一株拟无枝酸菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物技术领域，具体是涉及一株具有多种生物酶活性的海洋拟无枝 酸菌（Amycolatopsis sp.)WPl。
【背景技术】
[0002] 海洋微生物在漫长的演化过程中依靠体内特有的、强大的极端酶系适应其独特的 栖息环境，这些极端酶系既是微生物赖以生存的保证，同时也为人类提供了巨大的财富。
[0003] 放线菌是最具经济价值和生物技术价值的原核生物，除了能够产生丰富的次级代 谢产物，放线菌还是生物催化剂的主要来源，目前已从放线菌中分离得到一系列具有重要 工业用途的酶，如蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶、木聚糖酶、果胶酶、淀粉酶、葡萄糖氧化酶、月旨 肪氧化酶、肌醇六磷酸酶和过氧化酶等，他们在洗涤、食品、酿造、皮革、纺织、动物饲料、饮 料、造纸和烘培等领域的应用已取得令人瞩目的成果。对放线菌产酶能力的研宄结果表明 海洋放线菌具有生产多种生物酶的潜能，从放线菌中获得酶制剂是一个充满前景的发展方 向。
[0004] 目前，世界各国开始积极探索海洋放线菌的开发利用潜力，从中开发和利用具有 新颖生物活性的产品，包括了化工小分子的生产、生物活性物质的发现与利用、生物酶的高 值利用等。
[0005] 随着中国经济的飞速发展，人民生活水平的提高，人们对生物酶产业的需求越来 越大。因此深入开展海洋放线菌产生物酶的相关研宄已成为当今的一个研宄热点，同时也 具有重要的应用价值和科学意义。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一株具有多种生物酶活性的海洋拟无枝酸菌 (Amycolatopsis sp.)WPl 及其应用。
[0007] 所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1已于2015年4月23日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科 学院微生物研宄所，邮编：1〇〇1〇1，保藏中心登记入册编号：CGMCC No. 10738。
[0008] 所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1，从西南印度洋 63. 50E，27. 89S，2945m 深的沉积物样品中分离筛选得到。菌株分离后经菌落形态鉴定，该菌在高氏一号培养基上 28°C培养7天后，菌落呈圆形，表面和边缘不光滑，中部有褶皱状凸起，白色，不透明，产孢 子，无晕圈，菌落直径为2~3mm。
[0009] 所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WPl为革兰氏阳性菌，氧化酶试验阴性，过 氧化氢酶实验阳性，硫化氢产生试验和吲哚产生试验阴性，V-P试验阳性。
[0010] 由于所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1具有过氧化氢酶、蛋白酶、木聚糖 酶和磷酸酶活性，因此所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1可在制备过氧化氢酶生物 催化剂、蛋白酶生物催化剂、木聚糖酶生物催化剂、磷酸酶生物催化剂等多种生物催化剂中 应用。
[0011] 所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1通过16S rDNA序列比对分析，与已知 典型种 Amycolatopsis magusensis KT2025T, Amycolatopsis palatopharyngis IBDZ τ和 Amycolatopsis marina MS392AT的 16S rDNA 序列的同源性最高，分别为 97. 8%，97· 3%和 97. 2%，与其他典型种的16S rDNA序列相似性均低于97%。通过结合菌体形态特征、生长 条件、生理生化鉴定结果确定所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp.)WPl属于假诺卡氏菌科 (Pseudonocardiaceae)拟无枝酸菌属（Amycolatopsis) 〇
[0012] 所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1可在高氏一号培养基上生长，其生长温 度为10~45°C，最适生长温度为30~35°C，pH生长为5~11，最适pH为8~9,盐度生 长为0~8 %，最适盐度生长为0~3 %。
[0013] 所述高氏一号培养基配方为可溶性淀粉20g，NaCl 0. 5g，KNO3Ig, K2HPO4 · 3H20 0· 5g，MgSO4 · 7H20 0· 5g，FeSO4 · 7H20 0· Olg，琼脂 18g，蒸馏水 1000ml，pH 7· 4 ~7· 6。
[0014] 本发明所述拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WPl具有过氧化氢酶、蛋白酶、木聚 糖酶和磷酸酶活性，具有开发为过氧化氢酶、蛋白酶、木聚糖酶和磷酸酶等多种生物催化剂 的潜能，对过氧化氢酶、蛋白酶、木聚糖酶和磷酸酶的研宄和利用具有重要的价值。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明所述的拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1在高氏一号培养基上 的宏观形态。
[0016] 图2为本发明所述的拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1在高氏一号培养基上 的扫描电镜照片。
[0017] 图3为本发明所述的拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. )WP1及部分相关菌株依据 16S rDNA序列构建的系统发育树。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明做进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于 此。
[0019] 实施例1拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp. ) WPl的分离
[0020] 1.生物材料及培养基：用于分离海洋放线菌的生物材料为采自西南印度洋 63. 50E，27. 89S，2945m深的沉积物样品。用于放线菌分离所用的培养基为海水琼脂培养 基，配方为：人工海水1L，琼脂粉15g，pH 7. 2~7. 6;人工海水配方为：NaCl 24. 477g、 MgCl2 · 6Η204· 981g、Na2S043. 917g、CaCl2 · 2H20 I. 102g、KCl 0· 664g、NaHCO3O. 192g、KBr 0· 096g、H3BO30.0 26g、SrCl20.0 24g、NaF 0· 0039g 及蒸馏水 1000mL。
[0021] 2.样品处理：称取Ig沉积物样品，溶于45ml人工海水中（内加10颗左右玻璃 珠），28°C摇床中200rpm振荡2h，取200 μ 1涂布至含终浓度为50 μ g/ml制霉菌素和50 μ g/ ml萘啶酮酸的海水琼脂培养基上。
[0022] 3.放线菌培养：将涂布悬浊液的分离培养基置于28°C恒温培养箱中倒置培养，培 养14天左右开始挑取培养基上生长的单菌落进行转接纯化，根据菌株的形态特征和培养 特征，去除重复菌株，对已纯化菌株，接种于海水琼脂培养基中