专利名称:高浓度光合细菌制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及高浓度光合细菌制剂的制备方法。
背景技术：
光合细菌制剂的制备方法很多，如公开号为CN1104250A的中国专利介绍的方法为在菌种培养液中接种30％以上的两株菌株的混合菌群，接种后的培养液在温度为26-32℃，光照强度为3000-5000LX、pH为6-8，厌氧条件下培养48-72小时，然后将培养出的菌液在敞开体系中、自然光照下，根据菌液中的碳源残存量适时添加一次以上的碳源，在温度为20-35℃、好氧充气条件下培养72-120小时后，收集菌液分装，制成液体微生物混合制剂。还有的是在培养过程中进行定时搅拌(如公开号为CN1400303A的中国专利)，可见，绝大多数的光合细菌制剂制备方法的关注重点都是集中于对碳源、光照强度、温度、氧含量及pH值的控制，通过添加碳源、充氧、搅拌等多种方法来进行菌剂生产，这些方法一是在生产中需要添加碳源、充入氧气，操作过程繁琐，并且需要一定的设备；二是容易感染杂菌，影响菌剂质量；三是培养时间长，菌体含量低，品质难以保障。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种生长速度快、菌体含量高、具有抑菌作用的高浓度光合细菌制剂的制备方法。
本发明所采用的技术方案是在光合细菌基本培养基中加入促酵剂和木瓜提取液制成菌体生产培养液，再加入占菌体培养液总体积10～20％的菌种，混合均匀后装入透明容器中，在温度28～35℃、光照强度1500～2500LX的条件下微好氧培养72～120小时，制成活菌含量在30亿/ml以上的光合菌剂。
本发明中所述的光合细菌菌种均可外购，至少采用两种或两种以上的菌株进行混合培养，菌种密度在30亿/ml以上。
所述的光合细菌基本培养基的组成为酵母膏1～2g，磷酸二氢钾0.4～0.6g，硫酸镁0.3～0.6g，乙酸钠2～4g，水1000g，pH值6.5～7.5。
本发明中所述的促酵剂是指黄腐酸。黄腐酸在菌体生产培养液中的添加量为0.05～0.1％。
以上所说的木瓜提取液是指新鲜木瓜绞碎后，加入3倍重量的水，用文火煮沸半小时，过滤后得到的原液。木瓜提取液的添加量为0.5～1.5％。
以上所说的透明容器是指透明的塑料容器或玻璃容器。
以上所说的微好氧培养是指菌体培养容器用灭菌棉塞封口，培养过程中每隔5～8小时摇匀一次。
以上所说的菌体培养液所采用的原料，如果是用于农业种植或生活垃圾、污水处理，则采用工业级原料；如果是用于禽兽饲养、水产养殖，则采用食品级原料；水可以采用洁净的河水、地下水、自来水等，但是其硬度、大肠杆菌数、BOD值、氯含量等各项指标均应满足一般微生物生长的要求。
本发明中所加入的黄腐酸能明显促进光合细菌的生长速度，缩短生产时间，提高培养液中的菌体密度；木瓜提取液中含有丰富的维生素、蛋白质、有机酸、木瓜酵素等有效成分，这些成分均能被光合细菌利用，为光合细菌生长提供了充足的养份。此外，黄腐酸和木瓜中含有的有机酸均为弱酸，在培养液中能起缓冲作用，使pH值保持相对稳定，有利于光合细菌的生长。另外，木瓜酵素能抑制杂菌生长，提高光合细菌的活性。
本发明与一般的培养方法相比，其优点在于一是生长过程中无需添加碳源和充氧，操作简单；二是培养时间缩短为3～5天，提高了生产效率；三是菌体得率高，成品中菌体含量在3‰以上；四是基本无杂菌，有一定的抑菌作用。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的说明。
实施例11.配制菌种光合细菌采用荚膜红假单胞菌Rhodopseudomonas capsulata和沼泽红假单胞菌Rps.Palustris，将这两个菌株分别培养后按体积比1∶1混合得到混合菌种；2.配制培养液称取酵母膏1.5kg，磷酸二氢钾0.5kg，硫酸镁0.3kg，乙酸钠2.5kg，黄腐酸0.8kg，分别溶解于1000kg水中，再加入木瓜提取液1kg，调整pH值为7.0；3.培养菌种将180kg混合菌种加入培养液中，混合均匀，装入透明的塑料桶中，塞上棉塞，在温度32～35℃、光照强度2000LX的条件下培养3～5天，培养过程中每隔5小时摇匀一次，当菌液中活菌浓度达到30亿/ml以上时，制成光合菌剂。
实施例21.配制菌种光合细菌采用荚膜红假单胞菌Rhodobacter capsulatus、沼泽红假单胞菌Rps.rutila和球形红假单胞菌Rps.Globiformis。将三个菌株分别培养后按体积比1∶1∶1混合得到混合菌种；2.配制培养液称取酵母膏2kg，磷酸二氢钾0.5kg，硫酸镁0.5kg，乙酸钠3kg，黄腐酸0.5kg，分别溶解于1000kg水中，再加入木瓜提取液1.5kg，调整pH值为7.0；3.培养菌种将200kg混合菌种加入培养液中，混合均匀，装入透明的塑料桶中，塞上棉塞，在温度32～35℃、光照强度2500LX的条件下培养4天，培养过程中每隔5小时摇匀一次，当菌液中活菌浓度达到30亿/ml以上时，制成光合菌剂。
权利要求
1.一种高浓度光合细菌制剂的制备方法，其特征在于，在光合细菌基本培养基中加入促酵剂和木瓜提取液制成菌体生产培养液，再加入占菌体培养液总体积10～20％的菌种，混合均匀后装入透明容器中，在温度28～35℃、光照强度1500～2500LX的条件下微好氧培养72～120小时，制成活菌含量在30亿/ml以上的光合菌剂。
2.根据权利要求
1所述的高浓度光合细菌制剂的制备方法，其特征在于，促酵剂是指黄腐酸，其在菌体生产培养液中的添加量为0.05～0.1％。
3.根据权利要求
1所述的高浓度光合细菌制剂的制备方法，其特征在于，木瓜提取液是指新鲜木瓜绞碎后，加入3倍重量的水，用文火煮沸半小时，过滤后得到的原液，其在菌体生产培养液中的添加量为0.5～1.5％。
4.根据权利要求
1所述的高浓度光合细菌制剂的制备方法，其特征在于，光合细菌基本培养基的组成为酵母膏1～2g，磷酸二氢钾0.4～0.6g，硫酸镁0.3～0.6g，乙酸钠2～4g，水1000g，pH值6.5～7.5。
5.根据权利要求
1所述的高浓度光合细菌制剂的制备方法，其特征在于，微好氧培养是指菌体培养容器用灭菌棉塞封口，培养过程中每隔5～8小时摇匀一次。
专利摘要
一种高浓度光合细菌制剂的制备方法，具体为在光合细菌基本培养基中加入促酵剂和木瓜提取液制成菌体生产培养液，再加入占菌体培养液总体积10～20％的菌种，混合均匀后装入透明容器中，在温度28～35℃、光照强度1500～2500LX的条件下微好氧培养72～120小时，制成活菌含量在30亿/ml以上的光合菌剂，其中所述的微好氧培养是指菌体培养容器用灭菌棉塞封口，培养过程中每隔5～8小时摇匀一次。一般的培养方法相比，本发明所述的制备方法操作简单，培养时间短，生长速度快，菌体得率高，菌剂质量稳定，并且具有一定的抑菌作用。
文档编号C12N1/20GKCN1706933SQ200410048678
公开日2005年12月14日 申请日期2004年6月11日
发明者郭伟光 申请人:郭伟光导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan