6His的测定的分子量表现出形成二聚体的明显倾向。蛋白质rPhl p6d[P29,30,79] + 6His和rPhlp6d[P29,30]P79L+ 6His仅以单体形式被检测到 (表2)。从该结果可以得出结论，脯氨酸57但不是脯氨酸79的改变诱导二聚体倾向地改变 了rPhlp6d[P29,30]。
[0080] 通过条带测试测定IgE结合能力确实令人惊讶地表明，组"A"的过敏症患者的对 rPhlp6d[P29, 30]具有可检测的IgE结合力的血清对优化的变体具有明显降低的IgE结 合力（图14)。脯氨酸57和79是否缺失或被其它氨基酸替换显然同样对IgE结合能力的降 低具有很小的影响，如同形成二聚体能力一般。因此证实，来自脯氨酸29、30、57和79的组 的多个氨基酸残基同时具有改变进一步明显降低了IgE结合力。
[0081] 因此本发明进一步提供脯氨酸组合突变的禾本科家族的第6组过敏原 的低过敏性变体，所述脯氨酸在比对中对应于野生型Phlp6的氨基酸序列中29、30、57、 79位脯氨酸。优选的是通过缺失和通过被其它氨基酸的取代的突变。任何氨基酸都可以在 此处被选择用于替代脯氨酸。
[0082] 本发明优选提供脯氨酸组合突变的Phlp6或Poap6的低过敏性变体，所述脯 氨酸在比对中对应于野生型Phlp6的氨基酸序列中29、30、57、79位脯氨酸。
[0083] 本发明尤其优选提供脯氨酸组合突变的Phlp6的低过敏性变体，所述脯氨酸在 比对中对应于野生型Phlp6的氨基酸序列中29、30、57、79位脯氨酸。
[0084] 尤其优选的是脯氨酸组合突变的禾本科（Z5Oaceae)的第6组过敏原的低过敏性变 体，所述脯氨酸在比对中对应于成熟Phlp6.0102(SEQIDN0:2)的氨基酸序列中29、30、 57、79位脯氨酸。
[0085] 尤其优选的是根据本发明的低过敏性变体，其中脯氨酸29、30、57、79被组合去 除。尤其优选的还是根据本发明的过敏原变体，其中脯氨酸29、30、57、79被组合取代。
[0086] 此外，尤其优选的是根据本发明的低过敏性变体，其中脯氨酸29、30、57、79被组 合去除和/或取代。因此，根据本发明的尤其是低过敏性变体rPhlp6d[P29,30,57]、rPhl p6d[29,30,79]、rPhlp6d[29,30,57,79]、rPhlp6d[P29,57]、rPhlp6d[P30,57]、 rPhlp6d[29,79]、rPhlp6d[30,79]、rPhlp6d[29,57,79]、rPhlp6d[30,57,79]、 rPhlp6d[P29,30]P57L、rPhlp6d[29,30]P79L、rPhlp6d[29,30]P57LP79L、rPhl p6d[P29]P30L、rPhlp6d[P30]P29L、rPhlp6d[P57]P29LP30L、rPhlp6d[P79] P29LP30L、rPhlp6d[P57,79]P29LP30L、rPhlp6P29LP30LP57L、rPhlp6P29L P30LP79L、rPhlp6P29LP30LP57LP79L以及类似物，包括所有下述的根据本发明的低 过敏性变体，其中遵循Phlp6、尤其是成熟Phlp6. 0102的序列的编号。
[0087] 此处，脯氨酸被例如亮氨酸（L)替代。然而，根据本发明，根据本发明的脯氨酸可 以被任何氨基酸替代。因此，根据本发明的是所有上面提到的低过敏性变体，在其中根据本 发明的一个或多个的脯氨酸被另一种氨基酸取代。此外，这些例子并不限于Phlp6的变 体，而是尤其也涉及所有其它禾本科的Poap6和第6组过敏原。然而，尤其优选的是所有 提到的根据本发明的梯牧草（/5AJeiM?/Trateasey1你Phlp6、尤其基于Phlp6. 0102的低 过敏性变体。
[0088] 辅助性T淋巴细胞反应与通过在抗原呈递细胞（APZ)中的降解过程形成并被递呈 结合于APZ表面的MHCII类分子的过敏原的肽片段反应。所述肽一般具有13-18个氨基 酸的长度，但由于侧向开放的MHC2类结合位点也可能更长。肽与MHC类分子的主要接触 点被发现在约7-10个氨基酸的核心序列中。辅助性T淋巴细胞的过敏原特异性活化是其 增殖和功能分化的先决条件(例如Treg、THl和TH2)。过敏原或过敏原变体刺激过敏原特异 性T淋巴细胞的能力被视为其疗效的关键。
[0089] 基于Phlp6或Phlp6. 0102产生和此处所述的所有过敏原变体在实验中均表 现出重要的T细胞表位的很大程度的保留。
[0090] 因此，首次描述了通过脯氨酸残基的改变具有新的蛋白质特性的禾本科的第6组 过敏原的变体。涉及的脯氨酸残基位于环区域。仅修饰某些脯氨酸残基产生新的变体，其 特征在于很大程度地保留T细胞反应性的同时IgE反应性降低，并因此适用于治疗和预防 特异性免疫治疗法。相应的DNA分子适用于免疫性治疗的接种。
[0091] 因此，本发明提供所述的根据本发明的过敏原变体、DNA分子和重组表达载体作为 药物。
[0092] 尤其可以使用根据本发明的低过敏性变体、DNA分子和重组表达载体或根据本发 明的药物用于疾病和病症的预防和/或治疗。根据本发明的药物尤其适用于1型过敏症的 治疗和/或预防，即用于具有草花粉过敏的患者的特异性免疫治疗(脱敏）或用于在涉及禾 本科种（/5Oaceaespecies)的第6组的过敏原触发的草花粉过敏症的预防性免疫治疗。根 据本发明的DNA分子和重组表达载体可用于相应的免疫治疗和预防性预防的DNA接种。 [0093] 本发明还提供至少一种根据本发明的低过敏性变体用于制备用于预防和/或治 疗处理禾本科的第6组的过敏原参与成因引发的1型过敏症的药物的用途。
[0094] 至少一种根据本发明的DNA分子和/或根据本发明的重组表达载体，包括其以所 有比例的混合物用于制备用于免疫治疗性DNA接种的药物的用途也是根据本发明的。
[0095] 本发明还涉及药物制剂，包括至少一种本发明的低过敏性的变体、至少一种本发 明的DNA分子和/或至少一种本发明的重组表达载体，包括其所有比例的混合物，以及任选 的进一步的用于预防和/或治疗性治疗1型过敏症的活性物质和/或助剂。
[0096] 根据本发明的药物制剂尤其适用于预防和/或治疗性处理由禾本科的第6组的过 敏原参与成因引发的1型过敏症。
[0097] 在本发明范围内的药物制剂可作为治疗剂在人用药或兽药中使用，并因此可以相 应地被给药于人和动物，尤其是哺乳动物，如猴、狗、猫、大鼠或小鼠，并可被用于人或动物 体的治疗性处理并用于对抗上述疾病。此外，他们可以被用作诊断剂或作为试剂。
[0098] 在使用根据本发明的制剂或药物时，将根据本发明的低过敏性变体、DNA分子或重 组表达载体类似于通常已知的商业可得的制剂或配制品使用，优选剂量0. 001-500mg，在 低过敏性变体的情况中在维持期中每剂量约1-500呢，优选5-200呢。制剂给药可以每天 一次或多次，例如，每天两次、三次或四次。通常在剂量增加阶段增加剂量至最高到维持剂 量。为此，不同的剂量增加和维持方案是可能的。在皮下免疫治疗（SCIT)的情况下，例如， 这些可以包括短期治疗(在季节性疾病开始前有限数量的注射，通常为4 - 7次注射)、季 节前治疗(在草花粉季节前开始治疗，通常在增加阶段每周注射，以维持剂量每月注射直到 草花粉季节开始)或全年治疗(剂量增加阶段通常每周注射一次最多16次，随后以维持剂量 每月注射一次，如有需要，在花粉季节减少剂量)。在用含水的或固体制剂(片剂、糯米纸囊 剂等)的舌下免疫治疗的情况下，治疗的开始可以有或没有增加剂量阶段地进行。该治疗优 选全年以每日剂量进行，但也可以在季节前或以其它应用方案(例如每两天、每周、每月）进 行。
[0099] 表述"有效量"是指，其例如为研究者或医生找寻或力求的，在组织、体系、动物或 人中引起生物学的或医学应答的药物或药物活性物质的量。
[0100] 此外，表述"治疗有效量"是指，与未获得该剂量的相应患者相比，具有以下的结果 的剂量：疾病、病症、疾病状态、疾患、不适的改善的治疗处理、康复、预防或消除，或者防治 副作用，亦或者疾病、疾患或不适的进展的减缓。术语"治疗有效量"也包含有效地增加正 常生理功能的量。
[0101] 可以调整药物以通过任何合适的途径给药，例如以口服(包括口腔的或舌下的)、 直肠的、肺部的、鼻的、局部的(包括口腔的、舌下的或经皮的)、阴道的或胃肠外的(包括皮 下的、肌肉的、静脉内的或皮肤内的)途径。这些药物可以用药学专业领域已知的所有方法， 例如通过活性物质与一种或多种赋形剂或一种或多种助剂相结合来制备。
[0102] 用作肠胃外应用的尤其是溶液，优选油性或水性溶液，还可以是悬浮液、乳液或植 入物。根据本发明的过敏原变体也可以冻干，且获得的冻干物，例如用于制备注射制剂。指 定的制剂可被灭菌和/或包含助剂，如润滑剂、防腐剂、稳定剂和/或润湿剂、乳化剂、用于 影响渗透压的盐、缓冲物质和/或多种其它活性物质。此外，可以通过相应的根据本发明的 过敏原变体的配方，例如通过吸附至氢氧化铝、磷酸三钙或酪氨酸上获得缓释剂。
[0103] 合适的赋形剂是有机或无机物质，其适用于肠胃外给药，并且不与根据本发明的 第6组过敏原变体反应。其例子为赋形剂，如水、植物油、苄醇、聚乙二醇、三醋酸甘油酯、明 胶、碳水化合物、如乳糖或淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、羊毛脂或凡士林。
[0104] 肠胃外给药优选适用于根据本发明的药物的给药。在肠胃外给药的情况下，尤其 优选的是静脉内的、皮下的、皮内的或淋巴管内给药。在静脉给药的情况下，注射可以直接 进行或作为输液的添加物进行。
[0105] 适合于肠胃外给药的药物包括水性和非水性的无菌注射溶液，其包含抗氧化剂、 缓冲液、抑菌剂和增溶剂(通过其使得配剂与待治疗的受体的血液等渗)，以及水性的和非 水性的无菌悬浮液(其可包括悬浮剂和增稠剂)。所述配剂可以在单剂量或多剂量容器中给 药，例如密封的安瓿和小瓶，并储存在冷冻干燥(冻干）状态，这样仅需要在临使用前添加无 菌赋形溶液例如水，用于注射目的。根据配方制备的注射溶液和悬浮液可以由无菌粉末、颗 粒和片剂制备。
[0106] 如果希望，根据本发明的制剂或药物可以包含一种或多种其它活性物质和/或一 种或多种作用增强剂（Wirkverstjirker)(佐剂)。
[0107] 因此，本发明进一步提供药物制剂，其包含其它活性物质和/或助剂。本发明优 选提供根据本发明的药物制剂，其特征在于，所述其它活性物质是其过敏原或其变体。合 适的其它活性物质的例子是其它过敏原，尤其是禾本科的过敏原，尤其优选来自早熟禾亚 科（Pooideae)亚科的过敏原，优选来自早熟禾超族（Poodae)和Triticodae组，优选通过 猫尾草（Phleum pratense)、绒毛草（Holcus lanatus)、水生藹（Phalaris aquatica)、鸭 茅（Dactylis glomerata)、黑麦草（Lolium perenne)、草地早熟禾（Poa pratensis)、大麦 (Hordeum vulgare)、黑麦（Secale cereale)和小麦（Triticum aestivum)代表，例如第1、 2、3、4、5、6、7、10、12或13组的过敏原及其变体，例如低过敏性变体、片段、多聚体、杂合分 子或重组融合蛋白。而且，本发明还提供药物制剂，其包含至少一种其它助剂，尤其优选所 谓的作用增强剂。作用增强剂的例子为氢氧化铝、单磷酰脂A、Toll样受体激活剂，例如