一种具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药，特别是一种具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制 备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤是一种严重威胁人类健康和生命的常见病、多发病。现今，癌症已成为全 世界首要的致死病因。乳腺癌通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤，已经成为严重威胁 中青年妇女健康和生命的主要疾病之一，发病率较高，多见于40-60岁之间绝经期前后的 妇女，全国每年新发乳腺癌的人数约100万以上。目前治疗乳腺癌的药物虽很多，均具有较 强的毒副作用，其中以减退消化功能和抑制骨髓造血功能最为明显，往往使乳腺癌患者难 以坚持完成整个化疗过程，难以彻底治愈。同时长期用药以后，出现多药耐药现象，这也是 制约乳腺癌成功治疗的主要障碍。中草药在抗肿瘤方面的应用历史悠久，从中草药中寻找 高效低毒的抗乳腺癌活性物质，研制选择性强、毒副作用低的新型抗乳腺癌药物是药学科 研工作者迫切解决的首要问题。
[0003] 小叶莲是小檗科桃儿七属植物鬼白Sinopodophyllumemodi(Wall. )Ying.的干 燥成熟果实。鬼白是一种具有悠久历史的药用植物，古代《神农本草经》中就有记载：杀大 毒，疗咳嗽喉疾，风邪烦感，失魄妄见。不入汤。以后的历代本草亦多有记载，主要用于活血 散结、祛风除湿、虫蛇咬伤、跌打、心胃痛、风寒咳嗽、月经不调、铁棒锤中毒、风湿筋骨痛及 气管炎等症。鬼白分布比较广泛，我国主要分布在四川、青海、西藏、甘肃、陕西。小叶莲作 为传统藏药始载于《月王药诊》，具有悠久的药用历史。化学成分研究表明主要含有木脂素 和黄酮类化合物，其中异戊烯基化黄酮是小叶莲中代表性的活性成分，具有重要而广泛的 生物活性如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗骨质疏松、预防老年痴呆、抗糖尿病、心脑血管保 护、雌激素样等。本发明所涉及的异戊烯基化黄酮类化合物及其生物活性，迄今为止未见有 专利或文献报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种具有抗乳腺 癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及其应用，可有效解决制备具有抗乳腺癌活 性的异戊烯基化黄酮类化合物，实现制备抗乳腺癌药物的问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是，该类化合物是从小叶莲中分离得到的桃儿七酮 J(SinoflavonoidJ)、桃儿七酮K(Sinoflavonoid)、桃儿七酮L(SinoflavonoidL)、桃儿七 酮M(SinoflavonoidM)、桃儿七酮N(SinoflavonoidN)、桃儿七酮0(Sinoflavonoid0)，分 子结构式分别为：
[0006]
[0007] 其制备方法是，以小叶莲6 - 9kg为原料，以2 - 5倍原料重量、体积比为75% -95%的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90 - 95°C，每次提取时间为1. 5 - 2小时，减压回 收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2 - 3. 2L的蒸馏水中，依次以石油醚、二氯甲烷、乙酸 乙酯、正丁醇萃取3次，每次2 - 3. 2L，时间为1. 5 - 2小时；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶柱 色谱分离，依次用体积比为 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、 100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用9. 1 - 13L洗脱液，流速 为10 - 15mLmin\每350 - 500mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测 分析，用GF254薄层板，分别以体积比1 : 1的石油醚-丙酮和体积比5 : 1的二氯甲烷-甲 醇作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据 薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到Fr. 1-Fr. 16个组份；
[0008] 将组份Fr. 4经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每5 - 10mL为一流份， 收集27个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比6 : 1的 二氯甲烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加 热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份5 - 18、流份19 - 27,得到2个亚组份 Fr. 4-1，Fr. 4-2，将亚组份Fr. 4-1经开放0DS柱色谱，用体积比70 : 30的甲醇-水作洗脱 液进行洗脱，收集洗脱液，得桃儿七酮0 (化合物VI);
[0009] 将组份Fr. 5经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每5 - 10mL为一流份，收集 36个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比5 : 1的二氯甲 烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份4 - 16、流份17 - 28、流份29 - 36,得到3个亚组份 Fr. 5-1，Fr. 5-2,Fr. 5-3,将亚组份Fr. 5-1经高效液相色谱，用体积比80 : 20的甲醇-水 作洗脱液进行洗脱，收集洗脱时间为21min的峰得到桃儿七酮J(化合物I)、收集洗脱时间 为25min的峰得到桃儿七酮K(化合物II)、收集洗脱时间为33min的峰得到桃儿七酮M(化 合物IV)，收集洗脱时间为36min的峰得到桃儿七酮N(化合物V);
[0010] 将组份Fr. 6经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每5 - 10mL为一流份，收集 38个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4 : 1的二氯甲 烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份6 - 18、流份19 - 32、33 - 38流份，得到3个亚组份 Fr. 6-1，Fr. 6-2,Fr. 6-3,亚组份Fr. 6-1经过开放0DS柱色谱，体积比20:80-80:20的甲 醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱，分别收集体积比50:50、60:40、70:30的甲醇-水洗脱液， 得亚组份Fr. 6-1-1，Fr. 6-1-2,Fr. 6-1-3,将亚组份Fr. 6-1-2经高效液相色谱，用体积比 80 : 20的甲醇-水作洗脱液进行洗脱，收集洗脱时间为31min的峰得到桃儿七酮L(化合 物III)。
[0011] 本发明制备的具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物桃儿七酮 J(SinoflavonoidJ)、桃儿七酮K(Sinoflavonoid)、桃儿七酮L(SinoflavonoidL)、桃儿 七酮M(SinoflavonoidM)、桃儿七酮N(SinoflavonoidN)、桃儿七酮 0(Sinoflavonoid0) 具有抗乳腺癌活性，有效用于制备抗乳腺癌药物，具有实际的临床意义，经济和社会效益显 著。
【具体实施方式】
[0012] 以下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0013] 本发明在具体实施中可由以下实施例给出。
[0014] 实施例1
[0015] 本发明在具体实施中，具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物可由小叶 莲9kg为原料，以18L、体积比为95 %的乙醇加热回流提取3次，提取温度为95°C，每次提 取时间为1. 5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3. 2L的蒸馏水中，依次以 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3. 2L，时间为1. 5小时；将乙酸乙酯萃 取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用13L 洗脱液，流速为15mLmin\每500mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱 检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比1 : 1的石油醚-丙酮和体积比5 : 1的二氯甲 烷-甲醇作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到Fr. 1-Fr. 16 个组份；
[0016] 将组份Fr. 4经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每10mL为一流份，收集 27个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比6 : 1的二氯甲 烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份5 - 18、流份19 - 27,得到2个亚组份Fr. 4-1， Fr. 4-2,将亚组份Fr. 4-1经开放ODS柱色谱，用体积比70 : 30的甲醇-水作洗脱液进行 洗脱，收集洗脱液，得桃儿七酮0 (化合物VI);
[0017] 将组份Fr.5经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每10mL为一流份，收集 36个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比5 : 1的二氯甲 烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份4 - 16、流份17 - 28、流份29 - 36,得到3个亚组份 Fr. 5-1，Fr. 5-2,Fr. 5-3,将亚组份Fr. 5-1经高效液相色谱，用体积比80 : 20的甲醇-水 作洗脱液进行洗脱，收集洗脱时间为21min的峰得到桃儿七酮J(化合物I)、收集洗脱时间 为25min的峰得到桃儿七酮K(化合物II)、收集洗脱时间为33min的峰得到桃儿七酮M(化 合物IV)，收集洗脱时间为36min的峰得到桃儿七酮N(化合物V);
[0018] 将组份Fr. 6经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每10mL为一流份，收集 38个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比4 : 1的二氯甲 烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份6 - 18、流份19 - 32、33 - 38流份，得到3个亚组份 Fr. 6-1，Fr. 6-2,Fr. 6-3,亚组份Fr. 6-1经过开放0DS柱色谱，体积比20:80-80:20的甲 醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱，分别收集体积比50:50、60:40、70:30的甲醇-水洗脱液， 得亚组份Fr. 6-1-1，Fr. 6-1-2,Fr. 6-1-3,将亚组份Fr. 6-1-2经高效液相色谱，用体积比 80 : 20的甲醇-水作洗脱液进行洗脱，收集洗脱时间为31min的峰得到桃儿七酮L(化合 物III)。
[0019] 实施例2
[0020] 本发明在具体实施中，具有抗乳腺癌活性的异戊烯基化黄酮类化合物也可由小叶 莲6kg为原料，以30L、体积比为75 %的乙醇加热回流提取3次，提取温度为90°C，每次提 取时间为2小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2L的蒸馏水中，依次以石油 醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次2L，时间为2小时；将乙酸乙酯萃取部位经 硅胶柱色谱分离，依次用体积比为 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、 100:100、100:200、0:100的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用9. 1洗脱液， 流速为lOmLmin\每350mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分 析，用GF254薄层板，分别以体积比1 : 1的石油醚-丙酮和体积比5 : 1的二氯甲烷-甲 醇作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据 薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到Fr. 1-Fr. 16个组份；
[0021] 将组份Fr. 4经SephadexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每5. 5mL为一流份，收集 27个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，以体积比6 : 1的二氯甲 烷-丙酮作为展开剂，以体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份5 - 18、流份19 - 27,得到2个亚组份Fr. 4-1