18]步骤4.菌株YCSC6的保藏:该菌已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC N0.11730，保藏日期为2015年11月25号。在实验室中，该菌株长期保藏方式为将菌株加入含30%甘油的MB 2216培养基(Difco，货号:279110)培养基中，在-80°C保存;短期保藏方式为将菌株接种在MA 2216培养基(Difco，货号:212185)斜面上，在4°C保存备用。
[0019]实施例2YCSC6菌株对盾纤毛虫的杀灭活性监测
[0020]步骤1.YCSC6菌液的制备:取备用YCSC6母板，在MA 2216培养基平板上进行划线分纯，将划好线的培养皿倒置于25 0C培养24-96小时，挑取长出的单菌落，再次在MA 2216培养基平板上进行划线分纯，将划好线的培养皿倒置于25°C培养24-96小时，待单一菌落长出，挑取单菌落到Iml海水2216E液体培养基中，并用封口膜密封备用，接种好单菌落的海水2216E液体培养基置于25°C摇菌24-96小时，至其OD6qq达到0.4-0.7，用封口膜密封备用。
[0021]步骤2.盾纤毛虫液制备:取实验室保存的盾纤毛虫液体，10倍梯度稀释后挑含I个纤毛虫的液滴立即转移到Iml鱼汤培养基中置于14-18°C培养，待鱼汤培养基中盾纤毛虫密度达到5 X 13个/ml以上时，将该Iml鱼汤培养基转移到50ml鱼汤培养基中置于14-18°C继续培养，直至该50ml鱼汤培养基中盾纤毛虫密度达到5X 13个/ml以上，做为盾纤毛虫培养液备用。
[0022]所述的步骤2中的鱼汤培养基配法为:取50ml陈海水，经过121°C，20min灭菌，冷却后加入Iml鱼肉汤母液。
[0023]上所述的鱼肉汤母液配置方法为:取大菱鲆鱼肉10_30g于锥形瓶中，加入50ml的蒸馏水，电炉煮沸1min冷却，将上清液分装至灭好菌的1.5ml的离心管中，每管分装Iml，放置于一20 C冰箱备用。
[0024]步骤3.YCSC6对盾纤毛虫杀虫效果检测:。取一个96孔板，96孔板的A1、B1孔做空白对照，加160μ1灭菌海水，其余孔为实验组;取步骤(I)细菌菌液160μ1加入到96孔板中，每种细菌设2个平行，即每一种细菌加两孔;取步骤(2)获得的盾纤毛虫培养液，依次向96孔板加注了灭菌海水或细菌菌液的孔中再加注160μ1盾纤毛虫培养液，将加好样的96孔板置于湿盒中，放到16°C共培养;监测共培养体系中盾纤毛虫的存活率确定杀虫细菌。开始共培养后，每隔3小时，从培养箱中取出96孔板，将每孔液体吹匀后取出20μ1液体在显微镜下观察盾纤毛虫生长情况和存活率，ο通过该步骤:3h后，YCSC6与盾纤毛虫的共培养体系中，盾纤毛虫运动缓慢;12h后YCSC6与盾纤毛虫的共培养体系中已经观察不到盾纤毛虫。
[0025]实施例3菌株YCSC6培养液上清的杀虫效果
[0026]步骤1.菌株培养:将YCSC6从保存备用平皿上挑取单菌落到I毫升海水2216E液体培养基中置于25 °C摇菌36-96小时，至其OD6qq达到0.4-0.7做为种子液转移到100毫升海水2216E液体培养基中置于25°C摇菌培养36-96小时，至其OD6qq达到0.4-0.7时，采用5000rpm条件离心10分钟，离心后将上清液转移到一新的灭菌管中用封口膜密封备用。
[0027]步骤2.盾纤毛虫液制备:取实验室保存的盾纤毛虫液体，10倍梯度稀释后挑含I个纤毛虫的液滴立即转移到Iml鱼汤培养基中置于14-18°C培养，待鱼汤培养基中盾纤毛虫密度达到5 X 13个/ml以上时，将该Iml鱼汤培养基转移到50ml鱼汤培养基中置于14-18°C继续培养，直至该50ml鱼汤培养基中盾纤毛虫密度达到5X 13个/ml以上，做为盾纤毛虫培养液备用。
[0028]步骤3.YCSC6菌株培养液上清杀虫效果验证:将分离获得的YCSC6菌株培养液上清与盾纤毛虫在三角瓶中进行共培养。取6个10ml三角瓶，其中三个做空白对照，各加20ml灭菌海水;其余三瓶为实验组，各取步骤(I )YCSC6菌株培养液上清20ml加入到三角瓶;取步骤(2)获得的盾纤毛虫培养液，依次向6个加注了灭菌海水或菌株培养液上清的三角瓶中再加注20ml盾纤毛虫培养液，将加好样的三角瓶放到16°C共培养;监测共培养体系中盾纤毛虫的存活率确定杀虫细菌。开始共培养后，每隔12小时，从培养箱中取出三角瓶，将每孔液体吹匀后取出20μ1液体在显微镜下观察盾纤毛虫生长情况和存活率。共培养12小时后，共培养液体中已经观察不到盾纤毛虫，验证了 YCSC6菌株培养液上清的杀虫活性。
【主权项】
1.一种肋生盐弧菌，其特征在于，所述的肋生盐弧菌的保藏编号为CGMCC N0.11730。2.如权利要求1所述的肋生盐弧菌，其特征在于，所述的肋生盐弧菌(Salinivibriο(3081:;[(301&)为￥0306株。3.如权利要求1所述的肋生盐弧菌，其特征在于，所述的肋生盐弧菌为革兰氏阴性菌，其接触酶反应为弱阳性，氧化酶反应为阴性，在MA培养基上形成微黄色菌落，菌落圆形表面光滑；可利用葡萄糖、甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麦芽糖、苹果酸、D-核糖、D-果糖、L-山梨糖。4.权利要求1所述的肋生盐弧菌在制备预防或治疗盾纤毛虫病的制品中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的制品为权利要求1所述的肋生盐弧菌的发酵培养液。
【专利摘要】本发明提供一种肋生盐弧菌(Salinivibrio？costicola)YCSC6，其保藏号为CGMCC？No.11730。本发明的肋生盐弧菌用于制备预防或治疗盾纤毛虫病的制品。本发明的肋生盐弧菌与海水鱼类盾纤毛虫病原共培养时，能够在12小时内杀灭共培养体系中98％以上的盾纤毛虫。经过连续多代培养，其杀虫效果稳定。该菌株的发现为防治海水鱼类盾纤毛虫病提供了一种新的生防菌株。CGMCC No. 1173020151125
【IPC分类】C12N1/20, A01N63/02, C12R1/01, A01P15/00
【公开号】CN105624075
【申请号】CN201610205920
【发明人】曲凌云, 田欣欣, 杜光讯
【申请人】国家海洋局第一海洋研究所
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年4月5日