氨基-吡嗪甲酰胺化合物、缀合物及其用途的制作方法

氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物、缀合物及其用途
交叉引用
1.本申请要求于2018年5月25日提交的美国临时申请第62/676,832号和于2018年12月12日提交的美国临时申请第62/778,812号的权益，其各自通过引用以其整体并入本文。序列表
2.本申请包含序列表，该序列表已经以ascii格式以电子方式提交，并在此通过引用以其整体并入。创建于2019年5月22日的所述ascii副本，命名为50358
‑
733_601_sl.txt，大小为161,275字节。发明背景
3.在美国，主要的死亡原因之一是癌症。常规的癌症治疗方法，如化学疗法、外科手术或放射疗法，往往对癌症具有高毒性或非特异性，或两者兼有，导致有限的功效和有害的副作用。然而，免疫系统有可能成为抵抗癌症的有力的特定工具。在许多情况下，肿瘤可以特异性表达基因，这些基因的产物是诱导或维持恶性状态所必需的。这些蛋白质可以用作用于开发和建立更特异的抗癌免疫应答的抗原标志物。这种特异性免疫应答的加强有可能成为强大的抗癌治疗，其可以比常规的癌症治疗方法更有效，并且可以具有更少的副作用。
4.纤维化是在修复过程或反应过程中在器官或组织中过量的纤维结缔组织或瘢痕组织的形成。纤维化可以典型地作为炎症或损害的结果发生在体内的许多组织(其包括肺脏、肝脏、心脏和脑)中。瘢痕组织会阻塞动脉、固定关节并损害内部器官，严重破坏人体维持生命机能的能力。每年，由于纤维化的损害效应有数百万人住院。然而，当前用于治疗纤维化疾病的疗法是缺乏的或具有缺点。因此，仍然非常需要用于纤维化疾病的替代或改进的治疗。


技术实现要素：

5.本公开内容总体上涉及取代的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物和药物组合物。取代的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物可用于治疗或预防癌症和/或纤维化疾病。所公开的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物可以抑制tgfβ1、tgfβr1、tgfβr2或其组合。所公开的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物可以掺入缀合物，例如抗体缀合物中。
6.在本发明的一方面中是由式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐：其中：环a是未取代或取代的环烷基、未取代或取代的杂环烷基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基，其中当环a被取代时，环a上的取代基在每次出现时独立地选自
r4；每个r4选自r
l
和r
20
，或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；r
l
是或每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c6亚烷基；其中当y被取代时，y上的取代基在每次出现时独立地选自r5；每个r5选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r5与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；每个z独立地是
‑
nr6s(＝o)2‑
、
‑
s(＝o)2nr6‑
、
‑
oc(＝o)
‑
、
‑
c(＝o)o
‑
、
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
；其中每个r6独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环和未取代或取代的杂环，或者在相邻原子上的r5和r6与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环；l是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；其中当l被取代时，l上的取代基在每次出现时独立地选自r7；每个r7选自
‑
ssr
50
和r
20
；s是1至10；r1选自氢和r
20
；每个r2独立地选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r2与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；m是0至3；r3选自(i)、(ii)、(iii)和(iv)：(i)未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
10
；(ii)未取代或取代的环烷基或者未取代或取代的杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；(iii)包含1个或2个n原子和1个或2个选自o或s的其他杂原子的未取代或取代的多环杂环烷基、未取代或取代的3至5元单环杂环烷基、未取代或取代的6至8元单环杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；和其中当r3在吡啶的2位、5位或6位时，r3选自(i)、(ii)和(iv)，并且当r3在吡啶的4位时，r3选自(i)、(iii)和(iv)；以及每个r
10
选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r
10
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；
每个r
11
选自＝o、＝s和r
20
；r
12
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；q是
‑
or
13
、
‑
nr
13
r
13
、
‑
sr
13
、
‑
cn、
‑
c(＝o)r
14
、
‑
c(＝o)nr
13
r
13
、
‑
s(＝o)r
14
或
‑
s(＝o)2r
14
或
‑
s(＝o)2nr
13
r
13
；r
13
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；r
14
是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个u1是
‑
(cr
15
r
16
)
‑
，其中每个r
15
和r
16
独立地选自氢和r
20
；r是1至5；每个r
20
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
50
独立地选自未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
51
独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者在同一n原子上的两个r
51
与它们所连接的n原子一起形成未取代或取代的含氮杂环；其中当r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
中的任一个被取代时，r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、未取代或取代的单环碳环、未取代或取代的单环杂环，或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成c＝o或c＝s，并且其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自r
54
，并且在所述碳环和杂环上的取代基独立地选自r
55
；每个r
52
独立地选自氢、c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环；以及每个r
53
独立地选自c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；每个r
54
独立地选自
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
和苯基；
每个r
55
独立地选自
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
和未取代或取代的c1‑
c6烷基，其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自r
54
。
7.还包括式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，其中：环a是未取代或取代的环烷基、未取代或取代的杂环烷基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基，其中当环a被取代时，环a上的取代基在每次出现时独立地选自r4；每个r4选自r
l
和r
20
，或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；r
l
是每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c6亚烷基；其中当y被取代时，y上的取代基在每次出现时独立地选自r5；每个r5选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r5与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；每个z独立地是
‑
nr6s(＝o)2‑
、
‑
s(＝o)2nr6‑
、
‑
oc(＝o)
‑
、
‑
c(＝o)o
‑
、
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
；其中每个r6独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环和未取代或取代的杂环，或者在相邻原子上的r5和r6与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环；l是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；其中当l被取代时，l上的取代基在每次出现时独立地选自r7；每个r7选自
‑
ssr
50
和r
20
；s是1至10；r1选自氢和r
20
；每个r2独立地选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r2与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；m是0至3；r3选自(i)、(ii)、(iii)和(iv)：(i)未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
10
；(ii)未取代或取代的环烷基或者未取代或取代的杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；(iii)包含1个或2个n原子和1个或2个选自o或s的其他杂原子的未取代或取代的多环杂环烷基、未取代或取代的3至5元单环杂环烷基、未取代或取代的6至8元单环杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；和
其中当r3在吡啶的2位、5位或6位时，r3选自(i)、(ii)和(iv)，并且当r3在吡啶的4位时，r3选自(i)、(iii)和(iv)；以及每个r
10
选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r
10
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；每个r
11
选自＝o、＝s和r
20
；r
12
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；q是
‑
or
13
、
‑
nr
13
r
13
、
‑
sr
13
、
‑
cn、
‑
c(＝o)r
14
、
‑
c(＝o)nr
13
r
13
、
‑
s(＝o)r
14
或
‑
s(＝o)2r
14
或
‑
s(＝o)2nr
13
r
13
；r
13
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；r
14
是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个u1是
‑
(cr
15
r
16
)
‑
，其中每个r
15
和r
16
独立地选自氢和r
20
；r是1至5；每个r
20
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
50
独立地选自未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
51
独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者在同一n原子上的两个r
51
与它们所连接的n原子一起形成未取代或取代的含氮杂环；其中当r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
中的任一个被取代时，r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、单环碳环和单环杂环；或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成c＝o或c＝s；每个r
52
独立地选自氢、c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳
基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环；以及每个r
53
独立地选自c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基。
8.在某些实施方案中，所述式(i)的化合物由式(ii)表示：其中：环b是芳基或杂芳基；以及n是0至5。
9.在一些实施方案中，本文公开的化合物与接头连接以形成化合物
‑
接头。
10.在一些实施方案中，本文公开的化合物与抗体构建体或靶向部分共价结合，任选地通过接头。
11.本文还公开了本文所述的化合物或缀合物的药物组合物。
12.在一些方面中，本公开内容提供了用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的对象施用本文所述的化合物、缀合物或药物组合物。
13.在一些方面中，本公开内容提供了用于增强对象的免疫应答(例如，抗癌免疫应答)的方法，其包括向有需要的对象施用本文所述的化合物、缀合物或药物组合物。
14.在一些方面，本公开内容提供了治疗纤维化的方法，其包括向有需要的对象施用本文所述的化合物、缀合物或药物组合物。在一些方面中，纤维化是癌症相关的。在一些方面中，纤维化不是癌症相关的。在一个方面中，纤维化是硬皮病。在另一个方面中，纤维化是系统性纤维化。在一个方面中，纤维化疾病是脂肪性肝炎，例如，非酒精性脂肪性肝炎(nash)。通过引用并入
15.本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请明确地并单独地表示为通过引用并入。附图简述
16.在所附权利要求中具体阐述了本公开内容的新颖特征。通过参照以下阐述了利用了本公开内容的原理的说明性方面的详细描述，将获得对本公开内容的特征和优点的更好的理解，在附图中：
17.图1说明了通过可切割接头或不可切割接头与抗lrrc15抗体缀合的示例性tgfβr2抑制剂在报道子测定中抑制tgfβ诱导的smad2启动子活性。将用人lrrc15稳定转染的tgfβ/smad启动子
‑
荧光素酶报道子系用指定浓度的缀合物和对照抗体处理24小时，然后用tgfβ处理18小时。通过化学发光测定来确定经处理的样品中的荧光素酶活性，并通过与仅接受缓冲液然后接受tgfβ的样品相比化学发光的相对降低来确定抑制程度。
18.图2示出了所选化合物以浓度依赖性方式抑制在来源于ipf患者的人肺成纤维细
胞系中αsma基因表达的tgfβ诱导。在实施qpcr以确定αsma mrna水平之前，将ll97a细胞用指定浓度的tgfβ和所选化合物或dmso载体处理24小时。上虚线和下虚线表示在仅用tgfβ处理的细胞中αsma mrna诱导的100％水平和50％水平。
19.图3示出了化合物250以浓度依赖性方式抑制在来源于ipf患者的人肺成纤维细胞系中αsma基因表达的tgfβ诱导。在实施qpcr以确定αsma mrna水平之前，将ll97a细胞用指定浓度的tgfβ和化合物250或dmso载体处理24小时。上虚线和下虚线表示在仅用tgfβ处理的细胞中αsma mrna诱导的100％水平和50％水平。
20.图4示出了化合物250以浓度依赖性方式抑制在来源于ipf患者的人肺成纤维细胞系中弹性蛋白基因表达的tgfβ诱导。在实施qpcr以确定弹性蛋白mrna水平之前，将ll97a细胞用指定浓度的tgfβ和化合物250或dmso载体处理24小时。上虚线和下虚线表示在仅用tgfβ处理的细胞中弹性蛋白mrna诱导的100％水平和50％水平。
21.图5示出了所选化合物以浓度依赖性方式抑制在来源于ipf患者的人肺成纤维细胞系中αsma基因表达的tgfβ诱导。在实施qpcr以确定αsma mrna水平之前，将ll97a细胞用指定浓度的tgfβ和所选化合物或dmso载体处理24小时。上虚线和下虚线表示在仅用tgfβ处理的细胞中αsma mrna诱导的100％水平和50％水平。
22.图6a
‑
b示出了以高的平均dar用pabc可切割接头与半胱氨酸连接的所选化合物的抗体缀合物具有抑制tgfβ诱导的ll97a细胞中的αsma基因表达(a)或nhfl细胞中的弹性蛋白基因表达(b)的高效力。在准备rna并进行qpcr之前，将细胞用指定浓度的tgfβ和缀合物或对照处理24小时。上虚线和下虚线表示在仅用缓冲液和tgfβ处理的细胞中mrna诱导的100％水平和50％水平。
23.图7a
‑
b示出了lp1与具有野生型fc(星号)的抗lrrc15抗体或与具有无效fc结构域的抗体的相似平均dar缀合物在降低tgfβ诱导的ll97a细胞中的αsma基因表达(a)或正常人肺成纤维细胞(nhlf)细胞中的弹性蛋白基因表达(b)中具有相似的效力。在准备rna并进行qpcr之前，将细胞用指定浓度的缀合物和对照加上tgfβ处理24小时(a)或48小时(b)。上虚线和下虚线表示在仅用缓冲液和tgfβ处理的细胞中mrna诱导的100％水平和50％水平。
24.图8a
‑
c示出了瘤内注射化合物211降低接种有panc
‑
1肿瘤细胞的小鼠中所选的tgfβ诱导型基因的mrna水平(a)，瘤内注射化合物171和211降低接种有bxpc3肿瘤细胞的小鼠中所选的tgfβ诱导型基因的mrna水平(b)，以及瘤内注射化合物211降低接种有bxpc3肿瘤细胞的小鼠中所选的tgfβ诱导型基因的mrna水平(c)。星号表示与dmso载体对照处理的动物相比，用化合物处理之后发现基因mrna的统计上显著的降低。
25.图9示出了抗lrrc15缀合物lp35和lp36的全身性给药降低接种有bxpc3肿瘤细胞的小鼠肿瘤内所选的tgfβ调节的基因的mrna水平。将动物用缀合物或未缀合抗体的对照或无关抗体同种型对照静脉内给药。星号表示与接受未缀合抗体的剂量的对照动物相比，在用缀合物处理之后发现肿瘤内所选的基因mrna的统计上显著的减少。
26.图10示出了以5mpk和20毫克/千克的剂量全身性给药抗lrrc15缀合物lp36降低接种有bxpc3肿瘤细胞的小鼠肿瘤内所选的tgfβ调节的基因的mrna水平。将动物用指定剂量水平的缀合物或未缀合抗体的对照或无关抗体同种型对照静脉内给药。星号表示与接受20mpk未缀合抗体的剂量的对照动物相比，在用缀合物处理之后发现肿瘤内所选的基因mrna的统计上显著的减少。
27.图11示出了抗lrrc15缀合物lp1的全身性施用减少系统性硬皮病模型中的组织病理学纤维化。小鼠接受每天皮内注射博来霉素持续22天。在纤维化发作之后第14天开始ip注射10mpk缀合物或以pbs来处理动物。在第23天处死动物之后，在马松三色染色(masson’s trichrome stain)之后通过组织病理学对固定的皮肤组织进行纤维化评分。如所示出的，与pbs对照动物相比，通过该测量用缀合物处理显著降低了纤维化。
28.图12示出了全身性施用抗lrrc15缀合物lp1减少在接受每天皮内注射博莱霉素持续22天的系统性纤维化小鼠的模型中的纤维化。在纤维化发作之后第14天开始ip注射10mpk缀合物或以pbs来处理动物。在第23天处死动物之后，对皮肤组织进行sircol red胶原蛋白含量测定。如所示出的，与pbs对照动物相比，通过该测量用缀合物处理降低了纤维化。发明详述
29.尽管本文已经示出和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员明显的是，这些实施方案仅通过实例提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变体、改变和替代。应当理解，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于实施本发明。旨在所附权利要求限定本发明的范围并且由此涵盖这些权利要求及其等同物的范围内的方法和结构。
30.转化生长因子(tgf)及其受体(tgfr)是进化上保守的分子，其在许多发育和生理途径(例如细胞增殖、细胞分化、胚胎发育、细胞外基质形成、伤口愈合、骨骼发育、免疫应答和炎性反应)的调节中起重要的多效作用。鉴于生物功能的广度，tgf和tgfr也参与许多病理过程，例如癌症、免疫和炎性疾病、纤维化、瘢痕形成、动脉粥样硬化、病毒感染等的形成和进展中的病理过程。
31.转化生长因子β
‑
1(tgfβ1)是配体的tgf超家族的典型成员。tgfβ1是参与多种组织类型内的信号传导的生长因子和细胞因子。已经显示出tgfβ1的过表达在包括肾脏、肝脏、心脏、肺、骨髓和皮肤的许多器官系统中诱导纤维化疾病病理。
32.tgfβ1在肿瘤进展中起许多作用。tgfβ1可以诱导上皮向间充质转化、增强肿瘤细胞的生长能力、影响肿瘤细胞命运并调节肿瘤微环境的组成，从而使其更容许肿瘤生长。
33.tgfβ1在维持t细胞的外周耐受以及预防树突细胞成熟中起作用。此外，已经显示出tgfβ1通过下调主要组织相容性复合物ii类(mhc
‑
ii)的表达和白细胞介素
‑
12(il
‑
12)的分泌来调节树突细胞的抗原呈递功能。
34.已经显示出在髓样细胞中通过其受体的tgfβ1信号传导在包括在树突细胞、髓源性抑制细胞、肿瘤相关的巨噬细胞或这些细胞的组合中的肿瘤促进和肿瘤免疫抑制中起作用。
35.转化生长因子β受体2(tgfβr2)是tgfβ1信号转导所必需的两个跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体之一，另一个受体是tgfβr1。tgfβ1首先与tgfβr2在质膜处结合，诱导tgfβr1
‑
tgfβr2复合物的形成，这导致母抗dpp同源物(mothers against decapentaplegic homolog)2(smad2)和母抗dpp同源物3(smad3)的磷酸化，并随后调节多个下游信号传导靶标。
36.鉴于其中tgfβ1起主要作用的广泛的病理性细胞相互作用和多细胞相互作用，对tgfβ1或其受体tgfβr1或tgfβr2的药理抑制可能被证明可用于治疗多种疾病。
37.开发靶向治疗的挑战包括实现对主要药理靶标的高选择性以及维持延长的靶标抑制。为了克服这两个挑战，可以开发出具有提高的治疗功效和降低的全身性毒性的药物产品。解决这两个挑战的一种方法是开发共价药物，从而在药理实体与蛋白质靶标活性位点中的特定半胱氨酸之间发生共价相互作用。
38.当前需要可以抑制tgfβ1、tgfβr1、tgfβr2或其组合、治疗或预防癌症以及治疗或预防纤维化的治疗剂。纤维化可能与癌症相关或可能不与癌症相关。本公开内容提供了解决该需求和相关需求的化合物、组合物和方法。
39.本公开内容提供了用于治疗或预防疾病的化合物、缀合物和药物组合物。在某些实施方案中，取代的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物、缀合物和药物组合物用于治疗或预防疾病，例如癌症和纤维化疾病。取代的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物及其缀合物尤其可以用于治疗和预防癌症、治疗和预防纤维化疾病以及调节tgfβ1、tgfβr1、tgfβr2或其组合。取代的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物可以用于抑制tgfβ1、tgfβr1、tgfβr2或其组合。可以将氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物掺入缀合物，例如抗体缀合物中。
40.本公开内容的化合物及其缀合物可以用于治疗和预防例如癌症、自身免疫病、炎症、败血症、过敏症、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、纤维化、免疫缺陷和感染性疾病的疫苗接种。
41.在某些实施方案中，化合物作为单一药剂、作为缀合物或在联合疗法中可用于治疗癌症。在某些实施方案中，化合物可用作单一药剂免疫调节剂、疫苗佐剂以及与常规癌症疗法组合。在某些实施方案中，将化合物与抗体构建体连接以形成缀合物，该缀合物可用于例如增强免疫应答或用于治疗纤维化。在某些实施方案中，本公开内容提供了抗体构建体
‑
氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物缀合物(缀合物)及其用于治疗癌症或纤维化的用途。定义
42.除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。
43.除非上下文另外明确指出，否则如说明书和权利要求书中所使用的，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“该(the)”包括复数指代物。
44.如本文所用，术语“抗体”是指与特定抗原特异性结合或对特定抗原具有免疫反应性的免疫球蛋白分子。抗体可以包括例如多克隆的、单克隆的、基因工程化的和其抗原结合片段。抗体可以是例如鼠的、嵌合的、人源化的、异缀合、双特异性的双链抗体、三链抗体或四链抗体。抗原结合片段可包括例如fab
′
、f(ab
′
)2、fab、fv、rigg和scfv。
45.如本文所用，“抗原结合结构域”是指与抗原特异性结合的分子的区域。抗原结合结构域可以是抗体或抗体片段的抗原结合部分。抗原结合结构域可以是能够保留与抗原特异性结合的能力的抗体的一个或多个片段。抗原结合结构域可以是抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合结构域可以识别单一抗原。抗原结合结构域可以识别例如两种或三种抗原。
46.如本文所用，“抗体构建体”是指包含抗原结合结构域和fc结构域的分子，例如蛋白质、肽、抗体或其部分。
47.如本文所用，用于天然l
‑
对映体氨基酸的缩写是常规的并且可以如下：丙氨酸(a，ala)；精氨酸(r，arg)；天冬酰胺(n，asn)；天冬氨酸(d，asp)；半胱氨酸(c，cys)；谷氨酸(e，
glu)；谷氨酰胺(q，gln)；甘氨酸(g，gly)；组氨酸(h，his)；异亮氨酸(i，ile)；亮氨酸(l，leu)；赖氨酸(k，lys)；蛋氨酸(m，met)；苯丙氨酸(f，phe)；脯氨酸(p，pro)；丝氨酸(s，ser)；苏氨酸(t，thr)；色氨酸(w，trp)；酪氨酸(y，tyr)；缬氨酸(v，val)。
48.如本文所用，“缀合物”是指这样的抗体构建体，其直接或通过接头基团连接(例如缀合)至本文所述的化合物，例如，式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐。
49.如本文所用，“fc结构域”可以是来自抗体的或来自能够结合fc受体的非抗体的fc结构域。
50.如本文所用，关于抗体相互作用的“识别”是指抗体或其部分的抗原结合结构域与抗原之间的缔合或结合。
51.如本文所用，“序列同一性”是指根据上下文的dna、rna、核苷酸、氨基酸或蛋白质序列分别与另外的dna、rna、核苷酸、氨基酸或蛋白质序列之间的同一性。序列同一性可以以第一序列与第二序列的序列同一性的百分比表示。相对于参考dna序列的序列同一性百分比(％)是在将序列进行比对并在必要时引入缺口之后，候选序列中与参考dna序列中的dna核苷酸相同的dna核苷酸的百分比。相对于参考氨基酸序列的序列同一性百分比(％)是在将序列进行比对并在必要时引入缺口以实现最大的序列同一性百分比之后，候选序列中与参考氨基酸序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，并且不考虑将任何保守取代作为序列同一性的一部分。
52.如本文所用，“特异性结合”等是指与抗原结合结构域与不同抗原的相互作用(即，非特异性结合)相比，在抗原结合结构域与抗原之间的特异性缔合或特异性结合。在一些实施方案中，识别抗原或特异性结合抗原的抗原结合结构域的解离常数(kd)<<100nm、<10nm、<1nm、<0.1nm、<0.01nm或<0.001nm(例如10
‑8m或更小，例如10
‑8m至10
‑
13
m，例如，10
‑9m至10
‑
13
m)。
53.如本文所用，“靶标结合结构域”是指包含来自抗体的或来自能够结合抗原的非抗体的抗原结合结构域的构建体。
54.术语“靶向部分”是指相对于其他非靶标分子对靶标分子具有选择性亲和力的结构。靶向部分与靶标分子结合。靶向部分可以包括例如抗体、肽、配体、受体或其结合部分。靶标分子可以是抗原，例如细胞的生物受体或其他结构，例如肿瘤抗原。
55.如本文所用，“肿瘤抗原”可以是与肿瘤或癌细胞相关的抗原性物质，并且可以触发宿主的免疫应答。
56.术语“c
x
‑
y”或“c
x
‑
c
y”在与化学部分，例如烷基、烯基或炔基结合使用时意在包括在链中包含x至y个碳的基团。例如，术语“c1‑6烷基”是指取代或未取代的饱和烃基，包括含有1至6个碳的直链烷基和支链烷基。术语
–
c
x
‑
y
亚烷基
‑
是指在亚烷基链中具有x至y个碳原子的取代或未取代的亚烷基链。例如，
–
c1‑6亚烷基
‑
可以选自亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基和亚己基，其中的任一个是任选取代的。
57.术语“c
x
‑
y
烯基”和“c
x
‑
y
炔基”是指取代或未取代的不饱和脂族基团，其在长度和可能取代上与上述烷基相似，但是其分别包含至少一个双键或三键。术语
“–
c
x
‑
y
亚烯基”是指在亚烯基链中具有x至y个碳的取代或未取代的亚烯基链。例如，
–
c2‑6亚烯基
‑
可以选自亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基和亚己烯基，其中的任一个是任选取代的。亚烯基链可
以在亚烯基链中具有一个双键或多于一个的双键。术语
“–
c
x
‑
y
亚炔基”是指在亚烯基链中具有x至y个碳的取代或未取代的亚炔基链。例如，
‑
c2‑6亚烯基
‑
可以选自亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、亚戊炔基和亚己炔基，其中的任一个是任选取代的。亚炔基链可以在亚炔基链中具有一个三键或多于一个的三键。
[0058]“亚烷基”是指将分子的其余部分连接至基团的直链二价烃链，其仅由碳和氢组成，不包含不饱和性，并且优选地具有一至十二个碳原子，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基等。亚烷基链通过单键连接至分子的其余部分并通过单键连接至基团。亚烷基链与分子的其余部分和与基团的连接点分别通过末端碳。在其他实施方案中，亚烷基包含一至五个碳原子(即，c1‑
c5亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含一至四个碳原子(即，c1‑
c4亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含一至三个碳原子(即，c1‑
c3亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含一至两个碳原子(即，c1‑
c2亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含一个碳原子(即，c1亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含五至八个碳原子(即，c5‑
c8亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含二至五个碳原子(即，c2‑
c5亚烷基)。在其他实施方案中，亚烷基包含三至五个碳原子(即，c3‑
c5亚烷基)。除非本说明书中另有明确说明，否则亚烷基链任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代。
[0059]“亚烯基”是指将分子的其余部分连接至基团的直链二价烃链，其仅由碳和氢组成，包含至少一个碳
‑
碳双键，并且优选地具有二至十二个碳原子。亚烯基链通过单键连接至分子的其余部分并通过单键连接至基团。亚烯基链与分子的其余部分和与基团的连接点分别通过末端碳。在其他实施方案中，亚烯基包含二至五个碳原子(即，c2‑
c5亚烯基)。在其他实施方案中，亚烯基包含二至四个碳原子(即，c2‑
c4亚烯基)。在其他实施方案中，亚烯基包含二至三个碳原子(即，c2‑
c3亚烯基)。在其他实施方案中，亚烯基包含两个碳原子(即，c2亚烯基)。在其他实施方案中，亚烯基包含五至八个碳原子(即，c5‑
c8亚烯基)。在其他实施方案中，亚烯基包含三至五个碳原子(即，c3‑
c5亚烯基)。除非本说明书中另有明确说明，否则亚烯基链任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代。
[0060]“亚炔基”是指将分子的其余部分连接至基团的直链二价烃链，其仅由碳和氢组成，包含至少一个碳
‑
碳三键，并且优选地具有二至十二个碳原子。亚炔基链通过单键连接至分子的其余部分并通过单键连接至基团。亚炔基链与分子的其余部分和与基团的连接点分别通过末端碳。在其他实施方案中，亚炔基包含二至五个碳原子(即，c2‑
c5亚炔基)。在其他实施方案中，亚炔基包含二至四个碳原子(即，c2‑
c4亚炔基)。在其他实施方案中，亚炔基包含二至三个碳原子(即，c2‑
c3亚炔基)。在其他实施方案中，亚炔基包含两个碳原子(即，c2亚炔基)。在其他实施方案中，亚炔基包含五至八个碳原子(即，c5‑
c8亚炔基)。在其他实施方案中，亚炔基包含三至五个碳原子(即，c3‑
c5亚炔基)。除非本说明书中另有明确说明，否则亚炔基链任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代。
[0061]“亚杂烷基”是指直链二价烃链，其在链中包含至少一个杂原子，不包含不饱和性，并且优选地具有一至十二个碳原子和一至6个诸如
‑
o
‑
、
‑
nh
‑
、
‑
s
‑
的杂原子。亚杂烷基链通过单键连接至分子的其余部分并通过单键连接至基团。亚杂烷基链与分子的其余部分和与基团的连接点分别通过链的末端原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含一至五个碳原子和一至三个杂原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含一至四个碳原子和一至三个杂原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含一至三个碳原子和一至两个杂原子。在其他实施方案中，
亚杂烷基包含一至两个碳原子和一至两个杂原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含一个碳原子和一至两个杂原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含五至八个碳原子和一至四个杂原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含二至五个碳原子和一至三个杂原子。在其他实施方案中，亚杂烷基包含三至五个碳原子和一至三个杂原子。除非本说明书中另有明确说明，否则亚杂烷基链任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代。
[0062]
如本文所用的术语“碳环”是指饱和环、不饱和环或芳族环，其中环中的每个原子是碳。碳环包括3至10元单环，6至12元双环和6至12元桥环。双环碳环的每个环可选自饱和环、不饱和环和芳族环。在示例性实施方案中，芳族环，例如苯基可以与饱和环或不饱和环例如环己烷、环戊烷或环己烯稠合。当化合价允许时，双环碳环包括饱和双环、不饱和双环和芳族双环的任何组合。双环碳环包括环大小例如4
‑
5稠环系统、5
‑
5稠环系统、5
‑
6稠环系统、6
‑
6稠环系统、5
‑
7稠环系统、6
‑
7稠环系统、5
‑
8稠环系统和6
‑
8稠环系统的任何组合。示例性碳环包括环戊基、环己基、环己烯基、金刚烷基、苯基、二氢茚基和萘基。术语“不饱和碳环”是指具有至少一个不饱和度并且排除芳族碳环的碳环。不饱和碳环的实例包括环己二烯、环己烯和环戊烯。
[0063]
术语“芳基”是指芳族单环或芳族多环烃环系统。芳族单环或芳族多环烃环系统仅包含氢和碳以及五至十八个碳原子，其中环系统中的至少一个环是芳族的，即，其包含符合休克尔(h
ü
ckel)理论的环状的、离域的(4n+2)π
‑
电子系统。衍生出芳基的环系统包括但不限于诸如苯、芴、二氢化茚、茚、四氢化萘和萘的基团。除非本说明书中另有明确说明，否则术语“芳基”或前缀“芳”(例如在“芳烷基”中)意在包括任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代的芳基。
[0064]
术语“环烷基”是指其中环中的每个原子均为碳的饱和环。环烷基可以包括单环和多环，例如3至10元单环、6至12元双环和6至12元的桥环。在某些实施方案中，环烷基包含三至十个碳原子。在其他实施方案中，环烷基包含五至七个碳原子。环烷基可以通过单键与分子的其余部分连接。单环环烷基的实例包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环环烷基基团包括，例如，金刚烷基、降冰片基(即双环[2.2.1]庚基)、十氢萘基、7,7二甲基双环[2.2.1]庚基等。除非本说明书中另有明确说明，否则术语“环烷基”意在包括任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代的环烷基。
[0065]
术语“环烯基”是指其中环中的每个原子均为碳并且在两个环碳之间存在至少一个双键的饱和环。环烯基可以包括单环和多环，例如3至10元单环、6至12元双环和6至12元桥环。在其他实施方案中，环烯基包含五至七个碳原子。环烯基可以通过单键与分子的其余部分连接。单环环烯基的实例包括例如环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。除非本说明书中另有明确说明，否则术语“环烯基”意在包括任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代的环烯基。
[0066]
术语“卤代”或者可选地，“卤素”或“卤化物”意指氟、氯、溴或碘。在一些实施方案中，卤代是氟代、氯代或溴代。
[0067]
术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤代基团取代的上述定义的烷基基团，例如三氟甲基、二氯甲基、溴甲基、2,2,2
‑
三氟乙基、1
‑
氯甲基
‑2‑
氟乙基等。在一些实施方案中，卤代烷基基团的烷基部分是任选地如本文所述取代的。
[0068]
如本文所用，术语“杂环”是指包含一个或多个杂原子的饱和环、不饱和环或芳族
环。示例性的杂原子包括n、o、si、p、b和s原子。杂环包括3至10元单环、6至12元双环和6至12元桥环。当化合价允许时，双环杂环包括饱和双环、不饱和双环和芳族双环的任何组合。在示例性的实施方案中，芳族环，例如吡啶基，可以与饱和环或不饱和环例如环己烷、环戊烷、吗啉、哌啶或环己烯稠合。双环杂环包括环大小例如4
‑
5稠环系统、5
‑
5稠环系统、5
‑
6稠环系统、6
‑
6稠环系统、5
‑
7稠环系统、6
‑
7稠环系统、5
‑
8稠环系统和6
‑
8稠环系统的任何组合。术语“不饱和杂环”是指具有至少一个不饱和度并且排除芳族杂环的杂环。不饱和杂环的实例包括二氢吡咯、二氢呋喃、噁唑啉、吡唑啉和二氢吡啶。
[0069]
术语“杂芳基”包括芳族单环结构，优选地5至7元环，更优选地5至6元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选地1
‑
4个杂原子，更优选地一个或两个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或更多个环的多环系统，其中两个或更多个碳对于两个相邻的环是共有的，其中至少一个环是杂芳族的，例如，其他环可以是芳族的或非芳族的碳环或杂环。杂芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。
[0070]
术语“杂环烷基”是指具有碳原子和至少一个杂原子的饱和环。示例性的杂原子包括n、o、si、p、b和s原子。杂环烷基可以包括单环和多环，例如3至10元单环、6至12元双环和6至12元桥环。杂环烷基基团中的杂原子任选地被氧化。如果存在一个或多个氮原子，则任选地被季铵化。化合价允许的情况下，杂环烷基通过该杂环烷基的任何原子与分子的其余部分连接，例如杂环烷基的任何碳或氮原子。杂环烷基基团的实例包括但不限于二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2
‑
氧代哌嗪基、2
‑
氧代哌啶基、2
‑
氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4
‑
哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、噻吗啉基(thiamorpholinyl)、1
‑
氧代
‑
硫代吗啉基和1,1
‑
二氧代
‑
硫代吗啉基。除非本说明书中另有明确说明，否则术语“杂环烷基”意在包括任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代的以上定义的杂环烷基基团。
[0071]
术语“杂环烯基”是指具有碳原子和至少一个杂原子并且在两个环碳之间存在至少一个双键的不饱和环。杂环烯基不包括杂芳基环。示例性的杂原子包括n、o、si、p、b和s原子。杂环烯基可以包括单环和多环，例如3至10元单环、6至12元双环和6至12元桥环。在其他实施方案中，杂环烯基包含五至七个环原子。杂环烯基可以通过单键与分子的其余部分连接。单环环烯基的实例包括例如吡咯啉(二氢吡咯)、吡唑啉(二氢吡唑)、咪唑啉(二氢咪唑)、三唑啉(二氢三唑)、二氢呋喃、二氢噻吩、噁唑啉(二氢噁唑)、异噁唑啉(二氢异噁唑)、噻唑啉(二氢噻唑)、异噻唑啉(二氢异噻唑)、噁二唑啉(二氢噁二唑)、噻二唑啉(二氢噻二唑)、二氢吡啶、四氢吡啶、二氢哒嗪、四氢哒嗪、二氢嘧啶、四氢嘧啶、二氢吡嗪、四氢吡嗪、吡喃、二氢吡喃、噻喃、二氢噻喃、二噁英、二氢二噁英、噁嗪、二氢噁嗪、噻嗪和二氢噻嗪。除非本说明书中另有明确说明，否则术语“杂环烯基”意在包括任选地被一个或多个取代基例如本文所述的那些取代基取代的杂环烯基。
[0072]
术语“取代的”是指具有代替了在一个或多个碳上或可取代的杂原子例如化合物的nh或nh2上的氢的取代基的部分。将理解的是，“取代”或“被
……
取代”包括隐含的条件，即这样的取代符合取代的原子和取代基的允许化合价，并且该取代产生稳定的化合物，即，不会例如通过重排、环化、消除等自发进行转化的化合物。在某些实施方案中，“取代的”是指具有代替了同一个碳原子上的两个氢原子的取代基的部分，例如用氧代、亚氨基或硫代
基团取代单个碳上的两个氢原子。如本文所用，术语“取代的”预期包括有机化合物的所有可允许的取代基。在广泛的方面上，可允许的取代基包括有机化合物的非环状和环状的、支链的和非支链的、碳环的和杂环的、芳族的和非芳族的取代基。对于合适的有机化合物，可允许的取代基可以是一个或多个并且可以是相同或不同的。
[0073]
在一些实施方案中，取代基可以包括本文描述的任何取代基，例如：卤素、羟基、氧代(＝o)、硫代(＝s)、氰基(
‑
cn)、硝基(
‑
no2)、亚氨基(＝n
‑
h)、肟基(＝n
‑
oh)、肼基(＝n
‑
nh2)、
‑
r
b
‑
or
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
r
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
or
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
c(o)r
a
、
‑
r
b
‑
c(o)or
a
、
‑
r
b
‑
c(o)n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
o
‑
r
c
‑
c(o)n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
n(r
a
)c(o)or
a
、
‑
r
b
‑
n(r
a
)c(o)r
a
、
‑
r
b
‑
n(r
a
)s(o)
t
r
a
(其中t是1或2)、
‑
r
b
‑
s(o)
t
r
a
(其中t是1或2)、
‑
r
b
‑
s(o)
t
or
a
(其中t是1或2)、和
‑
r
b
‑
s(o)
t
n(r
a
)2(其中t是1或2)；以及烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基和杂芳基烷基，其中的任一个可以任选地被以下取代：烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代(＝o)、硫代(＝s)、氰基(
‑
cn)、硝基(
‑
no2)、亚氨基(＝n
‑
h)、肟基(＝n
‑
oh)、肼(＝n
‑
nh2)、
‑
r
b
‑
or
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
r
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
or
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
c(o)r
a
、
‑
r
b
‑
c(o)or
a
、
‑
r
b
‑
c(o)n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
o
‑
r
c
‑
c(o)n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
n(r
a
)c(o)or
a
、
‑
r
b
‑
n(r
a
)c(o)r
a
、
‑
r
b
‑
n(r
a
)s(o)
t
r
a
(其中t是1或2)、
‑
r
b
‑
s(o)
t
r
a
(其中t是1或2)、
‑
r
b
‑
s(o)
t
or
a
(其中t是1或2)和
‑
r
b
‑
s(o)
t
n(r
a
)2(其中t是1或2)；其中每个r
a
独立地选自氢、烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂环烷基、杂环烷基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，其中在化合价允许的情况下，每个r
a
可以任选地被以下取代：烷基、烯基、炔基、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代(＝o)、硫代(＝s)、氰基(
‑
cn)、硝基(
‑
no2)、亚氨基(＝n
‑
h)、肟基(＝n
‑
oh)、肼(＝n
‑
nh2)、
‑
r
b
‑
or
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
r
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
or
a
、
‑
r
b
‑
oc(o)
‑
n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
c(o)r
a
、
‑
r
b
‑
c(o)or
a
、
‑
r
b
‑
c(o)n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
o
‑
r
c
‑
c(o)n(r
a
)2、
‑
r
b
‑
n(r
a
)c(o)or
a
、
‑
r
b
‑
n(r
a
)c(o)r
a
、
‑
r
b
‑
n(r
a
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t
r
a
(其中t是1或2)、
‑
r
b
‑
s(o)
t
r
a
(其中t是1或2)、
‑
r
b
‑
s(o)
t
or
a
(其中t是1或2)和
‑
r
b
‑
s(o)
t
n(r
a
)2(其中t是1或2)；并且其中每个r
b
独立地选自直连键或者直链或支链的亚烷基、亚烯基、或亚炔基链，并且每个r
c
是直链或支链的亚烷基、亚烯基或亚炔基链。
[0074]
本领域技术人员将理解，如果合适，取代基本身可以被取代。除非具体说明为“未取代的”，否则本文中提及的化学部分应理解为包括取代的变体。例如，除非另有说明，否则提及“杂芳基”基团或部分隐含包括取代和未取代的变体。
[0075]“保护基团”是指当连接至分子中的反应性基团时掩盖、降低或阻止反应性的除烷基以外的部分。保护基团的实例可见于t.w.greene和p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis,3.sup.rd edition,john wiley&sons,new york,1999,以及harrison和harrison等,compendium of synthetic organic methods,第1
‑
8卷(john wiley and sons,1971
‑
1996)，将其通过引用以其整体并入本文。代表性的氨基或胺保护基团包括甲酰基、酰基(例如乙酰基、三氟乙酰基和苯甲酰基)、苄基、烷氧基羰基(例如苄氧基羰基(cbz)和叔丁氧基羰基(boc))、三甲基甲硅烷基(tms)、2
‑
三甲基甲硅烷基
‑
乙磺酰基(ses)、三苯甲基和取代的三苯甲基、烯丙氧基羰基、9
‑
芴基甲基氧基羰基(fmoc)、硝基
‑
藜芦基氧基羰基(nvoc)、磺酰基等。本文所述的化合物可以包含保护基团(例如，本文所述的化合物的反应性氮原子上的氢可以被氨基保护基团代替)。
[0076]
本文所用的短语“肠胃外施用(parenteral administration)”和“肠胃外施用
(administered parenterally)”意指除了肠内和局部施用之外的施用方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹腔内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、椎管内和胸骨内注射和输注。
[0077]
短语“药学上可接受的”在本文中用于指那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内适合与人和动物的组织接触使用而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的收益/风险比相称。
[0078]
本文所用的短语“药学上可接受的赋形剂”或“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。各“载体”在可与制剂的其他成分相容和不损伤患者的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液(ringer’s solution)；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药物制剂中使用的其他无毒的相容性物质。
[0079]
术语“盐”或“药学上可接受的盐”是指衍生自多种本领域众所周知的有机抗衡离子和无机抗衡离子的盐。药学上可接受的酸加成盐可以用无机酸和有机酸形成。可以衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。药学上可接受的碱加成盐可以用无机碱和有机碱形成。可以衍生盐的无机碱包括，例如，钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等。可以衍生盐的有机碱包括，例如伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺，包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等，具体地例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。在一些实施方案中，药学上可接受的碱加成盐选自铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。基因和蛋白质的定义
[0080]
ctla4基因编码ctla4蛋白(细胞毒性t淋巴细胞相关蛋白4)，也称为cd152(分化簇152)，其是充当免疫检查点并下调免疫应答的蛋白受体。ctla4在treg中是组成型表达的，但在活化之后仅在常规t细胞中上调。当与抗原呈递细胞表面上的cd80或cd86结合时，ctla4充当“关闭”开关。已开发出单克隆抗体伊匹莫单抗(ipilimamab)以靶向ctla4。
[0081]
pdcd1编码程序性细胞死亡蛋白1，也称为pd
‑
1和cd279(分化簇279)，其是通过抑制t细胞的炎性活性在下调免疫系统并促进自身耐受中起重要作用的细胞表面受体。pd
‑
1是细胞表面受体，其属于免疫球蛋白超家族并在t细胞和祖b细胞上表达。pd
‑
1是免疫检查点并通过促进淋巴结中抗原特异性t细胞的凋亡(程序性细胞死亡)同时降低调节性t细胞(抗炎性、抑制性t细胞)的凋亡的双重机制来防御自身免疫。已经开发了人igg4抗pd
‑
1单克隆抗体(纳武单抗(nivolumab))和人源化抗体(派姆单抗(pembrolizumab))以靶向pd
‑
1。抗体皮地利珠单抗(pidilizumab)(ct
‑
011，cure tech)和bms
‑
936559正在临床开发中。
[0082]
cd274编码pd
‑
l1(程序性死亡
‑
配体1)，也称为cd274(分化簇274)。pd
‑
l1是40kda的1型跨膜蛋白，据推测其在特定事件例如怀孕、组织同种异体移植、自身免疫病和其他疾病状态例如肝炎期间在抑制免疫系统中起主要作用。pd
‑
l1与pd
‑
1或b7.1的结合传递抑制信号，其减少了淋巴结处cd8+t细胞的增殖，并且对该pd
‑
1的补充还能够通过凋亡控制外源抗原特异性t细胞在淋巴结中的积累，所述凋亡进一步通过基因bcl
‑
2的较低调节介导。已开发出单克隆抗体阿特朱单抗(atezolizumab)、度伐单抗(durvalumab)、阿维单抗(avelumab)和mdx
‑
1106以靶向pd
‑
l1。
[0083]
tnfr2(肿瘤坏死因子受体2)，也称为tnfrsf1b(肿瘤坏死因子受体超家族1b)和cd120b，是单通道i型膜蛋白，并且是包含4个富含半胱氨酸的结构域(crd)重复的tnfr超家族的成员。除了全长的膜锚定形式外，可溶的tnfr2还可以通过两种不同的机制生成：(1)通过全膜锚定形式的蛋白水解过程脱落，和(2)来自编码tnfr2的细胞外结构域的选择性剪接信息的转译。tnfr2是对tnf
‑
α具有高亲和力且对同源三聚体淋巴毒素
‑
α具有低约5倍的亲和力的受体。已经开发出由seq id no:56至seq id no:82和seq id no:95至seq id no:103所描述的针对tnfr2的小鼠单克隆抗体，以及由seq id no:104和seq id no:105所描述的抗tnfr2抗体以靶向tnfr2。
[0084]
tnfrsf4编码ox40，也称为tnfrsf4(肿瘤坏死因子受体超家族，成员4)，与cd28不同，其是在静息的初始t细胞上不组成型表达的受体的tnfr
‑
超家族的成员。ox40是次级共刺激免疫检查点分子，在活化后24小时至72小时之后表达；其配体ox40l也不在静息的抗原呈递细胞上表达，而是在其活化后表达。ox40的表达依赖于t细胞的完全活化；在没有cd28的情况下，ox40的表达被延迟并且水平降低了四倍。已开发出单克隆抗体珀伽利珠单抗(vonlerolizumab)以靶向ox40。
[0085]
cd27是肿瘤坏死因子受体超家族的成员。该基因编码的蛋白质是tnf
‑
受体超家族的成员。该受体是产生和长期维持t细胞免疫所必需的。其与配体cd70结合，并在调节b细胞活化和免疫球蛋白合成中起关键作用。该受体转导导致nf
‑
κb和mapk8/jnk的活化的信号。已经显示出适配子蛋白traf2和traf5介导该受体的信号传导过程。cd27结合蛋白(siva)是一种促凋亡蛋白，可以与该受体结合，并被认为在由该受体诱导的凋亡中起重要作用。已开发出单克隆抗体伐立鲁单抗(varlilumab)以靶向cd27。
[0086]
il2ra编码cd25，也称为il2ra(白细胞介素
‑
2受体α链)，其是存在于活化t细胞、活化b细胞、一些胸腺细胞、髓样前体和少突胶质细胞上的i型跨膜蛋白。il2ra在大多数b细胞赘生物、一些急性非淋巴细胞性白血病、神经母细胞瘤、肥大细胞增多症和肿瘤浸润淋巴细胞中表达。它起htlv
‑
1的受体的作用，因此在成人t细胞淋巴瘤/白血病中的赘生性细胞上表达。其可溶性形式，称为sil
‑
2r，在这些疾病中可能升高，并偶尔用于追踪疾病进展。已开发出人源化单克隆抗体(达克珠单抗(daclizumab))以靶向cd25。
[0087]
tnfrsf18编码gitr(糖皮质激素诱导的tnfr相关蛋白)，也称为tnfrsf18(肿瘤坏死因子受体超家族成员18)和aitr(活化诱导的tnfr家族受体)，其是作为肿瘤坏死因子受体(tnf
‑
r)超家族的成员的蛋白质。gitr(糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体)是一种表面受体分子，其已经显示出参与抑制t调节细胞的抑制活性和延长t效应细胞的存活。已开发出由seq id no:37至seq id no:42和seq id no:187至seq id no:188所描述的抗gitr抗体以及抗体trx518以靶向gitr。
[0088]
lag
‑
3(淋巴细胞活化基因3)编码对t细胞功能具有多种生物学作用的细胞表面分子。lag
‑
3是免疫检查点受体。属于免疫球蛋白(ig)超家族的lag3蛋白包含具有四个细胞外ig样结构域(命名为d1至d4)的503个氨基酸的i型跨膜蛋白。lag
‑
3在活化的t细胞、自然杀伤细胞、b细胞和浆细胞样树突细胞上表达。已开发出由seq id no:43至seq id no:48和seq id no:111至seq id no:112所描述的抗lag
‑
3抗体以靶向lag
‑
3。
[0089]
garp(主要是糖蛋白a重复)是包含富含亮氨酸重复的跨膜蛋白，其存在于刺激的treg克隆的表面上，而不存在于th克隆上。已开发出由seq id no:113至seq id no:122所描述的抗garp抗体以靶向garp。
[0090]4‑
1bb是属于tnf超家族的在活化的t淋巴细胞上表达的2型跨膜糖蛋白。4
‑
1bb可以由活化的t细胞表达。4
‑
1bb表达可以在炎症部位的树突细胞、b细胞、滤泡树突细胞、自然杀伤细胞、粒细胞和血管壁细胞上发现。已开发出由seq id no:50至seq id no:55和seq id no:123至seq id no:128所描述的抗4
‑
1bb抗体以靶向4
‑
1bb。
[0091]
icos(诱导性t细胞共刺激分子)编码在活化的t细胞上表达的cd28超家族共刺激分子。由该基因编码的蛋白质属于cd28和ctla
‑
4细胞表面受体家族。icos形成同型二聚体，并在细胞
‑
细胞信号传导、免疫应答和细胞增殖的调节中起重要作用。已开发出由seq id no:129至seq id no:132所描述的抗icos抗体以靶向icos。
[0092]
cd70在高度活化的淋巴细胞上表达，例如在t细胞和b细胞淋巴瘤中。cd70是属于肿瘤坏死因子(tnf)配体家族的细胞因子。该细胞因子是tnfrsf27/cd27的配体。其为活化的而非静息的t淋巴细胞和b淋巴细胞上的表面抗原。cd70诱导共刺激t细胞的增殖，增强溶细胞性t细胞的生成，并有助于t细胞活化。据报道，该细胞因子还在调节b细胞活化、自然杀伤细胞的细胞毒性功能和免疫球蛋白合成中起作用。已开发出单克隆抗体伏司妥珠单抗(vorsetuzumab)以靶向cd70。
[0093]
pdgfrβ(β型血小板衍生的生长因子受体)编码典型的受体酪氨酸激酶，其为由细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和细胞内酪氨酸激酶结构域组成的跨膜蛋白。成熟的糖基化pdgfrβ蛋白的分子量为约180kda。已开发出单克隆抗体rinucumab以靶向pdgfrβ。
[0094]
cd73(分化簇73)，称为胞外
‑
5'
‑
核苷酸酶(胞外
‑
5'
‑
nt，ec 3.1.3.5)，是发现于大多数组织中的糖基磷脂酰肌醇(gpi)连接的70
‑
kda细胞表面酶。cd73通常用于将amp转化为腺苷。胞外
‑
5'
‑
核苷酸酶(5'
‑
核糖核苷酸磷酸水解酶；ec 3.1.3.5)催化嘌呤5'单核苷酸在中性ph下向核苷的转化，优选的底物是amp。该酶由通过糖基磷脂酰肌醇键与质膜的外表面结合的两个相同的70
‑
kd亚基的二聚体组成。该酶被用作淋巴细胞分化的标志物。已开发出单克隆抗体奥来鲁单抗(oleclumab)和由seq id no:139至seq id no:140中所描述的抗cd73抗体以靶向cd73。
[0095]
cd38(分化簇38)，也称为环状adp核糖水解酶，是发现于许多免疫细胞(白细胞)的表面上的糖蛋白，所述免疫细胞包括cd4
+
、cd8
+
、b淋巴细胞和自然杀伤细胞。cd38还在细胞粘附、信号转导和钙信号传导中起作用。cd38功能的丧失与免疫应答受损、代谢紊乱以及包括可能与自闭症有关的社交失忆症的行为改变相关。cd38蛋白是细胞活化的标志物。它与hiv感染、白血病、骨髓瘤、实体瘤、ii型糖尿病和骨代谢以及一些遗传决定的病况有关。cd38产生调节中枢神经系统内催产素释放的酶。已开发出单克隆抗体达雷木单抗(daratumumab)以靶向cd38。
[0096]
整合素αvβ3是一种类型的整合素，其是玻连蛋白受体。整合素αvβ3由整合素αv和整合素β3(cd61)的两种组分组成，并由血小板表达。整合素αvβ3是巨噬细胞或树突细胞吞噬作用的受体。已开发出单克隆抗体伊瑞西珠单抗(etaracizumab)和英妥木单抗(intetumumab)以靶向整合素αvβ3。
[0097]
整合素αvβ8(一种vn受体)被鉴定为细胞生长的潜在负调节剂。β8的胞质结构域在序列上是不同的，缺乏与其他αv相关的整合素β亚基(β1、β3、β5和β6)的高度同源的胞质结构域的所有氨基酸同源性。β8胞质结构域在功能上是不同的。αvβ8具有受限的分布，并且在非增殖细胞类型中最高表达。已开发出如在seq id no:147至seq id no:148中所描述的抗整合素αvβ8抗体以靶向整合素αvβ8。
[0098]
cd248编码内皮唾液酸蛋白。内皮唾液酸蛋白是新型的c型凝集素跨膜受体家族“xiv组”的成员，其不仅在细胞
‑
细胞粘附过程中起作用，而且在宿主防御中起作用。内皮唾液酸蛋白已经与胚胎、子宫中的以及肿瘤的发展和生长中的血管生成相关。已开发出单克隆抗体昂妥昔珠单抗(ontuxizumab)，以靶向内皮唾液酸蛋白。
[0099]
fap(成纤维细胞活化蛋白α)是170kda的黑色素瘤膜结合明胶酶，在人中由fap基因编码的蛋白质。该基因编码的蛋白质是属于丝氨酸蛋白酶家族的同型二聚体整合膜明胶酶。其在上皮癌的反应性基质成纤维细胞、愈合伤口的肉芽组织以及骨肉瘤和软组织肉瘤的恶性细胞中选择性表达。认为该蛋白在发育、组织修复和上皮癌发生期间参与成纤维细胞生长或上皮
‑
间充质相互作用的控制。已开发出在seq id no:151至seq id no:168中所描述的抗fap抗体以靶向fap。
[0100]
整合素αv亚基与五个整合素β亚基β1、β3、β5、β6或β8之一缔合，以形成五个不同的αvβ异二聚体。细胞表面上的整合素αvβ异二聚体与细胞粘附蛋白例如胶原蛋白、纤维蛋白原、纤连蛋白和玻连蛋白相互作用。这些相互作用在细胞粘附或迁移，尤其在肿瘤转移中起重要作用。已开发出如在seq id no:171至seq id no:174中所描述的单克隆抗体英妥木单抗和抗整合素αv抗体以靶向整合素αv。
[0101]
整合素αvβ6是上皮特异性整合素，其为细胞外基质(ecm)蛋白纤连蛋白、玻连蛋白、腱生蛋白和tgf
‑
β的潜伏相关肽(lap)的受体。整合素αvβ6在健康的成人上皮中不表达，但在伤口愈合期间和在癌症中上调。已显示出整合素αvβ6调节侵袭、抑制凋亡、调节基质金属蛋白酶(mmp)的表达并活化tgf
‑
β1。已开发出如在seq id no:175至seq id no:182中所描述的的抗整合素αvβ6抗体以靶向整合素αvβ6。抗体构建体
[0102]
本文公开了可以与本公开内容的化合物一起使用的抗体构建体和靶向部分。在某些实施方案中，本公开内容的化合物直接或通过接头基团与抗体构建体或靶向部分缀合以形成缀合物。
[0103]
在某些实施方案中，本公开内容的缀合物由以下式表示：其中抗体是抗体构建体，l3是接头，d是本文公开的化合物或盐，并且n是1至20。在某些实施方案中，n是1至10，例如1至9、例如1至8、例如2至8、例如1至6、例如3至5或例如1至3。在某些实施方案中，n是4。在某些实施方案中，每个d分别独立地选自式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14。
[0104]
在某些实施方案中，本公开内容的缀合物由以下式表示：其中l3是接头，d是本文公开的化合物或盐，并且n是1至20。在某些实施方案中，n是1至10，例如1至9、例如1至8、例如2至8、例如1至6、例如3至5或例如1至3。在某些实施方案中，n是4。在某些实施方案中，每个d分别独立地选自式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14。
[0105]
在某些实施方案中，本公开内容的化合物或盐，例如，式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14的化合物或盐，在本文中也可以被称为tgfβr2抑制剂、药物、d、氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物或有效载荷，特别是当被称为缀合物的一部分时。“lp”、“接头
‑
有效载荷”、“l3–
d”或“化合物
‑
接头”可以在本文中用于指与接头结合的本公开内容的化合物或盐。
[0106]
抗体构建体可以包含例如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个抗原结合结构域。抗体构建体可以包含两个抗原结合结构域，其中每个抗原结合结构域可以识别相同的抗原。抗体构建体可以包含两个抗原结合结构域，其中每个抗原结合结构域可以识别不同的抗原。抗原结合结构域可以在支架中，其中支架是抗原结合结构域的支持框架。抗原结合结构域可以在非抗体支架中。抗原结合结构域可以在抗体支架中。抗体构建体可以在支架中包含抗原结合结构域。抗体构建体可以包含fc融合蛋白。在一些实施方案中，抗体构建体是fc融合蛋白。抗原结合结构域可以与肿瘤抗原特异性结合。抗原结合结构域可以与和肿瘤抗原具有至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或100％序列同一性的抗原特异性结合。抗原结合结构域可以与抗原呈递细胞(apc)上的抗原特异性结合。抗原结合结构域可以与和抗原呈递细胞(apc)上的抗原具有至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或100％序列同一性的抗原特异性结合。
[0107]
抗体的抗原结合结构域可以包含一个或多个轻链(l)cdr和一个或多个重链(h)cdr。例如，抗体的抗原结合结构域可以包含以下的一个或多个：轻链互补决定区1(lcdr1)、轻链互补决定区2(lcdr2)或轻链互补决定区3(lcdr3)。对于另一个实例，抗原结合结构域可以包含以下的一个或多个：重链互补决定区1(hcdr1)、重链互补决定区2(hcdr2)或重链互补决定区3(hcdr3)。作为另外的实例，抗体的抗原结合结构域可包含以下的一个或多个：lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3。在一些实施方案中，抗体的抗原结合结构域包括所有六个cdr(即，lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)。
[0108]
抗体构建体的抗原结合结构域可以选自与抗原特异性结合的任何结构域，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体或其结合功能片段例如重链可变结构域(v
h
)和轻链可变结构域(v
l
)、或darpin、affimer、高亲合性多聚体(avimer)、打结素(knottin)、单抗体(monobody)、亲和钳(affinity clamp)、胞外域、受体胞外域、受体、细胞因子、配体、免疫细胞因子、t细胞受体或重组t细胞受体。
[0109]
抗体构建体的抗原结合结构域可以与选自但不限于以下的抗原结合结构域至少80％相同：单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体或其功能片段，例如，重链可变结构域(v
h
)和
轻链可变结构域(v
l
)或darpin、affimer、高亲合性多聚体、打结素、单抗体、亲和钳、胞外域、受体胞外域、受体、细胞因子、配体、免疫细胞因子、t细胞受体或重组t细胞受体。
[0110]
在某些实施方案中，本公开内容的抗体构建体包含可以包含fc区的fc结构域，其中fc结构域可以是与fc受体相互作用的fc区的一部分。抗体构建体的fc结构域可以与发现于免疫细胞上的fc受体(fcr)相互作用。fc结构域还可以介导效应分子与细胞之间的相互作用，这可以导致免疫系统的活化。fc区可以来源于igg、iga或igd抗体同种型，并且可以包含两个相同的蛋白质片段，其来源于抗体重链的第二恒定结构域和第三恒定结构域。在来源于igg抗体同种型的fc结构域或fc区中，fc结构域或fc区可以包含高度保守的n
‑
糖基化位点，其对于fcr介导的下游效应可能是必要的。fc结构域或fc区可以来源于igm或ige抗体同种型，其中fc结构域或fc区可以包含三个重链恒定结构域。
[0111]
fc结构域可以与不同类型的fcr相互作用。不同类型的fcr可以包括例如fcγri、fcγriia、fcγriib、fcγriiia、fcγriiib、fcαri、fcμr、fcεri、fcεrii和fcrn。fcr可以位于某些免疫细胞的膜上，所述免疫细胞包括例如b淋巴细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、滤泡树突细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、血小板和肥大细胞。一旦fcr通过fc结构域接合，则fcr可以启动功能，其包括例如通过受体介导的胞吞作用清除抗原
‑
抗体复合物、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(adcp)以及可能导致分泌、胞吐作用和细胞代谢变化的配体触发的跨质膜信号传输。当fcr通过抗体和多价抗原聚集在细胞表面处时，fcr可以递送信号。具有免疫受体酪氨酸活化基序(itam)的fcr的聚集可以依次活化src家族酪氨酸激酶和syk家族酪氨酸激酶。itam包含两次重复的侧翼为七个可变残基的yxxl序列。src激酶和syk激酶可以将转导的信号与常见的活化途径连接。
[0112]
在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对一种或多种fc受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对一种或多种fcγ受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcrn受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcγ受体和fcrn受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域是fc无效结构域或区。如本文所用，“fc无效”是指对任何fcγ受体均表现出弱结合至不结合的结构域。在一些实施方案中，fc无效结构域或区表现出与fcγ受体的结合亲和力降低(例如，kd增加)至少1000倍。
[0113]
fc结构域可以具有一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或者四个或更多个氨基酸取代，其降低了fc结构域与fc受体的结合。在某些实施方案中，fc结构域表现出与fcγri(cd64)、fcγriia(cd32)、fcγriiia(cd16a)、fcγriiib(cd16b)或其任何组合降低的结合。为了降低fc结构域或fc区与fc受体的结合亲和力，fc结构域或fc区可以包含一个或多个氨基酸取代，其具有降低fc结构域或fc区与fc受体的亲和力的作用。在某些实施方案中，一个或多个取代包括对应于根据kabat编号的eu索引的e233p、l234v、l234a、l235a、l235e、δg236、g237a、e318a、k320a、k322a、a327g、a330s或p331s的igg1重链突变中的任何一个或多个。
[0114]
在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以包含已经从野生型iggl序列修饰的iggl同种型的序列。修饰可以包含在多于一个氨基酸残基处，例如在包括根据kabat编号的eu索引的l235v/f243l/r292p/y300l/p396l(igg1vlpll)的5个不同氨基酸残基处的取代。修饰
可以包括在多于一个的氨基酸残基处，例如在包括根据kabat编号的eu索引的s239d/i332e(igg1de)的2个不同的氨基酸残基处的取代。修饰可以包括在多于一个的氨基酸残基处，例如在包括根据kabat编号的eu索引的s298a/e333a/k334a(igg1aaa)的3个不同氨基酸残基处的取代。
[0115]
抗体构建体可以由两条相同的蛋白轻链和两条相同的蛋白重链组成，它们均通过二硫化物键共价保持在一起。轻链和重链的n
‑
末端区可以一起形成抗体的抗原识别位点。在结构上，抗体的各种功能可以被限制于离散的蛋白结构域。可以识别并且可以结合抗原的位点可以由可以位于在重链和轻链的n
‑
末端处的可变重链区和可变轻链区内的三个互补性决定区(cdr)组成。恒定结构域可以提供抗体的一般框架，并且可以不直接参与抗体与抗原的结合，但可以参与各种效应子功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性，并且可以结合fc受体。恒定结构域可以包括fc区。恒定结构域可以包括fc结构域。天然轻链和重链的可变区可以具有相同的一般结构，并且每个结构域可以包含四个框架区，其序列可以在一定程度上是保守的，由三个高变区或cdr连接。四个框架区(fr)可以主要采用β
‑
折叠构象，并且cdr可以形成连接β
‑
折叠结构的环，并且在一些方面中，形成β
‑
折叠结构的一部分。每条链中的cdr可以通过框架区保持紧密接近，并且与来自另一条链的cdr一起可以有助于抗原结合位点的形成。
[0116]
抗体构建体可以包含氨基酸序列的轻链，所述氨基酸序列相对于天然或原始氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个修饰，并且在某些实施方案中，不超过40个、35个、30个、25个、20个、15个或10个氨基酸序列的修饰。抗体构建体可以包含氨基酸序列的重链，所述氨基酸序列相对于天然或原始氨基酸序列具有至少一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个修饰，并且在某些实施方案中，不超过40个、35个、30个、25个、20个、15个或10个氨基酸序列的修饰。
[0117]
抗体构建体可以是抗体。抗体可以选自不同类别的免疫球蛋白，例如iga、igd、ige、igg和igm。几种不同的类别可以进一步分为同种型，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。抗体可以进一步包含轻链和重链，通常超过一个链。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区(fc)可以分别是α、δ、ε、γ和μ。基于恒定结构域的氨基酸序列，轻链可以是κ或λ之一。fc结构域可以进一步包含fc区。fc受体可以结合fc结构域。抗体构建体还可以包括其任何片段或重组形式，包括但不限于单链可变片段(scfv)。
[0118]
抗体构建体可以包含抗原结合抗体片段。抗体片段可以包括(i)fab片段，由v
l
、v
h
、c
l
和c
h1
结构域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，包含通过铰链区的二硫化物桥连接的两个fab片段的二价片段；和(iii)由抗体的单臂的v
l
和v
h
结构域组成的fv片段。尽管fv片段的两个结构域v
l
和v
h
可以由不同的基因编码，但它们可以通过使其制成单个蛋白链的合成接头连接，其中v
l
区和v
h
区配对形成单价分子。
[0119]
f(ab')2和fab'部分可以通过基因工程或通过用诸如胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的蛋白酶处理免疫球蛋白(例如，单克隆抗体)来产生，并且可以包含通过消化在两个h链的每一个的铰链区之间存在的二硫化物键附近的免疫球蛋白而产生的抗体片段。fab片段还可以包含轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(c
h1
)。fab'片段可以通过在重链c
h1
结构域的羧基末端处添加一些残基(包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸)而不同于fab片段。
[0120]
fv可以是包含完整的抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该区可以由紧密的非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在该构型中，每个可变结构域的三个cdr可以相互作用以在v
h
‑
v
l
二聚体的表面上限定抗原结合位点。单个可变结构域(或仅包含对抗原具有特异性的三个cdr的fv的一半)可以识别并结合抗原，但该结合的亲和力可以低于整个结合位点的亲和力。
[0121]
抗体构建体可以包括包含fc区的fc结构域或几个fc结构域。抗体的fc结构域可以与发现于免疫细胞上的fcr相互作用。fc结构域还可以介导效应分子与细胞之间的相互作用，这可以导致免疫系统的活化。在igg、iga和igd抗体同种型中，fc区可以包含两个相同的蛋白质片段，其可以来源于抗体重链的第二恒定结构域和第三恒定结构域。在igm和ige抗体同种型中，fc区可以包含三个重链恒定结构域。在igg抗体同种型中，fc区可以包含高度保守的n
‑
糖基化位点，其对于fcr介导的下游效应可能是重要的。
[0122]
本文使用的抗体构建体可以是“嵌合的”或“人源化的”。非人(例如，鼠)抗体的嵌合形式和人源化形式可以是可以包含来源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如抗体的fv、fab、fab'、f(ab')2或其他靶标结合亚结构域)。一般来说，人源化抗体可以包含基本上所有的至少一个且通常两个可变结构域，其中所有的或基本上所有的cdr对应于非人免疫球蛋白的cdr，并且所有或基本上所有的框架区是人免疫球蛋白序列的框架区。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白共有序列的至少一部分。
[0123]
抗体构建体可以是人抗体。如本文所用，“人抗体”可以包括具有例如人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并且可以包括从人免疫球蛋白文库或从对于不表达内源性免疫球蛋白的一种或多种人免疫球蛋白转基因的动物分离的抗体。可以使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白但可以表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠来生产人抗体。可以使用指导的选择来产生识别选择的表位的完全人抗体。在该方法中，可以使用选择的非人单克隆抗体，例如小鼠抗体，来指导识别相同表位的完全人抗体的选择。
[0124]
抗体可以是双特异性抗体或双重可变结构域抗体(dvd)。双特异性抗体和dvd抗体可以是可以对至少两种不同的抗原具有结合特异性的单克隆抗体，通常是人或人源化抗体。
[0125]
抗体可以是衍生抗体。例如，衍生抗体可以通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护基团/封闭基团衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其他蛋白质的连接来修饰。
[0126]
抗体可以具有相对于相应的野生型序列被修饰以改变至少一种恒定区介导的生物效应子功能的序列。。例如，在一些实施方案中，可以修饰抗体以相对于未修饰的抗体减少至少一种恒定区介导的生物学效应子功能，例如减少与fc受体(fcr)的结合。可以通过例如在对fcr相互作用必需的特定区处突变抗体的免疫球蛋白恒定区区段来减少fcr结合。
[0127]
可以修饰抗体或fc结构域以相对于未修饰的抗体或fc结构域获得或改善至少一种恒定区介导的生物学效应子功能，例如，以增强fcγr相互作用。例如，可以根据本文所述的方法生产具有恒定区的抗体，该抗体以比相应的野生型恒定区更大的亲和力与fcγriia、fcγriib和/或fcγriiia结合。可以根据本文所述的方法或本领域技术人员已知的方法生产fc结构域，该fc结构域以比相应的野生型fc结构域更大的亲和力与fcγriia、fc
γriib和/或fcγriiia结合。
[0128]
在某些实施方案中，抗体构建体包含可以包含fc区的fc结构域，其中fc结构域可以是与fc受体相互作用的fc区的一部分。抗体构建体的fc结构域可以与发现于免疫细胞上的fc受体(fcr)相互作用。fc结构域还可以介导效应分子与细胞之间的相互作用，这可以导致免疫系统的活化。fc区可以来源于igg、iga或igd抗体同种型，并且可以包含两个相同的蛋白质片段，其来源于抗体重链的第二恒定结构域和第三恒定结构域。在来源于igg抗体同种型的fc结构域或fc区中，fc结构域或fc区可以包含高度保守的n
‑
糖基化位点，其对于fcr介导的下游效应可能是必要的。fc结构域或fc区可以来源于igm或ige抗体同种型，其中fc结构域或fc区可以包含三个重链恒定结构域。
[0129]
fc结构域可以与不同类型的fcr相互作用。不同类型的fcr可以包括例如fcγri、fcγriia、fcγriib、fcγriiia、fcγriiib、fcαri、fcμr、fcεri、fcεrii和fcrn。fcr可以位于某些免疫细胞的膜上，所述免疫细胞包括例如b淋巴细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、滤泡树突细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、血小板和肥大细胞。一旦fcr通过fc结构域接合，则fcr可以启动功能，其包括例如通过受体介导的胞吞作用清除抗原
‑
抗体复合物、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(adcp)以及可能导致分泌、胞吐作用和细胞代谢变化的配体触发的跨质膜信号传输。当fcr通过抗体和多价抗原聚集在细胞表面处时，fcr可以递送信号。具有免疫受体酪氨酸活化基序(itam)的fcr的聚集可以依次活化src家族酪氨酸激酶和syk家族酪氨酸激酶。itam包含两次重复的侧翼为七个可变残基的yxxl序列。src激酶和syk激酶可以将转导的信号与常见的活化途径连接。
[0130]
在一些实施方案中，缀合物的抗体构建体部分的fc结构域或fc区可以表现出对一种或多种fc受体增加的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对一种或多种fcγ受体增加的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcrn受体增加的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcγ和fcrn受体增加的结合亲和力。
[0131]
在一些实施方案中，缀合物的抗体构建体部分的fc结构域或fc区可以表现出对一种或多种fc受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对一种或多种fcγ受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcrn受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcγ和fcrn受体降低的结合亲和力。在一些实施方案中，fc结构域是fc无效结构域或区。在一些实施方案中，与野生型igg相比，fc结构域或fc区可以表现出对fcrn受体降低的结合亲和力，但对一种或多种fcγ受体具有相同或增加的亲和力。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以表现出对fcrn受体增加的结合亲和力，但对一种或多种fcγ受体具有相同或降低的结合亲和力。
[0132]
fc结构域可以具有一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或者四个或更多个氨基酸取代，其降低了fc结构域与fc受体的结合。在某些实施方案中，fc结构域对fcγri(cd64)、fcγriia(cd32)、fcγriiia(cd16a)、fcγriiib(cd16b)或其任何组合中的一种或多种具有降低的结合亲和力。为了降低fc结构域或fc区对fc受体的结合亲和力，fc结构域或fc区可以包含降低fc结构域或fc区与fc受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸取代。
[0133]
在某些实施方案中，一个或多个取代包括对应于根据kabat编号的eu索引的e233p、l234v、l234a、l235a、l235e、δg236、g237a、e318a、k320a、k322a、a327g、a330s或p331s的igg1重链突变中的任何一个或多个。
[0134]
在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以包含已从野生型igg序列修饰的igg同种型的序列。在一些实施方案中，fc结构域或fc区可以包含已从野生型igg1序列修饰的igg1同种型的序列。在一些实施方案中，修饰包括取代一个或多个降低igg fc结构域或fc区与所有fcγ受体的结合亲和力的氨基酸。修饰可以是根据kabat的eu索引的e233、l234和l235，例如e233p/l234v/l235a或e233p/l234v/l235a/δg236的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的p238，例如p238a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的d265，例如d265a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的n297，例如n297a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的a327，例如a327q的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的p329，例如p239a的取代。
[0135]
在一些实施方案中，与野生型或参照igg fc结构域相比，igg fc结构域或区包含至少一个降低其与fcγr1的结合亲和力的氨基酸取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的f241，例如f241a处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的f243，例如f243a处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的v264，例如v264a处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的d265，例如d265a处的取代。
[0136]
在一些实施方案中，与野生型或参照igg fc结构域相比，igg fc结构域或区包含至少一个增加其与fcγr1的结合亲和力的氨基酸取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的a327和p329，例如a327q/p329a处的取代。
[0137]
在一些实施方案中，修饰包含一个或多个降低igg fc结构域或区与fcγrii和fcγriiia受体的结合亲和力的氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的d270，例如d270a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的q295，例如q295a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的a327，例如a237s的取代。
[0138]
在一些实施方案中，修饰包含一个或多个增加igg fc结构域或区与fcγrii和fcγriiia受体的结合亲和力的氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的t256，例如t256a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k290，例如k290a的取代。
[0139]
在一些实施方案中，修饰包含一个或多个增加igg fc结构域或区与fcγrii受体的结合亲和力的氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的r255，例如r255a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的e258，例如e258a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的s267，例如s267a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的e272，例如e272a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的n276，例如n276a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的d280，例如d280a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的h285，例如h285a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的n286，例如n286a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的t307，例如t307a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的l309，例如l309a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的n315，例如n315a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k326，例如k326a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的p331，例如p331a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的s337，例如s337a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的a378，例如a378a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的e430，例如e430的取代。
[0140]
在一些实施方案中，修饰包含增加igg fc结构域或区与fcγrii受体的结合亲和力且降低与fcγriiia受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的h268，例如h268a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的r301，例如r301a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k322，例如k322a的取代。
[0141]
在一些实施方案中，修饰包含降低igg fc结构域或区与fcγrii受体的结合亲和力但不影响与fcγriiia受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的r292，例如r292a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k414，例如k414a的取代。
[0142]
在一些实施方案中，修饰包含降低igg fc结构域或区与fcγrii受体的结合亲和力且增加与fcγriiia受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的s298，例如s298a的取代。修饰可以是s239、i332和a330，例如s239d/i332e/a330l的取代。修饰可以是s239和i332，例如s239d/i332e的取代。
[0143]
在一些实施方案中，修饰包含一个或多个降低igg fc结构域或区与fcγriiia受体的结合亲和力的氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的f241和f243，例如f241s/f243s或f241i/f243i的取代。
[0144]
在一些实施方案中，修饰包含降低igg fc结构域或区与fcγriiia受体的结合亲和力且不影响与fcγrii受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的s239，例如s239a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的e269，例如e269a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的e293，例如e293a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的y296，例如y296f的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的v303，例如v303a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的a327，例如a327g的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k338，例如k338a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的d376，例如d376a的取代。
[0145]
在一些实施方案中，修饰包含增加igg fc结构域或区与fcγriiia受体的结合亲和力且不影响与fcγrii受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的e333，例如e333a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k334，例如k334a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的a339，例如a339t的取代。修饰可以是s239和i332，例如s239d/i332e的取代。
[0146]
在一些实施方案中，修饰包含一个或多个增加igg fc结构域或区与fcγriiia受体的结合亲和力的氨基酸的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的l235、f243、r292、y300和p396，例如l235v/f243l/r292p/y300l/p396l(igg1vlpll)的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的s298、e333和k334，例如s298a/e333a/k334a的取代。修饰可以是根据kabat的eu索引的k246，例如k246f的取代。
[0147]
在美国专利第7,317,091号和第8,969,526号(其公开内容通过引用并入本文)中公开了igg fc结构域中的影响其与一种或多种fcγ受体的相互作用的其他取代。
[0148]
在一些实施方案中，与野生型或参照igg fc结构域相比，igg fc结构域或区包含至少一个降低与fcrn的结合亲和力的氨基酸取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的h435，例如h435a处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的i253，例如i253a处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的h310，例如h310a处的取代。修饰可以包含在根据
kabat的eu索引的i253、h310和h435，例如i253a/h310a/h435a处的取代。
[0149]
相对于野生型或参照igg fc结构域，修饰可以包含增加igg fc结构域与fcrn的结合亲和力的一个氨基酸残基的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的v308，例如v308p处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的m428，例如m428l处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的n434，例如n434a或者根据kabat的eu索引的n434h处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的t250和m428，例如t250q和m428l处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的m428和n434，例如m428l和n434s、n434a或n434h处的取代。修饰可以包含在根据kabat的eu索引的m252、s254和t256，例如m252y/s254t/t256e处的取代。修饰可以是选自p257l、p257n、p257i、v279e、v279q、v279y、a281s、e283f、v284e、l306y、t307v、v308f、q311v、d376v和n434h的一个或多个氨基酸的取代。在美国专利第9,803,023号(其公开内容通过引用并入本文)中公开了igg fc结构域中影响其与fcrn的相互作用的其他取代。
[0150]
在某些实施方案中，抗体构建体包含抗原结合结构域和fc结构域。
[0151]
在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与t细胞、b细胞、星状细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、apc、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化的发病机制相关的细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与t细胞、apc、和/或b细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与肝细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自clta4、pd
‑
1、ox40、lag
‑
3、gitr、garp、cd25、cd27、pd
‑
l1、tnfr2、icos、41bb、cd70、cd73、cd38或vtcn1中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自asgr1和asgr2(脱唾液酸糖蛋白受体1和脱唾液酸糖蛋白受体2)中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与星状细胞、内皮细胞、成纤维细胞、纤维细胞或者与纤维化或癌症的发病机制相关的细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自pdgfrβ、整合素αvβ1、整合素αvβ3、整合素αvβ6、整合素αvβ8、内皮唾液酸蛋白、fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与肿瘤细胞上的抗原，肿瘤抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与选自muc16、upk1b、vtcn1、tmprss3、tmem238、clorf186、tmprss4、cldn6、cldn8、stra6、msln或cd73中的抗原至少80％相同的抗原。
[0152]
在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合t细胞、b细胞、星状细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、apc、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化的发病机制相关的细胞上的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合t细胞、apc、和/或b细胞上的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合肝细胞上的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自clta4、pd
‑
1、ox40、lag
‑
3、gitr、garp、cd25、cd27、pd
‑
l1、tnfr2、icos、41bb、cd70、cd73、cd38或vtcn1的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自asgr1和asgr2的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合星状细胞、内皮细胞、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化或癌症的发病机制相关的细胞上的抗原。
在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自pdgfrβ、整合素αvβ1、整合素αvβ3、整合素αvβ6、整合素αvβ8、内皮唾液酸蛋白、fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2的抗原。在某些实施方案中，抗原为lrrc15。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合肿瘤细胞上的抗原，肿瘤抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合选自muc16、upk1b、vtcn1、tmprss3、tmem238、clorf186、tmprss4、cldn6、cldn8、stra6、msln或cd73的抗原。
[0153]
抗体构建体可以包含具有至少一个氨基酸残基的修饰的抗体。修饰可以是取代、添加、突变、缺失等。抗体修饰可以是非天然氨基酸的插入。
[0154]
抗原结合结构域可以包含与表1中的任何序列至少80％的序列同一性。抗原结合结构域可以包含表1中列出的一组cdr。抗体构建体可以包含结合抗原的抗原结合结构域，其中抗原结合结构域包含与以下各项至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性：a)包含seq id no:1的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:2的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:3的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:4的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lcdr3；b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:8的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:9的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:10的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:11的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:12的氨基酸序列的lcdr3；c)包含seq id no:13的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:14的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:15的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:16的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:17的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:18的氨基酸序列的lcdr3；d)包含seq id no:19的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:20的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:21的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:22的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:23的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:24的氨基酸序列的lcdr3；e)包含seq id no:25的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:26的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:27的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:28的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:29的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:30的氨基酸序列的lcdr3；f)包含seq id no:31的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:32的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:33的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:34的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:35的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:36的氨基酸序列的lcdr3；g)包含seq id no:37的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:38的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:39的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:40的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:41的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:42的氨基酸序列的lcdr3；h)包含seq id no:43的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:44的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:45的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:46的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:47的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:48的氨基酸序列的lcdr3；i)包含seq id no:49的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:50的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:51的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:52的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:53的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:54的氨基酸序列的
lcdr3；j)包含seq id no:55的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:56的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:57的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:58的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:59的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:60的氨基酸序列的lcdr3；k)包含seq id no:61的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:62的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:63的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:64的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:65的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:66的氨基酸序列的lcdr3；l)包含seq id no:67的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:68的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:69的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:70的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:71的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:72的氨基酸序列的lcdr3；m)包含seq id no:73的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:74的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:75的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:76的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:77的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:78的氨基酸序列的lcdr3；n)包含seq id no:73的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:74的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:75的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:79的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:80的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:81的氨基酸序列的lcdr3；o)包含seq id no:199的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:200的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:201的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:202的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:203的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:204的氨基酸序列的lcdr3；p)包含seq id no:205的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:206的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:207的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:208的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:209的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:210的氨基酸序列的lcdr3；q)包含seq id no:211的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:212的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:213的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:214的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:215的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:216的氨基酸序列的lcdr3；r)包含seq id no:217的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:218的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:219的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:220的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:221的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:222的氨基酸序列的lcdr3；s)包含seq id no:223的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:224的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:225的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:226的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:227的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:228的氨基酸序列的lcdr3；或t)包含seq id no:229的氨基酸序列的hcdr1、包含seq id no:230的氨基酸序列的hcdr2、包含seq id no:231的氨基酸序列的hcdr3、包含seq id no:232的氨基酸序列的lcdr1、包含seq id no:233的氨基酸序列的lcdr2和包含seq id no:234的氨基酸序列的lcdr3。
[0155]
抗体构建体可以包含含有一个或多个可变结构域的抗原结合结构域。抗体构建体可以包含含有轻链可变结构域(v
l
结构域)的抗原结合结构域。结合结构域可以包含与表2中的任何v
l
序列至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、或至少100％的序列同一性。抗体构建体可以包含含有重链可变结构域(v
h
结构域)的抗原结合结构域。抗原结合结构域可以包含与表2中的任何v
h
序列至少80％、至少90％、至少95％、至少
97％、至少98％、至少99％、或至少100％的序列同一性。抗原结合结构域可以包含表2中的一对v
h
序列和v
l
序列。抗原结合结构域可以包含与表2中的任何序列至少80％的序列同一性。
[0156]
抗体构建体可以包含特异性结合抗原的抗原结合结构域，其中抗原结合结构域包含：a)与seq id no:83的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:84的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；b)与seq id no:85的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:86的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；c)与seq id no:87的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:88的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；d)与seq id no:89的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:90的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；e)与seq id no:91的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:92的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；f)与seq id no:93的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:94的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；g)与seq id no:95的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:96的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；h)与seq id no:97的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:98的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；i)与seq id no:99的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:100的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；j)与seq id no:101的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:102的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；k)与seq id no:101的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:103的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；l)与seq id no:104的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、
至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:105的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；m)与seq id no:106的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:107的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；n)与seq id no:109的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:108的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；o)与seq id no:110的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:108的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；p)与seq id no:111的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:112的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；q)与seq id no:113的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:114的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；r)与seq id no:115的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:116的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；s)与seq id no:117的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:118的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；t)与seq id no:117的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:119的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；u)与seq id no:117的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:120的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；v)与seq id no:117的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:121的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
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序列，以及与seq id no:122的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列，以及与seq id no:146的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列；jj)与seq id no:147的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列，以及与seq id no:148的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列；kk)
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序列，以及与seq id no:150的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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h
序列，以及与seq id no:153的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列，以及与seq id no:155的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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l
序列；pp)与seq id no:158的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:159的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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h
序列，以及与seq id no:161的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
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h
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序列，以及与seq id no:167的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列，以及与seq id no:167的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列；vv)与seq id no:165的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:168的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列；ww)与seq id no:166的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％
的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:167的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；xx)与seq id no:166的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:168的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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h
序列，以及与seq id no:170的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列，以及与seq id no:172的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列，以及与seq id no:173的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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h
序列，以及与seq id no:176的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列；ccc)与seq id no:177的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:178的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；ddd)与seq id no:179的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:180的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；eee)与seq id no:181的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:182的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
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序列；fff)与seq id no:183的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:184的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；ggg)与seq id no:185的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:186的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；hhh)与seq id no:187的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:188的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；iii)与seq id no:189的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:190的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至
少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；jjj)与seq id no:191的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:192的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；kkk)与seq id no:193的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:194的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；lll)与seq id no:195的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:196的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列；或者mmm)与seq id no:197的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
h
序列，以及与seq id no:198的氨基酸序列具有至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％的序列同一性的v
l
序列。
[0157]
抗体构建体可以包含来自表1和/或表2的序列。抗体构建体可以包含来自表1的一组cdr序列和/或来自表2的一对v
h
序列和v
l
序列。表1：抗体cdr
表2：抗体v
h
序列和v
l
序列
靶标结合结构域
[0158]
抗体构建体可以进一步包含靶标结合结构域。靶标结合结构域可以包含与靶标结合的结构域。靶标可以是抗原。靶标结合结构域可以包含抗原结合结构域。靶标结合结构域可以是能够与抗原特异性结合的结构域。靶标结合结构域可以是抗体或抗体片段的抗原结合部分。靶标结合结构域可以是抗体的一个或多个片段，其可以保留与抗原特异性结合的能力。靶标结合结构域可以是任何抗原结合片段。靶标结合结构域可以在支架中，其中支架是抗原结合结构域的支持框架。靶标结合结构域可以在支架中包含抗原结合结构域。
[0159]
靶标结合结构域可以包含抗原结合结构域，其是指包含抗原识别部分的抗体的一部分，即，足以赋予抗原识别部分识别和结合靶标，例如抗原(即表位)的抗体的抗原决定可变区。靶标结合结构域可以包含抗体的抗原结合结构域。
[0160]
fv可以是包含完整的抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。该区可以由紧密的非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在该构型中，每个可变结构域的三个cdr可以相互作用以在v
h
‑
v
l
二聚体的表面上限定抗原结合位点。单个可变结构域(或仅包含对抗原具有特异性的三个cdr的fv的一半)可以识别并结合抗原，但亲和力低于整个结合位点。
[0161]
靶标结合结构域可以与抗原结合结构域至少80％相同，所述抗原结合结构域选自但不限于：单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体或其功能片段例如重链可变结构域(v
h
)和轻链可变结构域(v
l
)、单链可变片段(scfv)、或darpin、affimer、高亲合性多聚体、打结素、单抗体、亲和钳、胞外域、受体胞外域、受体、细胞因子、配体、免疫细胞因子、t细胞受体或重组t细胞受体。
[0162]
靶标结合结构域可以连接至抗体构建体。例如，抗体构建体可以与靶标结合结构域融合以产生抗体构建体靶标结合域融合物。抗体构建体
‑
靶标结合结构域融合物可以是靶标结合结构域的核酸序列与抗体构建体的核酸序列框内表达的结果。抗体构建体
‑
靶标结合结构域融合物可以是编码具有靶标结合结构域的抗体构建体的框内遗传核苷酸序列或连续肽序列的结果。作为另一个实例，靶标结合结构域可以连接至抗体构建体。靶标结合结构域可以通过化学缀合连接至抗体构建体。靶标结合结构域可以连接至fc区的末端。靶
标结合结构域可以连接至fc结构域的末端。靶标结合结构域可以连接至抗体构建体的末端。靶标结合结构域可以连接至抗体的末端。靶标结合结构域可以连接至抗体的轻链。靶标结合结构域可以连接至抗体轻链的末端。靶标结合结构域可以连接至抗体的重链。靶标结合结构域可以连接至抗体重链的末端。末端可以是c
‑
末端。抗体构建体可以连接至1、2、3和/或4个靶标结合结构域。靶标结合结构域可以将抗体构建体引导至例如特定细胞或细胞类型。可以选择抗体构建体的靶标结合结构域以识别抗原，例如在免疫细胞上表达的抗原。抗原可以是肽或其片段。抗原可以在抗原呈递细胞上表达。抗原可以在树突细胞、巨噬细胞或b细胞上表达。作为另一个实例，抗原可以是肿瘤抗原。肿瘤抗原可以是本文所述的任何肿瘤抗原。当多个靶标结合结构域连接至抗体构建体时，靶标结合结构域可以结合相同的抗原。当多个靶标结合结构域连接至抗体构建体时，靶标结合结构域可以结合不同的抗原。
[0163]
在某些实施方案中，抗体构建体特异性结合第二抗原。在某些实施方案中，靶标结合结构域在所述fc结构域的c
‑
末端处连接至所述抗体构建体。
[0164]
在某些实施方案中，靶标结合结构域特异性结合与t细胞、b细胞、星状细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、apc、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化的发病机制相关的细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，靶标结合结构域特异性结合与t细胞、apc和/或b细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，靶标结合结构域可以特异性结合与选自clta4、pd
‑
1、ox40、lag
‑
3、gitr、garp、cd25、cd27、pd
‑
l1、tnfr2、icos、41bb、cd70、cd73、cd38或vtcn1中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，靶标结合结构域特异性结合这样的抗原，其为t细胞、b细胞、星状细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、apc、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化的发病机制相关的细胞上的抗原。在某些实施方案中，靶标结合结构域特异性结合这样的抗原，其为t细胞、apc和/或b细胞上的抗原。在某些实施方案中，靶标结合结构域可以特异性结合与选自clta4、pd
‑
1、ox40、lag
‑
3、gitr、garp、cd25、cd27、pd
‑
l1、tnfr2、icos、41bb、cd70、cd73、cd38或vtcn1中的抗原至少80％相同的抗原。接头与抗体构建体的连接
[0165]
本文所述的缀合物可以包含接头，例如肽接头。缀合物和方法中的接头可以不影响缀合物的活性部分(例如，活性部分包括抗原结合结构域、fc结构域、靶标结合结构域、抗体、氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物、抑制剂等)与靶标的结合，所述靶标可以是同源结合伴侣，例如抗原。接头可以在缀合物的不同部分之间，例如在抗体构建体或靶向部分与本公开内容的化合物之间形成连接。在某些实施方案中，缀合物包含多个接头。在缀合物包含多个接头的某些实施方案中，接头可以是相同的接头或不同的接头。
[0166]
接头可以通过抗体构建体靶向部分与接头之间的键结合至抗体构建体或靶向部分。接头可以通过抗肿瘤抗原抗体构建体与接头之间的键结合至抗肿瘤抗原抗体构建体。接头可以结合至抗体构建体的氨基酸序列的末端，或者可以结合至抗体构建体的侧链修饰，例如赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、非天然氨基酸残基或谷氨酸残基的侧链。接头可以结合至抗体构建体的fc区的氨基酸序列的末端，或者可以结合至抗体构建体的fc区的侧链修饰，例如赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、非天然氨基酸残基或谷氨酸残基的侧链。接头可以结合至抗体构建体的fc结构域的氨基酸序列的末端，或者可以结合至抗体构建体的fc结构域的侧链修饰，例如赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、非天然氨基酸残基或谷
氨酸残基的侧链。
[0167]
接头可以在铰链半胱氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在轻链恒定结构域赖氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在轻链中的工程化半胱氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在fc区赖氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在fc结构域赖氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在fc区半胱氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在fc结构域半胱氨酸处与抗体构建体结合。接头可以在轻链谷氨酰胺(例如工程化谷氨酰胺)处与抗体构建体结合。接头可以在工程化至轻链的非天然氨基酸处与抗体构建体结合。接头可以在工程化至重链的非天然氨基酸处与抗体构建体结合。氨基酸可以工程化至抗体构建体(例如，缀合物的接头)的氨基酸序列中。可以将工程化的氨基酸添加到现有氨基酸的序列中。工程化的氨基酸可以取代氨基酸序列中的一个或多个现有氨基酸。
[0168]
接头可以通过抗体构建体上的硫氢基与抗体构建体缀合。接头可以通过抗体构建体上的伯胺与抗体构建体缀合。接头可以通过抗体构建体上的非天然氨基酸的残基(例如酮部分)与抗体构建体缀合。
[0169]
在某些实施方案中，当一个或多个接头例如在构建体上的位点处与抗体构建体共价结合时，抗体构建体的fc结构域可以与fc受体结合。在某些实施方案中，与接头结合的抗体构建体或与结合至氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的接头结合的抗体构建体保留了抗体的fc结构域与fc受体结合的能力。在某些实施方案中，当接头与抗体构建体连接时，与接头结合的抗体构建体或与结合至氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的接头结合的抗体构建体的抗原结合结构域可以结合其抗原。在某些实施方案中，当接头在本文所述的位点处与抗体构建体连接时，与接头结合的抗体构建体或与结合至氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的接头结合的抗体构建体的靶标结合结构域可以结合其抗原。
[0170]
在某些实施方案中，接头或结合至氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的接头可以与选自以下的igg fc结构域的氨基酸残基连接：221、222、224、227、228、230、231、223、233、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、246、247、249、250、258、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、278、280、281、283、285、286、288、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、302、305、313、317、318、320、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、396、428或其任何子集，其中fc结构域中氨基酸残基的编号根据kabat中的eu索引。
[0171]
在某些实施方案中，接头或结合至氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的接头不与选自以下的igg fc结构域的氨基酸残基连接：221、222、224、227、228、230、231、223、233、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、246、247、249、250、258、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、278、280、281、283、285、286、288、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、302、305、313、317、318、320、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、396、428或其任何子集，其中fc结构域中氨基酸残基的编号根据kabat中的eu索引。基于赖氨酸的生物缀合
[0172]
抗体构建体可以通过基于赖氨酸的生物缀合而与接头缀合。可以将抗体构建体以约2mg/ml至约10mg/ml的浓度交换到适当的缓冲液(例如磷酸盐、硼酸盐、pbs、组氨酸、tris
‑
乙酸盐)中。可以在搅拌下以溶液的形式添加适当数量当量的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合
物和如本文所述的接头、接头
‑
有效载荷的构建体。取决于接头
‑
有效载荷的物理特性，可以在添加接头
‑
有效载荷之前引入共溶剂以促进溶解性。取决于所观察到的反应性，可以将反应在室温下搅拌2小时至约12小时。反应进程可以通过lc
‑
ms监测。一旦认为反应完成，就可以通过适用的方法除去剩余的接头
‑
有效载荷，并且可以将抗体缀合物交换到期望的制剂缓冲液中。赖氨酸连接的缀合物可以按照以下方案a(缀合物＝抗体缀合物)从ab抗体(mab)和接头
‑
有效载荷(例如10当量)开始来合成。可以通过本文所述的方法确定单体含量和药物与抗体构建体之比(摩尔比)。方案a.基于半胱氨酸的生物缀合
[0173]
抗体构建体可以通过基于半胱氨酸的生物缀合与接头缀合。可以将抗体构建体以约2mg/ml至约10mg/ml的浓度交换到具有适当数量当量的还原剂(例如，二硫苏糖醇或三(2
‑
羧乙基)膦)的适当的缓冲液(例如磷酸盐、硼酸盐、pbs、组氨酸、tris
‑
乙酸盐)中。可以将所得溶液以适当量的时间和温度搅拌，以实现期望的还原。可以在搅拌下以溶液的形式添加氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物和接头的构建体。取决于接头
‑
有效载荷的物理特性，可以在添加接头
‑
有效载荷之前引入共溶剂以促进溶解性。取决于所观察到的反应性，可以将反应在室温下搅拌约1小时至约12小时。反应的进程可以通过液相色谱
‑
质谱法(lc
‑
ms)监测。一旦认为反应完成，就可以通过适用的方法除去剩余的游离接头
‑
有效载荷，并且可以将抗体缀合物交换到期望的制剂缓冲液中。可以使用以下方案b中所述的条件从抗体(mab)和接头
‑
有效载荷(例如7当量)开始合成这样的基于半胱氨酸的缀合物(缀合物＝抗体缀合物)。单体含量和药物
‑
抗体比率可以通过本文所述的方法确定。方案b.化合物
[0174]
以下是可以在本公开内容的方法中使用的化合物及其盐的讨论。式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中所描述的化合物和盐可以与接头l3共价结合，其可以进一步与抗体构建体或靶向部分共价结合。
[0175]
在第一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：环a是未取代或取代的环烷基、未取代或取代的杂环烷基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基，其中当环a被取代时，环a上的取代基在每次出现时独立地选自r4；每个r4选自r
l
和r
20
，或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；r
l
是每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c6亚烷基；其中当y被取代时，y上的取代基在每次出现时独立地选自r5；每个r5选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r5与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；每个z独立地是
‑
nr6s(＝o)2‑
、
‑
s(＝o)2nr6‑
、
‑
oc(＝o)
‑
、
‑
c(＝o)o
‑
、
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
；其中每个r6独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环和未取代或取代的杂环，或者在相邻原子上的r5和r6与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环；l是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；其中当l被取代时，l上的取代基在每次出现时独立地选自r7；每个r7选自
‑
ssr
50
和r
20
；s是1至10；r1选自氢和r
20
；每个r2独立地选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r2与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；m是0至3；r3选自(i)、(ii)、(iii)和(iv)：(i)未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
10
；(ii)未取代或取代的环烷基或者未取代或取代的杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；(iii)包含1个或2个n原子和1个或2个选自o或s的其他杂原子的未取代或取代的多环杂环烷基、未取代或取代的3至5元单环杂环烷基、未取代或取代的6至8元单环杂环烷
基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；以及其中当r3在吡啶的2位、5位或6位时，r3选自(i)、(ii)和(iv)，并且当r3在吡啶的4位时，r3选自(i)、(iii)和(iv)；以及每个r
10
选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r
10
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；每个r
11
选自＝o、＝s和r
20
；r
12
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；q是
‑
or
13
、
‑
nr
13
r
13
、
‑
sr
13
、
‑
cn、
‑
c(＝o)r
14
、
‑
c(＝o)nr
13
r
13
、
‑
s(＝o)r
14
或
‑
s(＝o)2r
14
或
‑
s(＝o)2nr
13
r
13
；r
13
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；r
14
是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个u1是
‑
(cr
15
r
16
)
‑
，其中每个r
15
和r
16
独立地选自氢和r
20
；r是1至5；每个r
20
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
50
独立地选自未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
51
独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者在同一n原子上的两个r
51
与它们所连接的n原子一起形成未取代或取代的含氮杂环；其中当r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
中的任一个被取代时，r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、单环碳环和单环杂环；或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成c＝o或c＝s；每个r
52
独立地选自氢、c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环；以及每个r
53
独立地选自c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基。
[0176]
在第二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1是氢、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的碳环。
[0177]
在第三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1是氢、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
或c1‑
c6烷基。
[0178]
在第四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1是氢、卤素、
‑
cn或
‑
nh2。
[0179]
在第五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1是氢。
[0180]
在第六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1是甲基。
[0181]
在第七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且每个r2独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的碳环。
[0182]
在第八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且每个r2独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环或者未取代或取代的杂环。
[0183]
在第九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且每个r2独立地是
‑
f、
‑
cl、
‑
br、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。
[0184]
在第十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且每个r2独立地是
‑
f、
‑
cl、
‑
br、
‑
cn、
‑
oh、
‑
ome、
‑
nh2、
‑
nme2或c1‑
c6烷基。
[0185]
在第十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且每个r2独立地是
‑
cl或
‑
nh2。
[0186]
在第十二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且r2是卤素。
[0187]
在第十三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且r2是甲基。
[0188]
在第十四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且在相邻原子上的两个r2与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r2与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环苯基或者未取代或取代的单环5元或6元杂芳基。
[0189]
在第十五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1和r2如在方面1至14中任一项所列出的，并且m是0、1、2或3。
[0190]
在第十六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1和r2如在方面1至14中任一项所列出的，并且m是1。
[0191]
在第十七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1和r2如在方面1至14中任一项所列出的，并且m是2。
[0192]
在第十八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1如在方面1至6中任一项所列出的，并且m是0。
[0193]
在第十九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是未取代或取代的环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的单环环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的饱和的单环环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的c3‑
c8环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的不饱和环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基或环辛烯基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的多环环烷基。
[0194]
在第二十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是未取代或取代的杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的饱和杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的单环饱和杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的吖丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢噻吩基、氧硫杂戊环基(oxathiolanyl)、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、二氧杂环己基、噻烷基、二噻烷基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环庚基或氧氮杂环庚基(oxazepanyl)。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的哌啶基或哌嗪基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的不饱和杂环。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的吡咯啉基(二氢吡咯基)、吡唑啉基(二氢吡唑基)、咪唑啉基(二氢咪唑基)、三唑啉基(二氢三唑基)、二氢呋喃基、二氢噻吩基，噁唑啉基(二氢噁唑基)、异噁唑啉基(二氢异噁唑基)、噻唑啉基(二氢噻唑基)、异噻唑啉基(二氢异噻唑基)，噁二唑啉基(二氢噁二唑基)、噻二唑啉基(二氢噻二唑基)、二氢吡啶基、四氢吡啶基、二氢哒嗪基、四氢哒嗪基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、二氢吡嗪基、四氢吡嗪基、吡喃基、二氢吡喃基、噻喃基、二氢噻喃基、二噁英基、二氢二噁英基、噁嗪基、二氢噁嗪基、噻嗪基或二氢噻嗪基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的多环杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的多环杂环烷基，其为桥接的杂环烷基、稠合的杂环烷基或螺杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的多环杂环烷基，其为桥接的杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的多环杂环烷基，其为稠合的杂环烷基。在一些实施方案中，环a是未取代或取代的多环杂环烷基，其为螺杂环烷基。
[0195]
在第二十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是：
其中：w1是n或cr
21
；r
21
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(杂环)；w2是nr
22
、o、s或s(＝o)2；r
22
是氢、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(杂环)；每个u2、u2'、u3和u3'是c(r
23
)2；每个r
23
独立地是氢或r
20
；以及p1、p2、p3和p4各自独立地是1至3。
[0196]
在第二十二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a如在方面21中所列出的。在一些这样的实施方案中，w1是n。在一些这样的实施方案中，w1是cr
21
。在一些这样的实施方案中，w1是cr
21
；并且r
21
是氢或c1‑
c6烷基。在一些这样的实施方案中，w1是ch。在一些这样的实施方案中，w2是o。在一些这样的实施方案中，w2是s。在一些这样的实施方案中，w2是s(＝o)2。在一些这样的实施方案中，w2是nr
22
。在一些这样的实施方案中，w2是nr
22
；并且r
22
是氢、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。在一些这样的实施方案中，w2是nr
22
；并且r
22
是氢、boc、fmoc或cbz。在一些这样的实施方案中，w2是nh。在一些实施方案中，w2是nboc。在一些实施方案中，每个r
23
独立地是氢、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。在一些实施方案中，每个r
23
独立地是氢、卤素、
‑
oh、
‑
ome、
‑
nh2或c1‑
c6烷基。在一些实施方案中，每个r
23
是氢。在一些实施方案中，p1是1至3。在一些实施方案中，p1是1至2、1至3或2至3。在一些实施方案中，p1是1、2或3。在一些实施方案中，p2是1至3。在一些实施方案中，p2是1至2、1至3或2至3。在一些实施方案中，p2是1、2或3。在一些实施方案中，p3是1至3。在一些实施方案中，p3是1至2、1至3或2至3。在一些实施方案中，p3是1、2或3。在一些实施方案中，p4是1至3。在一些实施方案中，p4是1至2、1至3或2至3。在一些实施方案中，p4是1、2或3。在一些实施方案中，p1、p2、p3和p4各自独立地是1或2。在一些实施方案中，w1是n；w2是nr
22
；r
22
是氢、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基；每个r
23
独立地是氢、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
和未取代或取代的c1‑
c6烷基；以及p1、p2、p3和p4各自独立地是1
‑
2。在一些这样的实施方案中，环a是在一些实施方案中，环a是
[0197]
在第二十三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是芳基或杂芳基。
[0198]
在第二十四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是未取代或取代的苯基。
[0199]
在第二十五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是取代的苯基。
[0200]
在第二十六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2和m如在方面1至18中任一项所列出的，并且环a是取代或未取代的吡啶基。
[0201]
在第二十七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基。
[0202]
在第二十八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是未取代或取代的苯基。
[0203]
在第二十九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是未取代的苯基。
[0204]
在第三十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是未取代或取代的5元或6元杂芳基。
[0205]
在第三十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是未取代或取代的吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑、噁二唑、噻二唑、四唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪或三嗪。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪或三嗪。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的吡啶。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的哒嗪。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的嘧啶。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的吡嗪。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑、噁二唑、噻二唑或四唑。
[0206]
在第三十二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是未取代或取代的咪唑、三唑或吡啶。
[0207]
在第三十三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m和环a如在方面1至26中任一项所列出的，并且r3是多环芳基或杂芳基。在一些实施方案中，r3是双环芳基或杂芳基。在一些实施方案中，r3是萘基。在一些实施方案中，r3是吲哚、异吲哚、吲哚嗪、吲唑、苯并咪唑、氮杂吲哚、氮杂吲唑、嘌呤、苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并[b]噻吩、苯并[c]噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、喹啉、异喹啉、喹喔啉、酞嗪、喹唑啉、噌啉、萘啶、吡啶并嘧啶、吡啶并吡嗪或蝶啶。
[0208]
在第三十四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a和r3如在方面1至28和30至33中任一项所列出的，并且每个r
10
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。
[0209]
在第三十五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a和r3如在方面1至28和30至33中任一项所列出的，并且每个r
10
独立地是
‑
f、
‑
cl、
‑
br、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。
[0210]
在第三十六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a和r3如在方面1至28和30至33中任一项所列出的，并且每个r
10
独立地是
‑
or
50
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。
[0211]
在第三十七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a和r3如在方面1至28和30至33中任一项所列出的，并且每个r
10
独立地是
‑
oc1‑
c6烷基或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。
[0212]
在第三十八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a和r3如在方面1至28和30至33中任一项所列出的，并且每个r
10
独立地是甲基或甲氧基。
[0213]
在第三十九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a和r3如在方面1至28和30至33中任一项所列出的，并且在相邻原子上的两个r
10
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r
10
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环杂环。
[0214]
在第四十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是是
[0215]
在第四十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是未取代或取代的环烷基或者未取代或取代的杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的饱和的杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的单环杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的单环饱和的杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的吖
丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢噻吩基、环丁砜基、氧硫杂戊环基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、二氧杂环己基、噻烷基、二噻烷基、吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环庚基、硫代吗啉基二氧化物、氧氮杂环庚基、硫氮杂环庚基、oxazocanl和硫氮杂环辛基(thiazocanyl)。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的哌啶基或哌嗪基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的不饱和杂环。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的吡咯啉基(二氢吡咯基)、吡唑啉基(二氢吡唑基)、咪唑啉基(二氢咪唑基)、三唑啉基(二氢三唑基)、二氢呋喃基、二氢噻吩基，噁唑啉基(二氢噁唑基)、异噁唑啉基(二氢异噁唑基)、噻唑啉基(二氢噻唑基)、异噻唑啉基(二氢异噻唑基)，噁二唑啉基(二氢噁二唑基)、噻二唑啉基(二氢噻二唑基)、二氢吡啶基、四氢吡啶基、二氢哒嗪基、四氢哒嗪基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、二氢吡嗪基、四氢吡嗪基、吡喃基、二氢吡喃基、噻喃基、二氢噻喃基、二噁英基、二氢二噁英基、噁嗪基、二氢噁嗪基、噻嗪基或二氢噻嗪基。
[0216]
在第四十二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是取代或未取代的吗啉基、硫代吗啉基、氮杂环庚基、硫代吗啉基二氧化物或氧氮杂环庚基。
[0217]
在第四十三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是未取代或取代的环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的单环环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的饱和的单环环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的c3‑
c8环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的不饱和环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基或环辛烯基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的多环环烷基。
[0218]
在第四十四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是未取代或取代的多环杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的多环杂环烷基，其为桥接的杂环烷基、稠合的杂环烷基或螺杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的多环杂环烷基，其为桥接的杂环烷基或螺杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的多环杂环烷基，其为桥接的杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的多环杂环烷基，其为稠合的杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的多环杂环烷基，其为螺杂环烷基。
[0219]
在第四十五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是未取代或取代的3至5元单环杂环烷基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的3至5元单环杂环烷基，其选自吖丙啶基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢噻吩基和环丁砜基。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的6至8元单环杂环烷基，其包含1个或2个n原子和1个或2个选自o或s的其他杂原子。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的6至8元单环杂环烷基，其包含1个n原子和1个选自o或s的其他杂原子。在一些实施方案中，r3是未取代或取代的6至8元单环杂环烷基，其选自吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基二氧化物、氧氮杂环庚基、硫氮杂环庚基、氧氮杂环辛基和硫氮杂环辛基。
[0220]
在第四十六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1
至26的任一项中列出，并且r3是未取代或取代的吗啉基、未取代或取代的硫代吗啉基或者未取代或取代的氧氮杂环庚基。
[0221]
在第四十七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是未取代的吗啉基。
[0222]
在第四十八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是通过r3中的n原子连接的未取代或取代的吗啉基、未取代或取代的硫代吗啉基或者未取代或取代的氧氮杂环庚基。
[0223]
在第四十九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是通过r3中的n原子连接的未取代的吗啉基、未取代或取代的硫代吗啉基或者未取代或取代的氧氮杂环庚基。
[0224]
在第五十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是通过r3中的n原子连接的未取代的吗啉基。
[0225]
在第五十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3如在方面41至46和48至49中任一项所列出的，其中每个r
11
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(杂环)。在一些实施方案中，每个r
11
独立地是
‑
f、
‑
cl、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)。在一些实施方案中，当r
11
被取代时，r
11
上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
o
‑
c1‑
c6烷基、
‑
o
‑
苄基、
‑
co2h、
‑
co2‑
c1‑
c6烷基、
‑
c(＝o)
‑
c1‑
c6烷基、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nhc(＝o)
‑
c1‑
c6烷基、
‑
nhc(＝o)obn、
‑
nhc(＝o)o
‑
c1‑
c6烷基、
‑
so2nr
52
r
52
、c1‑
c6烷基或c1‑
c6卤代烷基；并且每个r
52
独立地选自氢或c1‑
c6烷基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环。在一些实施方案中，每个r
11
独立地是
‑
ch3、
‑
och3、
‑
ch2oh、
‑
ch2nh2、
‑
ch2och3、
‑
s(＝o)2ch3、
‑
ch2ph、
‑
c(＝o)nh2或
‑
c(＝o)och2ch3。在一些实施方案中，在同一碳原子上的两个r
11
一起形成c＝o。
[0226]
在第五十二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是是
[0227]
在第五十三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是
[0228]
在第五十四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是在一些这样的实施方案中，r
12
是氢或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。在一些这样的实施方案中，r
12
是氢或c1‑
c4烷基。在一些这样的实施方案中，r
12
是氢或甲基。在一些这样的实施方案中，r
12
是氢。在一些这样的实施方案中，r
12
是甲基。在一些这样的实施方案中，每个r
15
和r
16
独立地是氢、
‑
f、
‑
cl、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(杂环)。在一些这样的实施方案中，每个r
15
和r
16
独立地是氢、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)。在一些这样的实施方案中，每个r
15
独立地是氢或者未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r
16
独立地是氢、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)。在一些这样的实施方案中，每个r
15
独立地是氢或者未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r
16
独立地是
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的
‑
c1‑
c2亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c2亚烷基
‑
杂环。在一些这样的实施方案中，每个r
15
独立地是氢或者未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r
16
独立地是
‑
ch3、
‑
ch(ch3)2、
‑
ch(ch3)ch2ch3、
‑
ch2ch(ch3)2、
‑
ch2ch2sch3、
‑
ch2oh、
‑
ch(oh)ch3、
‑
ch2c(＝o)nh2、
‑
ch2ch2c(＝o)nh2、
‑
ch2sh、
‑
ch2ch2ch2ch2nh2、
‑
ch2c(＝o)oh、
‑
ch2ch2c(＝o)oh、在一些这样的实施方案中，r是1至5。在一些这样的实施方案中，r是1至2、1至3、1至4、1至5、2至3、2至4、2至5、3至4、3至5或4至5。
在一些这样的实施方案中，r是1、2、3、4或5。在一些这样的实施方案中，r是1、2或3。在一些这样的实施方案中，q是
‑
or
13
、
‑
nr
13
r
13
、
‑
sr
13
、
‑
cn、
‑
c(＝o)nr
13
r
13
或
‑
s(＝o)2nr
13
r
13
；r
13
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；并且r
14
是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。在一些这样的实施方案中，q是
‑
or
13
、
‑
cn或
‑
c(＝o)nr
13
r
13
；并且r
13
是氢或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。在一些这样的实施方案中，q是
‑
och3、
‑
cn或
‑
c(＝o)nh2。在一些这样的实施方案中，q是
‑
or
13
；并且r
13
是c1‑
c6烷基。
[0229]
在第五十五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是在一些这样的实施方案中，r
16
是氢、
‑
f、
‑
cl、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(杂环)。在一些这样的实施方案中，r
16
是氢、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)。在一些这样的实施方案中，r
16
是氢、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6烷基(碳环)。在一些这样的实施方案中，r
16
是
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的
‑
c1‑
c2亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c2亚烷基
‑
杂环。在一些这样的实施方案中，r
16
是
‑
ch3、
‑
ch(ch3)2、
‑
ch(ch3)ch2ch3、
‑
ch2ch(ch3)2、
‑
ch2ch2sch3、
‑
ch2oh、
‑
ch(oh)ch3、
‑
ch2c(＝o)nh2、
‑
ch2ch2c(＝o)nh2、
‑
ch2sh、
‑
ch2ch2ch2ch2nh2、
‑
ch2c(＝o)oh、
‑
ch2ch2c(＝o)oh、
[0230]
在第五十六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、m、环a在方面1至26的任一项中列出，并且r3是是
[0231]
在第五十七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且每个r4独立地是r
l
或r
20
。
[0232]
在第五十八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方
面1至56中任一项所列出的，并且在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的6元单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成哌啶或n
‑
boc哌啶。
[0233]
在第五十九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且每个r4独立地是r
l
、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。在一些实施方案中，每个r4独立地是r
l
、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的杂环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。在一些实施方案中，每个r4独立地是r
l
、
‑
f、
‑
cl、
‑
br、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的杂环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。
[0234]
在第六十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且至少一个r4是r
l
。在一些实施方案中，一个r4是r
l
。
[0235]
在第六十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且一个r4是r
l
，其中每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c2亚烷基；并且每个r5独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。
[0236]
在第六十二方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且一个r4是r
l
，其中每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c2亚烷基；并且每个r5独立地是
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的
‑
c1‑
c2亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c2亚烷基
‑
杂环。
[0237]
在第六十三方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且一个r4是r
l
，其中每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c2亚烷基；并且每个r5独立地是
‑
ch3、
‑
ch(ch3)2、
‑
ch(ch3)ch2ch3、
‑
ch2ch(ch3)2、
‑
ch2ch2sch3、
‑
ch2oh、
‑
ch(oh)ch3、
‑
ch2c(＝o)nh2、
‑
ch2ch2c(＝o)nh2、
‑
ch2sh、
‑
ch2ch2ch2ch2nh2、
‑
ch2c(＝o)oh、
‑
ch2ch2c(＝o)oh、
[0238]
在第六十四方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且一个r4是r
l
，其中每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c2亚烷基；并且每个r5是
‑
ch3。在一些实施方案中，一个r4是r
l
，其中每个y独立地是未取代的c1‑
c2亚烷基。
[0239]
在第六十五方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，一个r4是r
l
，y和r5在方面1至64的任一项中列出；每个z独立地
是
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
；并且每个r6独立地选自氢或者未取代或取代的c1‑
c6烷基。在一些这样的方面中，每个r6独立地选自氢或甲基。在一些这样的方面中，每个z独立地是
‑
c(＝o)nh
‑
或
‑
nhc(＝o)
‑
。
[0240]
在第六十六方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，一个r4是r
l
，y和r5在方面1至64的任一项中列出，其中每个z独立地是
‑
nr6s(＝o)2‑
、
‑
s(＝o)2nr6‑
、
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
；并且在相邻原子上的r5和r6与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环。在一些这样的方面中，其中每个z独立地是
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
，在相邻原子上的r5和r6与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的吡咯烷。
[0241]
在第六十七方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，一个r4是r
l
，y、z、r5和r6在方面1至66的任一项中列出，其中一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；并且每个r7独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
ssr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环或者未取代或取代的杂环；并且每个r7独立地是
‑
or
50
、
‑
ssr
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的碳环。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r7独立地是
‑
or
50
、
‑
ssr
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的碳环。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r7独立地是
‑
oh、
‑
ome、
‑
oph、
‑
obn、
‑
oc6h4c(＝o)me、
‑
ss
‑
ph、
‑
ss
‑
吡啶
‑2‑
基、
‑
nh2、
‑
nhme、
‑
nme2、
‑
nhboc、
‑
nhcbz、
‑
nmeboc、
‑
nmecbz、
‑
c(＝o)me、
‑
c(＝o)ph、
‑
c(＝o)oh、
‑
c(＝o)obn、
‑
c(＝o)nh2、
‑
nhc(＝o)me、c1‑
c6烷基或碳环。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r7独立地是
‑
oh、
‑
ome、
‑
o
‑
tbu、
‑
oph、
‑
obn、
‑
oc6h4c(＝o)me、
‑
ss
‑
ph、
‑
ss
‑
吡啶
‑2‑
基、
‑
nh2、
‑
nhme、
‑
nme2、
‑
nhboc、
‑
nhcbz、
‑
nhfmoc、
‑
nmefmoc、
‑
nmeboc、
‑
nmecbz、
‑
c(＝o)me、
‑
c(＝o)ph、
‑
c(＝o)oh、
‑
c(＝o)obn、
‑
c(＝o)otbu、
‑
c(＝o)nh2、
‑
nhc(＝o)me、c1‑
c6烷基或碳环。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的c1‑
c6烷基；并且每个r7独立地是
‑
o
‑
tbu、
‑
oc6h4c(＝o)me、
‑
ss
‑
吡啶
‑2‑
基、
‑
nh2、
‑
nhme、
‑
nhboc、
‑
nhcbz、
‑
nhfmoc、
‑
c(＝o)me、
‑
c(＝o)ph、
‑
c(＝o)oh或
‑
c(＝o)obn。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的碳环；并且每个r7独立地是
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c1‑
c6烷基或者未取代或取代的碳环。在这样的一些实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的碳环；并且每个r7独立地是
‑
oh、
‑
ome、
‑
oph、
‑
obn、
‑
oc6h4c(＝o)me、
‑
nh2、
‑
nhme、
‑
nme2、
‑
nhboc、
‑
nhcbz、
‑
nmeboc、
‑
nmecbz、
‑
c(＝o)me、
‑
c(＝o)ph、
‑
c(＝o)oh、
‑
c(＝o)obn、
‑
c(＝o)nh2、
‑
nhc(＝o)me、c1‑
c6烷基或碳环。在一些这样的实施方案中，一个r4是r
l
，其中l是未取代或取代的碳环；并且每个r7独立地是
‑
c(＝o)me。
[0242]
在第六十八方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，y、z、r5、r6、r7和l在方面1至67的任一项中列出，并且s是1至10。在一些这样的实施方案中，s至少是1。在一些这样的实施方案中，s至多是10。在一些实施方案中，s是1至2、1至3、1至4、1至5、1至6、1至7、1至8、1至9、1至10、2至3、2至4、2至5、2至6、2至7、2至8、2至9、2至10、3至4、3至5、3至6、3至7、3至8、3至9、3至10、4至5、4至6、4至7、4至8、4至9、4至10、5至6、5至7、5至8、5至9、5至10、6至7、6至8、6至9、6至10、7至8、7至9、7至10、8至9、8至10或9至10。在一些这样的实施方案中，s是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，s是1至2。在一些这样的实施方案中，s是1。在一些这样的实施方案中，s是2。
[0243]
在第六十九方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4、m和a如在方面1至69中任一项所列出的，其中当r4被取代时，r4上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
o
‑
c1‑
c6烷基、
‑
o
‑
苄基、
‑
co2h、
‑
co2‑
c1‑
c6烷基、
‑
c(＝o)
‑
c1‑
c6烷基、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nhc(＝o)
‑
c1‑
c6烷基、
‑
nhc(＝o)obn、
‑
nhc(＝o)o
‑
c1‑
c6烷基、
‑
so2nr
52
r
52
、c1‑
c6烷基或c1‑
c6卤代烷基；或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成c＝o；并且每个r
52
独立地选自氢和c1‑
c6烷基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环。
[0244]
在第七十方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4、m和a如在方面1至69中任一项所列出的，其中当r4被取代时，r4上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
o
‑
c1‑
c6烷基、
‑
co2h、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nhc(＝o)
‑
c1‑
c6烷基、c1‑
c6烷基或c1‑
c6卤代烷基；并且每个r
52
独立地选自氢或c1‑
c6烷基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环。
[0245]
在第七十一方面中，本文公开了由式(i)表示的化合物，其中r1、r2、r3、m和a如在方面1至56中任一项所列出的，并且每个r4独立地是
[0246]
在第七十二方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的：
其中：环b是芳基或杂芳基；并且n是0至5。
[0247]
在第七十三方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是单环芳基或杂芳基。
[0248]
在第七十四方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是苯基或者5元或6元杂芳基。
[0249]
在第七十五方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是苯基。
[0250]
在第七十六方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是5元或6元杂芳基。
[0251]
在第七十七方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑、噁二唑、噻二唑、四唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪或三嗪。
[0252]
在第七十八方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪或三嗪。
[0253]
在第七十九方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是哒嗪。
[0254]
在第八十方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是嘧啶。
[0255]
在第八十一方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是吡嗪。
[0256]
在第八十二方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、吡唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、三唑、噁二唑、噻二唑或四唑。
[0257]
在第八十三方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是多环芳基或杂芳基。
[0258]
在第八十四方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是双环芳基或杂芳基。
[0259]
在第八十五方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且其中环b是萘基。
[0260]
在第八十六方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的并且其中环b是吲哚、异吲哚、吲哚嗪、吲唑、苯并咪唑、氮杂吲哚、氮杂吲唑、嘌呤、苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并[b]噻吩、苯并[c]噻吩、苯并噁唑、苯并异噁唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、喹啉、异喹啉、喹喔啉、酞嗪、喹唑啉、噌啉、萘啶、吡啶并嘧啶、吡啶并吡嗪或蝶啶。
[0261]
在第八十七方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，环b如在方面72至86中任一项所列出的，并且其中n是0至5。
[0262]
在第八十八方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，环b如在方面72至86中任一项所列出的，并且其中
n是0至1、0至2、0至3、0至4、0至5、1至2、1至3、1至4、1至5、2至3、2至4、2至5、3至4、3至5或4至5。
[0263]
在第八十九方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，环b如在方面72至86中任一项所列出的，并且其中n是1至3。
[0264]
在第九十方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，环b如在方面72至86中任一项所列出的，并且其中n是1至5。
[0265]
在第九十一方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3、r4和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，环b如在方面72至86中任一项所列出的，并且其中是为1。
[0266]
在第九十二方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，环b是芳基或杂芳基(包括苯基以及本文对于环b所描述的任何其他芳基和杂芳基)，并且其中在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的6元单环杂环。在一些实施方案中，在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成哌啶或n
‑
boc哌啶。在一些实施方案中，是是
[0267]
在第九十三方面中，本文公开了由式(ii)表示的化合物，其中r1、r2、r3和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且是
[0268]
在第九十四方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、r4、a、n和m如对于式(i)在方面1至71中任一项所列出的，并且式(i)的化合物由式(i
‑
a)、式(i
‑
b)、式(i
‑
c)或式(i
‑
d)表示：
在某些实施方案中，对于式(i)、(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)或(i
‑
d)的化合物或盐，当a是苯基且r3是吗啉时，r4不是被
‑
or
52
取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(i)、(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)或(i
‑
d)的化合物或盐，当a是苯基且r3是吗啉时，r4不是被
‑
oh取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(i)、(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)或(i
‑
d)的化合物或盐，当a是苯基且r3是吗啉时，r4不是羟烷基。
[0270]
在第九十五方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、r4、b、n和m如在方面1至93中任一项所列出的，并且式(i)或式(ii)的化合物由(ii
‑
a)、式(ii
‑
b)、式(ii
‑
c)或式(ii
‑
d)表示：
[0271]
在某些实施方案中，对于式(ii)、(iia)、(iib)、(iic)或(iid)的化合物或盐，当b是苯基且r3是吗啉时，r4不是被
‑
or
52
取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(ii)、(iia)、(iib)、(iic)或(iid)的化合物或盐，当b是苯基且r3是吗啉时，r4不是被
‑
oh取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(ii)、(iia)、(iib)、(iic)或(iid)的化合物或盐，当b是苯基且r3是吗啉时，r4不是羟烷基。
[0272]
在第九十六方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且每个r4独立地选自卤素、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的碳环、未取代
或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环和取代的c1‑
c6烷基，条件是c1‑
c6烷基被
‑
nr
52
r
52
，以及
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代，或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环，或者可选地，每个r4独立地选自卤素、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、未取代或取代的杂环和取代的c1‑
c6烷基，条件是c1‑
c6烷基被
‑
nr
52
r
52
，以及
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代；或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。
[0273]
在第九十七方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且每个r4独立地选自卤素、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、包含1个或2个独立地选自氮和氧的环杂原子的未取代或取代的5元或6元饱和的单环杂环和取代的c1‑
c6烷基，条件是c1‑
c6烷基被
‑
nr
52
r
52
，以及
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代；或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环碳环或者未取代或取代的6元单环杂环，其中所述杂环包含1个或2个独立地选自氮和氧的环杂原子。
[0274]
在第九十八方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且每个r4独立地选自卤素、
‑
or
50
、
‑
nr
51
r
51
、包含1个或2个独立地选自氮和氧的环杂原子的未取代或取代的5元或6元饱和的单环杂环和取代的c1‑
c6烷基，条件是c1‑
c6烷基被
‑
nr
52
r
52
，以及
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代；或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环碳环或者未取代或取代的6元单环杂环，其中所述杂环包含1个或2个独立地选自氮和氧的环杂原子。
[0275]
在第九十九方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且r4如在方面95至98中任一项所列出的，并且至少一个r4选自取代的c1‑
c6烷基。在一些方面中，所述c1‑
c6烷基取代基中的每个r
52
独立地选自h和c1‑3烷基。在一些方面中，所述c1‑
c6烷基取代基中的每个r
52
独立地选自h和甲基。
[0276]
在第一百方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且r4如在方面95至99中任一项所列出的，至少一个r4是or
50
。在一些方面中，
‑
or
50
中的r
50
独立地选自未取代或取代的c1‑
c6烷基、包含选自氮的一个环杂原子的未取代或取代的4元、5元或6元饱和杂环或者未取代或取代的4元、5元或6元饱和碳环。在一些方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是取代的c1‑
c6烷基时，在所述烷基上的取代基在每次出现时独立地选自co2r
52
、
‑
or
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
、(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
和
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
nr
52
r
52
。在一些方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是取代的c1‑
c6烷基时，在所述c1‑
c6烷基上的取代基在每次出现时独立地选自
‑
co2r
52
、
‑
or
52
和
‑
nr
52
r
52
。在一些方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是取代的c1‑
c6烷基时，所述c1‑
c6烷基被
‑
nr
52
r
52
以及任选地co2r
52
和
‑
or
52
中的一个取代。当
‑
or
50
中的r
50
是取代的c1‑
c6烷基时，取代的c1‑
c6烷基的每个r
52
可以，例如，独立地选自h和c1‑3烷基(例如，甲基或乙基)。当
‑
or
50
中的r
50
是杂环或碳环时，
‑
or
50
中的r
50
可以是，例如，未取代或取代的吡咯烷、未取代或取代的哌啶、未取代或取代的氮杂环丁烷或者未取代或取代的环丁基。在一些方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是杂环或碳环时，在所述杂环和碳环上的取
代基独立地选自co2r
52
、
‑
or
52
、
‑
nr
52
r
52
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基，其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自
‑
or
52
、
‑
co2r
52
或
‑
nr
52
r
52
。在一些方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是杂环或碳环时，在所述杂环和碳环上的取代基独立地选自co2r
52
、
‑
or
52
、
‑
nr
52
r
52
或未取代的c1‑
c6烷基。在一些方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是杂环或碳环时，在所述杂环和碳环上的取代基独立地选自
‑
nr
52
r
52
。在所述杂环或碳环上的取代基中的每个r
52
可以，例如，独立地选自h和c1‑3烷基(例如，甲基或乙基)。在一些示例性的方面中，当
‑
or
50
中的r
50
是杂环时，r
50
在碳环原子处连接至
‑
or
50
中的氧原子。
[0277]
在第一百零一方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且r4如在方面95至100中任一项所列出的，并且至少一个r4独立地选自5元或6元未取代或取代的饱和的单环杂环。在一些方面中，当r4是取代的杂环时，在所述杂环上的取代基独立地选自co2r
52
、
‑
or
52
、
‑
nr
52
r
52
或者未取代或取代的c1‑
c6烷基，其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
nr
52
r
52
和苯基。在一些方面中，当r4是取代的杂环时，在所述杂环上的取代基独立地选自co2r
52
、
‑
or
52
、
‑
nr
52
r
52
、未取代的c1‑
c6烷基和苯基。在所述杂环上的取代基中的每个r
52
可以，例如，独立地选自h和c1‑3烷基。
[0278]
在第一百零二方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且r4如在方面95至101中任一项所列出的，并且至少一个r4独立地选自
‑
nr
51
r
51
。在一些方面中，
‑
nr
51
r
51
中的每个r
51
独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基和未取代或取代的饱和的含氮杂环；或者两个r
51
与它们所连接的n原子一起形成未取代或取代的含氮杂环。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的r
51
是杂环时，其为饱和的取代或未取代的5元或6元杂环，所述杂环包含一个选自氮的环杂原子。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的r
51
是取代的c1‑
c6烷基时，在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自or
52
、
‑
nr
52
r
52
和
‑
co2r
52
，或者同一碳原子的两个取代基一起形成c＝o；以及当
‑
nr
51
r
51
中的r
51
是杂环时，在所述杂环上的取代基独立地选自or
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
co2r
52
、未取代的c1‑
c6烷基或被独立地选自or
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
co2r
52
的取代基取代的c1‑
c6烷基。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的r
51
是杂环时，其为未取代的杂环。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的r
51
是取代的c1‑
c6烷基时，c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自or
52
、
‑
nr
52
r
52
和
‑
co2r
52
。
‑
nr
51
r
51
中的每个r
51
可以，例如，独立地选自氢和未取代或取代的c1‑
c6烷基，其中取代基独立地选自or
52
、
‑
nr
52
r
52
和
‑
co2r
52
。在一些方面中，所述烷基取代基和所述杂环取代基中的r
52
独立地选自氢和c1‑3烷基。在一些方面中，所述烷基取代基和所述杂环取代基中的r
52
独立地选自氢和甲基。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的两个r
51
与它们所连接的n原子一起时，形成未取代或取代的5元或6元饱和的含氮杂环。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的两个r
51
与它们所连接的n原子一起时，形成未取代或取代的5元或6元饱和的含氮杂环，其中所述取代基独立地选自
‑
nr
52
r
52
、未取代或取代的c1‑
c6烷基和未取代或取代的饱和的单环含n杂环，或者同一碳原子的两个取代基一起形成c＝o。在一些方面中，在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自or
52
、nr
52
r
52
和co2r
52
，并且在所述饱和的单环含n杂环上的取代基独立地选自or
52
、nr
52
r
52
、co2r
52
和未取代或取代的c1‑
c6烷基，其中所述c1‑
c6烷基取代基独立地选自or
52
、nr
52
r
52
和co2r
52
。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的两个r5与它们所连接的n原子一起时，形成6元取代的饱和的含氮杂环，其中取代基是环b的间位或对位。在一些方面中，当
‑
nr
51
r
51
中的两个r
51
与它们所连接的n原子一起形成6元环
时，形成取代或未取代的哌嗪或者取代或未取代的哌啶。每个r
52
可以，例如，独立地选自氢和c1‑3烷基(例如，甲基或乙基)。
[0279]
在第一百零三方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且r4如在方面95至102中任一项所列出的，并且至少一个r4是卤素(例如，氯)。
[0280]
在第一百零四方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且r4如在方面95至103中任一项所列出的，并且其中当环b被取代时，它至少在吡嗪的对位被取代。在一些方面中，当环b被取代时，它在吡嗪的间位被取代。
[0281]
在第一百零五方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、a、b、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环碳环或者具有一个或两个选自氧和氮的环杂原子的未取代或取代的6元单环杂环，并且在所述碳环和杂环上的取代基独立地选自nr
52
r
52
、or
52
或
‑
co2r
52
、未取代的c1‑
c6烷基和取代的c1‑
c6烷基，其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自nr
52
r
52
、or
52
和
‑
co2r
52
。
[0282]
在第一百零六方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，a或b是苯基，并且r4是以下中的至少一个：
其中r
51
和r
52
如对于式i或式ii在本文中列出的。在一些方面中，每个r
51
和r
52
独立地选自氢和c1‑3烷基(例如，甲基或乙基)。
[0283]
在第一百零七方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，a或b是苯基，并且r4是以下中的至少一个：
[0284]
在第一百零八方面中，本文公开了一种化合物，其中r1、r2、r3、n和m如对于式(i)和式(ii)在方面1至94中任一项所列出的，并且是
其中r
52
如对于式i或式ii在本文中列出的。在一些方面中，每个r
52
独立地选自氢和c1‑3烷基(例如，甲基或乙基)。
[0285]
本文考虑了以上针对各种变量所描述的基团的任何组合。在整个说明书中，可以选择基团及其取代基以提供稳定的部分和化合物。
[0286]
在某些实施方案中，本文所述的化合物不包含亲电体。在一些实施方案中，亲电体被定义为可以与抗体构建体的部分(诸如，例如，赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、非天然氨基酸残基或谷氨酸残基)反应形成共价键的官能团。在一些实施方案中，亲电体包括共价改性剂。在一些实施方案中，亲电体包括丙烯酰胺、α,β
‑
不饱和羰基、氰基吡啶或卤代硝基苯。
[0287]
在一些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，r3不包括共价改性剂。在一些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，r3不包括丙烯酰胺、α,β
‑
不饱和羰基、氰基吡啶，也不包括卤代硝基苯。在一些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，r3不包括亲电子基团。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，r3不包括：
‑
cn、任选取代的α,β
‑
不饱和羰基和任选取代的c2‑
10
亚烷基。
[0288]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，环a不被
–
ch2ch2oh取代。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，环a不是羟烷基。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，其中环a是苯基，环a在吡嗪的对位不被
–
ch2ch2oh取代。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，其中环a是苯基，环a不被
–
ch2ch2oh取代。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，其中环a是苯基，环a不被羟烷基取代。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，化合物不是或其盐。
[0289]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，环a不被选自以下的基团取代：
–
ch2ch2nh2、
‑
ch2nhboc、
‑
ch2nh2、、、在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，环a不被任选取代的氨基烷基取代。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，其中环a是苯基，环a不被
–
ch2ch2nh2、
‑
ch2nhboc、
‑
ch2nh2、、取代，它们中的任一个在吡嗪的对位。在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，其中环a是苯基、环a不被以下取代：
–
ch2ch2nh2、
‑
ch2nhboc、
‑
ch2nh2、、在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物
或盐，其中环a是苯基，环a不被任选取代的氨基烷基取代。
[0290]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，当环a被任选取代的氨基烷基取代时，环a被至少一个其他取代基取代。
[0291]
在某些实施方案中，本公开内容提供了由式(i
‑
e)表示的化合物或其盐，其中：r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的每一个独立地选自氢、r
l
和r
20
；或者在相邻原子上的r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的两个与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环，其中当所述单环碳环或所述单环杂环被取代时，取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、氨基c1‑
c6烷基
‑
、boc
‑
氨基c1‑
c6烷基
‑
、cbz
‑
氨基c1‑
c6烷基
‑
、单环碳环和单环杂环；或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成＝o或＝s；每个r
52
独立地选自氢、c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环；以及每个r
53
独立地选自c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基。
[0292]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的每一个独立地选自氢、r
l
和r
20
；或者在相邻原子上的r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的两个与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环，其中当所述单环碳环或所述单环杂环被取代时，取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、单环碳环和单环杂环；或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成＝o或＝s；每个r
52
独立地选自氢、c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环；以及每个r
53
独立地选自c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基。
[0293]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
不是
–
ch2ch2oh。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
不是
–
ch2ch2oh、
–
ch2ch2nh2、
‑
ch2nhboc、
‑
ch2nh2、
[0294]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
不是羟烷基。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的每一个不是
–
ch2ch2oh。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的每一个不是羟烷基。
[0295]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，m是0。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r1是氢。
[0296]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的至少两个不是氢。在某些实施方案中，当r
42
是任选取代的氨基烷基时，r
40
、r
41
、r
43
和r
44
中的至少一个不是氢。在某些实施方案中，当r
42
是羟烷基时，r
40
、r
41
、r
43
和r
44
中的至少一个不是氢。
[0297]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
选自氢、卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c3‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者r
42
和r
41
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。
[0298]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
选自氢、卤素、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c3‑
c6烷基、未取代或取代的杂环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者r
42
和r
41
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。
[0299]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
选自氢、
‑
or
50
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
c(＝o)r
50
、未取代或取代的c3‑
c6烷基、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者r
42
和r
41
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。
[0300]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
不是被
‑
or
52
取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
不是被
‑
oh取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
42
不是羟烷基。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的每一个不是被
‑
or
52
取代的烷基。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的每一个不是羟烷基。
[0301]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
42
、r
43
和r
44
中的至少一个是(i)当r
50
是被
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
或
‑
nr
52
c(＝o)or
52
取代的c1‑
c6烷基时的
‑
or
50
；(ii)被
‑
co2r
52
或
‑
or
52
以及
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
和
‑
nr
52
c(＝o)or
52
中的一个取代的c1‑
c6烷基；或者(iii)r
41
和r
42
与它们所连接的苯基环一起形成由以下表示的取代或未取代的环系统：
[0302]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
43
和r
44
独立地选自氢、卤素、
‑
or
50
、
‑
c(＝o)or
51
和未取代或取代的c1‑
c6烷基；或者r
41
和r
42
或r
41
和r
40
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。
[0303]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
43
和r
44
独立地选自氢和
‑
or
50
；或者r
41
和r
42
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环。在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，r
40
、r
41
、r
43
和r
44
各自是氢。
[0304]
在某些实施方案中，对于式(i
‑
e)的化合物或盐，化合物选自：
或其任一个的盐。在某些实施方案中，示例性化合物可以包括，但不限于选自以下的化合物或盐：
或其任一个的盐。
[0306]
本发明中还包括由式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐:其中：环a是未取代或取代的环烷基、未取代或取代的杂环烷基、未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基，其中当环a被取代时，环a上的取代基在每次出现时独立地选自
r4；每个r4选自r
l
和r
20
，或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；r
l
是或每个y独立地是未取代或取代的c1‑
c6亚烷基；其中当y被取代时，y上的取代基在每次出现时独立地选自r5；每个r5选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r5与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；每个z独立地是
‑
nr6s(＝o)2‑
、
‑
s(＝o)2nr6‑
、
‑
oc(＝o)
‑
、
‑
c(＝o)o
‑
、
‑
c(＝o)nr6‑
或
‑
nr6c(＝o)
‑
；其中每个r6独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环和未取代或取代的杂环，或者在相邻原子上的r5和r6与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环杂环；l是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；其中当l被取代时，l上的取代基在每次出现时独立地选自r7；每个r7选自
‑
ssr
50
和r
20
；s是1至10；r1选自氢和r
20
；每个r2独立地选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r2与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；m是0至3；r3选自(i)、(ii)、(iii)和(iv)：(v)未取代或取代的芳基或者未取代或取代的杂芳基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
10
；(vi)未取代或取代的环烷基或者未取代或取代的杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；(vii)包含1个或2个n原子和1个或2个选自o或s的其他杂原子的未取代或取代的多环杂环烷基、未取代或取代的3至5元单环杂环烷基、未取代或取代的6至8元单环杂环烷基；其中当r3被取代时，r3上的取代基在每次出现时独立地选自r
11
；和其中当r3在吡啶的2位、5位或6位时，r3选自(i)、(ii)和(iv)，并且当r3在吡啶的4位时，r3选自(i)、(iii)和(iv)；以及每个r
10
选自r
20
，或者在相邻原子上的两个r
10
与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；
每个r
11
选自＝o、＝s和r
20
；r
12
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；q是
‑
or
13
、
‑
nr
13
r
13
、
‑
sr
13
、
‑
cn、
‑
c(＝o)r
14
、
‑
c(＝o)nr
13
r
13
、
‑
s(＝o)r
14
或
‑
s(＝o)2r
14
或
‑
s(＝o)2nr
13
r
13
；r
13
是氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；r
14
是未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c1‑
c6烯基、未取代或取代的c1‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个u1是
‑
(cr
15
r
16
)
‑
，其中每个r
15
和r
16
独立地选自氢和r
20
；r是1至5；每个r
20
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
50
独立地选自未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；每个r
51
独立地选自氢、未取代或取代的c1‑
c6烷基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环和未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环；或者在同一n原子上的两个r
51
与它们所连接的n原子一起形成未取代或取代的含氮杂环；其中当r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
中的任一个被取代时，r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、未取代或取代的单环碳环、未取代或取代的单环杂环，或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成c＝o或c＝s，并且其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自r
54
，并且在所述碳环和杂环上的取代基独立地选自r
55
；每个r
52
独立地选自氢、c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；或者两个r
52
基团与它们所连接的n原子一起形成含氮杂环；以及每个r
53
独立地选自c1‑
c6烷基、c3‑
c6环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；每个r
54
独立地选自
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
和苯基；每个r
55
独立地选自
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝
o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
和未取代或取代的c1‑
c6烷基，其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自r
54
。
[0307]
式(i)的化合物包括那些化合物：其中r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
中的任一个被取代，r2、r4、r5、r6、r
10
、r
12
、r
13
、r
14
、r
20
、r
50
和r
51
上的取代基在每次出现时独立地选自卤素、
‑
cn、
‑
no2、
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
c(＝o)r
53
、
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
、
‑
nr
52
c(＝o)or
52
、
‑
sr
52
、
‑
s(＝o)r
53
、
‑
so2r
53
、
‑
so2nr
52
r
52
、未取代或取代的c1‑
c6烷基、c1‑
c6卤代烷基、单环碳环、单环杂环，或者在同一碳原子上的两个取代基一起形成c＝o或c＝s；并且其中在所述c1‑
c6烷基上的取代基独立地选自r
54
。
[0308]
式(i)的化合物包括那些化合物：其中当环a是芳基时，环a是取代的并且环a上的取代基在每次出现时独立地选自r4；并且每个r4选自r
20
和或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；并且每个r
20
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的c2‑
c6烯基、未取代或取代的c2‑
c6炔基、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环、或者取代的c1‑
c6烷基；条件是当c1‑
c6烷基被
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
或
‑
nr
52
c(＝o)or
52
取代时，所述c1‑
c6烷基进一步被
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代。
[0309]
式(i)的化合物包括那些化合物：其中当环a是芳基时，环a是取代的并且环a上的取代基在每次出现时独立地选自r4；并且每个r4选自r
20
和或者在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的单环碳环或者未取代或取代的单环杂环；并且每个r
20
独立地是卤素、
‑
cn、
‑
oh、
‑
or
50
、
‑
sh、
‑
sr
50
、
‑
no2、
‑
nr
51
r
51
、
‑
s(＝o)2r
50
、
‑
nr
51
s(＝o)2r
50
、
‑
s(＝o)r
50
、
‑
s(＝o)2nr
51
r
51
、
‑
c(＝o)r
50
、
‑
oc(＝o)r
50
、
‑
c(＝o)or
51
、
‑
oc(＝o)or
51
、
‑
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
oc(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)nr
51
r
51
、
‑
nr
51
c(＝o)r
50
、
‑
nr
51
c(＝o)or
51
、未取代或取代的碳环、未取代或取代的杂环、未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
碳环或者未取代或取代的
‑
c1‑
c6亚烷基
‑
杂环、或者取代的c1‑
c6烷基；条件是当c1‑
c6烷基被
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
或
‑
nr
52
c(＝o)or
52
取代时，所述c1‑
c6烷基进一步被
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代。还包括那些化合物：其中当r
20
是被
‑
or
52
取代的c1‑
c6烷基时，所述c1‑
c6烷基进一步被
‑
c(＝o)nr
52
r
52
、
‑
nr
52
r
52
、
‑
nr
52
c(＝o)r
53
或
‑
nr
52
c(＝o)or
52
中的至少一个取代。还包括那些化合物：其中当r
20
是被
‑
or
52
取代的c1‑
c6烷基时，所述c1‑
c6烷基进一步被
‑
nr
52
r
52
取代。还包括那些化合物：其中r
20
是被
‑
nr
52
r
52
和
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代的c1‑
c6烷基。
[0310]
本发明的示例性化合物包括表14中列出的那些化合物及其盐(包括其药学上可接受的盐)。
[0311]
具有碳
‑
碳双键或碳
‑
氮双键的化学实体可以以z
‑
或e
‑
形式(或者顺式或反式形
intermediates,tetrahedron,1989,45(21),6601
‑
21；以及evans,e.anthony.synthesis of radiolabeled compounds,j.radioanal.chem.,1981,64(1
‑
2),9
‑
32中的各种方法合成氘取代的化合物。
[0318]
氘化的起始材料是容易获得的，并且经历本文所述的合成方法以提供含氘化合物的合成。大量的含氘试剂和构建单元(building block)可从化学供应商(例如aldrich chemical co.)商购获得。
[0319]
本发明的化合物还包括那些化合物、药学上可接受的盐以及这些化合物的具有相同活性类型的活性代谢物的结晶形式和无定形形式，包括例如多晶型物、假多晶型物、溶剂化物、水合物、未溶剂化的多晶型物(包括无水物)、构象多晶型物和化合物的无定形形式，及其混合物。
[0320]
本公开内容包括本文所述的化合物的盐，特别是药学上可接受的盐。具有足够的酸性、足够的碱性或这两种官能团的本公开内容的化合物可以与多种无机碱以及无机酸和有机酸中的任一种反应以形成盐。可选地，固有带电荷的化合物，例如具有季氮的那些化合物，可以与适当的抗衡离子形成盐，例如卤化物，例如溴化物、氯化物或氟化物，特别是溴化物。
[0321]
在一些情况下，本文所述的化合物可以以非对映异构体、对映异构体或其他立体异构形式存在。本文呈现的化合物包括所有非对映异构体、对映异构体和差向异构体形式及其适当的混合物。立体异构体的分离可以通过色谱法或通过形成非对映异构体以及通过重结晶或色谱法或其任何组合分离来进行。(jean jacques,andre collet,samuel h.wilen,“enantiomers,racemates and resolutions”,john wiley and sons,inc.,1981，对于该公开内容通过引用并入本文)。立体异构体也可以通过立体选择性合成来获得。
[0322]
本文所述的方法和组合物包括使用无定形形式以及结晶形式(也称为多晶型物)。本文所述的化合物可以是药学上可接受的盐的形式。同样，在一些实施方案中，这些化合物的具有相同活性类型的活性代谢物也包括在本公开内容的范围内。另外，本文所述的化合物可以以未溶剂化的形式以及以与药学上可接受的溶剂(例如水、乙醇等)一起的溶剂化形式存在。本文呈现的化合物的溶剂化形式也被认为是本文所公开的。
[0323]
在某些实施方案中，化合物或化合物的盐可以是前药，例如其中母体化合物中的羟基以酯或碳酸酯的形式存在，或者母体化合物中存在的羧酸以酯的形式存在。术语“前药”旨在涵盖在生理条件下被转化为本公开内容的药剂的化合物。用于制备前药的一种方法是包括一个或多个选择的部分，这些部分在生理条件下水解以显示期望的分子。在其他实施方案中，前药通过宿主动物例如宿主动物中的特定靶细胞的酶促活性来转化。例如，酯或碳酸酯(例如，醇或羧酸的酯或碳酸酯以及膦酸的酯)是本公开内容的优选前药。
[0324]
本文所述的化合物的前药形式(其中前药在体内被代谢以产生如本文所列出的化合物)包括在权利要求的范围内。在一些情况下，一些本文所述的化合物可以是另一种衍生物或活性化合物的前药。
[0325]
前药通常是有用的，因为在一些情况下，它们可能比母体药物更易于施用。例如，它们可以通过口服施用是生物可利用的，而母体药物则不是。相对于母体药物，前药可能有助于增强化合物的细胞渗透性。与母体药物相比，前药在药物组合物中的溶解度也可能有
所提高。前药可以被设计为可逆的药物衍生物，用作改性剂以增强向位点特异性组织的药物运输或增加细胞内的药物停留。
[0326]
在某些实施方案中，前药可以在细胞内的条件下例如酶促地或化学地转化成母体化合物。在某些实施方案中，母体化合物包含例如由前药水解产生的酸性部分，其可以在细胞内的条件下带电。在特定的实施方案中，一旦前药已经穿过细胞膜进入细胞中，它就转化为母体化合物。在某些实施方案中，相对于前药，母体化合物具有降低的细胞膜渗透性特性，例如降低的亲脂性和增加的亲水性。
[0327]
在特定的实施方案中，具有酸性部分的母体化合物比没有酸性部分的相同化合物在细胞内保留更长的持续时间。
[0328]
相对于没有酸性部分的相同化合物，具有酸性部分的母体化合物可以在细胞内保留(即，药物停留)10％或更长，例如15％或更长，例如20％或更长，例如25％或更长，例如30％或更长，例如35％或更长，例如40％或更长，例如45％或更长，例如50％或更长，例如55％或更长，例如60％或更长，例如65％或更长，例如70％或更长，例如75％或更长，例如80％或更长，例如85％或更长或者甚至90％或更长。
[0329]
在一些实施方案中，前药的设计增加了药剂的亲脂性。在一些实施方案中，前药的设计增加了有效的水溶性。参见，例如，fedorak等,am.j.physiol.,269:g210
‑
218(1995)；mcloed等,gastroenterol,106:405
‑
413(1994)；hochhaus等,biomed.chrom.,6:283
‑
286(1992)；j.larsen和h.bundgaard,int.j.pharmaceutics,37,87(1987)；j.larsen等,int.j.pharmaceutics,47,103(1988)；sinkula等,j.pharm.sci.,64:181
‑
210(1975)；t.higuchi和v.stella,pro
‑
drugs as novel delivery systems,a.c.s.symposium series的第14卷；以及edward b.roche,bioreversible carriers in drug design,american pharmaceutical association and pergamon press,1987，对于此类公开内容全部并入本文)。根据另一个实施方案，本公开内容提供了生产以上限定的化合物的方法。这些化合物可以使用常规技术合成。有利地，这些化合物方便地由容易获得的起始材料合成。
[0330]
用于合成本文所述的化合物的合成化学转化和方法是本领域已知的，并且包括例如在r.larock,comprehensive organic transformations(1989)；t.w.greene和p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis,第二版(1991)；l.fieser和m.fieser,fieser and fieser's reagents for organic synthesis(1994)；以及l.paquette编辑,encyclopedia of reagents for organic synthesis(1995)中所描述的那些。接头
[0331]
本文所述的化合物和盐可以与接头，例如肽接头或不可切割接头结合。在某些实施方案中，接头也与抗体构建体结合并且可以被称为抗体缀合物或缀合物。缀合物的接头可以不影响缀合物的活性部分，例如抗原结合结构域、fc结构域、靶标结合结构域、抗体、氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物等与抗原的结合。缀合物可以包含多个接头，每个接头具有一个或多个所连接的化合物。这些接头可以是相同的接头或不同的接头。
[0332]
接头可以是短的、柔性的、刚性的、可切割的、不可切割的、亲水的或疏水的。接头可包含具有不同特性的区段，例如柔性区段或刚性区段。接头可以对细胞外环境是化学稳
定的，例如在血流中化学稳定，或者可以包括不稳定或选择稳定的键。接头可以包括被设计成在细胞内特异性地或非特异性地切割和/或断裂(immolate)或以其他方式分解的键。可切割接头可以是对酶敏感的。可切割接头可以被酶例如蛋白酶切割。可切割接头可以包括缬氨酸
‑
瓜氨酸接头或缬氨酸
‑
丙氨酸肽。含缬氨酸
‑
瓜氨酸
‑
或缬氨酸
‑
丙氨酸的接头可以包含五氟苯基基团。含缬氨酸
‑
瓜氨酸
‑
或缬氨酸
‑
丙氨酸的接头可以包含马来酰亚胺或琥珀酰亚胺基团。含缬氨酸
‑
瓜氨酸
‑
或缬氨酸
‑
丙氨酸的接头可以包含对氨基苯甲酸(paba)基团。含缬氨酸
‑
瓜氨酸
‑
或缬氨酸
‑
丙氨酸的接头可以包含paba基团和五氟苯基基团。含缬氨酸
‑
瓜氨酸
‑
或缬氨酸
‑
丙氨酸的接头可以包含paba基团和马来酰亚胺或琥珀酰亚胺基团。
[0333]
不可切割接头可以是蛋白酶不敏感的。不可切割接头可以是马来酰亚胺基己酰基接头。马来酰亚胺基己酰基接头可以包括n
‑
马来酰亚胺基甲基环己烷
‑1‑
羧酸酯。马来酰亚胺基己酰基接头可以包含琥珀酰亚胺基团。马来酰亚胺基己酰基接头可以包含五氟苯基基团。接头可以是马来酰亚胺基己酰基基团和一个或多个聚乙二醇分子的组合。接头可以是马来酰亚胺
‑
peg4接头。接头可以是包含琥珀酰亚胺基团的马来酰亚胺基己酰基接头和一个或多个聚乙二醇分子的组合。接头可以是包含五氟苯基基团的马来酰亚胺基己酰基接头和一个或多个聚乙二醇分子的组合。接头可以包含连接至聚乙二醇分子的马来酰亚胺，其中聚乙二醇可以允许更多的接头柔性或者可以用于延长接头。接头可以是(马来酰亚胺基己酰基)
‑
(缬氨酸
‑
瓜氨酸)
‑
(对氨基苄氧基羰基)接头。接头可以是适合于连接至工程化半胱氨酸(thiomab)的接头，例如(马来酰亚胺基己酰基)
‑
(缬氨酸
‑
瓜氨酸)
‑
(对氨基苄氧基羰基)
‑
接头。
[0334]
接头还可以包含亚烷基、亚烯基、亚炔基、聚醚、聚酯、聚酰胺基团以及聚氨基酸、多肽、可切割肽或氨基苄基氨基甲酸酯。接头可以在一端包含马来酰亚胺，并且在另一端包含n
‑
羟基琥珀酰亚胺酯。接头可以包含具有乙酰化的n
‑
末端胺的赖氨酸和缬氨酸
‑
瓜氨酸切割位点。接头可以是由微生物转谷氨酰胺酶产生的连接，其中由于酶催化谷氨酰胺侧链的酰基与赖氨酸链的伯胺之间的键形成，因此该连接可以在含胺部分与被工程化以包含谷氨酰胺的部分之间产生。接头可包含反应性伯胺。接头可以是sortase a接头。sortase a接头可以通过将lpxtg(seq id no:49)识别基序与n
‑
末端ggg基序融合以再生天然酰胺键的sortase a酶来产生。因此，所产生的接头可以将连接至lpxtg(seq id no:49)识别基序的部分与连接至n
‑
末端ggg基序的部分连接。
[0335]
在缀合物中，式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐通过一个或多个接头(在本文中也称为l3)连接至抗体。如本文所用，l3可以选自本文所讨论的任何接头部分。将化合物或盐与缀合物中的抗体构建体连接的接头可以是短的、长的、疏水的、亲水的、柔性的或刚性的，或者可以由各自独立地具有一种或多种上述特性的区段组成，使得接头可以包括具有不同特性的区段。接头可以是多价的，使得它们将多于一种的化合物或盐共价连接至抗体构建体上的单个位点，或者是单价的，使得它们将单一的化合物或盐共价连接至抗体构建体上的单个位点。
[0336]
本公开内容的接头(l3)在接头中可以具有约10个至约500个原子，例如在接头中具有约10个至约400个原子，例如约10个至约300个原子。在某些实施方案中，本公开内容的接头在接头中具有约30个至约400个原子，例如约30个至约300个原子。
[0337]
如本领域技术人员将理解的，接头可以通过接头与抗体构建体以及化合物之间的共价键将式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐连接至抗体构建体。如本文所用，表述“接头”旨在包括(i)接头的未缀合形式，其包括能够将接头共价连接至氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的官能团和能够将接头共价连接至抗体构建体的官能团；(ii)接头的部分缀合形式，其包括能够将接头共价连接至抗体构建体的官能团并且其共价连接至式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐，或者反之亦然；和(iii)接头的完全缀合形式，其共价连接至式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐以及抗体构建体二者。一个实施方案涉及一种缀合物，该缀合物通过使结合在肿瘤细胞上表达的细胞表面受体或肿瘤相关抗原的抗体构建体与本文所述的接头
‑
化合物在接头化合物共价连接至抗体构建体的条件下接触而形成。一个实施方案涉及制备缀合物的方法，该缀合物通过在接头
‑
化合物共价连接至抗体构建体的条件下接触接头
‑
化合物而形成。
[0338]
在某些实施方案中，标题为“化合物”的部分中描述的化合物或盐中的任一种与接头(l3)共价结合。在化合价允许的情况下，接头可以与任何位置共价结合。接头可以包含反应性部分，例如可以与抗体构建体的部分(诸如例如赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、非天然氨基酸残基或谷氨酸残基)反应形成共价键的亲电体。在一些实施方案中，本文中标题为“化合物”的部分中的化合物或化合物的盐通过接头与抗体构建体共价结合。
[0339]
描述了可用于将许多氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物连接至抗体构建体的示例性多价接头。例如，接头技术具有实现具有良好物理化学特性的高dar缀合物的潜力。如以下所示，接头技术是基于通过一系列酯键将药物分子掺入增溶的聚缩醛骨架中。该方法提供了高负载的缀合物(dar高至20)，同时保持良好的物理化学特性。如以下方案所示，该方法可以与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物一起使用。
[0340]
为了利用以上方案所述的接头技术，可以存在脂肪醇或将脂肪醇引入氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物中。然后将醇部分与丙氨酸部分缀合，然后以合成方式掺入
接头中。缀合物的脂质体加工在体外释放了母体含醇药物。
[0341]
通过实例而非限制，除了先前描述的那些以外，下文还描述了可以包含在缀合物中的一些可切割接头和不可切割接头。
[0342]
磺酰胺接头可以用于将许多氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物与抗体构建体连接。磺酰胺接头如本文和例如美国专利公开号2019/0038765(其接头通过引用并入本文)中所描述的。
[0343]
可切割接头可以是体外和体内可切割的。可切割接头可以包括化学不稳定的或酶促不稳定的或者化学可降解的或酶促可降解的键。可切割接头可依赖于细胞内的过程来释放氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物，例如细胞质的减少、暴露于溶酶体中的酸性条件或者被细胞内的特异性蛋白酶或其他酶切割。可切割接头可以掺入一个或多个化学可切割或酶促可切割的化学键，而接头的其余部分可以是不可切割的。
[0344]
接头可以包含化学不稳定的基团，例如腙和/或二硫化物基团。包含化学不稳定基团的接头可以利用血浆和一些细胞质区室之间的差异特性。可以促进含腙的接头释放氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的细胞内条件可以是内体和溶酶体的酸性环境，而含二硫化物的接头可以在胞质溶胶中被还原，该胞质溶胶可以包含高的硫醇浓度，例如谷胱甘肽。可以通过使用取代基在化学不稳定基团附近引入空间位阻来提高含有化学不稳定基团的接头的血浆稳定性。
[0345]
酸不稳定基团，例如腙，可以在血液的中性ph环境(ph 7.3
‑
7.5)的体循环期间保持完整，并且一旦抗体缀合物被内化到细胞的弱酸性内体(ph 5.0
‑
6.5)和溶酶体(ph 4.5
‑
5.0)区室中，则可以经历水解并释放出氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。这种ph依赖性释放机制可能与药物的非特异性释放相关。为了增加接头中腙基团的稳定性，可以通过化学修饰例如取代来改变接头，从而允许调节以在溶酶体中实现更有效的释放以及使循环中的损失最小化。
[0346]
含腙接头可以包含另外的切割位点，例如另外的酸不稳定的切割位点和/或酶促不稳定的切割位点。包含示例性含腙接头的缀合物可以包括例如以下结构：其中分别地，d是式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，并且ab是抗体构建体，并且n表示与抗体构建体结合的化合物结合的接头(lp)的数量。在某些接头例如接头(ia)中，该接头可以包含两个可切割基团，
即二硫化物部分和腙部分。对于这样的接头，未修饰的游离氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的有效释放可能需要酸性ph或者二硫化物还原和酸性ph。接头例如(ib)和(ic)可以在单个腙切割位点上有效。
[0347]
可以包含在接头中的其他酸不稳定基团包括含顺式乌头酰基的接头。顺式乌头酰基化学可以使用与酰胺键并置的羧酸，以在酸性条件下加速酰胺水解。
[0348]
可切割接头还可以包含二硫化物基团。二硫化物在生理ph下可以是热力学稳定的，并且可以设计成在细胞内部内化后释放氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物，其中与细胞外环境相比，胞质溶胶可以提供显著更多的还原环境。二硫化物键的断裂可能需要存在胞质硫醇辅因子，例如(还原的)谷胱甘肽(gsh)，使得含二硫化物的接头在循环中可以适度地稳定，从而在胞质溶胶中选择性释放氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。细胞内酶蛋白二硫化物异构酶或者能够切割二硫化物键的类似酶，也可有助于细胞内部二硫化物键的优先切割。与在循环中大约5μm的gsh或半胱氨酸(最丰富的低分子量硫醇)的显著较低的浓度相比，gsh可以以0.5mm至10mm的浓度范围存在于细胞中。其中不规则的血液流动可导致低氧状态的肿瘤细胞可以导致还原酶活性增强，因此谷胱甘肽浓度甚至更高。含二硫化物的接头的体内稳定性可以通过接头的化学修饰(例如使用与二硫化物键相邻的空间位阻)来增强。
[0349]
包含示例性的含二硫化物接头的包含氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的抗体缀合物，可以包括以下结构：结构：其中分别地，d是式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐，并且ab是抗体构建体，n表示与抗体构建体结合的结合至接头(l3)的化合物的数量，并且r在每次出现时例如独立地选自氢或烷基。增加与二化物硫键相邻的空间位阻可以增加接头的稳定性。当一个或多个r基团选自低级烷基例如甲基时，诸如(iia)和(iic)的结构可以显示出增加的体内稳定性。
[0350]
可以使用的另一种类型的接头是被酶特异性切割的接头。例如，接头可以被溶酶体酶切割。这样的接头可以是基于肽的，或者可以包括可以充当酶底物的肽区域。基于肽的接头在血浆和细胞外环境中可以比化学不稳定的接头更稳定。
[0351]
肽键可以具有良好的血清稳定性，因为与溶酶体相比，溶酶体蛋白水解酶由于内源性抑制剂和不利地高的血液ph值而可能在血液中具有非常低的活性。由于溶酶体蛋白酶例如组织蛋白酶和纤溶酶的作用，可以发生氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物从抗体构建体中释放。
这些蛋白酶可以在某些肿瘤组织中以升高的水平存在。接头可以是通过溶酶体酶可切割的。溶酶体酶可以是例如组织蛋白酶b，β
‑
葡糖醛酸糖苷酶或β
‑
半乳糖苷酶。
[0352]
可切割的肽可以选自诸如gly
‑
phe
‑
leu
‑
gly(seq id no:235)、ala
‑
leu
‑
ala
‑
leu(seq id no:236)的四肽或者诸如val
‑
cit、val
‑
ala和phe
‑
lys的二肽。与更长的肽相比，二肽可以具有较低的疏水性。
[0353]
多种基于二肽的可切割接头可用于抗体构建体中以形成本文所述的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的缀合物。
[0354]
可酶促切割的接头可以包括自我牺牲型(self
‑
immolative)间隔物，以将氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物与酶促切割位点在空间上分开。氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物直接连接至肽接头可导致氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的氨基酸加合物的蛋白水解释放，从而损害其活性。自我牺牲型间隔物的使用可以允许酰胺键水解时消除完全活性的、化学上未修饰的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。
[0355]
一种自我牺牲型间隔物可以是双官能对氨基苄基醇基团，其可以通过氨基与肽连接，形成酰胺键，而含胺的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物可以通过氨基甲酸酯官能团连接至接头的苄基羟基(以得到对酰胺基苄基氨基甲酸酯，pabc)。所得的氨基
‑
吡嗪甲酰胺前体化合物可以在蛋白酶介导的切割时被活化，导致1,6
‑
消除反应，从而释放出未修饰的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物、二氧化碳和接头基团的残留物。以下方案描述了对酰胺基苄基氨基甲酸酯的断裂和氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的释放：其中x
‑
d表示未修饰的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。
[0356]
也已经描述了该自我牺牲型基团的杂环变体。
[0357]
可酶促切割接头可以是基于β
‑
葡糖醛酸的接头。可以通过溶酶体酶β
‑
葡糖醛酸糖苷酶切割β
‑
葡糖苷酸糖苷键来实现氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的轻松释放。这种酶可以大量存在于溶酶体中，并可以在一些肿瘤类型中过表达，而细胞外的酶活性可以是低的。基于β
‑
葡糖醛酸的接头可以用于避免由于β
‑
葡糖苷酸的亲水性质而使氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的抗体构建物缀合物经历聚集的趋势。在某些实施方案中，基于β
‑
葡糖醛酸的接头可以将抗体构建体与疏水性氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物连接。以下方案描述了氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物(d)从包含基于β
‑
葡糖醛酸的接头的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的抗体构建体缀合物中的释放：其中ab表示抗体构建体。
[0358]
已经描述了用于将药物(例如澳瑞他汀(auristatins)、喜树碱和阿霉素类似物、
cbi小沟结合剂和psymberin与抗体连接的多种可切割的基于β
‑
葡糖醛酸的接头。这些基于β
‑
葡糖醛酸的接头可用于缀合物中。在某些实施方案中，可酶促切割的接头是基于β
‑
半乳糖苷的接头。β
‑
半乳糖苷大量存在于溶酶体内，而细胞外的酶活性是低的。
[0359]
另外，含有酚基团的氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物可以通过酚氧共价键合至接头。一个这样的接头依赖于这样的方法：其中将二氨基
‑
乙烷“空间连接(space link)”与传统的基于“pabo”的自我牺牲型基团结合使用以递送酚。
[0360]
可切割接头可以包含不可切割的部分或区段，和/或可切割的区段或部分可以包含在原本不可切割的接头中以使其成为可切割的。仅作为实例，聚乙二醇(peg)和相关聚合物可以在聚合物骨架中包含可切割基团。例如，聚乙二醇或聚合物接头可以包含一个或多个可切割基团，例如二硫化物、腙或二肽。
[0361]
可以包含在接头中的其他可降解键可以包括通过使peg羧酸或活化的peg羧酸与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物上的醇基团反应形成的酯键，其中这些酯基可以在生理条件下水解以释放氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。可水解降解的键可以包括但不限于碳酸酯键；由胺和醛的反应得到的亚胺键；通过使醇与磷酸基团反应形成的磷酸酯键；作为醛和醇的反应产物的乙缩醛键；作为甲酸酯和醇的反应产物的原酸酯键；以及由亚磷酰胺基团形成的寡核苷酸键，包括但不限于在聚合物的末端处和寡核苷酸的5'羟基。
[0362]
接头可以包含可酶促切割的肽，例如，包含结构式(iiia)、(iiib)、(iiic)或(iiid)或者其盐的接头：其中：“肽”表示通过溶酶体酶可切割的肽(以n
→
c方向例示，其中肽包括氨基和羧基“末端”)；t表示包含一个或多个乙二醇单元或亚烷基链或其组合的聚合物；r
a
选自氢、烷基、磺酸酯和甲基磺酸酯；r
y
是氢或c1‑4烷基
‑
(o)
r
‑
(c1‑4亚烷基)
s
‑
g1或c1‑4烷基
‑
(n)
‑
[(c1‑4亚烷基)
‑
g1]2；r
z
是c1‑4烷基
‑
(o)
r
‑
(c1‑4亚烷基)
s
‑
g2；g1是so3h、co2h、peg 4
‑
32或糖部分；g2是so3h、co2h或peg 4
‑
32部分；r是0或1；s是0或1；p是范围为0至5的整数；q是0或1；x是0或1；
y是0或1；表示接头与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点；并且*表示与接头的其余部分的连接点。
[0363]
在某些实施方案中，肽可以选自天然氨基酸、非天然氨基酸或其组合。在某些实施方案中，肽可以选自三肽或二肽。在特定的实施方案中，二肽可以包含l
‑
氨基酸，并且选自：val
‑
cit；cit
‑
val；ala
‑
ala；ala
‑
cit；cit
‑
ala；asn
‑
cit；cit
‑
asn；cit
‑
cit；val
‑
glu；glu
‑
val；ser
‑
cit；cit
‑
ser；lys
‑
cit；cit
‑
lys；asp
‑
cit；cit
‑
asp；ala
‑
val；val
‑
ala；phe
‑
lys；lys
‑
phe；val
‑
lys；lys
‑
val；ala
‑
lys；lys
‑
ala；phe
‑
cit；cit
‑
phe；leu
‑
cit；cit
‑
leu；ile
‑
cit；cit
‑
ile；phe
‑
arg；arg
‑
phe；cit
‑
trp；和trp
‑
cit，或其盐。
[0364]
根据结构式(iiia)的接头的示例性实施方案如下所示(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的反应性基团)：
其中表示接头(l3)与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的连接位点。
[0365]
可以包含在缀合物中的根据结构式(iiib)、(iiic)或(iiid)的接头的示例性实施方案可以包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的反应性基团)：
其中表示与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的连接位点。
[0366]
接头可以包含可酶促切割的糖部分，例如，包含结构式(iva)、(ivb)、(ivc)、(ivd)
或(ive)或者其盐的接头：其中：q是0或1；r是0或1；x1是ch2、o或nh；表示接头(l3)与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点；并且*表示与接头的其余部分的连接点。
[0367]
可以包含在本文所述的抗体构建体缀合物中的根据结构式(iva)的接头的示例性实施方案可以包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团)：
其中表示接头(l3)与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点。
[0368]
可以包含在缀合物中的根据结构式(ivb)的接头的示例性实施方案包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团)：
其中表示接头(l3)与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的连接点。
[0369]
可以包含在缀合物中的根据结构式(ivc)的接头的示例性实施方案包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团)：
其中表示接头(l3)与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的连接点。
[0370]
可以包含在缀合物中的根据结构式(ivd)的接头的示例性实施方案包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体的基团)：
其中表示接头(l3)与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的连接位点的点。
[0371]
可以包含在缀合物中的根据结构式(ive)的接头的示例性实施方案包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团)：
其中表示接头(l3)与氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的连接点。
[0372]
尽管可切割接头可以提供某些优点，但包含缀合物的接头不必是可切割的。对于不可切割接头，氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的释放可能不取决于血浆与一些胞质区室之间的差异特性。氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的释放可以在通过抗原介导的胞吞作用导致的抗体缀合物的内化并向溶酶体区室递送之后发生，其中可以通过细胞内蛋白水解降解使抗体构建体降解至氨基酸水平。该过程可以释放氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物衍生物(包含不可切割接头
‑
杂环化合物的缀合物的代谢物)，其由氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物、接头和氨基酸残基或共价连接有接头的残基形成。与具有可切割接头的抗体缀合物相比，来自具有不可切割接头的抗体构建体氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物缀合物的有效载荷化合物衍生物可以是更亲水的和更低的膜渗透性的，这可以导致较少的旁观者效应和较低的非特异性毒性。具有不可切割接头的抗体缀合物可以比具有可切割接头的抗体缀合物具有更大的循环稳定性。不可切割接头可以包括亚烷基链，或者可以是聚合的，诸如例如基于聚亚烷基二醇聚合物、酰胺聚合物，或者可以包括亚烷基链、聚亚烷基二醇和/或酰胺聚合物的区段。接头可以包含具有1个至6个乙二醇单元的聚乙二醇区段。
[0373]
接头可以是体内不可切割的，例如，根据以下式或其盐的接头：
其中：r
a
选自氢、烷基、磺酸酯和磺酸甲酯；r
x
是包含能够将接头共价连接至抗体构建体的官能团的反应性部分；并且表示接头(l3)与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点。
[0374]
可以包含在缀合物中的根据结构式(va)至(ve)的接头的示例性实施方案包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团，并且表示接头(l3)与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点：
[0375]
用于将接头连接至抗体构建体的连接基团本质上可以是亲电子的，并且包括例如马来酰亚胺基团、活化的二硫化物、活性酯例如nhs酯和hobt酯、卤代甲酸酯、酰卤、烷基和苄基卤化物例如卤代乙酰胺。还存在可以根据本公开内容使用的与“自稳定”马来酰亚胺和“桥联二硫化物”有关的新兴技术。
[0376]
马来酰亚胺基团由于它们与例如缀合物中的抗体的半胱氨酸基团中的硫醇基反应的特异性而经常用于缀合物的制备中。抗体的硫醇基与带有包含马来酰亚胺基团的接头的药物之间的反应根据以下方案进行：
[0377]
也可发生导致从硫代取代的琥珀酰亚胺中消除马来酰亚胺的逆反应。这种逆反应是不期望的，因为马来酰亚胺基团随后可以与另一个可用的硫醇基例如体内具有可用半胱氨酸的其他蛋白质反应。因此，逆反应可能破坏缀合物的特异性。防止逆反应的一种方法是将碱性基团掺入以上方案所示的接头基团中。不希望受理论束缚，碱性基团的存在可以增加附近水分子的亲核性，以促进琥珀酰亚胺基团的开环水解。连接基团的水解形式在血浆蛋白存在下抵抗去缀合(deconjugation)。所谓的“自稳定”接头为缀合物提供了改善的稳
定性。代表性示意图如下所示：
[0378]
以上示意性表示的水解反应可以在琥珀酰亚胺基团的任一个羰基处发生。因此，如下所示，可能会产生两种可能的异构体：
[0379]
可以修改碱的特性以及碱与马来酰亚胺基团之间的距离，以调节硫代取代的琥珀酰亚胺基团的水解速率并且通过例如提高缀合物的特异性和稳定性来优化缀合物向靶标的递送。
[0380]
适用于在与抗体构建体缀合之前包含在接头(例如具有马来酰亚胺基团的任何l3)中的碱可以促进在抗体构建体与接头缀合之后形成的附近琥珀酰亚胺基团的水解。碱可以包括，例如，胺(例如，
‑
n(r
26
)(r
27
)，其中r
26
和r
27
独立地选自h和c1‑6烷基)、含氮杂环(例如，包含一个或多个氮原子和任选地一个或多个双键的3至12元杂环)、脒、胍和被一个或多个胺基团取代的碳环或杂环(例如，任选地包含杂原子例如氮原子并被一个或多个
‑
n(r
26
)(r
27
)类型的胺取代的3至12元的芳族环或非芳族环，其中r
26
和r
27
独立地选自h或c1‑6烷基)。碱性单元可以通过例如
‑
(ch2)
m
‑
形式的亚烷基链与马来酰亚胺基团隔开，其中m是0至10的整数。亚烷基链可以任选地被如本文所述的其他官能团取代。
[0381]
具有马来酰亚胺基团的接头(l3)可以包括吸电子基团，例如但不限于
‑
c(o)r、＝o、
‑
cn、
‑
no2、
‑
cx3、
‑
x、
‑
coor、
‑
conr2、
‑
cor、
‑
cox、
‑
so2r、
‑
so2or、
‑
so2nhr、
‑
so2nr2、
‑
po3r2、
‑
p(o)(ch3)nhr、
‑
no、
‑
nr
3+
、
‑
cr＝cr2和
‑
c≡cr，其中每个r独立地选自h和c1‑6烷基并且每个x独立地选自f、br、cl和i。自稳定接头还可以包含芳基，例如苯基；或杂芳基，例如吡啶，任选地被吸电子基团取代的基团，例如本文所述的那些基团。
[0382]
自稳定接头的实例在例如美国专利公开第2013/0309256号中提供，其中的接头通过引用并入本文。应当理解，可以与本发明的化合物结合使用的自稳定接头可以等同地描述为含未取代的马来酰亚胺的接头、含硫代取代的琥珀酰亚胺的接头或者含水解的开环的硫代取代的琥珀酰亚胺的接头。
[0383]
在某些实施方案中，本公开内容的接头(l3)包含选自以下的稳定基团：
[0384]
在以上提供的方案中，底部结构可以被称为(马来酰亚胺基)
‑
dpr
‑
val
‑
cit
‑
pab，其中dpr是指二氨基丙酸，val是指缬氨酸，cit是指瓜氨酸，并且pab是指对氨基苄基羰基。表示与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点。
[0385]
已经公开了用于桥接来源于天然铰链二硫化物键还原的一对硫氢基的方法，并在以下示意图中进行描述。该方法的优势是能够通过完全还原igg(以从链间二硫化物得到4对巯基)，然后与4当量的烷化剂反应来合成均质的dar4缀合物。据称包含“桥接的二硫化物”的缀合物还具有增加的稳定性。
[0386]
类似地，如下所述，已经开发了能够桥接一对硫氢基的马来酰亚胺衍生物。
[0387]
本公开内容的接头l3可以包含以下结构式(via)、(vib)或(vic)或者其盐：
其中：r
q
是h或
–
o
‑
(ch2ch2o)
11
‑
ch3；x是0或1；y是0或1；g2是
–
ch2ch2ch2so3h或
–
ch2ch2o
‑
(ch2ch2o)
11
‑
ch3；r
w
是
–
o
‑
ch2ch2so3h或
–
nh(co)
‑
ch2ch2o
‑
(ch2ch2o)
12
‑
ch3；并且*表示与接头的其余部分的连接点。
[0388]
可以包含在缀合物中的根据结构式(via)和(vib)的接头的示例性实施方案可以包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团)：
其中表示接头(l3)与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点。
[0389]
可以包含在抗体构建体缀合物中的根据结构式(vic)的接头的示例性实施方案可以包括以下所示的接头(如所示的，接头包含适合于将接头共价连接至抗体构建体的基团)：
其中表示接头(l3)与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐的连接点。
[0390]
在以下段落中描述了一些示例性接头(l3)。在一些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14的化合物或盐，其中接头与化合物中的氮连接并且与抗体或靶向部分中的半胱氨酸残基缀合，
‑
l3由下表3中列出的式表示：表3
其中表示式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的氮连接，并且rx表示反应性部分。反应性部分可以选自，例如亲电体，例如，α,β
‑
不饱和羰基，例如马来酰亚胺，和离去基团。例如，
‑
l3可以由下表4中列出的式表示：表4
其中表示与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的氮的连接。
[0391]
当缀合至抗体或靶向部分的半胱氨酸残基时，这样的接头可以例如由下表5中列出的式表示：表5
其中rx
*
是与抗体构建体的半胱氨酸残基结合的键、琥珀酰亚胺部分或水解的琥珀酰亚胺部分，其中rx*上的表示与这样的残基的连接点；l4当存在时表示肽的c
‑
末端，并且l5选自键、亚烷基和亚杂烷基，其中l5任选地被一个或多个独立地选自r
30
的基团取代；并且r
30
当存在时在每次出现时独立地选自卤素、
‑
oh、
‑
cn、
‑
o
‑
烷基、
‑
sh、＝o、＝s、
‑
nh2、
‑
no2；以及c1‑
c
10
烷基、c2‑
c
10
烯基和c2‑
c
10
炔基，其中的每一个在每次出现时独立地任选地被一个或多个选自卤素、
‑
oh、
‑
cn、
‑
o
‑
烷基、
‑
sh、＝o、＝s、
‑
nh2和
‑
no2的取代基取代。特别优选的肽是val
‑
ala或val
‑
cit。
[0392]
在一些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14的化合物或盐，其中接头与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的氮连接并且与抗体或其他靶向部分中的赖氨酸残基缀合，
–
l3由下表6中列出的式表示：表6其中表示与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的氮连接，并且rx表示反应性部分。反应性部分可以选自活化酯。例如，
–
l3可以由下表7中列出的式表示：表7
[0393]
当与抗体或其他靶向部分的赖氨酸残基缀合时，这样的接头可以例如由下表8中列出的式表示。其中rx
*
是与抗体构建体或靶向部分的赖氨酸残基中的氮结合的键，其中rx*上的表示与这样的残基的连接点：表8
[0394]
如所指出的，表示与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的氮的连接。在示例性实施方案中，本文所述的接头，包括前述段落中的那些接头，通过环a或环b中的r4连接至本发明的化合物。在一些这样的示例性实施方案中，至少一个r4独立地选自：(i)取代的c1‑
c6烷基，条件是c1‑
c6烷基被
‑
nr
52
r
52
，以及
‑
or
52
、
‑
co2r
52
、
‑
(c1‑
c6烷基)
‑
or
52
或(c1‑
c6烷基)
‑
co2r
52
中的至少一个取代，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；(ii)
‑
or
50
，其中
‑
or
50
中的r
50
是取代的c1‑
c6烷基，在所述烷基上的至少一个取代基是
‑
nr
52
r
52
，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；(iii)
‑
or
50
，其中
‑
or
50
中的r
50
是杂环或碳环，所述杂环和碳环上的至少一个取代基是
‑
nr
52
r
52
或被至少一个选自
‑
nr
52
r
52
的取代基取代的c1‑
c6烷基，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；(iv)取代的杂环，其中所述杂环上的至少一个取代基是
‑
nr
52
r
52
或被至少一个选自
‑
nr
52
r
52
的取代基取代的c1‑
c6烷基，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；(v)
‑
nr
51
r
51
，其中
‑
nr
51
r
15
中的一个r
51
被
‑
l3代替；(vi)
‑
nr
51
r
51
，其中
‑
nr
51
r
51
中的一个r
51
是被至少一个
‑
nr
52
r
52
取代的c1‑
c6烷基，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；(vii)
‑
nr
51
r
51
，其中
‑
nr
51
r
51
中的一个r
51
是杂环，并且所述杂环上的至少一个取代基是
‑
nr
52
r
52
或被至少一个选自
‑
nr
52
r
52
的取代基取代的c1‑
c6烷基，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；(viii)
‑
nr
51
r
51
，其中
‑
nr
51
r
51
中的两个r
51
与它们所连接的n原子一起时，形成5元或6元未取代或取代的饱和的含氮杂环，其中所述取代基中的至少一个是nr
52
r
52
或被至少一个选自
‑
nr
52
r
52
的取代基取代的c1‑
c6烷基，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替；或(ix)在相邻原子上的两个r4与它们所连接的原子一起形成未取代或取代的5元或6元单环碳环或者具有一个或两个选自氧和氮的环杂原子的未取代或取代的6元单环杂环，并且所述碳环和杂环上的至少一个取代基是nr
52
r
52
或者被至少一个选自
‑
nr
52
r
52
的取代基取代的c1‑
c6烷基，并且其中
‑
nr
52
r
52
中的一个r
52
被
‑
l3代替。
[0395]
r4可以例如选自表9a中列出的任何基团，其中r
51
和r
52
如本文所述(包括氢或c1‑3烷基(例如，甲基))，并且波浪线表示与环a或环b的连接：表9a
[0396]
在示例性实施方案中，本文所述的接头，包括前述段落中的那些接头，在如下表9b中所示的氮原子处连接至本发明的化合物，其中l3表示接头：表9b
[0397]
在一些实施方案中，对于式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、
(ii
‑
c)和(ii
‑
d)的化合物或盐，其中接头与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的硫连接，并且与抗体或其他靶向部分中的赖氨酸残基缀合，
‑
l3由下表10中列出的式表示：表10其中表示与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的硫连接，并且rx表示反应性部分。反应性部分可以选自活化酯。例如，
‑
l3可以由以下式表示：
[0398]
当与抗体或其他靶向部分中的赖氨酸残基缀合时，这样的接头可以由表11中的以下式表示：表11其中rx
*
与抗体构建体或靶向部分的赖氨酸残基中的氮结合，其中rx*上的表示与这样的残基的连接点。
[0399]
如所指出的，表示与式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)以及表14中任一个的化合物或盐中的硫原子连接。在示例性实施方案中，本文所述的连接物，包括前述段落中的那些接头，在硫原子处连接至如在下表12中所示的化合物或盐，其中l3表示接头：表12
[0400]
在其他示例性实施方案中，示例性接头在如在下表13中所示的化合物或盐的氧原
子处连接，其中l3表示接头：表13
[0401]
如本领域技术人员所知，针对特定缀合物所选的接头可能受多种因素影响，包括但不限于与抗体构建体的连接位点(例如，lys、cys或其他氨基酸残基)、药物药效团的结构限制和药物的亲脂性。针对缀合物所选的特定接头应设法平衡特异性抗体构建体/药物组合的这些不同因子。
[0402]
在使用和/或储存条件下，接头或接头
‑
化合物的特性也可能影响缀合物的聚集。通常，文献中报道的缀合物中每个抗体分子包含不多于3至4个药物分子。由于缀合物的聚集，为获得更高的药物与抗体之比(“dar”)的尝试通常会失败，特别是如果药物和接头都是
疏水的情况。在许多情况下，作为提高效力的手段，高于3至4的dar可以是有益的。在有效载荷化合物本质上是更疏水的情况下，可能期望选择相对亲水的接头作为减少缀合物聚集的手段，尤其是在期望大于3至4的dar的情况下。因此，在某些实施方案中，接头掺入在储存和/或使用期间减少缀合物聚集的化学部分。接头可以掺入极性基团或亲水基团，例如带电荷的基团或在生理ph下变为带电荷的基团，以减少缀合物的聚集。例如，接头可以掺入带电荷的基团，例如去质子化的盐或基团，例如羧酸盐，或者在生理ph下质子化的盐或基团，例如胺。
[0403]
在特定的实施方案中，如通过尺寸排阻色谱法(sec)所确定的，缀合物在储存或使用期间的聚集小于约40％。在特定的实施方案中，如通过尺寸排阻色谱法(sec)所确定的，缀合物在储存或使用期间的聚集小于35％，例如小于约30％，例如小于约25％，例如小于约20％，例如小于约15％，例如小于约10％，例如小于约5％，例如小于约4％或甚至更小。
[0404]
本发明的示例性接头
‑
化合物包括表15、16和17中列出的那些及其盐(包括其药学上可接受的盐)。protacs的缀合物
[0405]
在某些实施方案中，可以将本文所述化合物的缀合物设计为通过泛素途径增加泛素介导的靶蛋白破坏。将泛素分子连接到蛋白靶标的过程通常涉及3种酶和3个步骤：1)可以活化泛素的e1酶，2)可以转移活化的泛素的e2酶，以及3)可以接收活化的泛素并催化泛素与靶蛋白连接的多亚基e3酶连接酶。
[0406]
在一些实施方案中，缀合物包含蛋白水解靶向模块(ptm；也称为蛋白水解靶向嵌合体或protac)。ptm可以包含可与e3泛素连接酶亚基结合的小分子以及与蛋白靶标结合的靶标结合部分(本文所述的化合物)。结合小分子的e3泛素连接酶直接或通过间隔物(s)与靶标结合部分连接。药物制剂
[0407]
本文所述的组合物和方法可以被认为可用作向有需要的对象施用的药物组合物。药物组合物可以至少包含本文所述的组合物以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂和/或增稠剂中的一种或多种。组合物可以包含具有抗体构建体和氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的缀合物。组合物可以包含具有抗体构建体和氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的缀合物。组合物可以包含具有抗体构建体、靶标结合结构域和氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的缀合物。组合物可以包含本文所述的任何缀合物。在一些实施方案中，抗体构建体是抗lrrc15抗体。缀合物可以包含抗lrrc15抗体和氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。在一些实施方案中，抗体构建体是抗asgr1抗体。缀合物可以包含抗asgr1抗体和氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物。药物组合物可以至少包含本文所述的化合物、盐或缀合物以及缓冲剂、抗生素、类固醇、碳水化合物、药物(例如化学疗法药物)、放射物、多肽、螯合剂、佐剂和/或防腐剂中的一种或多种。
[0408]
药物组合物可以使用一种或多种包含赋形剂和助剂的生理上可接受的载体来配制。可以根据所选择的施用途径来修改制剂。包含化合物、盐或缀合物的药物组合物可以例如通过冻干化合物、盐或缀合物，混合，溶解，乳化，封装或包埋缀合物来制备。药物组合物还可以包含游离碱形式或药学上可接受的盐形式的化合物、盐或缀合物。
[0409]
用于配制缀合物的方法可以包括将化合物、盐或缀合物中的任一种与一种或多种
惰性的药学上可接受的赋形剂或载体一起配制以形成固体、半固体或液体组合物。固体组合物可以包括例如散剂、片剂、可分散颗粒剂和胶囊剂，并且在一些方面中，固体组合物还包含无毒的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂，ph缓冲剂和其他药学上可接受的添加剂。可选地，化合物、盐或缀合物可以是冻干的或呈粉末形式，用于在使用前用合适的媒介物例如无菌无热原的水重构。
[0410]
缀合物的药物组合物可以包含至少一种活性成分(例如，化合物、盐或缀合物和其他试剂)。可以将活性成分包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)；包埋在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中；或包埋在粗乳剂(macroemulsion)中。
[0411]
针对所治疗的特定适应症，必要时，药物组合物通常还可以包含多于一种的活性化合物(例如，化合物、盐或缀合物和其他试剂)。活性化合物可以具有不会不利影响彼此的互补活性。例如，组合物可以包含化学治疗剂、细胞毒性剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、抗血管生成剂和/或心脏保护剂。这样的分子可以以对预期目的有效的量组合存在。
[0412]
组合物和制剂可以是无菌的。灭菌可以通过无菌过滤进行过滤来实现。
[0413]
可以将组合物配制成用于作为注射剂施用。用于注射的制剂的非限制性实例可以包括在油性或水性媒介物中的无菌悬浮液、溶液或乳剂。合适的油性媒介物可以包括但不限于亲脂性溶剂或媒介物，例如脂肪油或合成脂肪酸酯或脂质体。水性注射悬浮液可以包含增加悬浮液粘度的物质。悬浮液还可以包含合适的稳定剂。注射剂可以配制用于弹丸注射或连续输注。可选地，组合物可以是冻干的或呈粉末形式，用于在使用前用合适的媒介物例如无菌无热原的水重构。
[0414]
对于肠胃外施用，可以将化合物、盐或缀合物与药学上可接受的肠胃外媒介物联合配制成单位剂量可注射形式(例如溶液、悬浮液、乳剂)。这样的媒介物可以是固有无毒的和非治疗性的。媒介物可以是水、盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。也可以使用非水性媒介物，例如不挥发油和油酸乙酯。脂质体可用作载体。媒介物可以包含少量添加剂，例如增强等渗性和化学稳定性的物质(例如缓冲剂和防腐剂)。
[0415]
也可以制备缓释制剂。缓释制剂的实例可以包括可以包含化合物、盐或缀合物的固体疏水聚合物的半透性基质，并且这些基质可以呈成型制品的形式(例如，膜或微胶囊)。缓释基质的实例可以包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2
‑
羟乙基
‑
甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯、l
‑
谷氨酸与γ
‑
乙基
‑
l
‑
谷氨酸酯(盐)的共聚物、不可降解的乙烯
‑
乙酸乙烯酯、可降解的乳酸
‑
乙醇酸共聚物例如lupron depo
tm
(即，由乳酸
‑
乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球)和聚
‑
d
‑
(
‑
)
‑3‑
羟基丁酸。
[0416]
可以通过将化合物、盐或缀合物与药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂混合来制备用于储存的药物制剂。该制剂可以是冻干制剂或水溶液。可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者可以是无毒的。可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂可以包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂，多肽；蛋白质，例如血清白蛋白或明胶；亲水聚合物；氨基酸；单糖，二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如edta；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子(salt
‑
forming counter
‑
ion)，例如钠；金属络合物；和/或非
离子表面活性剂或聚乙二醇。
[0417]
缀合物的药物制剂的平均药物与抗体构建体之比(“dar”)可以选自约1至约20或约1至约10，其中药物是式(i
‑
a)、(i
‑
b)、(i
‑
c)、(i
‑
d)、(i
‑
e)、(ii
‑
a)、(ii
‑
b)、(ii
‑
c)和(ii
‑
d)中任一个的化合物或盐。在某些实施方案中，制剂的平均dar是约2至约8，例如约3至约8，例如约3至约7，例如约3至约5或例如约2。在某些实施方案中，药物制剂的平均dar是约3、约3.5、约4、约4.5或约5。治疗性应用
[0418]
本公开内容的组合物、缀合物和方法可用于多种不同的对象，包括但不限于哺乳动物、人、非人哺乳动物、驯养动物(例如，实验室动物、家庭宠物或牲畜)、非驯养动物(例如野生动物)、狗、猫、啮齿动物、小鼠、仓鼠、牛、鸟、鸡、鱼、猪、马、山羊、绵羊、兔子及其任意组合。
[0419]
组合物、缀合物和方法可以用作治疗剂，例如可以向有需要的对象施用的治疗。本公开内容的治疗效果可以通过减少、抑制、缓解或根除疾病状态(包括但不限于其症状)而在对象中获得。可以通过减少、抑制、预防、缓解或根除病况或疾病、或者病况前期状态或疾病前期状态来获得患有疾病或病况或者倾向患有或开始患有疾病或病况的对象中的治疗效果。
[0420]
在实施本文所述的方法中，可以向有需要的对象施用治疗有效量的组合物和缀合物，通常用于治疗和/或预防病况或其进展。药物组合物可影响对象的生理机能，例如免疫系统、炎性反应或其他生理学影响。治疗有效量可以根据疾病的严重程度、对象的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力以及其他因素而变化。
[0421]
治疗(treat)和/或治疗(treating)是指成功治疗或改善疾病或病况的任何标志。治疗可以包括例如减轻、延迟或缓解疾病或病况的一种或多种症状的严重程度，或者可以包括降低患者所经历的疾病、缺陷、病症或不良状况等的症状的频率。治疗可以在本文用于指导致疾病或病况的某种水平的治疗或改善的方法，并且可以考虑针对该目标的一系列结果，包括但不限于完全预防病况。
[0422]
预防(prevent)、预防(preventing)等是指在患者中预防疾病或病况，例如肿瘤形成。例如，如果用本公开内容的方法治疗处于患上肿瘤或其他形式的癌症的风险的个体，并且以后不会患上该肿瘤或其他形式的癌症，则疾病至少在一段时间内在该个体中得到预防。预防还可以指例如通过预防复发而在先前已经对疾病或病况进行过治疗的患者中预防该疾病或病况的再次发生。
[0423]
治疗有效量(也称为有效量)可以是足以向施用组合物的个体提供有益作用或以其他方式减少有害的非有益事件的该组合物(例如，缀合物或化合物)或其活性组分的量。治疗有效剂量可以是施用以产生一种或多种期望的或可取的(例如有益的)效果的剂量，这种施用在给定的时间段内发生一次或多次。确切的剂量可以取决于治疗目的，并且可以由本领域技术人员使用已知技术和本文提供的教导来确定。
[0424]
考虑到待治疗的疾病或病况、个体患者的状况，组合物的递送部位、施用方法和从业人员已知的其他因素，可以用于治疗的缀合物可以以与良好医学实践一致的方式配制并确定剂量。组合物可以根据本文所述的制备描述来制备。
[0425]
药物组合物可以用于本文所述的方法中，并且可以使用本领域普通技术人员已知
的技术向有需要的对象施用，该技术可以适合作为影响对象的疾病或病况的疗法。本领域普通技术人员将理解，向有需要的对象施用药物组合物的量、持续时间和频率取决于若干因素，包括例如但不限于对象的健康状况、患者的具体疾病或病况、患者的具体疾病或病况的等级或水平、对象正在接受或已经接受的另外的治疗等。
[0426]
方法和组合物可以用于向有需要的对象施用。通常，组合物的施用可以包括施用途径，施用途径的非限制性实例包括静脉内、动脉内、皮下、硬膜下、肌内、颅内、胸骨内、瘤内或腹腔内。另外，可以通过另外的施用途径，例如通过吸入、口服、皮肤、鼻内或鞘内施用向对象施用药物组合物。
[0427]
本公开内容的组合物和缀合物可以在第一次施用以及一次或多次另外的施用中向有需要的对象施用。一次或多次另外的施用可以在第一次施用之后的数分钟、数小时、数天、数周或数月向有需要的对象施用。另外施用中的任一次可以在第一次施用之后少于21天、或少于14天、少于10天、少于7天、少于4天或少于1天向有需要的对象施用。一次或多次施用可以每天发生一次以上、每周发生一次以上或每月发生一次以上。施用可以是每周一次、每两周(每隔两周)一次、每三周一次、每月一次或每两个月一次。
[0428]
本文提供的组合物、缀合物和方法可用于治疗对象的多种疾病、病况，预防对象的疾病或病况或者针对有需要的对象的其他治疗性应用。通常，本文提供的组合物、缀合物和方法可用于治疗增生性病况，包括但不限于赘生物、癌症、肿瘤等。本文提供的组合物、缀合物和方法可用于特异性靶向tgfβ1、tgfβr1、tgfβr2或其组合。本文提供的组合物和方法可用于抑制tgfβ1、tgfβr1、tgfβr2或其组合。在一个实施方案中，本公开内容的化合物活化或增强免疫应答。在另一个实施方案中，本公开内容的缀合物活化或增强免疫应答。
[0429]
诸如癌症的病况可以与癌细胞上分子的表达有关。通常，通过癌细胞表达的分子可以包含能够被缀合物中的抗体构建体识别的细胞外部分。通过癌细胞表达的分子可以是肿瘤抗原。缀合物中的抗体构建体可以识别肿瘤抗原。
[0430]
在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与t细胞、b细胞、星状细胞、内皮细胞、肿瘤细胞、apc、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化的发病机制相关的细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与t细胞、apc和/或b细胞上的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自clta4、pd
‑
1、ox40、lag
‑
3、gitr、garp、cd25、cd27、pd
‑
l1、tnfr2、icos、41bb、cd70、cd73、cd38或vtcn1中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与星状细胞、内皮细胞、成纤维细胞、纤维细胞或者与纤维化或癌症的发病机制相关的细胞上的抗原具有至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自pdgfrβ、整合素αvβ1、整合素αvβ3、整合素αvβ6、整合素αvβ8、内皮唾液酸蛋白、fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合与选自fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2中的抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与肿瘤细胞上的抗原，肿瘤抗原至少80％相同的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合与选自muc16、upk1b、vtcn1、tmprss3、tmem238、clorf186、tmprss4、cldn6、cldn8、stra6、msln或cd73中的抗原至少80％相同的抗原。
[0431]
在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合t细胞、b细胞、星状细胞、内皮细
胞、肿瘤细胞、apc、成纤维细胞、纤维细胞或与纤维化的发病机制相关的细胞上的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合t细胞、apc、和/或b细胞上的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自clta4、pd
‑
1、ox40、lag
‑
3、gitr、garp、cd25、cd27、pd
‑
l1、tnfr2、icos、41bb、cd70、cd73、cd38或vtcn1的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合星状细胞、内皮细胞、成纤维细胞、纤维细胞或者与纤维化或癌症的发病机制相关的细胞上的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自pdgfrβ、整合素αvβ1、整合素αvβ3、整合素αvβ6、整合素αvβ8、内皮唾液酸蛋白、fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域可以特异性结合选自fap、adam12、lrrc15、mmp14、pdpn、cdh11和f2rl2的抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合肿瘤细胞上的抗原，肿瘤抗原。在某些实施方案中，抗原结合结构域特异性结合选自muc16、upk1b、vtcn1、tmprss3、tmem238、clorf186、tmprss4、cldn6、cldn8、stra6、msln或cd73的抗原。
[0432]
另外，这样的抗原可以来源于以下特定病况和/或病况家族，包括但不限于癌症，例如脑癌、皮肤癌、淋巴瘤、肉瘤、肺癌、肝癌、白血病、子宫癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、血管肉瘤、骨癌、血癌、睾丸癌、前列腺癌、胃癌、肠癌、胰腺癌和其他类型的癌症，以及癌前病况例如增生等。
[0433]
癌症的非限制性实例可以包括急性淋巴细胞白血病(all)；急性髓性白血病；肾上腺皮质癌；儿童小脑或大脑星形细胞瘤；基底细胞癌；膀胱癌；骨肿瘤、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑癌；脑肿瘤，例如小脑星形细胞瘤、恶性胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤，视觉通路和下丘脑胶质瘤；脑干胶质瘤；乳腺癌；支气管腺瘤/类癌；伯基特氏淋巴瘤；小脑星形细胞瘤；宫颈癌；胆管癌；软骨肉瘤；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒细胞白血病；慢性骨髓增生性病症；结肠癌；皮肤t细胞淋巴瘤；子宫内膜癌；室管膜瘤；食道癌；眼癌，例如眼内黑色素瘤和视网膜母细胞瘤；胆囊癌；胶质瘤；毛细胞白血病；头颈癌；心脏癌；肝细胞(肝)癌；霍奇金淋巴瘤；下咽癌；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西肉瘤(kaposi sarcoma)；肾癌(肾细胞癌)；喉癌；白血病，例如急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病和毛细胞白血病；唇癌与口腔癌；脂肪肉瘤；肺癌，例如非小细胞肺癌和小细胞肺癌；淋巴瘤，例如与艾滋病有关的淋巴瘤，伯基特淋巴瘤；淋巴瘤，皮肤t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤、巨球蛋白血症、骨恶性纤维组织细胞瘤/骨肉瘤；黑色素瘤；默克尔细胞癌；间皮瘤；多发性骨髓瘤/浆细胞赘生物；蕈样肉芽肿；骨髓增生异常综合征；骨髓增生异常疾病/骨髓增殖性疾病；慢性骨髓增殖性病症；鼻腔和鼻旁窦癌；鼻咽癌；成神经细胞瘤；少突胶质细胞瘤；口咽癌；骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌；胰腺癌；甲状旁腺癌；咽癌；嗜铬细胞瘤；垂体腺瘤；浆细胞瘤形成；胸膜肺母细胞瘤；前列腺癌；直肠癌；肾细胞癌(肾癌)；肾盂和输尿管，移行细胞癌；横纹肌肉瘤；唾液腺癌；，尤因肉瘤家族肿瘤；卡波西肉瘤；软组织肉瘤；子宫肉瘤；塞扎里综合征(s
é
zary syndrome)；皮肤癌(非黑色素瘤)；皮肤癌；小肠癌；软组织肉瘤；鳞状细胞癌；鳞状颈癌伴隐匿性原发性、转移性；胃癌；睾丸癌；喉癌；胸腺瘤和胸腺癌；胸腺瘤；甲状腺癌；儿童期甲状腺癌；子宫癌；阴道癌；瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症(macroglobulinemia)；维尔姆斯瘤(wilms tumor)及其任何组合。
[0434]
纤维化或纤维化疾病的非限制性实例包括粘连性囊炎、动脉僵硬、关节纤维化、心
房纤维化、肝硬化、克罗恩病、胶原性纤维瘤、囊性纤维化、韧带样型纤维瘤病(desmoid
‑
type fibromatosis)、迪皮特朗挛缩(dupuytren’s contracture)、弹性纤维瘤、心内膜心肌纤维化、腱鞘的纤维瘤、胶质瘢痕、特发性肺纤维化、瘢痕疙瘩、纵隔纤维化、骨髓纤维化、颈部纤维瘤、肾源性系统性纤维化、陈旧性心肌梗死、佩罗尼氏病(peyronie’s disease)、肺纤维化、进行性大块纤维化、非酒精性脂肪性肝炎(也称为nash)、辐射诱导的肺损伤、腹膜后纤维化、瘢痕、硬皮病/系统性硬化症。
[0435]
本发明提供了本文公开的用于通过疗法治疗人体或动物体的方法的任何治疗性化合物或缀合物。治疗可以通过本文公开的任何机制进行，例如通过刺激免疫系统。本发明提供了本文公开的用于刺激免疫系统、疫苗接种或免疫疗法(包括例如增强免疫应答)的任何治疗性化合物或缀合物。本发明还提供了用于预防或治疗本文公开的任何病况(例如癌症、自身免疫病、炎症、败血症、过敏症、哮喘、移植排斥、移植物抗宿主病、免疫缺陷和感染性疾病(通常由传染性病原体引起))的本文公开的任何治疗性化合物或缀合物。本发明还提供了用于获得本文公开的任何病况的本文公开的任何临床结果(例如减少体内肿瘤细胞)的本文公开的任何治疗性化合物或缀合物。本发明还提供了本文公开的任何治疗性化合物或缀合物在制备用于预防或治疗本文公开的任何病况的药物中的用途。
实施例
缩略语列表
[0436]
如上文和贯穿本发明的说明所使用的，除非另外指出，否则以下缩写应理解为具有以下含义：acn或mecn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙腈bn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
苄基boc或boc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氨基甲酸叔丁酯cdi
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1,1'
‑
羰基二咪唑cy
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
环己基dce
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯乙烷(clch2ch2cl)dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯甲烷(ch2cl2)dipea或diea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二异丙基乙胺dmap
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ4‑
(n,n
‑
二甲基氨基)吡啶dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基甲酰胺dma
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n
‑
二甲基乙酰胺dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基亚砜equiv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
当量et
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙基etoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙醇etoac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯h
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时hatu
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ1‑
[双(二甲基氨基)亚甲基]
‑
1h
‑
1,2,3
‑
三唑并[4,5
‑
b]吡啶鎓3
‑
氧化物六氟磷酸盐
hfip
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1,1,1,3,3,3
‑
六氟丙
‑2‑
醇hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱法lah
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氢化铝锂lcms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱
‑
质谱法mc
‑
val
‑
cit
‑
pab
‑
pnp
ꢀꢀꢀ
[4
‑
[[(2s)
‑5‑
(氨基甲酰基氨基)
‑2‑
[[(2s)
‑2‑
[6
‑
(2,5
‑
二氧代吡咯
‑1‑
基)己酰氨基]
‑3‑
甲基丁酰基]氨基]戊酰基]氨基]苯基]甲基(4
‑
硝基苯基)碳酸酯(盐)me
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲基meoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲醇ms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
质谱法nmm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n
‑
甲基吗啉nmr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
核磁共振pdcl2(dppf)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
[1,1'
‑
双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)pd(oh)2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氢氧化钯pmb
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
对甲氧基苄基rt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
室温tea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三乙胺tfa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟乙酸thf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
四氢呋喃tlc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
薄层色谱法通用合成方案和实施例
[0437]
提供以下合成方案用于说明而非限制的目的。
[0438]
以下实施例说明了制备本文所述的化合物的各种方法。应当理解，本领域技术人员可以通过类似的方法或通过组合本领域技术人员已知的其他方法而能够制备这些化合物。还应理解，本领域技术人员将能够通过使用适当的起始材料并根据需要改变合成路径以如下所述的类似方式进行制备。通常，起始材料和试剂可以从商业供应商获得或根据本领域技术人员已知的来源进行合成或如本文所述的进行制备。
[0439]
除非另有说明，否则使用从商业供应商处获得的试剂和溶剂。无水溶剂和烘箱干燥的玻璃器皿用于对水分和/或氧敏感的合成转化。产量不是优化的。反应时间为近似的并且不是优化的。除非另有说明，否则在硅胶上进行柱色谱法和薄层色谱法(tlc)。谱以ppm(δ)给出，耦合常数(j)以赫兹报告。对于质子谱，溶剂峰用作参考峰。方案c.
[0440]
化合物的制备在文献(tebben等,acta cryst.(2016).d72,658
–
674；和berg等,j.med.chem.(2012),55(21),9107
‑
9119)中描述。
[0441]
将2
‑
氨基
‑5‑
溴吡嗪羧酸与3
‑
氨基吡啶在含有叔胺碱(例如n
‑
甲基吗啉)的极性溶剂(例如dmf)中混合以形成中间体i
‑
ii。在高温下，在钯催化剂(如pdcl2(dppf))下，中间体i
‑
ii可以与硼酸或硼酸酯在溶剂(例如二噁烷)和碱(例如na2co3)中混合，以提供最终产物(i
‑
iii)。方案d.
[0442]
可选地，在钯催化剂例如pdcl2(dppf)下，溴吡嗪(i
‑
iv)可以与硼酸或硼酸酯一起在溶剂(例如二噁烷)和碱(例如na2co3)中加热以提供中间体(i
‑
v)。羧酸酯可以在用氢氧化物碱例如naoh处理时转化为羧酸。中间体(i
‑
vi)可以与取代的氨基吡啶在含有叔胺碱(例如n
‑
甲基吗啉)的极性溶剂(例如dmf)中偶联以形成中间体i
‑
iii。方案e.
[0443]
可选地，溴吡嗪(i
‑
iv)可以与甲胺在水性条件下缩合以产生仲酰胺中间体(i
‑
vii)。然后可以在回流条件下用原甲酸三乙酯处理仲酰胺，以产生6
‑
溴
‑3‑
甲基蝶啶
‑
4(3h)
‑
酮(i
‑
viii)。然后可以使中间体6
‑
溴
‑3‑
甲基蝶啶
‑
4(3h)
‑
酮(i
‑
viii)与仲胺在高温下反应以产生中间体i
‑
x。3
‑
甲基蝶啶
‑
4(3h)
‑
酮(i
‑
x)可以水解为氨基吡嗪
‑2‑
羧酸中间体(i
‑
xi)，其可以通过与取代的氨基吡啶在极性溶剂(例如dmf)中偶联来进一步加工以形成中间体i
‑
xii。实施例i：关键中间体的制备实施例i.a：3
‑
氨基
‑6‑
溴
‑
n
‑
(4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)吡嗪
‑2‑
甲酰胺(中间体a)的制备
[0444]
向在25ml dmf中含有1.63g(7.5mmol)2
‑
氨基
‑5‑
溴吡嗪甲酸的溶液中添加3.54g(9.36mmol)hatu。将反应混合物搅拌15分钟，然后添加1.68g(9.36mmol)3
‑
氨基
‑4‑
吗啉代吡啶和2.5ml(22.5mmol)n
‑
甲基吗啉。将反应搅拌16小时，然后用10ml饱和nahco3溶液淬灭，并用etoac萃取三次。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，并经na2so4干燥。溶剂的蒸发和柱色谱法(sio2；10％ch3oh/dcm)提供了呈黄色固体的中间体a。1h nmr(cd3od)δ9.51(s,1h),8.76(s,1h),8.39(d,j＝5.4hz,1h),7.94(d,j＝8.1hz,2h),7.39
‑
7.27(m,8h),5.10(s,2h),3.81(t,j＝7.5hz,4h),2.96(t,j＝7.5hz,4h)。[m+h]
+
＝568.1。实施例i.b：(3
‑
(4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
(吡嗪
‑2‑
基)苯基)乙基)氨基甲酸苄酯(中间体b)的制备
[0445]
向3
‑
氨基
‑6‑
溴吡嗪
‑2‑
甲酸甲酯(4.6g，20.0mmol)和4
‑
(2
‑
(苄氧基羰基氨基)乙基)苯基硼酸(6.58g，22.0mmol)在50ml二噁烷中的溶液中添加2m na2co3溶液(20ml,40.0mmol)。用氮气吹扫反应混合物，然后添加pdcl2(dppf)(1.5g，2.0mmol)。将反应混合物在氮气球下于90℃加热1.5小时。将反应混合物冷却，并用乙酸乙酯和饱和nahco3溶液稀释。分离有机层并经硫酸镁干燥。将滤液浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(isco；80g筒(cartridge)：乙酸乙酯/二氯甲烷，0
‑
50％)纯化，以产生呈浅黄色固体的标题化合物，将其溶解在60ml etoh和10ml thf中。添加30ml(60mmol)2n lioh，并将混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩，然后用2n hcl溶液处理至ph＝5，以产生浅黄色沉淀，将其过滤并风干，无需进一步纯化即可使用。[m+h]
+
＝392.2。实施例i.c：(4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
((4
‑
溴吡啶
‑3‑
基)氨基甲酰基)吡嗪
‑2‑
基)苯乙基)
‑
氨基甲酸苄酯(中间体c)的制备
[0446]
向在5ml dmf中含有392mg(1.0mmol)中间体b的溶液中添加456mg(1.2mmol)hatu。将反应混合物搅拌15分钟，然后添加206mg(1.2mmol)3
‑
氨基
‑4‑
溴吡啶和0.26ml(2.4mmol)n
‑
甲基吗啉。将反应搅拌16小时，然后用饱和nahco3溶液淬灭并用etoac萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤并经na2so4干燥。溶剂的蒸发和柱色谱法(sio2；10％ch3oh/dcm)提供了呈黄色固体的中间体c。1h nmr(dmso
‑
d6)δ10.6(s,1h),9.25(s,1h),9.01(s,1h),8.29(d,j＝5.2hz,1h),8.10(d,j＝8.0hz,2h),7.8(s,1h),7.65(s,2h),7.57
‑
7.51(m,8h),5.02(s,2h),3.32(t,j＝7.2hz,2h),2.79(t,j＝7.2hz,2h),1.23(m,1h)。[m+h]
+
＝547.4。实施例i.d：4
‑
(3
‑
甲基
‑4‑
氧代
‑
3,4
‑
二氢蝶啶
‑6‑
基)哌嗪
‑1‑
甲酸叔丁酯(中间体d)的制备
[0447]
向6
‑
溴
‑3‑
甲基
‑
蝶啶
‑4‑
酮(cas#146940
‑
38
‑
7，0.5g，2.1mmol)在2
‑
甲氧基乙醇(10ml/g)中的溶液中添加哌嗪
‑1‑
甲酸叔丁酯(0.584g，3.1mmol，1.5当量)，并将得到的悬浮液在100℃下加热2小时。将反应混合物在冰浴中冷却，并将收集的沉淀物通过制备型rp
‑
hplc(在h2o(0.1％tfa)中的10％
→
80％acn(0.1％tfa))纯化，以提供呈黄色固体的中间体
d(0.35g，49％产率)。[m+na]
+
:369.2，m
‑
boc:246.2。实施例i.e：3
‑
氨基
‑6‑
(4
‑
(叔丁氧基羰基)哌嗪
‑1‑
基)吡嗪
‑2‑
甲酸(中间体e)的制备
[0448]
向4
‑
(3
‑
甲基
‑4‑
氧代
‑
蝶啶
‑6‑
基)哌嗪
‑1‑
甲酸叔丁酯(0.165g，0.48mmol)在meoh(5ml)中的溶液中添加(10％w/w，7.0当量)，并将得到的溶液在环境温度下搅拌17小时。然后将溶液酸化，用ch2cl2萃取，然后用碱性h2o(ph～10)处理以沉淀出期望的产物，将其重新溶解在ch2cl2中，经mg2so4干燥，过滤并浓缩，以得到呈黄色固体的中间体e(0.10g，64％产率)(90％纯度)。[m+na]
+
:346.2，m
‑
boc:223.2。实施例1
‑
6：示例性氨基
‑
吡嗪甲酰胺化合物的制备实施例1.1：(4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
((4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)氨基甲酰基)吡嗪
‑2‑
基)苯乙基)氨基甲酸苄酯(化合物1.1)的制备
[0449]
向中间体a(567mg，1.0mmol)和4
‑
(2
‑
(苄氧基羰基氨基)乙基)苯基硼酸(329mg，1.1mmol)在5ml二噁烷中的溶液中添加2m na2co3溶液(1.0ml，2.0mmol)。用氮气吹扫反应混合物，然后添加pdcl2(dppf)(37mg，0.05mmol)。将反应混合物在氮气球下于90℃下加热4小时。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯和饱和nahco3溶液稀释。分离有机层并经硫酸镁干燥。将滤液浓缩并将残余物通过硅胶色谱法(乙酸乙酯/二氯甲烷，0
–
50％)纯化，得到呈浅黄色固体的化合物1.1。实施例2.1：3
‑
氨基
‑6‑
(4
‑
(3
‑
氨基丙基)苯基)
‑
n
‑
(4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)吡嗪
‑2‑
甲酰胺(化合物2.1)的制备
[0450]
向在10ml etoh和10ml thf中含有758mg(2.0mmol)受保护的胺化合物1.2的溶液中添加200mg碳载20％pd(oh)2。将反应混合物脱气，然后用h2气球覆盖，然后在室温下搅拌4小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物并蒸发，以得到粗产物，将其通过反相hplc纯化，以提供750mg呈黄色固体的化合物2.1的tfa盐。1h nmr(cd3od)δ9.49(s,1h),8.71(s,1h),8.27(d,j＝5.1hz,1h),7.94(d,j＝8.1hz,2h),7.35(d,j＝8.1hz,2h),7.24(d,j＝5.4hz,1h),
3.80(t,j＝4.2hz,4h),3.00(d,j＝4.5hz,4h),2.71(m,4h),1.82(m,2h)。[m+h]
+
＝434.1。实施例3.1：(4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
((4
‑
(2
‑
甲基
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)吡啶
‑3‑
基)氨基甲酰基)吡嗪
‑2‑
基)苯乙基)氨基甲酸苄酯(化合物3.1)的制备
[0451]
向在5ml dmf中含有392mg(1.0mmol)中间体b的溶液中添加456mg(1.2mmol)hatu。将反应混合物搅拌15分钟，然后添加209mg(1.2mmol)4
‑
(2
‑
甲基
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)吡啶
‑3‑
胺和0.26ml(2.4mmol)n
‑
甲基吗啉。将反应搅拌16小时，然后用饱和nahco3溶液淬灭并用etoac萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤并经na2so4干燥。溶剂的蒸发和制备型hplc提供了呈黄色固体的化合物3.1。1h nmr(cd3od)δ9.81(s,1h),8.74(s,1h),8.53(d,j＝7.2hz,1h),7.64(d,j＝8.4hz,2h),7.54(d,j＝7.56(s,1h),7.35
‑
7.11(m,9h),7.36
‑
7.24(m,9h),5.07(s,2h),3.43(t,j＝7.5hz,2h),2.86(t,j＝7.5hz,2h),2.30(s,3h)。[m+h]
+
＝449.2。实施例4.1：3
‑
氨基
‑6‑
(4
‑
(2
‑
氨基乙基)苯基)
‑
n
‑
(4
‑
(2
‑
甲基
‑
1h
‑
咪唑
‑1‑
基)吡啶
‑3‑
基)吡嗪
‑2‑
甲酰胺(化合物4.1)的制备
[0452]
将90mg(0.20mmol)化合物3.1溶解在2ml tfa中，并将混合物在50℃下加热4小时。蒸发反应混合物，以得到粗产物，将其通过反相hplc纯化，以提供50mg呈黄色固体的化合物4.1的tfa盐。1h nmr(cd3od)δ9.83(s,1h),8.75(s,1h),8.54(d,j＝8.0hz,1h),7.63(d,j＝8.0hz,2h),7.44(s,1h),7.40
‑
7.29(m,3h),7.217(s,1h),3.06(m,2h),2.90(m,2h),2.35(s,3h)。[m+h]
+
＝415.2实施例5.1：(4
‑
(6
‑
([4,4'
‑
二吡啶]
‑3‑
基氨基甲酰基)
‑5‑
氨基吡嗪
‑2‑
基)苯乙基)氨基甲酸苄酯(化合物5.1)的制备
[0453]
向中间体c(110mg，0.20mmol)和4
‑
吡啶硼酸(27mg，0.22mmol)在1ml二噁烷中的溶液中添加2m na2co3溶液(0.2ml，0.4mmol)。用氮气吹扫反应混合物，然后添加pdcl2(dppf)(15mg，0.02mmol)。将反应混合物在氮气球下于90℃加热2小时。将反应混合物冷却并用乙酸乙酯和饱和nahco3溶液稀释。分离有机层并经硫酸镁干燥。将滤液浓缩并将残余物通过
反相柱色谱法纯化，以产生呈黄色固体的化合物5.1。1h nmr(dmso
‑
d6)δ10.2(s,1h),9.32(s,1h),8.85(s,1h),8.68(d,j＝6.8hz,2h),8.5(d,j＝7.8hz,1h),7.66
‑
7.22(m,15h),4.99(s,2h),3.28(m,2h),2.74(m,2h)。实施例6.1：4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
((4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)氨基甲酰基)吡嗪
‑2‑
基)哌嗪
‑1‑
甲酸叔丁酯(化合物105)的制备
[0454]
向3
‑
氨基
‑6‑
(4
‑
(叔丁氧基羰基)哌嗪
‑1‑
基)吡嗪
‑2‑
甲酸(0.2g，0.62mmol)在dmf(5.0ml)中的溶液中添加hoat(0.126g，0.93mmol，1.5当量)和edci(0.177g，0.93mmol，1.5当量)，在将溶液在环境温度下搅拌15分钟之后，以固体形式添加3
‑
氨基
‑4‑
溴吡啶(0.166g，0.93mmol，1.5当量)，并将所得溶液在室温下搅拌16小时。将反应物直接通过制备型rp
‑
hplc(在h2o(0.1％tfa)中的10％
→
80％acn(0.1％tfa))纯化，以提供呈黄色固体的化合物105(0.080g，27％产率)。[m+na]
+
:406.2，m
‑
boc:384.3。实施例7.1：3
‑
氨基
‑
n
‑
(4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)
‑6‑
(哌嗪
‑1‑
基)吡嗪
‑2‑
甲酰胺(化合物108)的制备
[0455]
在室温下向4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
((4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)氨基甲酰基)吡嗪
‑2‑
基)哌嗪
‑1‑
甲酸叔丁酯(0.08g，0.165mmol)在ch2cl2(1ml)中的溶液中添加tfa(1ml)。将所得溶液在环境温度下搅拌2小时，然后将其减压浓缩并将残余物通过制备型rp
‑
hplc(在h2o(0.1％tfa)中的10％
→
65％acn(0.1％tfa))纯化，以提供呈黄色固体的化合物108(0.037g，45％产率)。[m+h]
+
:385.3。
[0456]
使用本文所述的方法结合本领域技术来制备以下化合物：表14
实施例6：氨基
‑
吡嗪甲酰胺
‑
接头化合物的制备实施例6.1：4
‑
((s)
‑2‑
((s)
‑2‑
(6
‑
(2,5
‑
二氧代
‑
2,5
‑
二氢
‑
1h
‑
吡咯
‑1‑
基)已酰胺基)
‑3‑
甲基丁酰胺基)
‑5‑
脲基戊酰胺基)苄基(2
‑
(4
‑
(5
‑
氨基
‑6‑
((4
‑
吗啉代吡啶
‑3‑
基)氨基甲酰基)吡嗪
‑2‑
基)苯基)乙基)氨基甲酸酯(化合物6.1)的制备
[0457]
将包含42.0mg(0.10mmol)化合物2.3的溶液溶解在2ml dmf中，然后用74mg(0.10mmol)mc
‑
val
‑
cit
‑
pab
‑
pnp和0.035ml(0.2mmol)的hunig碱处理。将反应在25℃下加热1小时，然后使用rp
‑
hplc纯化而无需后处理。通过lcms鉴定产物级分并合并，然后冻干以提供20mg呈白色固体的化合物6.1的tfa盐。1h nmr(cd3od)δ9.49(s,1h),8.76(s,1h),8.27(d,j＝5.2hz,1h),7.98(j＝8.0hz,2h),7.53(d,j＝8.4hz,2h),7.37(d,j＝7.6hz,1h),7.27(m,3h),6.77(s,2h),5.02(s,2h),4.51
‑
4.48(m,1h),4.15(d,j＝7.6hz,1h),3.79(m,4h),3.46
‑
3.39(m,4h),3.02(m,4h),3.87(t,j＝6.8hz,2h),2.26(t,j＝7.2hz,2h),2.08
‑
2.03(m,1h),1.90
‑
1,69(m,2h),1.65
‑
1.51(m,6h),1.33
‑
1.29(m,4h),0.95(d,j＝6.8hz,6h)。lcms(m+h)＝1018.7。
[0458]
以类似于实施例6.1中所描述的方式制备表15和表16中的接头
‑
化合物。
表15
表16
[0459]
使用本文所述的教导结合本领域技术制备了表17中的接头
‑
化合物。表17
实施例7：通过非工程化抗体的天然二硫化物键的部分还原产生抗体
‑
tgfb抑制剂缀合物。
[0460]
通过分子量截留离心过滤(millipore，30kda)将mab(在pbs中3
‑
8mg/ml)交换至hepes(100mm，ph 7.0，1mm dtpa)中。将所得的mab溶液转移到配衡的50ml锥形管中。通过a
280
确定mab浓度为3
‑
8mg/ml。在室温下向mab溶液中添加tcep(2.0至4.0当量，1mm储备液)，并将所得混合物在37℃下孵育30分钟至90分钟，同时轻轻摇动。冷却至室温后，将搅拌棒添加至反应管中。在搅拌下，滴加接头
‑
有效载荷(5
‑
10当量，10mm dmso)。将所得反应混合物在环境温度下搅拌30分钟至60分钟，此时添加n
‑
乙基马来酰亚胺(3.0当量，100mm dma)。再搅拌15分钟之后，添加n
‑
乙酰基半胱氨酸(6.0当量至11.0当量，50mm hepes)。然后将粗制的adc交换至pbs中，并使用pbs作为流动相通过制备型sec(例如hiload 26/600，superdex 200pg)进行纯化。将纯级分通过分子量截留离心过滤(millipore，30kda)浓缩，无菌过滤，并转移到15ml锥形管中。通过以下实施例8中所述的方法确定药物与抗体构建体之比(摩尔比)。实施例8：用于确定药物与抗体之比的一般程序疏水相互作用色谱
[0461]
将10μl 6mg/ml缀合物溶液上样到装配有附加的tosoh tskgel butyl
‑
npr
tm
疏水相互作用色谱(hic)柱(2.5μm粒径，4.6mm
×
35mm)的hplc系统中。然后，在18分钟的过程中，运行这样的方法，其中在12分钟的过程中从100％的流动相a到100％的流动相b运行流动相梯度，然后以100％的流动相a进行6分钟再平衡。流速为0.8ml/分钟，检测器设置为280nm。流动相a是1.5m硫酸铵、25mm磷酸钠(ph 7)。流动相b是25mm磷酸钠(ph 7)中的25％异丙醇。运行后，对色谱图进行积分，并通过对加权峰面积求和来确定摩尔比。实施例9：tgfβ报道子测定材料和一般程序
[0462]
tgfβ/smad信号传导途径sbe报道细胞系获自bps bioscience。按照供应商的说明将细胞传代、扩增并储存在液氮中，不同之处在于将生长培养基更换为具有遗传霉素的dmem
‑
c(补充有10％胎牛血清、1x neaa、1mm丙酮酸、2mm谷氨酰胺、50μg/ml青霉素、50u/ml链霉素和400μg/ml遗传霉素的dmem)。测定培养基为补充有0.5％胎牛血清、1x neaa、1mm丙酮酸、50μg/ml青霉素和50u/ml链霉素的mem。用于体外小分子筛选的一般程序
[0463]
将测试样品(在测定培养基中稀释的期望浓度下)添加到96孔测定板中，每孔20μl。在移除烧瓶中的培养基并用pbs冲洗细胞之后，通过在37℃下在少量pbs中孵育两分钟来从组织培养瓶中收获报道细胞。将细胞进行计数并在测定培养基中以约0.5
×
106个细胞/ml稀释，然后以80μl/孔的细胞添加到含有20μl/孔测试样品(或仅培养基)的测定板中，并在37℃下于5％co2的湿润培养箱中孵育约5小时至6小时。之后，将在测定培养基中稀释至12ng/ml的15μl tgfβ添加到板中。对照包括无抑制剂的tgfβ滴定(50ng/ml至0ng/ml)和仅培养基(无细胞、抑制剂或tgfβ)。将板在37℃下于5％co2的湿润培养箱中孵育18小时。随后以每孔100μl添加荧光素酶底物溶液，在黑暗中于室温孵育15分钟，并使用发光计测量发光。使用prism(graphpad software)获得ec
50
值和曲线拟合。
[0464]
表18包括所选化合物的ec
50
值；其中化合物的ec
50
值<50nm计为aa，化合物的ec
50
值
为50nm至100nm计为a，100nm至1000nm计为b，以及大于1000nm计为c。
[0465]
本公开内容的化合物也由reaction biology corp.使用tgfbr2 rbc测定(酶抑制测定)进行测定。表18还包括所选化合物的ic
50
值；化合物的ic
50
值<50nm计为aa，化合物的ic
50
值为50nm至100nm计为a，100nm至1000nm计为b，大于1000nm的化合物计为c。nt是指未测试。表18
实施例10至实施例21
[0466]
在实施例10至实施例21中，lrrc15抗体是鼠m25抗体或其人源化变体(参见国际申
请第wo2017/095805号，将其出于所有目的通过引用以其整体并入本文)。通过链间二硫化物与接头
‑
有效载荷缀合。抗体具有野生型fc结构域或无效fc结构域。对于人igg1的fc无效突变是l234a、l236a、g237a和k322a，并且对于鼠igg2a的fc无效突变是l234a、l236a、g237a、k322a和p329g；以上均按eu索引编号。接头
‑
有效载荷如表15至表17中所示。实施例10：多种抗体
‑
tgfb抑制剂缀合物降低了tgfβ诱导的smad2活性
[0467]
测试了在2.5至4的平均dar(药物负载)下通过组织蛋白酶b可切割的pabc接头与抗lrrc15抗体缀合的一组tgfβr2抑制剂分子在表达抗体抗原的靶标细胞中降低tgfβ1诱导的smad2启动子活性的能力。将lp1和lp10接头
‑
有效载荷与具有fc无效结构域的人源化igg1 m25抗体缀合，而其他接头
‑
有效载荷与具有fc无效结构域的鼠igg2a m25抗体缀合。将在mem+0.5％fbs、1％neaa、1％napyr&1％pen/strep的测定培养基中的转染为稳定表达全长人lrrc15的hek293 smad2p荧光素酶报道细胞(bps bioscience inc.)以40,000个细胞/孔接种到96孔板中。将缀合物和对照以范围为500nm至.03nm的剂量滴定添加到孔中。在5％co2环境中于37℃下培养24小时之后，添加人tgfβ1(peprotech inc.)至终浓度1.6ng/ml，然后再培养18小时。按照制造商的推荐添加荧光素酶steady glo试剂(promega corporation)。摇动孵育10分钟之后，通过用envision读板仪(perkin
‑
elmer inc.)测量发光来确定smad2p活性，并使用prism software v8.1.0(graphpad inc.)来确定绝对ic50。许多小分子抗
‑
lrrc15抗体缀合物减少了化学发光信号，从而证明了对tgfβ诱导的信号的抑制。通过不相关的非抗原结合抗地高辛抗体缀合物的抑制的缺乏以及几种有效的抗lrrc15缀合物对亲代hek293 smad2
‑
荧光素酶报道子系的抑制的缺乏都证明了抑制依赖于抗原结合(数据未示出)。效力等级显示在下表19中。表19
实施例11：与具有不同接头的单克隆抗体缀合的示例性tgfβr2抑制剂可以降低tgfβ诱导的smad2活性
[0468]
使用表达人lrrc15的hek293smad2
‑
荧光素酶报道细胞系测试了用不同的可切割接头或不可切割接头与抗lrrc15抗体共价连接的化合物2.1的缀合物的降低由tgfβ诱导的smad2启动子活性的能力。使接头
‑
有效载荷与具有野生型fc结构域的人源化igg1m25抗体缀合。将在mem+0.5％fbs、1％neaa、1％napyr&1％pen/strep的测定培养基中的转染为稳定表达全长人lrrc15的hek293smad2p荧光素酶报道细胞(bps bioscience inc.)以40,000个细胞/孔接种到96孔板中。将缀合物和对照以范围为500nm至.03nm的剂量滴定添加到孔中。在5％co2环境中于37℃下培养24小时之后，添加人tgfβ1(peprotech inc.)至终浓度1.6ng/ml，然后再培养18小时。按照制造商的推荐添加荧光素酶steady glo试剂(promega corporation)。摇动孵育10分钟之后，通过用envision读板仪(perkin
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elmer inc.)测量发光来确定smad2p活性，并使用prism software v8.01(graphpad inc.)来确定绝对ic50。可切割接头均显示出ic50<1nm的效力，而不可切割接头则显示出更可变的效力。通过抗地高辛缀合物(同种型mab
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lp1)对tgfβ诱导的smad2p活性增加的最小抑制证明了对lrrc15结合的依赖性。参见图1。实施例12：示例性tgfβr2抑制剂分子以浓度依赖性方式降低人ipf患者来源的成纤维细胞系中tgfβ诱导的mrna
[0469]
在用细胞系ll97a(atcc)的测定中如下测试了选择小分子以降低tgfβ1诱导的
mrna的能力。将在dmem+10％fbs+1％napyr、+1％l
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glut、+1％neaa、+1％hepes+0.5％pen/strep中的ll97a细胞以10,000个细胞/孔接种到96孔板中。第二天，将测试物品和对照以不同浓度添加到dmem+0.5％bsa的测定培养基中，同时将0.5ng/ml tgfβ1(peprotech inc.)添加到孔中。在5％co2环境中于37℃下与tgfβ1一起孵育24小时或48小时之后，从细胞制备rna，并根据制造商的推荐，使用gene expression cells
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to
‑
c
t 1
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step试剂盒(life technologies inc.)和one step plus热循环仪(applied biosystems)对tgfβ诱导型基因αsma和弹性蛋白以及非诱导型对照基因rplpo进行qpcr。引物探针组获自thermofisher scientific。如图2至图5所示，tgfβr2抑制剂以浓度依赖性方式有效抑制tgfβ诱导的基因。实施例13：与抗lrrc15抗体缀合的tgfβr2抑制剂显示出对tgfβ诱导的基因表达的有效抑制
[0470]
使用不同的蛋白酶可切割的pabc接头将化合物2.1和化合物171与抗lrrc15抗体共价连接。将接头
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有效载荷与具有fc无效结构域的鼠igg2a m25抗体缀合。通过制备型尺寸排阻色谱法纯化缀合物。通过经由使用tsk
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gel butyl npr(tosoh bioscience llc)的疏水相互作用色谱(hic)的分析以及通过lcms(waters corp.)来确定纯化的物质的平均dar水平，并使用qpcr测定来测试它们在ll97a和nhlf人成纤维细胞系中通过tgfβ减少αsma和弹性蛋白基因诱导的能力。为了进行测定，将在推荐的生长培养基中的ll97a或nhlf的10,000个细胞放入6孔板的孔中，并进行孵育。移除生长培养基并用测定培养基dmem+0.5％bsa(ll97a)或fbm+0.1％bsa(nhlf)代替，将不同浓度的测试物品和对照添加到孔中以及添加tgfβ1(peprotech inc.)至终浓度为0.5ng/ml。在5％co2环境中于37℃下孵育24小时或48小时之后，从孔准备rna，并使用针对αsma和弹性蛋白的探针组，根据制造商的推荐，使用cells
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to
‑
ct 1
‑
step试剂盒(life technologies inc.)和step one plus热循环仪(applied biosystems)进行qpcr。如图6a和图6b所示，对于ll97a细胞(a)和正常成纤维细胞(b)，不同的接头支持抑制剂向细胞中的有效抗体递送，如通过αsma和弹性蛋白的mrna的有效降低所证明的。实施例14：tgfbr2抑制剂与具有无fcγr结合的fc结构域或者具有完整fcγr结合的fc结构域的抗lrrc15抗体的缀合物具有等效性
[0471]
使化合物2.1通过pabc接头与携带野生型fc结构域或fc无效结构域的鼠igg2a m25抗体共价连接。鼠igg2a的fc无效突变为基于eu编号的l234a、l236a、g237a、k322a和p329g，从而缺乏通过生物层干涉测定(octet；forte bio)可检测的fcγr结合(fc无效)。为了进行测定，将在推荐的生长培养基中的ll97a或nhlf的10,000个细胞放入6孔板的孔中，并进行孵育。移除生长培养基并用测定培养基dmem+0.5％bsa(ll97a)或fbm+0.1％bsa(nhlf)代替，将不同浓度的测试物品和对照添加到孔中以及添加tgfβ1(peprotech inc.)至终浓度为0.5ng/ml。在5％co2环境中于37℃下孵育24小时或48小时之后，从孔准备rna，并使用针对αsma和弹性蛋白的探针组，根据制造商的推荐，使用cells
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to
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ct 1
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step试剂盒(life technologies inc.)和step one plus热循环仪(applied biosystems)进行qpcr。如图7所示，在大约相等的平均dar下，缀合物在ll97a细胞(图7(a))和正常成纤维细胞(b)中具有相当地同样减少αsma和弹性蛋白的能力。星号表示具有野生型fc
结构域的抗体。实施例15：瘤内注射tgfβr2抑制剂降低了疾病相关的tgfβ诱导型基因在人胰腺癌的两种异种移植模型中的基因表达
[0472]
测试了tgfβr2抑制剂改变一组据报道受tgfβ调节的基因(特别是与肿瘤caf相关的那些基因)的体内表达的能力。将matrigel(corning life sciences)中的200万个bxcp3(attc)或500万个panc
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1(attc)细胞接种到裸鼠(jax labs)的侧腹中，使其生长到约100mm3的尺寸，然后再分类成群组以进行处理。bxpc3肿瘤通过瘤内注射(it)2μg化合物211、化合物171或等体积的dmso媒介物进行处理(qd5)，而panc
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1肿瘤则接受2μg化合物211或媒介物对照注射物(qd5)。最后一次注射之后四个小时，将肿瘤取出并通过使用分离rna的purelink rna试剂盒(ambion)在m管(miltenyi biotec)中均化以及使用rna to ct 1step试剂盒(applied biosystems)和onestepplus热循环仪进行rt
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qpcr处理。基因特异性引物获自thermofisher scientific。一些引物对小鼠基因靶标(ms)具有特异性，而另一些引物可以测量来源于人肿瘤细胞和小鼠肿瘤细胞的基因mrna水平(ms/hu)。alas1 mrna不受处理的影响，并用作参考基因。使用graphpad prism v8.1.0分析数据并绘制图形。通过采用q＝5％的benjamini、krieger和yekutieli的两阶段线性递升程序的发现(fdr)，使用多重t检验比较来确定tgfβr2抑制剂与媒介物处理的群组之间的基因mrna表达的统计差异。在不假设sd一致的情况下，对每一行进行单独分析。如图8a所示，化合物211处理降低了panc
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1肿瘤中的许多tgfβ诱导型基因mrna，包括q值通过fdr测试的那些(**q<.005；*q<.05)。同样如图8b和图8c所示，用化合物211或化合物171(b)和/或化合物211(c)的处理降低了bxpc3肿瘤中大多数tgfβ诱导型基因的mrna水平，包括通过fdr测试的一些(*q<0.05，**q<0.005***q<.0005，****q<0.00005)。实施例16：体内瘤内注射tgfβr2抑制剂缀合物降低肿瘤中tgfβ诱导型基因的基因表达
[0473]
为了证明与具有小鼠igg2a恒定区的抗lrrc15抗体缀合的tgfβr2抑制剂在体内降低tgfβ诱导型基因的肿瘤mrna，在通过用马来酰亚胺pabc可切割接头将胱氨酸部分还原处理之后，化合物171与抗体在反应性半胱氨酸残基处共价连接，以产生平均dar为3.9的抗lrrc15
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lp35。将panc
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1肿瘤细胞注射到裸鼠的侧腹中(matrigel中的5,000,000个)，并使其生长至100mm3，然后开始通过每隔一天共3剂的瘤内注射pbs媒介物、157μg非缀合的抗lrrc15抗体或157μg缀合物进行处理。在最后一个剂量之后八小时收获肿瘤，如上所述进行处理，进行rt
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qpcr，并进行分析。通过采用q＝5％的benjamini、krieger和yekutieli的两阶段线性递升程序的发现(fdr)，使用多重t检验比较来确定tgfβr2抑制剂与媒介物处理群组之间的基因mrna表达的统计差异。在不假设sd一致的情况下，对每一行进行单独分析。该缀合物降低了所有基因((eln、tagln、fn1、tgfb1和acta2)的mrna的平均值，其数值通过了fdr测试(数据未示出)。实施例17：抗lrrc15缀合物的全身性递送减少小鼠人肿瘤异种移植模型中tgfβ调节的基因
[0474]
测试了通过不同的接头在半胱氨酸残基处与lrrc15抗体共价连接的两种tgfβr2抑制剂的抗lrrc15
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migg2a缀合物在全身性给药之后抑制tgfβ调节的基因的表达的能力。裸鼠(jax labs)具有175万个接种到侧腹中的bxpc3肿瘤细胞，并在肿瘤达到约100mm3之后
分类成处理群组。动物连续4天接受20mpk静脉内剂量的抗lrrc15
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lp35(野生型igg2)、抗lrrc15
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lp36缀合物(fc无效igg2)或由未缀合的抗lrrc15抗体组成的对照或抗lrrc15抗体同种型匹配的对照。在最终剂量之后八小时收获肿瘤，如上所述进行rna分离处理并对rna进行rt
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qpcr。使用q＝1％比较用未缀合的抗体和缀合物处理的动物中的基因表达，对图9中示出的结果进行统计学分析(如实施例14所述)。以星号标记的比较通过了fdr测试(*q<0.01，**q<0.001，***q<0.0001)。实施例18：抗lrrc15tgfβr2抑制剂缀合物的全身性递送在两种剂量水平下有效降低肿瘤中的tgfβ调节的基因表达
[0475]
将抗lrrc15抗体tgfbr2抑制剂缀合物(抗lrrc15
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lp36)以2种不同剂量水平通过静脉内途径施用至携带人肿瘤细胞系bxpc3的异种移植物的裸鼠中。将每只小鼠两百万个肿瘤细胞注射到侧腹中，在肿瘤达到约100mm3的大小之后，将其分类成处理组。该组接受每天4次静脉内注射20mpk抗lrrc15
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lp36、5mpk抗lrrc15
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lp36、20mpk未缀合的lrrc15抗体或20mpk同种型对照抗体。在最终剂量之后八小时收集肿瘤，如实施例14中所述分离rna并进行rt
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qpcr。结果显示在图10中。当对fdr为q＝5％的发现通过多重t检验进行统计分析时，在与未缀合的抗体相比显示出有效降低的tgfβ调节的基因表达的两个剂量下均发现所有基因(*q<0.05；**q<0.005)。实施例19：缀合物活性追踪的小分子活性
[0476]
制备抗lrrc15或抗her2缀合物，其包括在如表9b所示的可取代氮处与接头l1连接的化合物55、56、57、61、62、64、65、67、70、73、75、83、87、88、91、102、108、112、127、129、132、136、138、139、140、142、145、162、168、169、170、171、175、181、182、184、190、194、195、197、202、203、205、211、213、219、220、222、224和256。使化合物171与以下接头l1、l2、l3和l4缀合。平均dar为2至5。表20
[0477]
追踪到通过基于细胞的报道子测定测试的所述tgfβr2
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抗体药物缀合物的效力与在基于小分子细胞的报道子测定中观察到的小分子活性的活性成比例。例如，当通过基于小分子细胞的报道子测定评估时，观察到的小分子活性是低的，而在无小分子细胞的酶促抑制测定中通过测量的活性是高的，认为不受理论的束缚，这通常可以归因于具有低细胞渗透性的分子。在这些情况下，追踪到适用的tgfβr2抗体药物缀合物的效力的排名顺序与无小分子细胞的酶促抑制测定中观察到的活性更紧密。实施例20：与抗lrrc15抗体缀合的tgfβr2抑制剂减少系统性硬皮病模型中的组织病理学纤维化
[0478]
通过每天皮下注射博来霉素(0.1ml，1.2u/ml)持续23天，在5至7周龄的雌性c3h/hej小鼠的皮肤中引起纤维化。使用蛋白酶可切割的pabc接头将化合物2.1与抗lrrc15抗体(具有野生型igg1 fc结构域的人源化m25抗体)共价连接。从第14天开始至第22天结束，以10mpk的剂量向10只动物的群组ip施用缀合物3xw。作为对照，匹配的小鼠群组仅接受pbs媒介物。在第23天，处死小鼠，将注射部位的皮肤用多聚甲醛固定并通过标准程序用马松三色染色进行染色以显示胶原蛋白。如通过胶原蛋白评估的纤维化由组织病理学家使用表21列出的分级系统进行评分。如图11所示，使用邓恩多重比较检验(dunn’s multiple comparison test)，通过达到指定的统计学显著性的该测量进行评估，用缀合物的处理减少了纤维化。表21
实施例21：与抗lrrc15抗体缀合的tgfβr2抑制剂减少在系统性纤维化模型中的纤维化
[0479]
使用蛋白酶可切割的pabc接头将化合物2.1与抗lrrc15抗体(具有野生型iggl fc结构域的人源化m25抗体)共价连接。使用制造商的方案，通过在来自注射部位的一片称重的未固定皮肤上使用sircol胶原蛋白测定，对通过缀合物处理的动物中的胶原蛋白沉积进行的纤维化独立评估进行生化分析，以测定微克/mg胶原蛋白。如图12所示，当通过单向方差分析(one
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way anova)进行分析时，通过该测量，处理后的群组的纤维化显著减少。