酸溶液中进行。
[0029] 上述原料3-幾基-4-(2,4,5-^氣苯基）下酸扣1)可参考〔化02574856制备得 到。
[0030] 与现有技术相比，本发明方法工艺路线减少，反应时间缩短，产物纯度和收率提 高，生产成本降低，适合工业化生产。
【具体实施方式】
[0031] 下面结合具体实施例对本发明的技术内容作进一步的阐述，其目的是为了更好的 理解本发明的内容，但本发明的保护范围不限于此。 阳03引实施例1佩-3-氨基-4-(2, 4, 5-Ξ氣苯基）下酸（I)的制备
[0033] 在憐酸钟缓冲液（100ml，0. lmol/l，pH=7. 5)中依次加入3-幾基-4-(2, 4,5-Ξ 氣苯基）下酸（18. 6g)，NAD(0.1 g)，甲酸锭（lOg)，二甲亚讽（10ml)，甲酸脱氨酶（5g)，D-氨 基酸脱氨酶巧g)，30°C水浴中揽拌反应2地，HPLC检测至转化率达95%时，调节抑至2-3终 止反应，过滤去除沉淀，滤液中加入等体积的乙酸乙醋萃取3次，合并萃取液，加入无水硫 酸钢干燥处理，过滤浓缩得（时-3-氨基-4-(2, 4,5-Ξ氣苯基）下酸（16. 5g)，收率为88%， 产品ee值>99%。
[0034] 实施例2 (R)-N-叔下氧幾基-3-氨基-4-(2, 4, 5-Ξ氣苯基）下酸（II)的制备
[0035] 在反应瓶中加入佩-3-氨基-4-(2,4,5-^氣苯基）下酸（10邑)，度〇(3)2〇(11.2邑)， 碳酸氨钢（7. 9g)，四氨巧喃巧0ml)和水巧0ml)，室溫下反应2地，调节抑至2-3,加入乙酸 乙醋萃取巧〇ml*3)，合并萃取液，加入无水硫酸钢干燥处理，过滤浓缩得（时-N-叔下氧幾 基-3-氨基-4- (2, 4, 5-Ξ氣苯基）下酸（13.6g)，收率为95%。 1^0036]实施例3 7-[(R)-3-(叔下氧幾基氨基）-1-氧代-4-(2, 4, 5-二氣苯基）下 基]-5, 6, 7, 8-四氨-3-(Ξ氣甲基）-1,2,4-Ξ挫[4, 3-a]化挫（V)的制备 W37] 在反应瓶中加入佩-N-叔下氧幾基-3-氨基-4-(2,4, 5-S氣苯基）下酸 (1〇邑），3-(^氣甲基）-5,6,7,8-四氨-[1，2,4]^挫并[4,3-曰]化嗦盐酸盐（12.1邑）， Ξ乙胺化8扣，1-径基苯并Ξ挫化g)和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳酷二亚胺 盐酸盐（7. 2g)，四氨巧喃（80ml)，室溫下反应12h，加入水（80ml)，分层，水层用乙酸乙 醋萃取巧〇ml*2)，合并有机层，加入无水硫酸钢干燥，过滤浓缩，异丙醇/水混合溶剂结 晶（10 :1，50ml)，得7-[佩-3-(叔下氧幾基氨基）-1-氧代-4-(2, 4, 5-Ξ氣苯基）下 基]-5, 6, 7,8-四氨-3-(Ξ氣甲基）-1,2,4-Ξ挫[4, 3-a]化挫（13.Ig)，收率为 86%。
[0038] 实施例4西他列汀（Sitagliptin)的制备
[0039] 在反应瓶中加入7-[ (R) -3-(叔下氧幾基氨基）-1-氧代-4- (2, 4, 5-二氣苯基） 下基]-5, 6, 7, 8-四氨-3-(Ξ氣甲基）-1,2,4-Ξ挫[4, 3-a]化挫（lOg)，甲醇巧0ml)，0°C 加入25%的氯化氨甲醇溶液巧0ml)，室溫反应12h，减压浓缩，残留物加入乙酸乙醋巧0ml) 和饱和碳酸钢巧0ml)，分层，水层用乙酸乙醋萃取巧0ml*2)，合并有机层，无水硫酸钢干 燥、过滤、浓缩，残留物用甲苯重结晶得到西他列汀游离碱化3g)，收率为82%，纯度大于 99%。
【主权项】
1. 一种（R)-3-氨基-4-(2, 4, 5-三氟苯基）丁酸的酶法制备方法，其特征在于：3-羰 基-4-(2, 4, 5-三氟苯基）丁酸，D-氨基酸脱氢酶，辅因子，辅因子催化循环酶，氨基供体， 助溶剂和缓冲液按一定比例混合得到产物（R)-3_氨基_4-(2, 4, 5-三氟苯基）丁酸。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述辅因子为选自NAD、NADH、NADP和NADPH 的任意一种或它们的组合，其中优选为NAD。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述辅因子催化循环酶为甲酸脱氢酶。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述助溶剂为DMSO、异丙醇、乙酸乙酯或 THF，其中优选为DMSO。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氨基供体为无机铵盐，其中优选为甲酸 铵。6. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液或三乙醇胺 缓冲液，其中优选为磷酸盐缓冲液。7. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法在pH = 6~9、温度为20~55°C 下进行。8. -种西他列汀的酶-化学制备方法，其特征在于包括以下步骤：a)使用权利要求1 的方法得到（R)-3-氨基-4-(2, 4, 5-三氟苯基）丁酸（I) ;b) (R)-3-氨基-4-(2, 4, 5-三 氟苯基）丁酸⑴在碱性条件下与（Boc)20反应得到（R)-N-叔丁氧羰基-3-氨 基-4-(2, 4, 5-二氟苯基）丁酸（II) ;c) (R)-N-叔丁氧羰基-3-氨基-4-(2, 4, 5-二氟苯 基）丁酸（II)与3-(三氟甲基）-5,6,7,8_四氢-[1，2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪盐酸盐 (IV) 在缩合剂及缚酸剂作用下发生缩合反应生成7-[(R)-3-(叔丁氧羰基氨基）-1-氧 代-4-(2, 4, 5-三氟苯基）丁基]-5, 6, 7, 8-四氢-3-(三氟甲基）-1，2, 4-三唑[4, 3-a]吡唑 (V) ;d) 7-[ (R) _3_(叔丁氧羰基氨基）-1-氧代-4-(2, 4, 5-二氟苯基）丁基]-5, 6, 7, 8-四 氢-3-(三氟甲基）-1，2, 4-三唑[4, 3-a]吡唑（V)在酸性条件下反应得到西他列汀 (Sitagliptin)，具体反应路线如下：9. 如权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤b)中所述碱性条件为有机碱或无机 碱；步骤c)中所述缩合剂为0-苯并三氮唑-N，Ν，Ν'，Ν' -四甲基脲四氟硼酸、N，N-二环己 基碳二亚胺或同时使用1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐 酸盐为缩合剂；所述缚酸剂为三乙胺、Ν，Ν-二异丙基乙胺或2, 6-二甲基吡啶；步骤d)中所 述酸性条件为盐酸。
【专利摘要】本发明公开了一种西他列汀及其中间体的酶-化学制备方法，该方法将3-羰基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸，D-氨基酸脱氢酶，辅因子，辅因子催化循环酶，氨基供体，助溶剂和缓冲液按一定比例混合得到产物(R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸；(R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸经过氨基保护、缩合和脱保护步骤得到西他列汀游离碱。与现有技术相比，本发明所采用的方法工艺路线减少，反应时间缩短，产物纯度和收率提高，生产成本降低，适合工业化生产。
【IPC分类】C12P13/04, C12P17/18, C07D487/04
【公开号】CN105331651
【申请号】CN201510831495
【发明人】竺伟, 高新星, 王波
【申请人】尚科生物医药（上海）有限公司
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月25日