薄树芝中的多糖及其提取方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药及保健食品技术领域，具体涉及植物粗多糖、纯多糖及其制备方 法和用途。
【背景技术】
[0002]薄树芝（(Lloyd) Teng)为灵芝亚属真菌薄树芝的菌丝体，又 称薄盖灵芝、薄芝，是多孔菌科灵芝属真菌。性微甘、寒，能清热、消炎，主治肝炎、肿瘤等，广 泛分布于中国、日本、韩国等亚洲国家。
[0003] 据报道，薄树芝的化学成分有嘌呤、嘧啶、D-甘露醇、凝集素、生物碱，麦角甾醇、 麦角留醇棕榈酸酯、麦角留-7, 22-二烯-(3)酮、麦角留_7、22_二烯-3 0-醇、5a-豆甾 烷_(3, 6)二酮、谷留醇等留体化合物，菜豆皂苷元-B，以及花生酸、硬脂酸、廿二碳烷 酸、廿三碳烷酸、廿四碳烷酸等饱和脂肪酸，蛋白质、氨基酸、多糖、脂肪酸及丰富的矿质元 素等。其中，主要活性物质是薄树芝中的多糖、糖肽类成分。研宄表明，薄树芝提取物具有 免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、调节心血管系统、护肝解毒、镇静、降血糖等方面的活性。作为主 要活性成分的薄树芝多糖具有潜在的开发应用价值。但是由于其环境要求高，自然资源破 坏严重等因素，使得薄树芝资源越来越稀缺。据报道，从真菌薄树芝中分离的菌种并经现代 生物工程技术深层发酵所得的干燥粉末中，多糖含量比野生薄树芝大大提高，而作为主要 活性成分的薄树芝多糖具有潜在的开发应用价值，所以提取、分离、纯化薄树芝多糖就显得 尤为重要，总多糖含量及纯度较高的薄树芝多糖可为其药理和制剂提供原料。
[0004]目前，国内外对薄树芝的研宄则主要集中为对薄芝糖肽的药理活性，对薄树芝多 糖的研宄还不够深入，同时关于薄树芝发酵产物多糖的研宄也鲜有报道。为了进一步开发 薄树芝这一宝贵资源，发掘新药源，本发明以经过深层发酵的薄树芝菌粉为原料，采用水提 醇沉法得到粗多糖，对提取的粗多糖进行脱蛋白，然后利用离子交换层析和凝胶分子筛柱 层析方法纯化薄树芝多糖，首次制备出五种薄树芝多糖纯品，并且对五种组分多糖的理化 性质、分子量、单糖组成等进行了系统的分析鉴定，并成功得出了五个组分的重复单元结 构。本发明得到的多糖样品在免疫增强、抗肿瘤方面具有显著效果，同时，在抗氧化实验中 显示其具有DPPH?和0H?自由基清除活性，这些可为将来在食品、化妆品、保健品、医药等 领域应用中提供依据。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供薄树芝多糖的提取方法。
[0006] 本发明的另一目的在于提供新发现的薄树芝多糖。
[0007] 本发明所采取的技术方案是： 一种薄树芝多糖GCP-1，该多糖GCP-1是由葡萄糖单糖组成的葡聚糖，多糖的主链由 -4)-a-D-Glc-(1 -和一4, 6)-a-D-Glc-(1 -组成，支链由a-D-Glc-(1 -组成，GCP-1 的结构为：
【主权项】
1. 一种薄树芝多糖GCP-1，其特征在于：该多糖GCP-I是由葡萄糖单糖组成的 葡聚糖，多糖的主链由一4)-a-D-Glc-(l -和一4,6)-a-D-Glc-(l -组成，支链由 a -D-Glc-(1 -组成，GCP-I的结构为：
2. -种薄树芝多糖GCP-2,其特征在于：该多糖GCP-2是由葡萄糖单糖组成的 葡聚糖，多糖的主链由一4)-a-D-Glc-(l -和一4,6)-a-D-Glc-(l -组成，支链由 a -D-Glc-(1 -组成，GCP-2的结构为：
3. -种薄树芝多糖GCP-4,其特征在于：该多糖GCP-4是由葡萄糖单糖组成的 葡聚糖，多糖的主链由一4)-a-D-Glc-(l -和一4,6)-a-D-Glc-(l -组成，支链由 a -D-Glc-(1 -组成，GCP-4的结构为：
4. 一种薄树芝多糖GCP-3,其特征在于：该多糖GCP-3是由0-L-吡喃构型的阿拉伯糖 和0 -D-吡喃构型的木糖组成的杂多糖，且以1 - 4健型作为连接方式，GCP-3的结构为：
5. -种薄树芝多糖GCP-5,其特征在于：该多糖GCP-5是由阿拉伯糖和木糖以1:1 比例组成的杂多糖，其主链由一3,4)-f3-D-Xyl-(l -组成，支链由f3-D-Xyl-(l -、 -3)-0 -L-Ara-(1 -和一4)-0 -L-Ara-(1 -组成，GCP-5 的结构为：
6. 薄树芝中多糖的提取方法，其特征在于：该方法包括以下操作步骤： 1) 脱脂：将薄树芝菌粉脱脂，晾干； 2) 水提：将脱脂后的薄树芝菌粉进行水提，分别收集提取液和残渣； 3) 分级醇沉：将提取液浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为a%，静置，收集沉淀，即得 粗多糖Pa ;将上清液再次浓缩，加入乙醇使乙醇体积浓度为b%，静置，收集沉淀，即得粗多 糖Pb ;将上清液再次浓缩，加入乙醇使乙醇体积浓度为b%，静置，收集沉淀，即得粗多糖Pc ; 其中 10 彡 a < b < c < 100 ; 4) 碱提：将水提后的残渣浸泡于0. 1~IM NaOH溶液中，静置1~4h，上清液用0. 1~ IM HCl进行中和使上清液的pH为6~8,离心取上清，浓缩上清，加入乙醇使乙醇体积浓度 为50~90%，静置，收集沉淀，即得碱提粗多糖PB ; 纯化：对上述粗多糖Pa、Pb、Pc、PB进行纯化，即得薄树芝多糖。
7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤1)中所述脱脂选用2~8倍体积的 石油醚对薄树芝菌粉进行脱脂； 步骤2)中所述水提的具体操作为用5~15倍体积的60~100°C热水对薄树芝菌粉进 行提取，提取时间1~4h。
8. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤3)中所有所述浓缩为40~70°C真 空浓缩，所有所述静置的时间为10~28h。
9. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于：将步骤5)中纯化后的多糖Pa、Pb、Pc、PB 分别进行离子交换柱层析，用〇~I. 5M NaCl进行梯度洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱 曲线，根据洗脱曲线分别收集有效部分，浓缩，冷冻干燥；然后，分别用水进行溶解，离心，取 上清液进行分子筛凝胶柱层析，用水进行洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱 曲线收集有效部分，浓缩，冷冻干燥后获得五种多糖纯品，分别命名为GCP-l、GCP-2、GCP-3、 GCP-4 和 GCP-5，其中 GCP-1 来自多糖 Pb 中，GCP-2 来自多糖 Pc 中，GCP-3、CPP-4、GCP-5 来 自于多糖PB中。
10. 薄树芝多糖，其特征在于：该多糖的提取方法为权利要求6~9中任一所述的方 法。
【专利摘要】本发明公开了薄树芝中的多糖及其提取方法和用途，该方法为以薄树芝菌丝粉为原料，通过水提醇沉提取和碱提的结合、Sevag法脱蛋白、DEAE纤维素柱层析、Sephadex 柱层析等获得多糖纯品，结构分析显示此法得到的薄树芝多糖有杂多糖和均多糖，分子量范围1000-200000Da。该提取方法在比较温和的条件下进行，完好的保存了多糖的组分，所得多糖结构明确，质量可控。该薄树芝多糖在免疫增强、抗肿瘤方面具有显著效果，同时，本发明得到的多糖纯品，在抗氧化实验中显示其具有DPPH·和OH·自由基清除活性，这些可为将来在食品、化妆品、保健品、医药等领域应用中提供依据。
【IPC分类】A61P39-06, C08B37-02, A61P37-04, C07H1-08, C07H3-06, A61P35-00
【公开号】CN104817646
【申请号】CN201510161409
【发明人】严春艳, 黄雅婷, 黎乃生
【申请人】广东药学院
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月7日