一种门冬氨酸缩合物的制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及有机合成技术领域，尤其涉及一种门冬氨酸缩合物的制备方法。
【背景技术】
[0002] 门冬氨酸鸟氨酸主要用于治疗因急、慢性肝病（如各型肝炎，肝硬化，脂肪肝，肝炎 后综合症）引发的血氨升高及肝性脑病。门冬氨酸缩合物为门冬氨酸鸟氨酸原料药及制剂 中的主要杂质，也是在门冬氨酸鸟氨酸征求意见稿中提到需要研究与控制的杂质。门冬氨 酸缩合物的化学名:2-[(3_氨基-3-羧基丙酮基)氨基]丁二酸），结构式如下所示：
[0003]
[0004] 该杂质市场售价极高且难保证产品纯度，不利于日常生产检测使用。为准确检测 门冬氨酸鸟氨酸原料药及制剂中门冬氨酸缩合物杂质的含量，需高纯度的门冬氨酸缩合物 作为对照品。本发明工艺可以稳定产出高纯度质量稳定的门冬氨酸缩合物，对于门冬氨酸 鸟氨酸原料药及制剂的生产过程及质量的控制具有很高的应用意义。
[0005] 据目前检索到的文献中尚未发现该杂质的合成方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是针对现有技术中存在的缺陷与不足，提供一种门冬氨酸缩合物的 制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0007] (1)门冬氨酸与醇发生酯化反应，得到门冬氨酸二酯；
[0008] (2)Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与门冬氨酸二酯反应，得到缩合产物；
[0009] (3)水解所述缩合产物，即得所述门冬氨酸缩合物。
[0010] 其中，步骤⑴的具体操作为：向门冬氨酸中加入无水醇，于-20°C~-10°c条件下， 滴加氯化亚砜，滴加结束后，于室温下反应，反应完全后浓缩反应液，得含所述门冬氨酸二 酯的油状物。
[0011]所述醇为甲醇、乙醇中的一种或多种，优选为甲醇。
[0012] 所述无水醇与门冬氨酸的体积质量比优选为（15-25): 1，进一步优选为20: l(mL: g)〇
[0013] 所述门冬氨酸与氯化亚砜的摩尔比优选为1:(3.5~5)。
[0014]其中，步骤(2)的具体操作为:加入溶剂溶解所述Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯，并向其 内加入1，Γ-羰基二咪唑和所述门冬氨酸二酯或含门冬氨酸二酯的油状物于45-55Γ反应， 反应完全后浓缩反应液，即得含所述缩合产物的油固混合物。
[0015]所述溶剂为无水四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃中的一种或多种，优选为四氢呋喃。
[0016] 所述Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与1，Γ-羰基二咪唑的摩尔比优选为1: (1-2)，进一 步优选为1:1。
[0017] 所述Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与所述门冬氨酸二酯的摩尔比优选为1:(1~3)，进 一步优选为1: (2~3)。
[0018] 其中，步骤(3)的具体操作为：向所述缩合产物或含所述缩合产物的油固混合物中 加入酸液和有机溶剂，室温条件下进行水解反应，反应完全后，调节反应液的pH值为7~8， 分去有机溶剂层，浓缩水层即得所述门冬氨酸缩合物。
[0019] 所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或多种，优选为乙酸乙酯；
[0020] 所述酸液为盐酸溶液。
[0021] 本发明提供了一种优选的门冬氨酸缩合物的制备方法，其反应历程为：
[0022] (1)酯化反应
[0028]其具体的操作为：
[0029] (1)向门冬氨酸中加入无水甲醇，于-20 °C~-10 °C条件下，滴加氯化亚砜，滴加结 束后，于室温下反应，反应完全后浓缩反应液，得含门冬氨酸二甲酯的油状物；
[0030] (2)加入四氢呋喃溶解Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯，并向其内加入1，1'_羰基二咪唑 和含门冬氨酸二酯的油状物于45-55 °C反应，反应完全后浓缩反应液，即得含缩合产物的油 固混合物；
[0031] (3)向含缩合产物的油固混合物中加入盐酸和乙酸乙酯，室温条件下进行水解反 应，反应完全后，调节反应液的pH值为7~8,分去乙酸乙酯层，浓缩水层即得门冬氨酸缩合 物。
[0032]本发明同时提供了采用柱层析对所述门冬氨酸缩合物进行提纯的方法，所述提纯 的具体操作为：以硅胶为固定相，以甲醇和二氯甲烷混合液为洗脱液，收集使茚三酮显色的 流出液，浓缩，将浓缩液加入石油醚中，析出固体即为所述门冬氨酸缩合物。
[0033]所述洗脱液中甲醇和二氯甲烷的体积比优选为1:1。
[0034]本发明以门冬氨酸和Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯为原料，经酯化、缩合、水解、分离纯 化得到高纯度的门冬氨酸缩合物。该制备方法适合实验室中较大批量的制备，纯化过程中 除杂效果好。
【附图说明】
[0035]图1为实施例1制备得到的门冬氨酸缩合物的HPLC谱图。
【具体实施方式】
[0036]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0037]实施例1门冬氨酸二甲酯的合成
[0038]取门冬氨酸20g作为原料，加入无水甲醇400ml，搅拌，冰浴外温-20 °C下，滴加氯化 亚砜80g，30min滴加完毕，滴加过程中固体逐渐溶解，保温反应lh，然后升温至室温，继续反 应12h。60 °C真空浓缩反应液至干，加入200ml甲醇溶解，再60 °C真空浓缩至干，得含门冬氨 酸二甲酯的油状物25g。
[0039] 实施例2门冬氨酸二甲酯的合成
[0040] 取门冬氨酸20g作为原料，加入无水甲醇300ml，搅拌，冰浴外温-20 °C下，滴加氯化 亚砜70g，25min滴加完毕，滴加过程中固体逐渐溶解，保温反应lh，然后升温至室温，继续反 应12h。60 °C真空浓缩反应液至干，加入200ml甲醇溶解，再60 °C真空浓缩至干，得含门冬氨 酸二甲酯的油状物24.2g。
[0041] 实施例3缩合物的合成
[0042] 称取Boc-L-天冬氨酸-1-节酯10g，加入无水四氢咲喃100ml室温搅拌溶解，加入 CDI 5g( 1，Γ -羰基二咪唑），55°C反应lh，加入实施例1所得油状物12.8g，50°C继续反应2h， 50°C减压浓缩反应液至干，有固体析出，得含缩合物的油固混合物。
[0043]实施例4缩合物的合成
[0044] 称取Boc-L-天冬氨酸-1-节酯10g，加入无水四氢咲喃100ml室温搅拌溶解，加入 CDI 5g( 1，Γ -羰基二咪唑），50°C反应lh，加入实施例1所得油状物12.8g，50°C继续反应2h， 50°C减压浓缩反应液至干，有固体析出，得含缩合物的油固混合物。
[0045]实施例5门冬氨酸缩合物的合成
[0046] 将实施例3中所得油固混合物加入250ml三口烧瓶中，加入200ml混合溶剂10%盐 酸与乙酸乙酯（v:v = 1: 2)，室温下搅拌40min。反应完毕，加入10%氨水调节pH至7~8,分 液，分去有机乙酸乙酯层，水层50°C减压浓缩至30ml，即得门冬氨酸缩合物粗品。
[0047]实施例6门冬氨酸缩合物粗品的提纯
[0048]使用200目硅胶装柱，采用甲醇:二氯甲烷1:1作为洗脱液，将水解产物上柱，采用 茚三酮显色剂（茚三酮lg至50ml丙酮溶液），收集显色产物，所得收集液于50°C减压浓缩至 20ml，取出，室温下缓慢滴加入50ml石油醚中，有白色固体产生，滴加完毕搅拌30min，过滤， 所得固体于真空干燥箱中40°C减压浓缩8h，得粘性结晶状固体5.2g APLC含量98.89%。
[0049]虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 一种门冬氨酸缩合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤： (1) 门冬氨酸与醇发生酯化反应，得到门冬氨酸二酯； (2) Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与门冬氨酸二酯反应，得到缩合产物； (3) 水解所述缩合产物，即得所述门冬氨酸缩合物。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:步骤(1)的具体操作为：向门冬氨酸中 加入无水醇，于-20 °C~-10°C条件下，滴加氯化亚砜，滴加结束后，于室温下反应，反应完全 后浓缩反应液，得含所述门冬氨酸二酯的油状物。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于:所述醇为甲醇、乙醇中的一种或多种， 优选为甲醇； 和/或，所述无水醇与门冬氨酸的体积质量比为20:1; 和/或，所述门冬氨酸与氯化亚砜的摩尔比为1:(3.5~5)。4. 根据权利要求1-3任一所述的制备方法，其特征在于:步骤(2)的具体操作为:加入溶 剂溶解所述Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯，并向其内加入1，Γ-羰基二咪唑和所述门冬氨酸二酯 或含门冬氨酸二酯的油状物于45-55 °C反应，反应完全后浓缩反应液，即得含所述缩合产物 的油固混合物。5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于:所述溶剂为无水四氢呋喃、无水2-甲 基四氢呋喃中的一种或多种，优选为无水四氢呋喃； 和/或，所述Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与1，Γ-羰基二咪唑的摩尔比为1: (1-2); 和/或，所述Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与所述门冬氨酸二酯的摩尔比为1:(1~3)。6. 根据权利要求1-5任一所述的制备方法，其特征在于:步骤(3)的具体操作为：向所述 缩合产物或含所述缩合产物的油固混合物中加入酸液和有机溶剂，室温条件下进行水解反 应，反应完全后，调节反应液的pH值为7~8,分去有机溶剂层，浓缩水层即得所述门冬氨酸 缩合物。7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯 中的一种或多种，优选为乙酸乙酯； 和/或，所述酸液为盐酸溶液。8. 根据权利要求1-7任一所述的制备方法，其特征在于:还包括采用柱层析对所述门冬 氨酸缩合物进行提纯的步骤，所述提纯的具体操作为：以硅胶为固定相，以甲醇和二氯甲烷 混合液为洗脱液，收集使茚三酮显色的流出液，浓缩，将浓缩液加入石油醚中，析出固体即 为所述门冬氨酸缩合物。9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于:所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1:1。
【专利摘要】本发明涉及有机合成技术领域，尤其涉及一种门冬氨酸缩合物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)门冬氨酸与醇发生酯化反应，得到门冬氨酸二酯；(2)Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯与门冬氨酸二酯反应，得到缩合产物；(3)水解所述缩合产物，即得所述门冬氨酸缩合物。本发明以门冬氨酸和Boc-L-天冬氨酸-1-苄酯为原料，经酯化、缩合、水解、分离纯化得到高纯度的门冬氨酸缩合物。该制备方法适合实验室中较大批量的制备，纯化过程中除杂效果好。
【IPC分类】C07C231/12, C07C237/12
【公开号】CN105566141
【申请号】CN201510965114
【发明人】郑爱, 王栋, 马金成, 洪广怀, 魏珺璇
【申请人】蚌埠丰原医药科技发展有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月17日