1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物、其合成方法和应用与流程

本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物及其制备方法和应用。

背景技术：

目前，癌症发病率呈直线上升趋势。癌症已成为危害生命健康和制约经济发展的一类大疾病。化疗是目前治疗肿瘤的主要方式，副作用小、高效的抗肿瘤药物是提高患者生存率、生活质量的关键。甾体是一类是广泛存在于自然界中的一类天然化学成分，其具有抗炎、抗癌、调节代谢、抗肿瘤等功能。核苷类似物是一类经过修饰与改造的核苷类化合物，结构与天然核苷类似，能够干扰病毒dna、抑制蛋白质的合成，或者影响核酸的转录过程，从而达到治疗肿瘤和抗病毒的效果。1,2,3-三氮唑具有稳定的芳香性及良好的生物兼容性，利用三氮唑环将具有不同生物活性的药效分子连接成一个分子，其衍生物利用度高，并且促进抗菌、抗癌和消炎等作用。近年来，药物接枝修饰在医药领域中的应用不断扩大。将1,2,3-三氮唑、甾体骨架与嘌呤相连，形成一类新颖、具有抗癌活性的化合物，目前未见文献报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一类抗癌活性好的1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物；另一目的提供其制备方法和应用。

为实现本发明目的，本发明采用以下技术方案：

所述具有抗癌活性的1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物，其特征在于，具有以下通式：

其中，所述r1对通式中虚线部分进行修饰，代表所述r2是吗啉硫代吗啉环己亚胺n-boc-哌嗪

制备具有抗癌活性的1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物的方法，其特征在于，

包括以下步骤：

(1)化合物1a、1b、1c、1d的合成：将6-氯嘌呤加入甲醇中，然后加入吗啉或硫代吗啉或环己亚胺或n-boc-哌嗪，之后加入三乙胺，回流、搅拌反应，反应结束，后处理得化合物1a或1b或1c或1d；

(2)化合物2a、2b、2c、2d的合成：将化合物1a或1b或1c或1d溶于乙腈与水的混合溶液中，再加入多聚甲醛，80℃-85℃搅拌反应，反应结束，后处理得化合物2a或2b或2c或2d；

(3)化合物3a、3b、3c、3d的合成：将化合物2a或2b或2c或2d溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液中，随后冰浴条件搅拌滴加氯化亚砜，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束，后处理得化合物3a或3b或3c或3d；

(4)化合物4a、4b、4c、4d的合成：将化合物3a或3b或3c或3d溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液中，再加入叠氮化钠搅拌反应，随后在60℃-65℃下搅拌反应，后处理得化合物4a或4b或4c或4d；

(5)化合物5a、5b、5c、5d的合成：将化合物4a或4b或4c或4d溶于四氢呋喃和水溶液中，随后依次搅拌加入炔丙醛二乙基乙缩醛、五水硫酸铜溶液以及抗坏血酸钠，反应，随后向其中加入甲酸继续搅拌反应，反应结束，后处理得化合物5a或5b或5c或5d；

(6)化合物1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物的合成：将化合物5a或5b或5c或5d与3β-羟基-5α-雄甾-17-酮或3β-羟基-5-雄烯-17-酮或4-氮杂-5α-雄甾-3,17二酮或4-氮杂-5烯-雄甾-3,17二酮溶于乙醇中，再加入催化剂kf/al2o3，回流、搅拌反应，反应结束，后处理得1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物；

步骤(1)中6-氯嘌呤与吗啉或硫代吗啉或环己亚胺或n-boc-哌嗪的摩尔比分为1:1.2，每克6-氯嘌呤使用15ml甲醇；

步骤(2)中1a或1b或1c或1d与多聚甲醛的摩尔比为1:3，每克1a或1b或1c或1d使用乙腈与水的混合溶液15ml；

步骤(3)中2a或2b或2c或2d与氯化亚砜的摩尔比为1:3，每克2a或2b或2c或2d使用n,n-二甲基甲酰胺溶液30ml；

步骤(4)中3a或3b或3c或3d与叠氮化钠的摩尔比为1:2，每克3a或3b或3c或3d使用n,n-二甲基甲酰胺溶液20ml

步骤(5)中4a或4b或4c或4d与炔丙醛二乙基乙缩醛、五水硫酸铜、抗坏血酸钠以及甲酸的摩尔比分别为1:1、1:0.05、1:0.2、1:45，四氢呋喃/水体积比为1：0.8-1.0，每克化合物4a或4b或4c或4d使用四氢呋喃与水30-50ml；

步骤(6)将化合物5a或5b或5c或5d与3β-羟基-5α-雄甾-17-酮或3β-羟基-5-雄烯-17-酮或4-氮杂-5α-雄甾-3,17二酮或4-氮杂-5-烯-雄甾-3,17二酮摩尔比为1:1，5a或5b或5c或5d与催化剂摩尔比为1:0.8。

所述步骤(1)的后处理过程为过滤，所述步骤(2)的后处理过程为减压蒸馏，所述步骤(3)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥，所述步骤(4)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥，所述步骤(5)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥、柱层析，所述步骤(6)的后处理过程为减压蒸馏、柱层析。

1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物的合成路线如下：

本发明所述1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物对多种肿瘤细胞株如前列腺癌、胃癌等细胞株具有显著的抑制作用，为进一步研究抗癌药物提供了先导化合物结构，为开发自主知识产权的一类新药奠定了良好的基础。

本发明优点：本发明以6-氯嘌呤化合物为原料，经亲核反应、卤化、叠氮化、环加成、claisen-schmidt缩合反应制得，制备方法简单，条件温和，收率高，达80％以上。所得化合物由1,2,3-三氮唑将甾体骨架与芳香胺类化合物相连，形成一类新颖、具有抗癌活性的化合物，对前列腺癌细胞株(pc-3)、人胃癌细胞(mgc-803)、(sgc-7901)都显示出较好的抑制活性，具有进一步研究的价值，并且丰富了亚芳甾体衍生物的种类。

具体实施方式

为对本发明进行更好地说明，举实施例如下：

实施例1

制备通式所示r1是r2是吗啉即化合物6a(3β-羟基-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

步骤一：化合物1a(6-吗啉-9-氢-嘌呤)的合成

取化合物6-氯嘌呤(1g，6.5mmol)于100ml烧瓶中，加入甲醇(15ml)，之后依次加入吗啉(680mg，7.8mmol)、三乙胺(789mg，7.8mmol)，回流反应8h。反应完毕后产品析出，过滤得化合物1a淡黄色固体(1.2g，5.9mmol)，产率91％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ13.06(br.s,1h),8.22(s,1h),8.13(s,1h),4.20(br.s,3h),3.75(t,j＝5.0hz,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ153.2,151.8,151.5,138.3,118.9,66.2,45.2.。

步骤二：化合物2a(6-吗啉-9-羟亚甲基-嘌呤)的合成

取化合物1a(410mg，2mmol)于100ml烧瓶中，加入乙腈(8ml)和水(8ml)，之后加入多聚甲醛(180mg，6mmol)，85℃反应12h。反应完毕后减压蒸馏得化合物2a淡黄色固体(343mg，1.46mmol)，产率73％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.30(s,1h),8.24(s,1h),6.82(t,j＝7.2hz,1h),5.54(d,j＝6.9hz,2h),4.22(br.s,4h),3.73(t,j＝4.9hz,4h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ153.7,152.4,150.8,140.5,140.4,119.5,66.7,66.2,45.7.。

步骤三：化合物3a(6-吗啉-9-氯亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物2a(940mg，4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后冰浴条件搅拌滴加氯化亚砜(1428mg，12mmol)，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束后加入水(60ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物3a白色固体(940mg，3.7mmol)，产率93％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.43(s,1h),8.35(s,1h),6.21(s,2h),4.20(br.s,4h),3.72(t,j＝2.8hz,4h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ153.6,152.9,150.5,140.3,119.4,66.6,50.8,45.7.。

步骤四：化合物4a(6-吗啉-9-叠氮亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物3a(1.5g，6mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后加入叠氮化钠(780mg，12mmol)，65℃反应3h。反应结束后加入水(30ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物4a白色固体(1.5g,5.8mmol)，产率97％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.37(s,1h),8.33(s,1h),5.73(s,2h),4.22(br.s,4h),3.74(t,j＝5.0hz,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ153.2,152.4,150.6,139.7,118.9,66.1,57.0,45.1。

步骤五：化合物5a(1-(6′-吗啉-9′-亚甲基-嘌呤)-1,2,3-三氮唑-4-甲醛)的制备

取化合物4a(1.3g，5mmol)溶解于四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，然后再加入炔丙醛二乙基乙缩醛(640mg，5mmol)，五水硫酸铜(62.5mg，0.25mmol)，抗坏血酸钠(198mg，1mmol)室温搅拌5h，之后加入甲酸(10.35g，225mmol)在40℃下搅拌3h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物5a白色固体(1.02g，3.2mmol)，产率65％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ10.02(s,1h),9.11(s,1h),8.54(s,1h),8.33(s,1h),6.94(s,2h),4.19(br.s,4h),3.71(t,j＝4.9hz,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ184.8,153.2,152.5,150.3,146.8,139.7,128.9,118.7,66.1,55.1,45.1.。

步骤六：化合物6a(3β-羟基-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物5a(314mg，1mmol)和3β-羟基-5α-雄甾-17-酮(290mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物6a(3β-羟基-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)白色固体(533mg，0.9mmol)，产率91％。

产物的分析数据如下:¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.74(s,1h),8.52(s,1h),8.32(s,1h),7.23-7.22(m,1h),6.88(s,2h),4.45(d,j＝4.7hz,1h),4.19(br.s,4h),3.70(t,j＝4.7hz,4h),2.87(dd,j＝17.0,5.3hz,1h),2.30(ddd,j＝16.2,13.0,2.8hz,1h),1.83-0.85(m,18h),0.81(s,3h),0.78(s,3h),0.73-0.65(m,1h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ208.0,153.2,152.4,150.3,143.2,139.7,137.2,126.7,119.7,118.8,69.2,66.1,54.8,53.8,48.2,47.3,45.1,44.3,38.1,36.5,35.3,34.1,31.3,31.2,30.6,28.9,28.1,20.1,14.1,12.0.。

实施例2

制备通式所示r1是r2是硫代吗啉即化合物6b(3β-羟基-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

步骤一：化合物1b(6-硫代吗啉-9-氢-嘌呤)的合成

取化合物6-氯嘌呤(1g，6.5mmol)于100ml烧瓶中，加入甲醇(15ml)，之后依次加入硫代吗啉(805mg，7.8mmol)、三乙胺(789mg，7.8mmol)，回流反应8h。反应完毕后产品析出，过滤得化合物1b淡黄色固体(1.28g，5.8mmol)，产率89％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ13.07(br.s,1h),8.24(s,1h),8.14(s,1h),4.51(br.s,4h),2.69(t,j＝5.0hz4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ152.9,151.8,151.5,138.3,118.8,47.3,26.3.。

步骤二：化合物2b(6-硫代吗啉-9-羟亚甲基-嘌呤)的合成

取化合物1b(442mg，2mmol)于100ml烧瓶中，加入乙腈(8ml)和水(8ml)，之后加入多聚甲醛(180mg，6mmol)，85℃反应12h。反应完毕后减压蒸馏得化合物2b白色固体(380mg，1.52mmol)，产率76％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.30(s,1h),8.25(s,1h),6.82(s,1h),5.54(s,2h),4.51(s,4h),2.70(br.s,4h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ153.4,152.4,150.8,140.5,119.5,66.2,47.9,26.9.。

步骤三：化合物3b(6-硫代吗啉-9-氯亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物2b(1000mg，4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后冰浴条件搅拌滴加氯化亚砜(1428mg，12mmol)，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束后加入水(60ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物3b白色固体(990mg,，3.7mmol)，产率92％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.49(s,1h),8.40(s,1h),6.24(s,2h),5.13(br.s,2h),4.17(br.s,2h),3.00(t,j＝8.0hz,2h),2.84(d,j＝8.9hz,2h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ153.4,153.0,150.7,140.5,119.6,50.8,45.0.。

步骤四：化合物4b(6-硫代吗啉-9-叠氮亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物3b(1.6g，6mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后加入叠氮化钠(780mg，12mmol)，65℃反应3h。反应结束后加入水(30ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物4b白色固体(1573mg，5.7mmol)，产率95％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.37(s,1h),8.33(s,1h),5.72(s,2h),4.51(br.s,4h),2.71(t,j＝5.1hz,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ152.9,152.4,150.7,139.7,118.9,57.0,47.4,26.4.。

步骤五：化合物5b(1-(6′-硫代吗啉-9′-亚甲基-嘌呤)-1,2,3-三氮唑-4-甲醛)的制备

取化合物4b(1.38g，5mmol)溶解于四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，然后再加入炔丙醛二乙基乙缩醛(640mg，5mmol)，五水硫酸铜(62.5mg，0.25mmol)，抗坏血酸钠(198mg，1mmol)室温搅拌5h，之后加入甲酸(10.35g，225mmol)在40℃下搅拌3h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物3b白色固体(1.1g,3.35mmol)，产率67％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ10.03(s,1h),9.12(s,1h),8.55(s,1h),8.34(s,1h),6.95(s,2h),4.48(br.s,4h),2.69(t,j＝5.0hz,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ184.8,152.9,152.5,150.4,146.8,139.7,129.0,118.8,55.1,47.4,26.3.

步骤六：化合物6b(3β-羟基-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物5b(330mg，1mmol)和3β-羟基-5α-雄甾-17-酮(290mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物6b(3β-羟基-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)黄色固体(540mg，0.9mmol)，产率90％。

产物的分析数据如下:¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.75(s,1h),8.53(s,1h),8.32(s,1h),7.23(s,1h),6.88(s,2h),4.48–4.44(m,5h),2.87(dd,j＝17.0,5.4hz,1h),2.68(t,j＝4.6hz,4h),2.30(ddd,j＝16.1,13.0,2.8hz,1h),1.83–0.85(m,18h),0.81(s,3h),0.78(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ208.6,153.4,153.0,150.8,143.7,140.2,137.7,127.3,120.2,119.3,69.7,60.2,55.3,54.3,48.7,47.8,44.8,38.6,37.0,35.8,34.6,31.8,31.7,31.1,29.4,28.6,26.8,21.2,20.6,14.6,14.0,12.5.。

实施例3

制备通式所示r1是r2是环己亚胺即化合物6c(3β-羟基-16-(1′-(6″-环己亚胺-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

步骤一：化合物1c(6-环己亚胺-9-氢-嘌呤)的合成

取化合物6-氯嘌呤(1g，6.5mmol)于100ml烧瓶中，加入甲醇(15ml)，之后依次加入环己亚胺(773mg，7.8mmol)、三乙胺(789mg，7.8mmol)，回流反应8h。反应完毕后产品析出，过滤得化合物1c白色固体(1.3g，6mmol)，产率93％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ12.93(s,1h),8.18(s,1h),8.08(s,1h),4.34(s,2h),3.84(s,2h),1.78(s,4h),1.50(s,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ153.5,151.9,151.1,137.9,118.5,48.9,47.4,28.7,26.3.。

步骤二：化合物2c(6-环己亚胺-9-羟亚甲基-嘌呤)的合成

取化合物1c(434mg，2mmol)于100ml烧瓶中，加入乙腈(8ml)和水(8ml)，之后加入多聚甲醛(180mg，6mmol)，85℃反应12h。反应完毕后减压蒸馏得化合物2c白色固体(355mg，1.4mmol)，产率72％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.24(s,1h),8.19(s,1h),6.77(t,j＝11.0hz,1h),5.51(d,j＝10.6hz,2h),4.33(s,2h),3.85(s,2h),1.78(s,4h),1.49(s,4h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ154.0,152.5,150.4,140.1,119.2,66.1,49.4,48.1,29.13,27.1,26.7.。

步骤三：化合物3c(6-环己亚胺-9-氯亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物2c(988mg，4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后冰浴条件搅拌滴加氯化亚砜(1428mg，12mmol)，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束后加入水(60ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物3c白色固体(1g,，3.8mmol)，产率95％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.42(s,1h),8.32(s,1h),6.22(s,2h),4.31(s,2h),3.86(s,2h),1.79(s,4h),1.50(s,4h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ153.9,153.0,150.2,140.0,119.1,50.8,49.5,48.2,28.9,27.0,26.7.。

步骤四：化合物4c(6-环己亚胺-9-叠氮亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物3c(1.59g，6mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后加入叠氮化钠(780mg，12mmol)，65℃反应3h。反应结束后加入水(30ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物4c淡黄色固体(1.5g，5.5mmol)，产率92％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.32(s,1h),8.28(s,1h),5.72(s,2h),4.32(s,2h),3.86(s,2h),1.79(s,4h),1.50(s,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ153.6,152.5,150.3,139.4,118.6,57.0,49.0,47.6,28.5,26.6,26.2.

步骤五：化合物5c(1-(6′-环己亚胺-9′-亚甲基-嘌呤)-1,2,3-三氮唑-4-甲醛)的制备

取化合物4c(1.36g，5mmol)溶解于四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，然后再加入炔丙醛二乙基乙缩醛(640mg，5mmol)，五水硫酸铜(62.5mg，0.25mmol),抗坏血酸钠(198mg，1mmol)室温搅拌5h，之后加入甲酸(10.35g，225mmol)在40℃下搅拌3h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物5c白色固体(1.04g，3.2mmol)，产率63％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ10.03(s,1h),9.13(s,1h),8.49(s,1h),8.29(s,1h),6.93(s,2h),4.29(s,2h),3.83(s,2h),1.77(s,4h),1.48(s,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ184.8,153.5,152.7,150.0,146.8,139.4,129.0,118.4,55.0,48.9,47.6,40.1,39.9,39.7,39.5,39.3,39.1,38.9,28.4,26.5,26.2.。

步骤六：化合物6c(3β-羟基-16-(1′-(6″-环己亚胺-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物5c(326mg，1mmol)和3β-羟基-5α-雄甾-17-酮(290mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物6c(3β-羟基-16-(1′-(6″-环己亚胺-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)黄色固体(526mg，0.88mmol)，产率88％。

产物的分析数据如下:¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.75(s,1h),8.46(s,1h),8.27(s,1h),7.23(s,1h),6.86(s,1h),4.44(d,j＝4.7hz,1h),4.28(br.s,2h),3.83(br.s,2h),2.87(dd,j＝17.0,5.3hz,1h),2.30(ddd,j＝16.2,13.0,2.8hz,1h),1.82–0.85(m,27h)0.81(s,3h),0.78(s,3h),0.71–0.65(m,1h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ208.6,154.0,153.1,150.4,143.7,139.9,137.7,127.3,120.2,118.9,69.7,60.2,55.2,54.3,49.5,48.7,48.1,47.8,44.8,38.6,37.0,35.8,34.6,31.8,31.7,31.1,29.4,29.0,28.6,27.0,26.7,21.2,20.6,14.6,14.6,12.52。.

实施例4

制备通式所示r1是r2是n-boc-哌嗪即化合物6d(3β-羟基-16-(1′-(6″-(n″′-boc-哌嗪)-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

步骤一：化合物1d(6-(n′-boc-哌嗪)-9-氢-嘌呤)的合成

取化合物6-氯嘌呤(1g，6.5mmol)于100ml烧瓶中，加入甲醇(15ml)，之后依次加入n-boc-哌嗪(1452mg，7.8mmol)、三乙胺(789mg，7.8mmol)，回流反应8h。反应完毕后产品析出，过滤得化合物1d白色固体(1.8g，6mmol)，产率92％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ13.08(s,1h),8.24(s,1h),8.15(s,1h),4.21(s,4h),3.47(t,j＝5.1hz,4h),1.43(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ153.9,153.1,151.7,151.5,138.3,118.8,79.1,44.4,28.0.。

步骤二：化合物2d(6-(n′-boc-哌嗪)-9-羟亚甲基-嘌呤)的合成

取化合物1d(608mg，2mmol)于100ml烧瓶中，加入乙腈(8ml)和水(8ml)，之后加入多聚甲醛(180mg，6mmol)，85℃反应12h。反应完毕后减压蒸馏得化合物2d白色固体(527mg，1.58mmol)，产率79％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.29(s,1h),8.25(s,1h),6.81(t,j＝11.1,1h),5.53(d,j＝10.8hz,2h),4.21(s,4h),3.46(t,j＝7.5hz,4h),1.43(s,9h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ154.4,153.6,152.4,150.8,140.5,119.5,84.5,79.6,66.2,44.9,44.2,28.5.。

步骤三：化合物3d(6-(n′-boc-哌嗪)-9-氯亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物2d(1.34g，4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后冰浴条件搅拌滴加氯化亚砜(1428mg，12mmol)，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束后加入水(60ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物3d白色固体(1.06g，3mmol)，产率75％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(600mhz,dmso)δ8.45(s,1h),8.35(s,1h),6.22(s,2h),4.21(br.s,4h),3.47(s,4h),1.43(s,9h).¹³cnmr(151mhz,dmso)δ154.4,153.5,152.9,150.6,140.4,119.4,79.6,50.8,44.1,28.5.。

步骤四：化合物4d(6-(n′-boc-哌嗪)-9-叠氮亚甲基-嘌呤)的合成

将化合物3d(2.1g，6mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺溶液(30ml)中，随后加入叠氮化钠(780mg，12mmol)，65℃反应3h。反应结束后加入水(30ml)，用乙酸乙酯(60ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物4d白色固体(2.09g，5.82mmol)，产率97％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.37(s,1h),8.33(s,1h),5.72(s,2h),4.21(s,4h),3.48(t,j＝5.1hz,4h),1.44(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ153.9,153.2,152.4,150.6,139.8,118.9,79.1,57.0,44.4,28.0.。

步骤五：化合物5d(1-(6′-(n″-boc-哌嗪)-9′-亚甲基-嘌呤)-1,2,3-三氮唑-4-甲醛)的制备

取化合物4d(1.8g，5mmol)溶解于四氢呋喃(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，然后再加入炔丙醛二乙基乙缩醛(640mg，5mmol)，五水硫酸铜(62.5mg，0.25mmol),抗坏血酸钠(198mg，1mmol)室温搅拌5h，之后加入甲酸(10.35g，225mmol)在40℃下搅拌3h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(20ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得化合物5d白色固体(1.1g，2.65mmol)，产率53％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ10.01(s,1h),9.10(s,1h),8.54(s,1h),8.33(s,1h),6.94(s,2h),4.18(s,4h),3.47–3.44(m,4h),1.43(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ184.8,153.8,153.1,152.5,150.32146.8,139.8,128.9,118.8,79.1,55.1,44.0,28.0.。

步骤六：化合物6d(3β-羟基-16-(1′-(6″-(n″′-boc-哌嗪)-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物5d(413mg，1mmol)和3β-羟基-5α-雄甾-17-酮(290mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物6d(3β-羟基-16-(1′-(6″-(n″′-boc-哌嗪)-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-17-酮)黄色固体(568mg，0.83mmol)，产率83％。

产物的分析数据如下:¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.74(s,1h),8.53(s,1h),7.22(s,1h),6.88(s,2h),4.44(d,j＝4.7hz,1h),4.18(br.s,4h),3.45(s,4h),2.86(dd,j＝17.1,5.6hz,1h),2.30(ddd,j＝16.2,13.1,2.8hz,1h),1.83–1.58(m,6h),1.42(s,9h),1.33–0.88(m,12h),0.81(s,3h),0.78(s,3h),0.72–0.64(m,1h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ208.6,154.3,153.6,152.9,150.8,143.7,140.3,137.7,127.2,120.2,119.3,79.6,69.7,55.3,54.3,48.7,47.8,44.8,38.6,367.0,35.8,34.6,31.8,31.7,31.1,29.4,28.6,28.5,20.6,14.6,12.5.。

实施例5

制备通式所示r1是r2是吗啉即化合物7a(3β-羟基-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-17-酮)的制备。

步骤：化合物7a(3β-羟基-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-17-酮)的制备

称取化合物5a(314mg，1mmol)和3β-羟基-5-雄烯-17-酮(288mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物7a(3β-羟基-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-17-酮)白色固体(531mg，0.91mmol)，产率91％。

产物的分析数据如下:¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.74(s,1h),8.52(s,1h),8.32(s,1h),7.24(s,1h),6.89(s,2h),5.33(d,j＝3.6hz,1h),4.63(d,j＝4.5hz,1h),4.19(br.s,4h),3.70(t,j＝4.7hz,4h),3.32-3.23(m,1h),2.91(dd,j＝17.1,6.4hz,1h),2.35(ddd,j＝16.2,13.0,2.8hz,1h),2.22–2.12(m,3h),1.79–1.24(m,18h),1.02–0.95(m,5h),0.87–0.81(m,5h),.¹³cnmr(101mhz,dmso)δ208.0,153.2,152.5,150.3,143.2,141.5,139.7,137.1,126.8,119.9,119.7,118.8,69.9,66.1,54.8,49.7,48.4,47.0,42.2,36.8,36.2,31.4,31.1,30.9,30.6,30.2,28.9,22.0,19.9,19.1,13.9,13.9.。

实施例6

制备通式所示r1是r2是吗啉即化合物8a(4-氮杂-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-3,17二酮)的制备。

步骤：化合物8a(4-氮杂-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-3,17二酮)的制备

称取化合物5a(314mg，1mmol)和4-氮杂-5α-雄甾-3,17二酮(289mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8a(4-氮杂-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-3,17二酮)白色固体(520mg，0.89mmol)，产率89％。

产物的分析数据如下:¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.74(s,1h),8.52(s,1h),8.32(s,1h),7.32(s,1h),7.24(s,1h),6.89(s,2h),4.19(br.s,4h),3.71(t,j＝4.8hz,4h),2.97(d,j＝12.2,8.8hz,1h),2.89(dd,j＝17.1,5.4hz,1h),2.33(ddd,j＝16.2,13.0,2.8hz,1h),2.22-2.10(m,2h),1.84–1.59(m,6h),1.40–1.22(m,5h),1.03(qd,j＝13.0,3.6hz,1h)0.83–0.79(m,7h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ207.9,170.2,153.2,152.5,150.3,143.2,139.8,137.1,126.8,119.8,118.8,66.1,59.7,54.8,50.6,47.8,47.4,35.1,33.6,32.8,31.0,28.8,28.4,28.2,26.1,20.0,14.2,11.0.。

实施例7

制备通式所示r1是r2是吗啉即化合物9a(4-氮杂-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-3,17二酮)的制备。

步骤：化合物9a(4-氮杂-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-3,17二酮)的制备

称取化合物5a(314mg，1mmol)和4-氮杂-5-烯-雄甾-3,17二酮(287mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物9a(4-氮杂-16-(1′-(6″-吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-3,17二酮)黄色固体(536mg，0.92mmol)，产率92％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ9.35(s,1h),8.74(s,1h),8.52(s,1h),8.33(s,1h),7.25(s,1h),6.89(s,2h),4.90(q,j＝2.2hz,1h),4.20(br.s,4h),3.71(t,j＝4.7hz,4h),2.93(dd,j＝17.0,5.3hz,1h),2.42–2.19(m,4h),1.90–1.63(m,5h),1.51–1.28(m,4h),1.14(td,j＝11.6,4.4hz,1h)1.05(s,3h),0.87(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ207.9,167.8,153.2,152.5,150.3,143.2,140.8,139.8,137.0,126.9,119.8,118.8,100.6,66.1,54.8,48.3,47.6,47.1,33.6,31.0,30.9,30.2,28.8,28.2,19.8,18.5,14.0.。

实施例8

制备通式所示r1是r2是吗啉即化合物7b(3β-羟基-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-17-酮)的制备。

步骤：化合物7b(3β-羟基-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-17-酮)的制备

称取化合物5b(330mg，1mmol)和3β-羟基-5-烯-17-酮(288mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物6b(3β-羟基-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5-雄烯-17-酮)黄色固体(538mg，0.9mmol)，产率90％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.75(s,1h),8.53(s,1h),8.33(s,1h),7.25(s,1h),6.89(s,2h),5.33(d,j＝3.4hz,1h),4.63(d,j＝4.5hz,1h),4.48(br.s,4h),3.31–3.24(m,1h),2.92(dd,j＝17.0,5.4hz,1h),2.69–2.67(m,4h),2.35(ddd,j＝16.1,13.0,2.6hz,1h),2.21–2.12(m,3h),1.79–1.62(m,5h),1.53-1.22(m,4h),1.11–0.92(m,6h),0.85(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ208.0,152.9,152.5,150.3,143.2,141.5,139.7,137.1,126.8,120.0,119.8,118.8,69.9,64.9,56.0,54.8,49.7,48.4,47.0,42.2,36.8,36.2,31.4,31.1,30.6,30.3,28.9,26.4,20.0,19.1,18.6,15.2,13.9.。

实施例9

制备通式所示r1是r2是吗啉即化合物8b(4-氮杂-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-3,17二酮)的制备。

步骤：化合物8b(4-氮杂-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-3,17二酮)的制备

称取化合物5b(330mg，1mmol)和4-氮杂-5α-雄甾-3,17二酮(289mg，1mmol)，溶解于乙醇中，然后再加入催化剂kf/al2o3(128mg，0.8mmol)在80℃搅拌6h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10ml×3)，无水na2so4干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8b(4-氮杂-16-(1′-(6″-硫代吗啉-9″-亚甲基-嘌呤)-1′,2′,3′-三氮唑)亚甲基-5α-雄甾-3,17二酮)白色固体(530mg，0.88mmol)，产率88％。

产物的分析数据如下：¹hnmr(400mhz,dmso)δ8.75(s,1h),8.53(s,1h),8.33(s,1h),7.32(s,1h),7.24(s,1h),6.89(s,2h),4.48(br.s,4h),2.97(dd,j＝12.2,3.4hz,1h),2.90(dd,j＝17.2,5.6hz,1h),2.69–2.67(m,4h),2.33(ddd,j＝16.1,12.8,2.7hz,1h),2.19–2.15(m,2h),1.84–1.59(m,6h),1.36–1.23(m,5h),1.08–0.96(m,1h),0.83–0.79(m,7h).¹³cnmr(101mhz,dmso)δ207.9,170.2,152.9,152.5,150.3,143.2,139.7,137.1,126.9,119.8,118.8,59.7,54.8,50.6,47.8,47.4,35.1,33.6,32.8,31.0,28.8,28.4,28.2,26.3,26.1,20.0,14.2,11.0.。

表1本专利中所涉及到的新化合物的编号和化学结构

目标化合物的肿瘤细胞抑制活性试验：

采用本发明实施例制得的1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物(6a-9d)对人胃癌细胞(mgc-803、sgc-7901)、前列腺癌细胞株(pc-3)进行细胞毒性试验。采用mtt法，进行体外细胞毒性测定。在96孔板中培养的对数生长期细胞中加入不同浓度本发明制得的1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物，于37℃、体积百分含量5％co2下培养细胞72h，同时进行三个平行实验，与对照组进行比较。加入mtt，继续培养3-4h，活细胞内将形成蓝紫色不溶物甲躜，移除培养液，加入dmso，室温下振荡15分钟，使甲躜充分溶解，用酶标仪测定其吸光度，分别计算抑制肿瘤细胞生长到50％时化合物的浓度，以ic50值表示，其中部分结果如表2所示。

表2本发明1-甲基嘌呤-4-亚甲基雄甾-三氮唑衍生物抗肿瘤活性测试结果(ic50，μm)

由表2看出，所测化合物对三种癌细胞都有一定的抑制活性，化合物8a对mgc-803抑制活性最好，化合物7b对sgc-7901的抑制活性最好，8b对pc3的抑制活性最好。