从雨生红球藻中提取虾青素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从雨生红球藻中提取虾青素的方法，本发明采取较为简单的酸处理作为藻细胞壁的破壁方法结合易溶于虾青素的脂溶性溶剂二甲基亚砜，经过对酸处理破壁方法的因素优化得出，当盐酸浓度为4M、雨生红球藻粉和盐酸比（w/v）为1:40，80℃前处理5min时，再用二甲基亚砜作为萃取溶剂提取率达到最大为0.2%?0.5%。为了进一步提高虾青素提取率，采用两种破壁方法—酸处理破壁法与超声破壁法联用的策略，达到较好效果，虾青素提取率达到0.4%?0.7%。
【专利说明】
从雨生红球藻中提取虾青素的方法
技术领域
[0001]本发明属于微藻生物技术，涉及一种从雨生红球藻中提取虾青素的方法。
【背景技术】
[0002]雨声红球藻(Haematococcus pluvialis)一种普遍存在的绿藻，属于团藻目，红球藻科，是生产虾青素的天然来源之一。虾青素(Astaxanthin)作为类胡萝卜素中的叶黄素类，在鱼类的着色及人体抗氧化等方面具有极其重要的应用。
[0003]雨生红球藻在厚壁孢子时期能大量积累虾青素，此时一般为收集雨生红球藻的最佳时期。厚壁孢子时期细胞壁较厚，破壁效果对虾青素的提取至关重要，而且还要综合考虑方法的经济成本及工业化大规模生产等实际因素。近年来，随着技术的不断发展，微波辅助提取(MAE)(Hemwimon S，Pavasant P, Shotipruk A.Microwave-assisted extract1nof ant1xidative anthraquinones from roots of Morinda citrifolia[J].Separat1n and purificat1n technology, 2007 , 54(1): 44-50.)和超声辅助提取(UAE)CRostagno M A, Palma M, Barroso C G.Ultrasound-assisted extract1n ofsoy isoflavones[J].Journal of Chromatography A, 2003, 1012(2): 119-128.)越来越多地被用来从植物和微生物中提取活性物质。但应用于工业化的过程中可能出现成本过尚，不易大规t旲生广等特点。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于探究雨生红球藻中虾青素的较优提取方案。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案:
本发明一方面涉及一种从雨生红球藻中提取虾青素的方法，所述的方法包括如下步骤:
(I)雨生红球藻粉溶于HCl溶液中，70-90 0C水浴3-8min ；
(2 )酸处理后以5000-9000rpm离心3-7min，倒出上清液，沉淀采用去离子水洗涤1_3次后，用DMSO溶解底部沉淀得a;
(3)a在冰浴下超声20-40min;
(4)超声后40-50°C下水浴Ih后取样。
[0005]在本发明的一个优选实施方式中，所述的HCl为3-5MHCl0
[0006]在本发明的另一个优选实施方式中，所述的盐酸用量为雨生红球藻粉重量的30-50倍。
[0007]在本发明的另一个优选实施方式中，所述的DMSO的用量为雨生红球藻粉重量的30-50倍。
[0008]在本发明的一个优选实施方式中，所述的超声总工作时间30min，工作Is，间歇Is，功率390W。
[0009]在本发明的一个优选实施方式中，水浴后的样品通过0.22μπι的有机滤膜过滤。
[0010]本发明采取较为简单的酸处理作为藻细胞壁的破壁方法结合易溶于虾青素的脂溶性溶剂二甲基亚砜，经过对酸处理破壁方法的因素优化得出，当盐酸浓度为4M、雨生红球藻粉和盐酸比(w/v)为1:40，80°C前处理5min时，再用二甲基亚砜作为萃取溶剂提取率达到最大为0.2%-0.5%。为了进一步提尚4下青素提取率，米用两种破壁方法一酸处理破壁法与超声破壁法联用的策略，达到较好效果，虾青素提取率达到0.4%-0.7%。
【具体实施方式】
[0011 ]雨生红球藻中虾青素提取具体方法如下:
(1)分析天平称取Ig雨生红球藻粉溶于40mL4M HCl中，80°C水浴5min;
(2)酸处理后离心7000rpm5min，倒出上清液，去离子水洗涤两次后用40mL DMSO溶解底部沉淀5min后取样记为a ；
(3)冰浴下超声30min，相关设置参数为总工作时间30min，工作ls，间歇ls，功率390W。超声后取样记为b;
(4)超声后45°C下水浴Ih后取样记为C。样a、b、c分别通过0.22μπι的有机滤膜，液相色谱仪测定虾青素含量。进而计算虾青素的提取率。
[0012]虾青素提取率(％)=提取得到的虾青素质量/雨生红球藻藻粉质量X100%。
[0013]实验结果:
实验采用先酸处理后超声的方法处理藻细胞，最后再辅助水浴方法来提取虾青素。三个阶段分别取样，酸处理阶段结束后即a阶段虾青素提取率为0.2%-0.5%，超声进行完毕后SPb阶段提取率为0.3%-0.6%，水浴Ih后即c阶段提取率为0.4%-0.7%。
[0014]结果表明三种不同的处理方法都在原有的基础上提高了虾青素的收率，分析比较后得知，通过将不同的方法联合，使得虾青素的提取率大大提高，发挥了不同方法之间的协同作用。
[0015]以上所述实施例只是本发明的较佳实例，而没有限制本发明的实施范围。因此，凡是根据本
【发明内容】
的实质所作出的等效修改，都应属于在本发明的保护范围内。
【主权项】
1.一种从雨生红球藻中提取虾青素的方法，所述的方法包括如下步骤: (1)雨生红球藻粉溶于HCl溶液中，70-90°C水浴3-8min； (2)酸处理后以5000-9000rpm离心3-7min，倒出上清液，沉淀采用去离子水洗涤1-3次后，用DMSO溶解底部沉淀得a; (3 )a在冰浴下超声20-40min ； (4)超声后40-50 °C下水浴Ih后取样。2.根据权利要求1所述的方法，所述的HCl为3-5MHCl。3.根据权利要求1所述的方法，所述的盐酸用量为雨生红球藻粉重量的30-50倍。4.根据权利要求1所述的方法，所述的DMSO的用量为雨生红球藻粉重量的30-50倍。5.根据权利要求1所述的方法，所述的超声总工作时间3O m i η，工作I s，间歇I s，功率39016.根据权利要求1所述的方法，水浴后的样品通过0.22μπι的有机滤膜过滤。
【文档编号】C07C403/24GK105859601SQ201610303101
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】冯嵬, 朱明辉
【申请人】北京化工大学