至关重要的作用。然而，细胞内硫醇水平的改变与很多疾病密切相关。体内缺乏半胱氨酸会导致儿童生长缓慢，肝损伤和皮肤损伤等多种病症。血液中高半胱氨酸的浓度增加会导致维生素b12的缺失和老年痴呆症等。谷胱甘肽是细胞内最丰富的硫醇，在维持细胞的氧化还原动态平衡中起着重要作用。因此，检测生物体系中硫醇具有非常重要的意义。

目前，用于检测硫醇的方法有很多，如高效液相色谱法、电化学法、荧光法等。相比其他方法，荧光法由于具有选择性好、灵敏度高、快速简便等优点，因此，近年发展了许多检测硫醇的荧光探针。由于生物样品自身荧光发射波长一般小于600nm，而大多数探针的荧光发射波长与生物样品的背景荧光有重叠，因此极大地限制了这些探针的灵敏度，而在近红外(λem>600nm)光区，生物样品光吸收和荧光强度很弱，因而背景干扰大大降低。因此，发展近红外硫醇探针是一项具有挑战性的工作。目前已有少数近红外硫醇探针通过单波长荧光信号强度的变化来进行检测，而荧光强度易受到其他因素(如样品环境条件、探针浓度等)的影响。因此，这些探针并不能提供足够的精度以进行定量检测。具有自校正作用的，通过两个波长的变化指示识别过程的比率测量型荧光探针则能很好的实现定量检测。因此，设计近红外比率荧光探针对硫醇进行检测仍是一项具有挑战性的工作。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种选择性好、快速简便的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针，还相应提供该检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的制备方法及应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种检测硫醇的新型近红外比率荧光探针，所述检测硫醇的新型近红外比率荧光探针为2-[2-[2-[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧羰基]苄胺基]-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，结构式如式(1)：

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)2,3,3-三甲基-3h-吲哚与碘甲烷反应，得到1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚，结构式如式(5)：

(2)环己酮进行维尔斯迈尔(vilsmeier)反应，得到2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯，结构式如式(4)：

(3)步骤(1)所得的1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚与步骤(2)所得的2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯通过脱水缩合反应，得到2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，结构式如式(3)：

(4)步骤(3)所得的2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物与苄胺反应，得到2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，结构式如式(2)：

(5)2,2'-二硫二乙醇与乙酸反应，得到2,2'-二硫二乙醇单乙酯，结构式如式(6)：

(6)步骤(5)所得的2,2'-二硫二乙醇单乙酯生成中间体[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧基]甲酰氯与步骤(4)所得的2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物反应，得到式(1)所示的化合物。

优选的，所述步骤(1)的具体过程为：

将2,3,3-三甲基-3h-吲哚溶于硝基甲烷中，再向其中加入碘甲烷，室温反应24h，有大量固体析出，向其中加入乙醚使其完全沉淀，然后减压过滤，用乙醚淋洗，得固体产物为1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚。

优选的，所述2,3,3-三甲基-3h-吲哚与碘甲烷的摩尔比为1∶1.0～2.0。

优选的，所述步骤(2)的具体过程为：

在氩气保护下，将干燥的n,n-二甲基甲酰胺溶于干燥的二氯甲烷，用冰盐浴冷却至0℃，控温0℃缓慢滴加三氯氧磷的二氯甲烷溶液，滴加完反应30min后，将环己酮加入其中，然后将反应液加热至80℃反应3h，反应结束后，将反应液倒入冰水中，静置过夜，有黄色固体析出，减压过滤，得固体产物为2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯。

优选的，所述环己酮进行维尔斯迈尔反应的温度为25～80℃。

优选的，所述步骤(3)的具体过程为：

在双口瓶中加入1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚和2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯，接上分水器，抽换气三次后，在氩气保护下加入正丁醇和甲苯(30ml，v/v＝7:3)。然后，氩气保护下回流搅拌反应10h，反应完毕后减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，用乙醚洗涤过滤后，用硅胶色谱柱(二氯甲烷/0-2％甲醇)提纯，得绿色固体产物为2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物。

优选的，所述2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯与1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚的摩尔比为1∶2.0～2.2。

优选的，所述步骤(4)的具体过程为：

在双口瓶中加入2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，抽换气三次后，在氩气保护下加入无水乙腈。溶解后，用微量注射器将苄胺和n,n-二异丙基乙胺加入其中，氩气保护下加热至80℃反应40min，反应完毕后，加入0.1n的盐酸淬灭反应，用二氯甲烷萃取三次，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，随后用硅胶色谱柱(二氯甲烷/0-2％甲醇)提纯，得蓝色固体产物为2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物。

优选的，所述2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物与苄胺的摩尔比为1∶1.0～1.5。

优选的，所述步骤(5)的具体过程为：

在氩气保护下，将2,2'-二硫二乙醇，乙酸，4-二甲氨基吡啶溶于干燥的四氢呋喃中。将上述反应液冷却至0℃，将二环己基碳二亚胺溶于干燥的四氢呋喃缓慢滴加至其中。滴加完，室温反应12～18h，完全完毕后，减压过滤，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，随后用硅胶色谱柱(石油醚/10-50％乙酸乙酯)提纯，得浅黄色液体产物为2,2'-二硫二乙醇单乙酯。

优选的，所述乙酸与2,2'-二硫二乙醇的摩尔比为1∶2.0～5.0。

优选的，所述步骤(6)的具体过程为：

在三口瓶中加入无水碳酸钠，高温除水后冷却至室温，抽换气三次后，在氩气保护下向其中加入无水甲苯，冰浴至0℃左右，滴加三光气的甲苯溶液，滴加完0℃搅拌15min，滴加2,2'-二硫二乙醇单乙酯的甲苯溶液，滴加完缓慢升至室温反应3h后，用氩气赶走剩余的光气1h，过滤后减压蒸馏除去溶剂得到中间体[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧基]甲酰氯，真空干燥后将其用无水二氯甲烷溶解，控温-5～0℃缓慢滴加到2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物和n,n-二异丙基乙胺的二氯甲烷溶液中，加完缓慢升至室温反应12～18h。反应完毕后，用0.1n的盐酸洗涤两次，饱和氯化钠溶液洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，随后用硅胶色谱柱(二氯甲烷/0-5％甲醇)提纯，得绿色固体产物为2-[2-[2-[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧羰基]苄胺基]-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物。

优选的，所述2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物与2,2'-二硫二乙醇单乙酯的摩尔比为1∶1.0～2.0。

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针或上述的制备方法制得的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的应用，将所述硫醇新型近红外比率荧光探针与4-羟乙基哌嗪乙磺酸(hepes)缓冲液和二甲基亚砜(dmso)的缓冲液混合，再加入待测溶液中，得到混合溶液，利用两个不同发射波长处荧光强度变化来检测硫醇的存在与否。

优选的，所述待测溶液中无硫醇时，所述反应溶液的最大荧光发射波长位于808nm处，当加入硫醇后，所述反应溶液的808nm处的荧光减弱，最大荧光发射波长蓝移至747nm处。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

1、本发明的一种检测硫醇的新型近红外比率荧光探针是以二硫键为识别单元的荧光探针，实践表明，本发明的荧光探针分子在对硫醇进行检测时表现出了较高的选择性。

3、本发明的一种检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的制备方法，近红外荧光团合成简单，且后处理过程容易，适于工业化生产。

附图说明

图1为实施例1的式(1)所示的化合物(即检测硫醇的新型近红外比率荧光探针)的合成路线图。

图2为实施例1制备的式(3)所示的化合物的¹hnmr图谱。

图3为实施例1制备的式(3)所示的化合物的¹³cnmr图谱。

图4为实施例1制备的式(3)所示的化合物的hrms图谱。

图5为实施例1制备的式(2)所示的化合物的¹hnmr图谱。

图6为实施例1制备的式(2)所示的化合物的¹³cnmr图谱。

图7为实施例1制备的式(2)所示的化合物的hrms图谱。

图8为实施例1制备的式(1)所示的化合物的¹hnmr图谱。

图9为实施例1制备的式(1)所示的化合物的¹³cnmr图谱。

图10为实施例1制备的式(1)所示的化合物的hrms图谱。

图11中(a)为ph值对实施例1制备的式(1)所示的化合物(808nm)和式(2)所示的化合物(747nm)荧光强度的影响示意图，(b)为ph值对实施例1制备的式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物的荧光强度比率(f747nm/f808nm)的影响示意图。

图12中(a)为实施例1的式(1)所示的化合物与半胱氨酸反应的吸收光谱变化示意图，(b)为实施例1的式(1)所示的化合物与半胱氨酸反应的荧光光谱变化示意图。

图13中(a)为实施例1的式(1)所示的化合物与各种巯基化合物反应荧光强度比率(f744nm/f810nm)的影响示意图，(b)为活性硫、活性氧、活性氮和生物硫醇对实施例1的式(1)所示的化合物与硫化氢反应荧光强度比率(f744nm/f810nm)的影响示意图。

具体实施方式

以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。

实施例1：

一种本发明的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针，名称为2-[2-[2-[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧羰基]苄胺基]-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，分子式为c46h54in3o4s2，结构式如式(1)所示：

上述本实施例的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的制备方法，其合成路线如图1所示，包括以下步骤：

(1)合成结构式如式(5)所示的1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚：

反应式如式(2)：

具体过程为：将2,3,3-三甲基-3h-吲哚(1.59g,10mmol)溶于硝基甲烷(30ml)中，再向其中加入碘甲烷(2.13g,15mmol)，室温反应24h，有大量固体析出，向其中加入乙醚使其完全沉淀，然后减压过滤，用乙醚淋洗，得固体产物为1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚，产率96％。

(2)合成结构式如式(4)所示的2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯：

反应式如式(3)：

具体过程为：在氩气保护下，将干燥的n,n-二甲基甲酰胺(20ml,273mmol)溶于干燥的二氯甲烷(20ml)，用冰盐浴冷却至0℃，控温0℃缓慢滴加三氯氧磷(17.5ml,115mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液，滴加完反应30min后，将环己酮(5g,50mmol)加入其中，然后将反应液加热至80℃反应3h，反应结束后，将反应液倒入冰水中，静置过夜，有黄色固体析出，减压过滤，得固体产物为2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯，产率92％。

(3)合成结构式如式(3)所示的2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物：

反应式如式(4)：

具体过程为：在双口瓶中加入1,2,3,3-四甲基-3h-碘代吲哚(1.81g,6mmol)和2-氯-1-甲酰基-3-羟甲基环己烯(518mg,3mmol)，接上分水器，抽换气三次后，在氩气保护下加入正丁醇和甲苯(30ml，v/v＝7:3)。然后，氩气保护下回流搅拌反应10h，反应完毕后减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，用乙醚洗涤过滤后，用硅胶色谱柱(二氯甲烷/0-2％甲醇)提纯，得绿色固体产物为2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，产率75％。

式(3)所示的化合物的¹hnmr图谱如图2所示，¹hnmr(400mhz,d6-dmso,ppm)δ8.22(d,j＝14.0hz,2h),7.61(d,j＝7.2hz,2h),7.44(t,j＝3.6hz,4h),7.30-7.26(m,2h),6.28(d,j＝14.4hz,2h),3.68(s,6h),2.71(t,j＝5.6hz,4h),1.84(q,j＝5.6hz,2h),1.67(s,12h)。

式(3)所示的化合物的¹³cnmr图谱如图3所示，¹³cnmr(100mhz,d6-dmso,ppm)δ172.68,152.60,147.70,142.87,142.71,141.02,128.58,126.10,125.16,122.40,111.44,101.89,48.89,31.53,27.34,27.22,25.89,20.45。

式(3)所示的化合物的hrms图谱如图4所示，hrms(esi)forc32h36cln2⁺([m-i]⁺):calcd:483.25615,found:483.25562。

(4)合成结构式如式(2)所示的2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物：

反应式如式(5)：

具体过程为：在双口瓶中加入2-[2-[2-氯-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物(61mg,0.1mmol)，抽换气三次后，在氩气保护下加入无水乙腈(10ml)。溶解后，用微量注射器将苄胺(44μl,0.4mmol)和n,n-二异丙基乙胺(33μl,0.2mmol)加入其中，氩气保护下加热至80℃反应40min，反应完毕后，加入0.1n的盐酸(5ml)淬灭反应，用二氯甲烷(20ml)萃取三次，有机相用饱和氯化钠溶液(20ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，随后用硅胶色谱柱(二氯甲烷/0-2％甲醇)提纯，得蓝色固体产物为2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，产率86％。

式(2)所示的化合物的¹hnmr图谱如图5所示，¹hnmr(400mhz,d6-dmso,ppm)δ8.81(brs,1h),7.57(d,j＝12.8hz,2h),7.47(t,j＝7.6hz,2h),7.41-7.37(m,5h),7.30-7.26(m,2h),7.13(d,j＝8.0hz,2h),7.04(t,j＝7.2hz,2h),5.72(d,j＝13.2hz,2h),4.87(d,j＝6.0hz,2h),3.41(s,6h),2.54(t,j＝6.0hz,4h),1.75(q,j＝6.4hz,2h),1.38(s,12h)。

式(2)所示的化合物的¹³cnmr图谱如图6所示，¹³cnmr(100mhz,d6-dmso,ppm)δ168.83,167.76,143.43,139.71,138.25,137.72,128.98,128.03,127.70,127.01,122.45,121.86,119.99,109.00,94.69,52.62,46.92,27.69,25.01,21.27。

式(2)所示的化合物的hrms图谱如图7所示，hrms(esi)forc39h44n3⁺([m-i]⁺):calcd:554.35297,found:554.35223。

(5)合成结构式如式(6)所示的2,2'-二硫二乙醇单乙酯：

反应式如式(6)：

具体过程为：在氩气保护下，将2,2'-二硫二乙醇(6.16g,40mmol)，乙酸(601mg,10mmol)，4-二甲氨基吡啶(122mg,1.0mmol)溶于干燥的四氢呋喃(50ml)中。将上述反应液冷却至0℃，将二环己基碳二亚胺(2.27g,11mmol)溶于干燥的四氢呋喃(10ml)缓慢滴加至其中。滴加完，室温反应12～18h，完全完毕后，减压过滤，减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，随后用硅胶色谱柱(石油醚/10-50％乙酸乙酯)提纯，得浅黄色液体产物为2,2'-二硫二乙醇单乙酯，产率57.6％。

(6)合成结构式如式(1)所示的2-[2-[2-[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧羰基]苄胺基]-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物：

反应式如式(7)：

具体过程为：在三口瓶中加入无水碳酸钠(1.59g,15mmol)，高温除水后冷却至室温，抽换气三次后，在氩气保护下向其中加入无水甲苯(5ml)，冰浴至0℃左右，滴加三光气(888.72mg,3mmol)的甲苯溶液(10ml)，滴加完0℃搅拌15min，滴加2,2'-二硫二乙醇单乙酯(294mg,1.5mmol)的甲苯溶液(10ml)，滴加完缓慢升至室温反应3h后，用氩气赶走剩余的光气1h，过滤后减压蒸馏除去溶剂得到中间体[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧基]甲酰氯，真空干燥后将其用无水二氯甲烷(10ml)溶解，控温-5～0℃缓慢滴加到2-[2-[2-苄胺基-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物(170mg,0.25mmol)和n,n-二异丙基乙胺(0.75ml,4.5mmol)的二氯甲烷溶液(20ml)中，加完缓慢升至室温反应12～18h。反应完毕后，用0.1n的盐酸(20ml)洗涤两次，饱和氯化钠溶液(20ml)洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压蒸馏除去溶剂得到粗产物，随后用硅胶色谱柱(二氯甲烷/0-5％甲醇)提纯，得绿色固体产物为2-[2-[2-[2-[(2-乙酰氧乙基)二硫基]乙氧羰基]苄胺基]-3-[(1,3-二氢-1,3,3-三甲基-2h-吲哚-2-亚基)亚乙基]-1-环己烯-1-基]乙烯基]-1,3,3-三甲基吲哚鎓碘化物，产率20％。

式(1)所示的化合物的¹hnmr图谱如图8所示，¹hnmr(400mhz,cd2cl2,ppm)δ7.42-7.37(m,6h),7.35-7.31(t,j＝7.2hz,2h),7.29-7.27(d,j＝7.6hz,2h),7.25-7.22(t,j＝7.2hz,3h),7.19-7.17(d,j＝8.0hz,2h),6.10-6.06(d,j＝14.0hz,2h),4.76(s,2h),4.27-4.24(t,j＝6.4hz,2h),4.19-4.16(t,j＝6.4hz,2h),3.60(s,6h),2.81-2.76(m,5h),2.59-2.53(m,3h),2.07-2.04(m,2h),1.96(s,3h),1.26(s,12h)。

式(1)所示的化合物的¹³cnmr图谱如图9所示，¹³cnmr(100mhz,cd2cl2,ppm)δ172.6,170.7,155.8,154.7,143.2,142.4,141.1,137.0,130.8,129.1,128.9,128.7,128.3,125.4,122.3,111.1,101.5,64.2,62.4,55.8,49.3,37.8,37.6,32.1,28.2,27.7,25.4,21.1,20.9。

式(1)所示的化合物的hrms图谱如图10所示，hrms(esi)forc46h54n3o4s2⁺([m-i]⁺):calcd:776.3550,found:776.3539。

上述本实施例制得的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的应用，将100mmhepes,100mmnacl,5％dmso,ph＝7.4的缓冲溶液2ml加入比色皿中，加入本实施例制得的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针混合均匀后，再加入待测溶液进行测试，该待测溶液中无硫醇时，所述反应溶液的最大荧光发射波长位于808nm处，当加入硫醇后，所述反应溶液的808nm处的荧光减弱，最大荧光发射波长蓝移至747nm处。

上述本实施例制得的检测硫醇的新型近红外比率荧光探针的应用研究：

1、ph值对式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物的荧光的影响

取实施例1合成的式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物溶于二甲基亚砜中，分别制成2mmol/l的储备液。当ph值不同时，在室温下以676nm为激发光测量式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物的荧光性质，结果如图11所示。实验结果表明，在生理ph6.0～8.0范围内图(a)式(1)所示的化合物荧光强度在808nm处和式(2)所示的化合物荧光强度在747nm处几乎不变；图(b)式(1)所示的化合物和式(2)所示的化合物荧光强度比率(f747nm/f808nm)在ph6.0～8.0几乎保持不变。

2、式(1)所示的化合物与cys反应的吸收光谱和荧光光谱研究

在100mmhepes,100mmnacl,5％dmso,ph＝7.4，研究式(1)所示的化合物与半胱氨酸反应的吸收光谱和荧光光谱性质，结果如图12所示。图12中(a)图为式(1)所示的化合物与半胱氨酸反应的吸收光谱图，(b)图为式(1)所示的化合物与半胱氨酸反应的荧光光谱图。化合物1与cys反应，785nm处的吸收强度减弱，与之同时在645nm处一个新的吸收峰不断增强，如图12(a)所示；化合物1与cys反应，808nm处的荧光发射强度逐渐减弱，与之同时在747nm处一个新的荧光发射峰不断增强，如图12(b)所示。

3、式(1)所示的化合物对硫醇的选择性研究

为测试式(1)所示的化合物对硫醇的选择性，对式(1)所示的化合物与各种巯基化合物，包括半胱氨酸(cys)、高半胱氨酸(hcy)、谷胱甘肽(gsh)、二硫苏糖醇(dtt)、2-氨基乙硫醇(2-aet)、2-巯基乙酸(2-mea)和非巯基化合物，如丙氨酸(ala)、缬氨酸(val)、丝氨酸(ser)、组氨酸(his)、亮氨酸(leu)、赖氨酸(lys)，葡萄糖(glu)，2-氨基乙酸(2-aea)以及常见的金属离子(k⁺，na⁺，ca²⁺，mg²⁺)，反应后荧光强度比率(f747nm/f808nm)进行了实验研究，结果如图13所示。由图13可知，式(1)所示的化合物对硫醇的检测具有高度的选择性。

以上所述，仅是本申请的较佳实施例，并非对本申请做任何形式的限制，虽然本申请以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限制本申请，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本申请技术方案的范围内，利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。