一种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶及其应用，该乙酰乳酸合成酶的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示；编码该乙酰乳酸合成酶的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该乙酰乳酸合成酶在水稻品种“CL55”中表达，与野生型乙酰乳酸合成酶蛋白质相比具有4个突变位点。将编码乙酰乳酸合成酶的基因转化到植物中编码乙酰乳酸合成酶，可使转基因植物具有抗咪唑啉酮类除草剂的特性。CGMCC NO.934820140714
【专利说明】
一种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成 酶及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶及其应 用，更具体地涉及一种来源于水稻品种"CL55"的乙酰乳酸合成酶，该乙酰乳酸合成酶的编 码基因转化植物使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂的特性。
【背景技术】
[0002] 水稻是我国乃至世界的主要粮食作物，是全球近一半人口的主要热量来源。在我 国，水稻的种植总面积、总产量和单位面积产量均居各类粮食作物的首位。近年来，由于半 矮杆水稻品种的种植，水稻种植方式由传统的移栽方式向直播转变，杂草稻随后蔓延开来 并且日益严重。全国由于杂草对水稻的危害，导致水稻产量损失达11%，目前，杂草稻已经 成为全球水稻田杂草危害的新问题。由于杂草稻同栽培稻亲缘关系密切，尚没有理想的除 草剂可以安全而有效地控制杂草稻。
[0003] 咪唑啉酮类除草剂选择性强、广谱、高活性，经根与叶吸收，可进行播前混土、苗前 土表处理及莖叶喷雾，即能防除一年生禾本科与阔叶杂草，也能防除多年生杂草。咪唑啉酮 类除草剂在土壤中吸附性小、持效期较长，广泛用于大豆等旱田作物，它对防除水稻田杂草 稻非常有效。目前通过非转基因手段培育的抗除草剂作物主要是抗咪唑啉酮类作物，其中， 已经商品化的有玉米、小麦、油菜、水稻和向日葵等。
[0004] 目前，已经发现水稻品种"Kinmaze"的乙酰乳酸合成酶蛋白质Trp547和SER627 的双位点突变（Kawai et al. 2007A novel mutant acetolactate synthase gene from rice cells, which confers resistance to ALS-inhibiting herbicides. J. Pestic. Sci，32:89-98)，以及广东的水稻品种"黄占华"、"黄占丝"的乙酰乳酸合成酶蛋白质Ala96、 Trp548、SER627的单位点突变（中国专利CN102586215B)会使水稻获得抗咪唑啉酮类除草 剂的特性。但是，要从根本上解决水稻直播田杂草稻问题，仍需要培育出具有高效的抗咪唑 啉酮类除草剂特性的转基因植物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸 合成酶及其应用，该乙酰乳酸合成酶的编码基因来源于水稻品种"CL55"（保藏号：CGMCC No. 9348 ;建议的分类命名：粳稻Oryza sativa subsp. japonica ;保藏日期：2014年7月 14日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北 辰西路1号院3号，邮编100101)，将其转化到植物中，使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂的特 性。
[0006] 为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：
[0007] -种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶，其氨基酸序列如 SEQ ID No :1 所示。
[0008] 所述使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶的编码基因，其核苷 酸序列如SEQ ID N0. 2所示。
[0009] -种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶在培育抗咪唑啉酮 类除草剂植物中的应用。
[0010] 进一步，所述咪唑啉酮类除草剂是指咪唑乙烟酸（英文名称：Imazethapyr，化学 名称：2_[4, 5-二氢-4-甲基-4- (1-甲基乙基）-5-氧代-1H-咪唑-2-基]-5-乙基-3-吡 啶羧酸）或者甲咪唑烟酸（英文名：Imazameth，化学名称：（RS) -2- (4-异丙基-4-甲 基-5-氧-2-咪唑啉-2-基）-5-甲基烟酸）。
[0011] 又，所述植物为水稻或玉米。
[0012] 本发明所述的乙酰乳酸合成酶蛋白质与其他野生型乙酰乳酸合成酶蛋白质（其 氨基酸序列如SEQ ID N0:3所示）相比具有4个突变位点，将编码该合成酶的基因转化到 植物中，可使水稻、玉米等植物具有抗咪唑啉酮类除草剂的特性。
[0013] 具体是将本发明编码乙酰乳酸合成酶的基因转化到水稻中得到转基因1300-CL55 水稻，在转基因1300-CL55水稻和野生型水稻苗期喷洒咪唑啉酮类除草剂，十天后，野生型 水稻植株全部死亡，而转基因1300-CL55水稻植株全部存活；将编码乙酰乳酸合成酶的基 因转化到玉米中得到转基因1300-CL55玉米，在转基因1300-CL55玉米和野生型玉米苗期 喷洒咪唑啉酮类除草剂，十天后，野生型玉米植株全部死亡，而转基因 13〇〇-CL55玉米植株 全部存活。因此，含有本发明如SEQ ID N0 :1所示的乙酰乳酸合成酶的转基因植物具有抗 咪唑啉酮类除草剂的特性。
[0014] 本发明有益效果：
[0015] 1)本发明如SEQ ID No :1所示的乙酰乳酸合成酶是在水稻品种"CL55"中表达出 来的，编码该合成酶的基因转化到植物中编码乙酰乳酸合成酶，使转基因植物可以表达乙 酰乳酸合成酶蛋白质，进而使转基因植物具有抗咪唑啉酮类除草剂的特性。
[0016] 2)含有本发明乙酰乳酸合成酶基因的植物安全稳定，对植物生长没有不良影响， 对环境无污染。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。
[0018] 下列实施例中如无特殊说明均为《分子克隆实验指南（第三版）》（科学出版社， 2002年）、《植物组织培养原理与技术-》（化学工程出版社，2009年）、《现代作物栽培学》 (高等教育出版社，2011年）所记载的方法。本实施例中，引物DNA的合成和DNA测序委托 上海生工生物工程股份有限公司进行，化学试剂、实验菌株、分子生物学试剂盒和酶类从杭 州南天生物科技有限公司购买。组织培养使用的NBDC共培养基、NBDS筛选培养基、MSH)预 分化培养基、MSD分化培养基、生根培养基等从杭州莱楓生物科技有限公司购买。
[0019] 实施例1.确定水稻品种"CL55"中的乙酰乳酸合成酶基因
[0020] 根据已知的乙酰乳酸合成酶的核酸序列（如SEQ ID N0 :4所示）设计引物：AHA S-F: 5' atggctacgaccgccgcggccgcg ;AHAS-R: 5' atacacagtcctgccatcaccatc。使用上述 2 个引物，通过聚合酶链式反应（PCR)从水稻品种"CL55"水稻基因组中扩增出1935bp条 带。其中，PCR反应体系为：50yl 2x高保真聚合酶（PFU)Mix，4yl AHAS-F(10yM)，4yl AHAS-R(10 y M)，1 y 1 "CL55" 基因组 DNA，41 y 1 去离子水（ddH20)，总体积 100 y 1 ;PCR 反 应程序为：1.95°C，10 分钟；2. 95°C，40 秒；3. 52°C，40 秒；4. 68°C，2 分钟；5.步骤 2 ~4,循 环 25 次；6. 68°C，10 分钟；7. 16°C，保存。
[0021] 将PCR产物DNA测序，其序列如SEQ ID N0 :2所示，获得本发明"CL55"水稻中的 "CL55"乙酰乳酸合成酶基因序列。根据核苷酸编码氨基酸的密码子规律，推算获得该乙酰 乳酸合成酶基因编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID N0 :1所示。
[0022] 通过比对"CL55"水稻中如SEQ ID N0 :1所示的乙酰乳酸合成酶氨基酸序列和野 生型乙酰乳酸合成酶蛋白质序列（如SEQ ID N0 :3所示），本发明的乙酰乳酸合成酶氨基 酸序列具有 4 个突变位点：AlallThr、Trp293Arg、Gln401Ala 和 Ser627Asn。
[0023] 实施例2.构建含有"CL55"乙酰乳酸合成酶基因的农杆菌诱导植物转化载体
[0024] 农杆菌转化T-DNA载体是基于pCambia 1300载体而构建的。获取表达乙酰乳酸 合成酶各个原件的步骤如下：
[0025] (1)获得可用于构建的"CL55"乙酰乳酸合成酶基因片段
[0026] "CL55"乙酰乳酸合成酶基因的核苷酸序列通过PCR从"CL55"的基因组中获得，弓丨 物两端设计酶切位点：
[0027] AHASF-BamHl :5'GTGGGATCC atggctacgaccgccgcggccgcg，5'端被设计上 BamHI 位 占 .
[0028] AHASR-Sacl :5, GTGGAGCTC atacacagtcctgccatcaccatc，5' 端被设计上 SacI 位 点。
[0029] 将AHASF-BamHl和AHASR-Sacl扩增出的PCR产物进行纯化，然后将纯化后的产物 进行BamHI和Sac 1双酶切，获得核苷酸片段AHAS55。
[0030] (2)获得可用于构建的终止子核苷酸片段
[0031] PEPC终止子（如SEQ ID N0 :5所示）从玉米的基因组中通过PCR获得，使用的引 物分别是：
[0032] PEPCF-Sacl: 5'GTGGAGCTC aagagctcactggctaggcg，5' 端被设计上 SacI 位点；
[0033] PEPCF-Sacl: 5'GTGGGTACC ggtaccttaaacaagtccatc，5' 端被设计上 Kpnl 位点。
[0034] 将PEPCF-Sacl和PEPCF-Sacl扩增出的PCR产物进行纯化，然后将纯化后的产物 进行SacI和Kpnl双酶切，获得核苷酸片段PEPC-Ter。
[0035] (3)获得可用于构建的启动子
[0036] Ubiquitin-1启动子（如SEQ ID N0 :6所示）从玉米的基因组中通过PCR获得， 使用的引物分别是：
[0037] UbiF-Hind :5' GCGAAGCTTgcatgcctacagtgcagcgt，5' 端被设计上 Hindlll 位点）；
[0038] UbiR-BamH :5' GTGGGATCCgatgccccagatgatgtccac，5' 端被设计上 BamHI 位点）。
[0039] 将UbiF-Hind和UbiR-BamH扩增出的PCR产物进行纯化，然后将纯化后的产物进 行Hindlll和BamHI双酶切，获得核苷酸片段Ubi-PMT。
[0040] 将上述乙酰乳酸合成酶表达原件进行转化T-DNA载体构建：将pCambia 1300载 体进行Hindlll和SacI双酶切获得核苷酸片段1300-HS，将1300-HS、Ubi-PMT和AHAS55 进行连接，将连接产物转入克隆菌株大肠杆菌TG1中，鉴定获得质粒1300-Ubi-AHAS55。将 质粒1300-Ubi-AHAS55进行SacI和Kpnl双酶切获得核苷酸片段1300-SK，将1300-SK和 PEPC-Ter进行连接，将连接产物转入克隆菌株TG1中，鉴定获得可用于农杆菌植物转化的 含有T-DNA载体的质粒1300-CL55。
[0041] 实施例3.在野生型水稻品种中表达"CL55"的乙酰乳酸合成酶
[0042] 将质粒1300-CL55转入农杆菌菌株LBA4044中，以此农杆菌进行植物转化。转基 因水稻的获得方法是采用现有技术。选取成熟饱满的秀水134种子去壳，诱导产生愈伤组 织作为转化材料。取包含质粒1300-CL55的农杆菌划板，挑单菌落接种准备转化用农杆 菌。将待转化的愈伤组织放入浓度为〇D 595 = 0 . 4的农杆菌液中（含乙酰丁香酮），让农杆 菌结合到愈伤组织表面，然后把愈伤组织转移到NBDC共培养基（含有50mg/ml的潮霉素） 中，共培养2-3天。用无菌水冲洗转化后的愈伤，转移到含抗生素的NBDS筛选培养基上，筛 选培养两个月（中间继代一次）。把筛选后，生长活力良好的愈伤转移到MSH)预分化培养 基上培养20天左右，然后将预分化好的愈伤组织移到MSD分化培养基，14小时光照分化发 芽。2-3周后，把抗性再生植株转移到生根培养基上壮苗生根。最后，将再生植株洗去琼脂 移植于温室中，得到1300-CL55转基因水稻植株，此植株作为鉴定材料。
[0043] 实施例4转基因水稻的抗咪唑啉酮类除草剂分析
[0044] 在温室中种植秀水134和转基因1300-CL55水稻植株，每个除草剂处理秀水134 和转基因1300-CL55水稻植株各30株，在水稻苗期喷洒咪唑烟乙酸或者甲咪唑烟酸除草 剂。
[0045] 其中，咪唑烟乙酸除草剂为山东先达公司的"豆说好"，稀释浓度为稀释200倍，终 浓度除草剂用量为500毫升。在喷洒除草剂10天后，观察水稻植株的死亡率，实验结果参 见表1。
[0046] 其中，甲咪唑烟酸除草剂为德国巴斯夫公司的"百垄通"，稀释浓度为稀释1000 倍，终浓度除草剂用量为500毫升。在喷洒除草剂10天后，观察水稻植株的死亡率，实验结 果参见表1。
[0047] 由表1可知，喷洒除草剂10天后，野生型的秀水134植株全部死亡，而含有本发明 所述乙酰乳酸合成酶基因（转基因T-DNA)的水稻植株全部存活。因此说明含有本发明如 SEQ IDN0 :1所示的乙酰乳酸合成酶的水稻植株具有抗咪唑啉酮类除草剂的特性。
[0048] 表 1
[0049]
[0050] 实施例5.在野生型玉米品种中表达"CL55"乙酰乳酸合成酶
[0051] 将质粒1300-CL55转入农杆菌菌株LBA4044中，以此农杆菌进行植物转化。转基 因玉米的获得方法是采用现有技术。取授粉后8-10天的Hi-2玉米穗，收集所有的未成熟 胚（大小为1. 0-1. 5_)作为转化材料。取包含质粒1300-CL55的农杆菌划板，挑单菌落接 种准备转化用农杆菌。将待转化的愈伤组织放入浓度为〇D 595 = 0 . 4的农杆菌液中（含乙酰 丁香酮），让农杆菌结合到愈伤组织表面，然后把愈伤组织转移到无抗生素的NBDC共培养 基中，共培养10-14天。把愈伤组织继续转移到含抗生素的NBDC共培养基（含有50mg/ml 的潮霉素）中，共培养14-21天。转移到含抗生素的NBDS筛选培养基上，筛选培养14-21 天。把筛选后，生长活力良好的愈伤转移到MSH)预分化培养基上培养10-14天左右，然后 将预分化好的愈伤组织移到MSD分化培养基，14小时光照分化发芽。10-14天后，把抗性 再生植株转移到生根培养基上壮苗生根。最后，将再生植株洗去琼脂移植于温室中，得到 1300-CL55转基因玉米植株，此植株作为鉴定材料。
[0052] 实施例6.转基因玉米的抗咪唑啉酮类除草剂分析
[0053] 在温室中种植Hi-2玉米和转基因1300-CL55玉米植株，每个除草剂处理Hi-2玉 米和转基因1300-CL55玉米植株各30株，在玉米苗期喷洒咪唑烟乙酸或者甲咪唑烟酸除草 剂。
[0054] 其中，咪唑烟乙酸除草剂为山东先达公司的"豆说好"，稀释浓度为稀释200倍，终 浓度除草剂用量为500毫升。在喷洒除草剂10天后，观察玉米植株的死亡率，实验结果参 见表2。
[0055] 其中，甲咪唑烟酸除草剂为德国巴斯夫公司的"百垄通"，稀释浓度为稀释1000 倍，终浓度除草剂用量为500毫升。在喷洒除草剂10天后，观察玉米植株的死亡率，实验结 果参见表2。
[0056] 由表2可知，喷洒除草剂10天后，野生型的Hi-2植株全部死亡，而含有如SEQ ID NO :1所示的乙酰乳酸合成酶基因（转基因 T-DNA)的玉米植株全部存活。因此，可以说明 含有本发明如SEQ ID N0 :1所示的乙酰乳酸合成酶的玉米植株具有抗咪唑啉酮类除草剂的 特性。
[0057] 表 2
[0058]
[0059]
<110>上海市农业科学院 <120>-种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶及其应用 ^16〇>6 <210>SEQTDHO： 1 <2II>044 <212>PRT <213 > 水 frl ( ()/似沒麗） <400>1 Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Leu Ser Ala Ala 5 10 IS： Ala Thr Ala Ljs Thr Gly krg Lys Asn His Gin Arg His His Val 20 25 30 Leu Pro Aia Arg Gly Arg Val Gly Ala Ala Ala Val Arg Cys Ser 35 40 45 Ala Val Ser Pro Val Thr Pro Pro Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr 50 55 60 Pro Leu Arg Pro Trp Gly P^o Ala： Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp 65 70 75 He Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Val Ser Asp Val Phe 80 85 9Q Ala Tyr Pro GLy Gly Ala Ser Met Glu lie His Gin Ala Leu Th：r 95 100 105 Arg Ser Pro Val He Thr Asn His Leu Ph? Arg: His Glu Gin Gly 110 115 120 Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ala Arg Ala Ser Gly Arg Val 125 130 135 Qlj Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro. Gly Ala Thr Aan Leu Val 14Q 145 150 Ser Ala Leu Ala Asp Ala Leu Leu Asp Ser Val Pro Met Val Ala 155 160 165 lie Thr Qly Gin ￥：al Pro Arg Arg Met He Gly Thr Asp Ala Phe 170 175 180 Gin： Glu Thr Pro He Val Glu Val Thr Arg Ser He Thr Lys His 185 190 195 Asn Tyr Leu ￥al Leu Asp Val Glti Asp lie Pro Arg ?al lie Gin 200 205 210 Glu Ala Phe Pho Leu： Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu 215 220 ￡25 Val Asp t ie Pro f,ys Asp Tie Girt Gin Gin Met Ala Val Pro Val
[0060] 230 235 240 Trp Asp Thr Ser Met Am： Leu Pm Gif Tyr lie Ala Arg Leu Pro 24.5 2.50 255 Lys Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gin Val Leu Arg Leu Val 2&) 265 270 Gly Glu Sor krg Arg Pro He Leu Tyr Val Glj Gly Gly Cys Ser 275 280 285 Ala Ser Gly Asp： Glu Leu Arg Arg; Phe Val Glu Leu Thr Gly lie 290 295 300 Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Lou Gly Asn Pho Pro Sor Asp 305 310 315 Asp Pro Leu Ser Leu Arg Met Leu (jIv Met His Gif Thr ￥al Tyr 320 '3；25 330 Ala Asn Tyr Ma Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Glj 340 Val Arg Phe Asp： Asp Arg： Val Thr Gly Lys He Glu Ala Phe Ala 350 355 360 Ser Arg Ala Lys He Val His lie Asp lie Asp Pro Ala Glu Tie 365 370 375 Gly Lys Asn Lys Gin Pro His ￥a.l Sor lie Cys Ala Asp Va 1 Lys 380 385 390 Lgu Ala Leu Gin Gly Leu As；n Ala Leu Leu Asp Gin Ser Thr Thr 395 400 4Q5 Lys thr Ser Ser Asp Phe Ser Ala Trp His： Asn Glu Leu Asp Gin 410 415 420 Gin Lys Arg Glu Phe Pro Leu Gly Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Glu 4-25 430 435 lie Pro Pro Gin Tyr Ala lie Gin Val Leu A,sp Glu Thr Lys 440 446 450 Gly Glu Ala lie lie Ala Thr Gly ?al Gly Gin His： Gin Met Trp 455 4m 4B5 Ala Ala Gin Tjr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gin Trp Leu Ser 470 475 480 Ser Al芬 Gly Leu (Uy Ala Met Gly Phe Gly L即 Prt> Ala Ala; Ala 485 490 495 Gly Ala Ser Yal Ala A$n Pro Gly Val Thr Yal Vkl Asp lie Asp 500 505 510 Gly Asp Gly Ser Phe Leu Met Asn lie Gin Glu L^u Ala Leu He 515 520 525 Arg lie Glu Asn Lea Pro Val Lys Val Mot Val Leu Asn Asn Gin 5；5() 〇K) His Leu Gl5^ Met Val Val Gin Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Ljs Ala 545 550 555 真$n Arg Ala His Thr Tyr Leu Gly Asn Pro Glu Cys G丄u Ser Glu 560 565 570
[0061] lie. Tyr Pro Asp Phe Yal Thr He Ala Lys Gly Phe Asn lie Pro： 575 oH{) Aia Val Arg Val Thr Lys Lys Ser Glu Val Arg A丄a Ala lie Lys 590 595 600 Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp lie lie Val 605 610 615 Pro： His Gin Glu His Val Leu Pro Met He Pro Asn Gly Gly Ala 620 625 630 Phe Lys Asp Met lie Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr 635 640 644 <2iO>SE〇 ID NO： 2 <21!>l〇35 <2I2>DNA <213 > tr i (()ryza saliva) <400>2
[0062]
<210>SF：〇 ID NO： 3 <211>644 <-212>PRT <213>水稻（似沒爾 <400>3 Met Ala Thr Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leii Ser Ala Ala 5 10 15 Ala Thr Ala Lys Thr Gly Arg Lys Asn His Gin Arg His His Val 20 2§ 3D Leu Pro Ala Arg Gly Arg Val Gly Ala Ala Ala Val Afg Gjs Ser 35 40 45 Ala Val Ser Pro Val Thr Pr〇 Pm Ser Pro Ala Pro Pro Ala Thr 50 55 60 Pro Leu Arg Pro Trp Gly Pro Ala Glu Pro Arg Lys Gly Ala Asp 65 70 75 lie Leu Val Glu Ala Leu Glu Arg Cys Gly Val Ser Asp Val Phe 80 85 90 Ala Tyiv I)rc> Gly Gly Ala Ser Met ?lu His GJjx Ala Leu Thr 95 100 105 Arg Ser Pro Val lie Thr Asn His Leu Phe Arg His Glu (iln (ily 110 115 120 Glu Ala Phe Ala Ala Ser Gly Tyr Ma Arg A1 Ei Ser Gly Arg Val 125 130 135 Gly Val Cys Val Ala Thr Ser Gly Pro Gly Ala Thr Asn Leu Val 140 145 150 Ser Aia Leu Aia Asp A丄a Leu Leu Asp Ser Va_L Pro Met Vai A_La 155 160 165 lie Thr G_lv Gin Val Pro Arg Arg Met lie Gly Thr Asp Ala Phe 170 17:5 180 Gin Glu Thr Pro lie Val Glu Val Thr Arg Ser lie Thr Lrs His 185 190 195 Asn Tyr Leu Yal Leu Asp Val Glu Asp lie Pro Arg Val lie Gin 200 205 210 Glu Ala Phe Phe Leu Ala Ser Ser Gly Arg Pro Gly Pro Val Leu 215 22Q 225
[0063] Val Asp lie Pro Lys Asp lie Gin Gin Gin Met Ala Val Pro Val 230 235 240 Trp Asp Tfar Ser Met Asn Leu Pro Gly Tyr lie: Ala 八rg Leti Pro 245 250 255 Lys Pro Pro Ala Thr Glu Leu Leu Glu Gin Val Leu Arg Leu Val 260 265 270 Gly Glu Ser Arg Arg Pro He Leu Tyr Veil Gly Glj Gly Cys S.er 275 280 285 Ala Sot Gly A即 Glu Leu Arg Trp Phe Vtil Glu Leu Thr Gly lie 290 295 300 Pro Val Thr Thr Thr Leu Met Gly Leu Gly Asn Phe Pro Ser Asp 305 310 315 Asp Pro L^u Ser Leu Arg Met Leu Gl> Met H丄s: &l'y Thr Yal Tyr 320 325 330 Ala Asn Tyr ALa Val Asp Lys Ala Asp Leu Leu Leu Ala Phe Gly 335 34:0 345 Val Arg Phe A.sp Asp Arg Val Thr Gly Lys lie Glu Ala Pho Ala 350 355 360 Ser Arg Ala Lys: He Val His lie Asp lie Asp Pro Ala Glu lie 365 370 375 G：l；y Lys Asn Lys： Gin Pro His Yal Ser He Cys Ala Asp ￥al Lys 380 .385 390 Leu A_Lfi Leu Gin Gly Leu Asn Aia Leu Leu G丄n G_Ln Ser Thr Thr 395 400 405 Lys Thr Ser Ser Asp Phe S^：r Ala Trp His. Asn Glu L^：u Asp Gin 410 ，115 420 Gin Lys Arg Glu Phe Pro Leu Glj Tyr Lys Thr Phe Gly Glu Glu 425 430 435 lie Pro Pro Gin Tyr Ala lie Gin Val Leu Asp： Glu Leu Thr Lys UO 445 450 Gly Glu Ala lie He Ala Thr Gly Val Gly Gin Hjs Gin Met Trp 455 460 465 Ala Ala Gin Tyr Tyr Thr Tyr Lys Arg Pro Arg Gin Trp Leu Ser 470 475 480 Ser Ala Gly Leu Gly Ala Met Glj Phe Gly Leu Pro Ala Ala Ala 485 490 495 Gly Ala Ser Val Ala Asn Pro Gly Val Thr Val Val Asp lie Asp 500 505 510 Gly Asp Gly Ser Phe Lew Met Asn lie Gin Glu Leu Ala Leix 515 520 Fi2〇 Arg lie： Gin Asn Leu Pro Val Lys Val Met Val Leu Asn Asn Gin 53:0 535 540 His Leu Gly Met Val Val Gin Trp Glu Asp Arg Phe Tyr Lys Ala 545 550 555 Asn Arg Al珥 His Thr Tyr Leu Giy Asn Pro G丄u Cys Glu Ser Glu
[0064] 5翻 585 570 lie Tyr Pro Asp Phe Yal Thr lie Ala Lys {Jlj Phe Ksn lie Pro 575 580 585 Ala Val Arg Val Thr Lys Lys： Ser Glu Val Arg Alfi Ala lie Lys 590 595 600 Lys Met Leu Glu Thr Pro Gly Pro Tyr Leu Leu Asp lie lie Val 605 610 615 Pro His Gin Glu His Val Leu Pro Met lie Pro Ser GLy Gly Ala 620 625 630 Phe Lys Asp Met lie Leu Asp Gly Asp Gly Arg Thr Val Tyr 635 640 6:44 <2I(V、SF:Q IDM): 4 <211 '1935 <212>DNA <213 >水稻（0/:)ca ） <400>4
[0065]
【主权项】
1. 一种使植物具有抗咪唑啉酮类除草剂特性的乙酰乳酸合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID No :1 所示。2. 如权利要求1所述的乙酰乳酸合成酶的编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所 不。3. 如权利要求1所述的乙酰乳酸合成酶在培育抗咪唑啉酮类除草剂植物中的应用。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述咪唑啉酮类除草剂为咪唑乙烟酸或 甲咪唑烟酸。5. 根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述植物为水稻或玉米。
【文档编号】C12N9/88GK105821026SQ201510005524
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年1月5日
【发明人】朴钟泽, 方军, 白建江, 杨瑞芳
【申请人】上海市农业科学院