一种壳聚糖衍生物的制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学临床用药，具体是涉及一种适用抗菌、抑菌的治疗与预防感染的 药物和食品保鲜剂。
【背景技术】
[0002] 壳聚糖是甲壳素的主要衍生物，是由甲壳素经脱乙酰基后得到的一种高分子氨基 多糖，在它们的结构中有活泼的氨基、羟基，易于化学改性羟基多功能基团拓宽应用领域。
[0003]Jeon等研究了高、中、低分子量的甲壳低聚糖对革兰阳性菌、阴性菌及乳酸菌的 抑制作用。结果证实其对大部分细菌都有杀菌活性，革兰阳性苗的敏感性高于阴性菌，致 病菌的敏感性高于非致病菌，与国内报道一致，高分子量甲壳低聚糖的抗菌性最强（Jeon YJ，ParkPJ，KimSK.Antimicrobialeffectofchitcooligosaccharidesproducedby bioreactor[J].CarbohydratePolimer，2001，44 :71_76)〇 对于分子量在30. 5万以下的随其浓度的增加其抗菌作用的效果增强。当浓度为1% 时，对革兰阳/阴性菌的抑菌率均达到100%。对革兰阳性菌，随分子量增大抗菌作用逐渐 增强，其原因主要是分子量越大，所形成外层膜越致密、越能阻止营养物质进入细菌细胞， 因而抗菌作用效果更明显。对革兰阴性菌，随分子量减小，抗菌作用逐渐增强，分子量为 5000以下时，抗菌作用最强。其原因主要是分子量越小，越容易进入细胞壁的空隙结构内， 干扰细胞的新陈代谢，引起细菌死亡。
[0004] 在壳聚糖的羟基引入酰基，可以大大改善它的溶解性，增加其抗菌作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种壳聚糖酰基衍生物的制备方法。提供一种制备方法简 单，易溶于水，原料来源广泛的治疗和预防细菌感染的药物以及抗菌食品添加剂。
[0006] 本发明的优点是制备方法简单，易溶于水，原料来源广，成本低廉，无副作用。
[0007] 本发明的壳聚糖酰基化衍生物的制备方法，包括以下步骤：
[0008] 壳聚糖酰基化衍生物制备：将壳聚糖30g，乙酸酐200ml和氨基磺酸2g，混合于室 温下反应30min，再将温度继续上升至60-90°C反应20min完成反应。至反应完全结束，真 空减压浓缩。产物中加入乙酸乙酯200ml分次冲洗，经减压干燥得到壳聚糖衍生物。
[0009] 所述的药物，在促进人或动物细菌感染的治疗中的应用。
[0010] 为了进一步的验证本发明成品制剂的疗效，我们将上述具体制备方法中制备的药 物进行了相应的细菌试验，现将结果报告如下。
[0011] 试剂：NutrientAgar培养基、MH(B)培养基均购于北京奥博星生物技术有限公 司；阳性药青霉素药敏试纸（10ug/片）购于杭州天和微生物试剂有限公司
[0012] 微生物：金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌。
[0013] 方法：检测壳聚糖衍生物抗菌活性、测定最低抑菌浓度（MIC)
[0014]NutrientAgar培养基：称取33gNutrientAgar干粉，溶解于1000ml蒸馈水，调 pH值至7. 2,121 °C灭菌20min后，冷却至50-60°C，分别向各75cm培养皿中倒入20ml，冷却 制备固体培养基平板，备用。MH(B)培养基：称取24gMueller-HintonBroth干粉，溶解于 1000ml蒸馏水，调pH值至7. 2,121°C灭菌20min，备用。取壳聚糖用蒸馏水溶解，制成药物 浓度20mg/ml溶液，经高压灭菌后备用。每张纸片（直径6mm)分别加溶液10yl，室温下 干燥备用。供试菌株的活化。取试验菌种接种于MH液体培养基中制备菌悬液，调整菌液浓 度为〇. 5麦氏单位（约108CFU/ml)备用。纸片扩散法测抗菌活性：取0. 5麦氏单位的菌液 0.lml加在固体培养基平板上，用玻璃推棒将菌液涂布均匀，制成带菌平板。室温放置5min 后，贴加含药纸片，植入35°C恒温培养箱内培养18h，观察菌落生长情况，用游标卡尺测定 抑菌圈直径，实验平行重复3次，同时用青霉素药敏试纸作为阳性对照。
[0015] 参考美国临床实验室标准委员会（CLSI)所公布的标准，采用微量液基稀释法测 定对不同菌株的MIC值。将0.5麦氏单位的菌液经MH培养基1 : 1000稀释后，在96孔板 中每孔加入100U1 (每排第1孔不加），每排第1孔只加培养基作阴性对照，第12孔不加 药物作阳性对照，2-11孔按倍比稀释法使药物在各孔中的浓度分别为1024、512、256、128、 64、32、16、8、4、2yg/ml，每个浓度重复3孔。将培养板置于35°C恒温培养箱内培养18h，在 黑色背景下肉眼观察，阴性对照孔溶液应清晰透亮，阳性对照孔细菌生长良好，此时以溶 液清晰透亮的最低浓度孔中的药物浓度为MIC。
[0016] 结果：表1壳聚糖对受试菌株抑菌圈直径（mm)
【主权项】
1. 一种壳聚糖衍生物的制备方法，其特征在于将壳聚糖30g，乙酸酐200ml和氨基磺酸 2g，混合于室温下反应30min，再将温度继续上升至60-90°C反应20min完成反应。至反应 完全结束，真空减压浓缩。产物中加入乙酸乙酯200ml分次冲洗，经减压干燥得到壳聚糖衍 生物。
2. 权利1壳聚糖酰基衍生物在制备促进人或动物抗菌抑菌和预防感染治疗中的应用 以及在食品添加剂中的应用。
【专利摘要】将壳聚糖30g，乙酸酐200ml和氨基磺酸2g，混合于室温下反应30min，再将温度继续上升至60-90℃反应20min完成反应。至反应完全结束，真空减压浓缩。产物中加入乙酸乙酯分次冲洗，经减压干燥得到壳聚糖衍生物。本制剂，制备方法简单，易溶于水，抗菌效果好，原料来源广，成本低廉，无副作用。
【IPC分类】C08B37-08, A23L3-3562, A61P31-04, A61K31-722
【公开号】CN104710545
【申请号】CN201410284541
【发明人】牛秉轩, 张崇, 屈艳, 焦军杰, 王爽
【申请人】牛秉轩
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2014年6月24日