苯甲酰胺衍生物及制备和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学领域，涉及苯甲酰胺衍生物、制备及应用，尤其涉及 N-(3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物及其制 备方法和作为Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 慢性粒细胞白血病（ChronicMyelogenousLeukemia,CML)是恶性的骨髓造血干 细胞克隆增殖性疾病，95%的病人有特征性Ph染色体及其分子标志Bcr-Abl融合基因。研 究证明，融合基因Bcr-Abl是慢性粒细胞白血病的分子生物学特征，其产物Bcr-Abl激酶是 发病的关键因素。
[0003] 目前临床上最常用的针对Bcr-Abl酪氨酸激酶的小分子抑制剂（TKI)包括：第一 代药物伊马替尼；第二代药物达沙替尼、尼洛替尼和伯舒替尼；第三代药物普纳替尼。伊马 替尼（Imatinib)是瑞士诺华公司研发的口服抗慢性粒细胞白血病小分子酪氨酸激酶抑制 剂。它开创了以激酶为靶标治疗疾病的新时代，Imatinib能够与Bcr-Abl激酶区域的ATP 位点结合，阻止氨基酸残基磷酸化，从而阻断信号传导途径，抑制细胞增殖，可以有效缓解 CML。治疗后患者5年存活率可达90%，并且它能特异性的作用于CML癌细胞，而对正常 细胞几乎没有伤害，毒副作用大大降低。随着Imatinib的使用，Bcr-Abl基因的突变导致 了耐药性的出现，很大程度上降低了伊马替尼的疗效。达沙替尼（Dasatinib)是一种针对 Bcr-Abl酪氨酸激酶、Src激酶家族（Src，Lck，Fyn)、c-Kit和TOGFR-B等多种激酶都作用的 多靶点口服激酶抑制剂，于2006年6月28日由百时美施贵宝研发获得FDA批准上市。和 Imatinib-样，竞争性地和Bcr-Abl激酶区域的ATP位点结合，但是抑制Bcr-Abl激酶的活 性是Imatinib的300倍。尽管能克服多种Imatinib出现的耐药性，但对Bcr-Abl无效。尼 洛替尼（Nilotinib) -种新型苯胺嘧啶类Imatinib的衍生物，于2007年10月29日获得美 国FDA批准上市。它对Bcr-Abl激酶的亲和力比Imatinib强20倍，并且对出现Imatinib 耐药性的患者（T315I突变除外）有广泛的活性。使用Nilotinib治疗CML的大多数患者 会存在肠胃反应、骨髓抑制、高胆红素血症等常见的不良反应。针对Imatinib、Dasatinib 和Nilotinib所产生的耐药性，美国惠氏制药公司研发了 4-取代苯胺-3-喹啉加甲腈类药 物伯舒替尼（Bosutinib)，用于治疗CML，于2012年9月4日被FDA批准上市。Bosutinib 既能抑制多种人肿瘤细胞中Scr蛋白的自主磷酸化，也能抑制Bcr-Abl蛋白的自主磷酸化， 并且在针对KU812和K562细胞（含Bcr-Abl的CML细胞）的抗增殖试验中，Bosutinib活 性要明显高于Imatinib，另外Bosutinib口服生物利用度叫较高，但是接受Bosutinib治疗 的患者经常会出现腹痛、腹泻、血小板减少、发热和疲劳等不良发应。普纳替尼（Ponatinib) 是一种能够作用于Abl，TOGFRa，VEGFR2,FGFR1和Src激酶的口服多靶点抑制剂。由于它 独特的作用机制，服用可抑制对T315I突变在内的Bcr-Abl激酶活性。但是据FDA最新报 道服用Ponatinib的患者，会出现严重的血管问题，所以期待对该药进行安全性评估。
[0004] Imatinib和Ponatinib在治疗CML过程中表现出非常好的疗效，但是他们都很昂 贵，据统计服用Imatinib和Ponatinib的患者每年分别需要92 000和138 000美元的费 用。因此，寻求Imatinib和Ponatinib的低成本替代药物已经成为当务之急。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供N- (3- (4- (3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基 苯基）苯甲酰胺衍生物及其制备方法和作为Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂的应用。
[0006] 本发明提供了式⑴表示的N- (3- (4- (3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡唑 基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺衍生物，
[0007]
[0008] R1 表示-0CH3、-F、_CF3、_CH2CH3、-H、
[0009] R2表不-CF3、_F、_C1 或-Η。
[0010] 本发明化合物均具有对Bcr-Abl酪氨酸激酶的抑制作用，其中部分化合物的抑制 效果显著。
[0011] 本发明还提供了N-(3-(4-(3-咪唑并[l，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯 基）苯甲酰胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
[0012] (a)将2-甲基-5-硝基苯胺溶解在乙醇中，加入37%的浓盐酸，将上述体系置于 冰浴条件下，然后将亚硝酸钠的水溶液滴加到上述体系中，优选反应温度〇~5°C，反应时 间0. 5~1小时，得到式（II)表示的2-甲基-5-硝基苯肼盐酸盐；
[0013]
[0014] (b)将二水合氯化亚锡溶于浓盐酸（质量百分浓度37% )中，置于冰浴条件下，然 后把2-甲基-5-硝基苯肼盐酸盐滴加到上述体系中，优选式（II)化合物与二水合氯化亚 锡的物质的量比为1 : (1. 5~2)，反应温度0~10°C，反应时间1~2小时，加NaOH溶液 (如浓度lmol/L)中和，得到式（III)表示的2-甲基-5-硝基苯肼；
[0015]
[0016] (c)将式（III)化合物与2-溴丙二醛在乙醇中反应，优选式（III)化合物与2-溴 丙二醛的物质的量比为1 : (1.1~1.5)，反应温度55~65°C，反应时间2~4小时，得到 式（IV)表示的4-溴-1-(2-甲基-5-硝基苯基）吡唑；
[0017]
[0018] (d)将式（IV)化合物溶解到乙醇中，加入氯化铵的水溶液和铁粉，优选反应温度 80~90°C，反应时间2~3小时，得到式（V)表示的3-(4-溴-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0019]
[0020] (e)将式（V)化合物和Boc酸酐在四氢呋喃中反应，优选式（V)化合物与Boc酸酐 的物质的量比为1 : (1. 1~1. 4)，反应温度66~70°C，反应时间2~3小时，得到式（VI) 表示的N-Boc-3-(4-溴-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0021]
[0022] (f)将式（VI)化合物溶于二氧六环中，加入联硼酸频哪醇酯、醋酸钾和二（三苯 基膦）二氯化钯，优选式（VI)化合物、联硼酸频哪醇酯、醋酸钾和二（三苯基膦）二氯化钯 的物质的量比为1 : (1.1~1.5) : 3 : (0.1~0.2)，反应温度100~110°C，反应时间 15~18小时，得到式（VII)表示的N-Boc-3-(4-(2-(4, 4, 5, 5-四甲基-1，3, 2-二氧硼戊环 基））-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0023]
[0024] (g)将咪唑并[1，2-b]哒嗪、NBS和催化量的AIBN在氯仿中反应，优选咪唑并 [l，2-b]哒嗪、NBS和AIBN物质的量比为1 : (1.5~2) : (0.1~0.2)，反应温度65°C， 反应时间2~3小时得到式（VIII)表示的3-溴咪唑并[1，2-b]哒嗪；
[0025]
[0026] (h)将式（VII)化合物和式（VIII)化合物溶解到二氧六环和水的混合溶液中，加 入四（三苯基磷）钯和碳酸钠，优选式（VII)化合物、式（VIII)化合物、碳酸钠和四（三苯 基磷）钯的物质的量比为1 : 2 : 3 : (0.1~0.2)，反应温度110~120°C，反应时间7~ 10小时，得到式（IX)示的N-Boc-3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基 苯胺；
[0027]
[0028] ⑴将式（IX)和三氟乙酸在二氯甲烷中反应，优选反应时间5~6小时，得到式 (X)表示的3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯胺；
[0029]
[0030] (j)将式⑴化合物、4-氯甲基苯甲酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反应，优选式（X) 化合物、4-氯甲基苯甲酰氯和三乙胺的物质的量比为1 : (2~3) : (0.2~0.5)，反应时 间2~3小时，得到式（XI)表示的4-氯甲基-N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡 唑基）-4-甲基苯基）苯甲酰胺；
[0031]
[0032] (K)将式（XI)化合物、亲核试剂和碘化钾在DMF中反应，优选式（XI)化合物、亲核 试剂和碘化钾的物质的量比为1 : (2~3) : (0. 1~0. 2)，反应温度，80~90 °C，反应时 间2~3小时，得到式（I)表示的N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲 基苯基）苯甲酰胺衍生物；
[0036] 或⑴将式⑴化合物、取代苯甲酰氯和三乙胺在二氯甲烷中反应，优选式⑴化 合物、取代苯甲酰氯和三乙胺的物质的量比为1 : (2~3) : (0.2~0.5)，反应时间2~ 3小时，得到式（I)表示的N-(3-(4-(3-咪唑并[1，2-b]哒嗪基）-1-吡唑基）-4-甲基苯 基）苯甲酰胺衍生物；
[0037]
[0038]R1 表示-0CH3、-F、-CF3、-CH2CH3或-H，R2表示-CF3、-F、-C1 或-H。
[0040] 本发明方法使用工业上普通的试剂和常规的生产条件，反应条件温和，步骤简单。
[0041] 上述合成过程中的化学反应式如下：
[0042]
[0043]其中，R1 表示-0CH3、-F、_CF3、_CH2CH3或-H，进一步表示
[0045] 本发明方法是首先以2-甲基-5-硝基苯胺为原料，经过重氮化和还原反应生成 2-甲基-5-硝基苯肼，然后与2-溴丙二醛进行缩合关环，得到4-溴-1-(2-甲基-5-硝 基苯基）吡唑中间体，然后经还原，Boc酸酐保护，钯催化下和联硼酸频哪醇酯反应，得到 N-Boc-3- (4- (2- (4, 4, 5, 5-四甲基-1，3, 2-二氧硼戊环基））-1-吡唑基）-4-甲基苯胺，之