麦芽中酵母提前絮凝因子的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及麦芽特性的检测方法，具体涉及麦芽中酵母提前絮凝因子的检测方法。
【背景技术】
[0002]酵母提前絮凝(Premature Yeast Flocculat1n, PYF)是指酵母在发酵过程中发酵尚未结束时出现的酵母絮凝现象。PYF因子是麦芽中一项负面的质量指标，麦芽的PYF因子值越低，造成酵母提前絮凝的现象就越严重，具体为酵母在相同的发酵过程中呈现明显差异的悬浮酵母数的现象。酵母的提前絮凝会造成后期用于发酵的酵母数目减少从而导致麦汁发酵度偏低，残糖偏高，从而使啤酒的质量、风味及成本等诸多方面受到影响。PYF值受大麦品种、质量、制麦工艺及微生物污染等因素的影响，这些条件影响到成品麦芽的质量，进而影响到麦汁组分，并由此延伸到对酵母产生影响。分析麦芽的PYF因子，通过不同麦芽的PYF情况搭配使用进行酿造，以及建立麦芽的PYF标准指导原料采购，都对啤酒酿造生产有重要的意义，它是稳定啤酒发酵过程的基础，是旋钮式调控啤酒发酵效果的指示指标。
[0003]目前国内外检测麦芽中的PYF因子并没有统一的检测方法，而各种检测方法都各有利弊，如不能判别非凝聚性酵母、误差大、平行试验和重复性不理想、检验耗时长等，因此检验结果对生产的指导作用不大。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是提供一种准确快速、稳定且重现性好，检验结果可应用于生产指导及原料采购的麦芽中酵母提前絮凝因子的检测方法。
[0005]本发明所述的麦芽中酵母提前絮凝因子的检测方法，包括以下步骤:
[0006]I)确定标准麦芽和待检麦芽，制备标准麦芽的协定麦汁，记称为协定麦汁A ;制备待检麦芽的协定麦汁，记为协定麦汁B ;
[0007]2)无菌操作取用实际生产中满罐5天以上的酵母泥，加入去离子水洗涤，静置，弃去上层清液及底部杂质，收集中间部分并置于离心管中，之后于冷冻离心机中离心分离，得到洗净的酵母泥；
[0008]3)取步骤2)所得洗净的酵母泥加入到协定麦汁A中，搅拌均匀后转入发酵管中，加入消泡剂后用锡泊纸封口，记为发酵管A ;另取一份步骤2)所得的酵母泥加入到协定麦汁B中，搅拌均匀后转入另一发酵管中，加入消泡剂后用锡泊纸封口，记为发酵管B ;其中，所述洗净的酵母泥在协定麦汁A或协定麦汁B中的加入比例相同，均按40?50g的协定麦汁A或协定麦汁B加入Ig洗净的酵母泥为基准计算；
[0009]4)将发酵管A和发酵管B置于无菌恒温培养箱中，于同样条件下进行相同时间的培养发酵；
[0010]5)培养结束后，取出发酵管A和发酵管B，分别从发酵管A和发酵管B中取出同等体积的上清液进行酵母计数，其中从发酵管A中取出的上清液中的酵母数记为标准样品酵母数，从发酵管B中取出的上清液中的酵母数记为待检样品酵母数，按下述公式计算待检麦芽的酵母提前絮凝因子；
[0011]PYF待检麦芽=待检样品酵母数/标准样品酵母数X 100%( I )
[0012]其中，PYFt_s帛为待检麦芽的酵母提前絮凝因子，PYFtttts帛越大表示待检麦芽在实际生产过程中对酵母提前絮凝的影响越小，反之则越大。
[0013]上述检测方法的步骤I)中，所述的标准麦芽应为具有正常发酵和絮凝特性的PYF阴性麦芽，其PYF因子为已知。所述的待检麦芽即为选定的要进行PYF因子检测的麦芽。该步骤中，标准麦芽的协定麦汁(即协定麦汁A)的制备以及待检麦芽的协定麦汁(即协定麦汁B)的制备均按GB4927中的方法进行制备。
[0014]上述检测方法的步骤2)中，可以选用实际生产中满罐5天以上的2?4代酵母泥，优选是选用实际生产中满罐5天以上的2代酵母泥，更优选是选用实际生产中满罐5天的2代酵母泥。所选取的酵母泥用去离子水进行洗涤并离心的操作可以重复2次以上，以更好的去除所选取的酵母泥中的杂质。该步骤中，收集的中间部分置于离心管中，再置于冷冻离心机中进行离心。分离前，需要按常规操作加入适量的去离子水对离心管进行称量配平。称量配平的离心管在冷冻离心机中离心分离的参数优选为:温度为4?6°C，转数为6000?7000rmp，离心时间为5?15min ;更优选为温度为4°C，转数为6000rmp，离心时间为lOmin。
[0015]上述检测方法的步骤3)中，所述洗净的酵母泥在协定麦汁A或协定麦汁B中的加入比例优选是按45g的协定麦汁A或协定麦汁B加入Ig洗净的酵母泥为基准计算。所述消泡剂在协定麦汁A或协定麦汁B中的加入比例相同，通常情况下都是以40?50g的协定麦汁A或协定麦汁B加入0.04?0.05g消泡剂为基准计算，更优选是以45g协定麦汁A或协定麦汁B加入0.045g消泡剂为基准计算。所述的消泡剂可以是乳化硅油、高碳醇脂肪酸酯复合物、聚氧乙烯聚氧丙烯季戊四醇醚、聚氧乙烯聚氧丙醇胺醚、聚氧丙烯甘油醚和聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚和聚二甲基硅氧烷中的任意一种或两种以上的组合。当选择为两种以上的组合时，它们之间的配比可以为任意配比。
[0016]上述检测方法的步骤4)中，发酵管A和发酵管B在无菌恒温培养箱中的培养条件为:20?30°C条件下恒温培养发酵20?30h，更优选是在20°C条件下恒温培养发酵24h。
[0017]上述检测方法的步骤5)中，通常是从发酵管A和发酵管B中分别吸取Iml上清液进行酵母计数。在吸取上清液时，优选是使吸取仪器的吸入口位于液面以下并不与发酵管中下层的固体部分接触。
[0018]与现有技术相比，本发明采用已知PYF因子的为具有正常发酵和絮凝特性的PYF阴性麦芽作为标准麦芽，每一份待检麦芽均与其进行对比，再联合采用冷冻离心机有效保质酵母的活性，使得检测结果准确快速、稳定且重现性好，所得检验结果可用于啤酒厂合理搭配使用不同PYF因子的原料，由过去的被动分析变为主动从原料预防，从而在原料使用环节调控酵母絮凝能力处于正常状态，保证发酵过程正常进行、过滤性能良好以及啤酒口味的稳定性和均一性，起到了很好的指导生产作用。
【附图说明】
[0019]图1为按本发明实施例1所述方法进行检测时7次待检麦芽的待检样品酵母数；
[0020]图2为按本发明实施例2所述方法进行检测时7次待检麦芽的待检样品酵母数；
[0021]图3为按本发明实施例3所述方法进行检测时7次待检麦芽的待检样品酵母数。
【具体实施方式】
[0022]下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的内容，但本发明并不限于以下实施例。
[0023]实施例1
[0024]I)选取经24h实验培养发酵后酵母数彡0.3亿/mL的中粮江阴Gairdner麦芽(中粮麦芽江阴有限公司)作为标准麦芽，按以下方法制备标准麦芽的协定麦汁，记为协定麦汁A ；
[0025]1.1)称取50g粉碎后的麦芽粉(30?35目，下同)加入已知重量的糖化杯中，加入200mL已预热至45°C的二次去离子水，用搅拌棒轻轻搅拌后，将糖化杯置于糖化仪中，搅拌状态下于45°C保持30min ；
[0026]1.2)以1°C /min升温至70°C，往糖化杯内加入10mL已预热至70°C的二次去离子水，并于70 C保持60min，保温结束后降温至20 C ；
[0027]1.3)将糖化杯从杯孔中取出，擦干外壁，用二次去离子水冲洗搅拌棒，加二次去离子水使糖化杯内容物重量至450克，用搅拌棒将杯内液体混匀，用单层中速滤纸过滤，将初滤的10mL滤液弃去后收集；
[0028]1.4)将过滤好的麦汁样称量200g至三角瓶中，包扎好瓶口，放入灭菌锅中，设置灭菌锅程序:115°C，10min，灭菌后，麦汁冷却，得到协定麦汁A，备用；
[0029]选取广麦Gairdner麦芽(广州麦芽有限公司)为待检麦芽，重复上述步骤1.1)至步骤1.4)，制得待检麦芽的协定麦汁，记为协定麦汁B，备用；
[0030]2)无菌操作取用生产中满罐5天的2代酵母泥置于烧杯中，加入二次去离子水，搅拌均匀后静置，去除上层清液和底部杂质，收集中间的悬浮液，转入离心管中，加入二次去离子水称量配平；之后将离心管放入冷冻离心机，设置参数6000rmp、4°C、1min进行离心操作，离心完成后收集离心管底部的酵母泥，之后再重复上述操作进行洗涤，并以同样的离心条件进行二次离心，二次离心完成后收集离心管底部的酵母泥，得到洗净的酵母泥；
[0031]3)称取1g步骤2)所得洗净的酵母泥置于烧杯中，向其中加入450ml协定麦汁A，搅拌均匀后转入一发酵管中，加入0.045g消泡剂后用锡泊纸封口，记为发酵管A ;另取1g步骤2)所得的酵母泥置于另一烧杯中，向其中加入450ml协定麦汁B，搅拌均匀后转入另一发酵管中，加入0.045g消泡剂后用锡泊纸封口，记为发酵管B ;其中，所述消泡剂为乳化硅油；
[0032]4)将发酵管A和发酵管B置于无菌恒温培养箱中，20°C恒温培养发酵24h ;
[0033]5)培养结束后，取出发酵管A和发酵管B，从发酵管A中取出Iml上清液进行酵母计数，记为标准样品酵母数(具体为0.331亿/ml)，从发酵管B中取出Iml上清液进行酵母计数，记为待检样品酵母数(具体为0.226亿/ml)，并按下述公式(I )计算待检麦芽的酵母提前絮凝因子；
[0034]PYF待检麦芽=待检样品酵母数/标准样品酵母数X 100%( I )
[0035]其中，PYFt_s帛为待检麦芽的酵母提前絮凝因子，PYFtttts帛越大表示待检麦芽在实际生产过程中对酵母提