本发明涉及一种新型镧系螯合物设计，其具有围绕发光镧系离子的芴基吡啶发色团、芴基乙炔基吡啶发色团、9H-咔唑基吡啶发色团、9H-咔唑基乙炔基吡啶发色团、二苯并噻吩基吡啶发色团、二苯并噻吩基乙炔基吡啶发色团、二苯并呋喃基吡啶发色团或二苯并呋喃基乙炔基吡啶发色团。带有镧系离子的这些三元环发色团具有高摩尔吸光系数和高发光值。本发明还涉及将要连接到生物特异性反应物的螯合物及其在各种测定法中的用途。
背景技术：
：对于时间分辨荧光分析(TRF)应用，最理想的发光镧系螯合物必须满足下列若干要求：1)基态和激发态下必须是光化学稳定的；2)必须是动力学和化学稳定的；3)激发波长必须尽可能高，优选大于300nm；4)必须具有高效的阳离子发射特性，即高发光产额，即亮度(激发系数×量子产率，ε)；5)发光衰减时间必须长；6)螯合物必须具有良好的水溶性；6)为了进行标记，螯合物应当具有反应性基团以共价连接到生物特异性结合反应物；以及7)必须保持标记生物分子的亲和力和非特异性结合特性。一般来讲，激发能通过配体的三重态从配体转移到特定镧系离子。但是，如果配体处于低能量电荷转移态(CT)，则敏化可直接在松弛CT态下发生，而无需三重态的任何参与(Andraud,C.,Maury,O.,Eur.J.Inorg.Chem2009,4357(Andraud,C.、Maury,O.，《欧洲无机化学杂志》，2009年，第4357页)。此外，还报道了直接通过配体的单重态的激发过程。自从公开了含有1-3个分开的4-(苯乙炔基)吡啶(US4,920,195；Takalo,H.,etal.,1996,Helv.Chim.Acta.,79,789(Takalo,H.等人，1996年，《瑞士化学学报》，第79卷，第789页))和4-苯基吡啶(EP0195413；WO87/07955)的标记物螯合物以来，已经在多个专利、专利申请和专利公开中申请了这种设计的配体结构。提高发光强度通常使用的一种方法是，通过将若干独立的发色团部分(即4-(苯乙炔基)吡啶和4-苯基吡啶)结合到结构设计中，提高螯合剂的摩尔吸光系数，其中这些发色团部分提供高稳定性和高发光量子产率(参见例如，US2013/210165A1和US2013/183771A1)。众所周知，发光强度也可通过增加发色团的摩尔吸光系数和量子产率来提高。摩尔吸光系数可通过增加芳族发色团的π-电子共轭来增强。同时，激发波长通常会发生红移。但是，共轭程度的增加通常会降低三重态和/或CT的能级，然后观察到量子产率降低，衰减时间缩短。鉴于此原因，在实际生物标记应用中，镧系螯合物中所用的单一发色团的摩尔吸光系数最好为上万。此外，发色团的芳族共轭程度的增加会降低螯合物的水溶性，提高非特异性结合特性，并增加镧系标记物与被标记生物分子的聚集体的形成。关于基于4-苯乙炔基吡啶和4-苯基吡啶的螯合物标记物，已有文献公布了较高芳族共轭程度发色团候选物，诸如4-[4-(苯乙炔基)苯乙炔基]吡啶、4-(4-苯基-1,3-丁二炔-1,4-二基)吡啶、4-(二苯基-乙炔基)吡啶、4-二苯基吡啶、4-(苯甲酰苯乙炔基)吡啶、萘乙炔基吡啶和4-(2-芴基乙炔基)吡啶(参见例如，Takalo,H.,atal.J.AlloysandCompounds,225(1995)511(Takalo,H.等人，《合金与化合物杂志》，1995年，第225卷，第511页)；D’Aleo,A.,etal.InorgChem.,47(2008)10269(D’Aleo,A.等人，《无机化学》，2008年，第47卷，第10269页)；PicotA.,etal.Inorg.Chem.46(2007)2659(PicotA.等人，《无机化学》，2007年，第46卷，第2659页))。但是，与母体基础螯合物相比，这些所公开的螯合物设计并未显示出任何显著改善的发光强度。举例来说，Picot等人描述，对于4-(2-(7-己氧基-9,9'-二己基芴基)乙炔基)-2,6-双(二乙基氨基甲酰基)吡啶·[OTf]3的铕螯合物，“在室温下未观察到明显的发射光”，并且“[可能吡啶配体的CT或三重态]在室温下很少依靠能量来敏化铕离子”。具有多个发色团的螯合物和配体所面临的常见挑战是找出合适的结构设计，使其具有高水溶性，同时对任何可能的生物过程是惰性的。已知，加入发色团会降低配体和螯合物在水中的溶解度，增加生物特异性结合反应物聚集体在标记过程中的形成，并改善被标记生物分子的非特异性结合特性。聚集体将造成纯化问题，并降低被标记物质的产率。此外，被标记生物分子改善的非特异性结合特性将增强生物特异性测定法的背景发光，因此降低测定法灵敏度。与此前公布的结构相反，新的发色镧系螯合物设计表现出改善的发光强度(即，亮度)以及高激发波长。这些发色团显示出令人惊讶的高摩尔吸光系数，这是观察到发光强度改善背后的主要原因。技术实现要素：本发明的第一方面涉及一种发光镧系螯合物，其包含一个或多个式(I)或(III)的发色团部分。本发明的第二方面涉及一种可检测的分子，其包含缀合至发光镧系螯合物的生物特异性结合反应物，其中发光镧系螯合物包含一个或多个如本文所限定的式(I)或(III)的部分。本发明的第三方面涉及一种发光镧系螯合配体，其包含一个或多个式(II)或(IV)的发色团部分。本发明的第四方面涉及一种进行生物特异性结合测定法的方法，所述方法包括下列步骤：a)在分析物与用如本文所限定的发光镧系螯合物标记的生物特异性结合反应物之间形成生物复合物；b)用具有一定激发波长的辐射激发所述生物复合物，从而形成激发的生物复合物；以及c)检测由所述激发的生物复合物发出的发射辐射。本发明的第五方面涉及如本文所限定的可检测分子在基于特异性生物亲和力的结合测定法中的用途，其中该测定法利用例如基于单光子激发或双光子激发的特异性发光的时间分辨荧光测定。本发明的第六方面涉及一种与如本文所限定的发光镧系螯合物缀合的固体载体材料。已经在若干个不同的螯合物结构中采用了根据本发明的结构修饰(参见实例部分)。与具有常规取代模式的螯合物相比，这些引入所述修饰的螯合物的摩尔系数(ε，即吸光系数)显著增大。令人惊讶地是，使用吸光系数通常为5000至30000cm-1M-1的新镧系标记物，吸光系数甚至已超过100000cm-1M-1/发色团。尽管芳族结构的共轭程度较高，但所观察到的三重态已经足够高到可获得至少适度的量子产率(Φ)。由于这些特征，与其他相当的标记物设计相比，所观察到的总发光产额(εΦ，即亮度)显著更高。此外，已经获得甚至超过340nm的激发波长(λ激发)，这使得可由基于LED的低价位仪器进行激发。具体实施方式本发明的目的是提供手段来获得改进的镧系螯合物标记物以用于基于特异性生物亲和力的结合测定法中，诸如免疫测定法(均相免疫测定法和非均相免疫测定法二者)、核酸杂交测定法、受体结合测定法、酶测定法、免疫细胞化学测定法、免疫组织化学测定法以及利用特异性发光的荧光测定或时间分辨荧光测定的基于细胞的测定法。本发明的螯合物提供了一种获得改善的基于生物亲和力的结合测定法的手段，该改善的基于生物亲和力的结合测定法与例如测定法灵敏度和背景相关，甚至是在大于340nm的波长下。发光镧系螯合物本发明的一个方面涉及一种发光镧系螯合物，其包含一个或多个式(I)或(III)的发色团部分其中X选自–S-、-O-、-NR1-、–CR1R2-、>C＝O和>C＝N-O-R1(>C(＝O)的肟)，其中R1和R2各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2)1-6OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自氢、C1-12-烷基(尤其是C1-6-烷基)、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6N+(CH3)2(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、亲水基团(任选包含间隔基)、反应性基团(任选包含间隔基)、寡肽、多肽和核苷酸；R3和R4各自表示螯合物的发色团部分与其他部分之间的键；R6选自氢、-Cl、-Br、-F、-I、-CH3、-(CH2)1-6OH、-(CH2)1-6OCH3-CF3、-CN、-NO2、-OH、-OCH3、-O(CH2)1-6OH、-O(CH2)1-6OCH2、-O(CH2)1-6COOH、-O(CH2)1-6COO-、-SCH3、-S(CH2)1-6OH、-S(CH2)1-6OCH2、-S(CH2)1-6COOH、-S(CH2)1-6COO-、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-CONH(CH2)1-6OH、-CONHCH(CH2OH)2、-CONHC(CH2OH)3、-NHCOCH3、-NHCO(CH2)1-6OH、-NHCO(CH2)1-6COOH、-NHCO(CH2)1-6COO-、反应性基团Z和亲水基团；并且Ln3+是镧系离子。在一个实施例中，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2)1-6OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自氢、C1-12烷基(尤其是C1-6烷基)、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、-(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6N+(CH3)2(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2和-(CH2)1-6PO32-。在另一个实施例中，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-。在一些实施例(可与其他实施例相结合)中，R1和R2(如果存在)中的一者选自-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5是反应性基团(任选包含间隔基)，尤其是R5是-NCS，而R1和R2中另一者是如上文所限定的，不同之处在于任何R5均不是反应性基团。在本文的一个变型中，R1和R2中的一者是-(CH2)1-6-C6H4-NCS、-CO(CH2)1-6-C6H4-NCS，尤其是-CH2-C6H4-NCS。在又一个实施例中，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6N+(CH3)2(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、-(CH2)1-6OH、-(CH2)1-6C(＝O)N(CH2COOH)2、-(CH2)1-6C(＝O)N(CH2COO-)2、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH和-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3；尤其是，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、-CH2COOH、CH2COO-、-CH2SO3H、-CH2SO3-、CH2-O-PO3H2、-CH2-O-PO32-、-CH2PO3H2、-CH2PO32-、-CH2OH、-CH2C(＝O)N(CH2COOH)2、-CH2C(＝O)N(CH2COO-)2、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH和-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3。在本文中提及时，-(CH2)1-6是指具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直烷基链。其优选的例子为-CH2-、-CH2-CH2-和-CH2-CH2-CH2-，尤其是-CH2-。目前据信，某些类型的取代基(即羧酸和磺酸类型的取代基)是尤其受关注的。因此，在一个优选的实施例中，R1和R2各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、-(CH2)1-6SO3-、-CH2CONHCH2COOH、-CH2CONHCH2COO-、-CH2CON(CH2COOH)2、-CH2CON(CH2COO-)2、-COCH2NHCH2COOH、-COCH2NHCH2COO-、-COCH2N(CH2COOH)2和-COCH2N(CH2COO-)2，尤其选自–CH2-COOH、–CH2-COO-、-CH2CON(CH2COOH)2和-CH2CON(CH2COO-)2。在一个实施例中，R1和R2各自独立地选自–CH2-COOH和–CH2-COO-。在另一个实施例中，X为-CR1R2-，其中R1和R2均为氢。在一个实施例中，R1和R2各自独立地选自-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3，尤其选自–(CH2CH2O)2CH2CH2OCH3。应当理解，当取代基为羧酸根、磺酸根、膦酸根、磷酸根等时，螯合物可包含阳离子作为反离子，例如Na+、K+、Ca2+等。在一个实施例中，X是与芴酮发色团相对应的>C＝O。在另一个实施例中，X是与芴酮肟发色团相对应的>C＝N-OR1。在本实施例内的一个变型中，R1选自氢、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、-(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6N+(CH3)2(CH2)1-6SO3-、-(CH2CH2O)14CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)N(R5)2、-(CH2)1-6C(＝O)R5，其中R5选自氢、C1-12烷基(尤其是C1-6烷基)、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H和(CH2)1-6SO3-。在另一个实施例中，X是与二苯并噻吩相对应的–S-。在又一个实施例中，X是与二苯并呋喃相对应的-O-。在又一个实施例中，X是与9H-咔唑基相对应的-NR1-。在本实施例内的一个变型中，R1选自氢、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、-(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6N+(CH3)2(CH2)1-6SO3-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)N(R5)2、-(CH2)1-6C(＝O)R5，其中R5选自氢、C1-12烷基(尤其是C1-6烷基)、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H和(CH2)1-6SO3-。在又一个实施例中，X是与芴相对应的–CR1R2-。在本实施例内的一个变型中，R1和R2优选独立地选自氢、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、-(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6N+(CH3)2(CH2)1-6SO3-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)N(R5)2、-(CH2)1-6C(＝O)R5，其中R5选自氢、C1-12烷基(尤其是C1-6烷基)、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H和(CH2)1-6SO3-。亲水基团的例子为单糖和低聚糖(例如，单糖和二糖)、低聚亚烷基二醇(例如，具有1-20个重复单元的那些，如低聚乙二醇和低聚丙二醇等)。在一个实施例中，亲水基团选自单糖、二糖、-(CH2)1-6CH2OH、–CH(CH2OH)2、-C(CH2OH)3-(CH2)1-3-O-(CH2CH2O)0-5-H、(CH2)1-3-O-(CH2CH2O)0-5-C1-4-烷基、-O-(CH2CH2O)1-6-H和-O-(CH2CH2O)1-6-C1-4烷基，尤其是单糖。在此上下文中，术语“单糖”旨在意指无环或环状形式的C5-C7碳水化合物。单糖的例子为C6碳水化合物，例如选自以下的那些在此上下文中，术语“二糖”旨在意指优选通过糖苷键连接在一起的两个单糖(参见上文)。在其他可能的实施例中，亲水基团(按照说明)存在于螯合物结构中，但不存在于由式(I)或(III)表示的发色团部分中。在一些另选的实施例中，取代基R1和/或R2包含反应性基团Z，优选包含间隔基(进一步参见下文)。在所述实例中，反应性基团Z有利于标记生物特异性结合反应物，或有利于形成与固体载体材料的共价键。在螯合物具有聚合基团作为反应性基团的情况下，那么此螯合物可在制备颗粒的同时被引入到固体载体(例如，颗粒)中。如果存在，反应性基团Z通常选自叠氮基(-N3)、炔基(-C≡CH)、烯基(-CH＝CH2)、氨基(-NH2)、氨基氧基(-O-NH2)、羧基(-COOH)、醛基(-CHO)、酰肼基(-CONHNH2)、巯基(-SH)、马来酰亚胺基、活化的马来酰亚胺基衍生物、异氰酸酯基(-NCO)、异硫氰酸酯基(-NCS)、重氮基(-N+N)、溴乙酰胺基、碘乙酰胺基、反应性酯、吡啶基-2-二硫基和6-取代的4-氯-1,3,5-三嗪-2-基氨基，尤其是包含异硫氰酸酯基(-NCS)的反应性基团。6-取代的4-氯-1,3,5-三嗪-2-基氨基中的取代基可选自氢、卤素、烷氧基、芳氧基、氨基、C1-6-烷基、取代的氨基或硫醚，并且优选选自氯代基、氟代基、乙氧基、2-甲氧基乙氧基、2-氰基乙氧基、2,2,2-三氟乙氧基、硫代苯氧基或乙氧羰基-硫代甲氧基。取代的氨基或硫醚优选为单取代的或二取代的，每个取代基优选独立地选自C1-6烷基、C1-6烷基-O-、苯基、羰基或羧基。由此结果是，当与生物特异性结合反应物(进一步参见下文)反应时，反应性基团Z形成键合至所述生物特异性结合反应物的键，例如以下类型的键之一的键：硫脲(-NH-C(＝S)-NH-)、氨基乙酰胺(-NH-CO-CH2-NH-)、酰胺(-NH-CO-、CO-NH-、-NCH3-CO-和–CO-NCH3-)、肟(-O-N＝CH-)、腙(-CO-NH-NH＝CH-)和脂族硫醚(S)、二硫化物(-S-S-)、6-取代的-1,3,5-三嗪-2,4-二胺、(其中n＝1-6)以及三唑(例如，通过所谓的“点击(click)”化学形成)。在其他可能的实施例中，反应性基团Z(按照说明)存在于螯合物结构中，但不存在于由式(I)表示的发色团部分中。应当理解，当存在反应性基团Z时，基团Z可包含间隔基，即形成间距的双基，以便(如果必要或所需)使反应性基团Z定位在能对生物特异性结合反应物可及而进行反应的位置。相似地，当R1和R2中的任一者包含亲水基团时，则亲水基团可包含间隔基。在两种情况下，间隔基可以很容易地在合成配体或螯合物的过程中被引入。术语“间隔基”旨在意指在例如共轭基团或芯结构的吡啶部分与例如反应性基团Z或亲水基团之间的间隔基团。间隔基通常在附接点与反应性基团(或亲水基团)之间具有1-20个键(例如，3-15个键或5-12个键)的长度。所述间隔基由1至5个部分形成，每个部分选自亚苯基、-C1-10亚烷基-、乙炔二基(-C≡C-)、乙烯二基(-C＝C-)、醚基(-O-)、硫醚基(-S-)、二硫化物(-S-S-)、酰胺基(-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-C(＝O)-NCH3-和-NCH3-C(＝O)-)、羰基(-CO-)、酯基(-COO-和–OOC-)、磺酰胺基(-SO2-NH-、-SO2-NR’-)、砜(-SO2-)、磷酸酯基(-O-PO2-O-)、二氮基(-N＝N-)、叔胺、硫脲(-NH-C(＝S)-NH-)、肟(-O-N＝CH-)、腙(-CO-NH-NH＝CH-)和三唑，其中R’表示由1-10个碳原子组成的烷基。在一些实施例中，取代基R1和/或R2中的至少一者包括寡肽、多肽或多核苷酸。R3和R4各自表示螯合物的发色团部分与其他部分(例如，发色团部分与螯合部分)之间的键。螯合部分包含至少两个羧酸或磷酸基团、所述酸的酯、酰胺或盐，它们直接或通过环状或非环含N烃链和/或含O烃链连接到发色团部分的芳族单元。应当理解，由式(I)和/或(III)表示的发色团部分可取代常规螯合物中的任何其他发色团部分。因此，应认识到，由式(I)和/或(III)表示的发色团部分可简单地结合到具有类似或不同于由式(I)或(III)表示的发色团部分的其他发色团部分的常规螯合物中。示例性的例子提供于实例部分中。R3和R4各自表示通常通过连接基键合到螯合物的其他部分，例如键合到另一个发色团部分，或键合到络合基团(例如，–COOH/-COO-)，或仅键合到端基或氢原子上的键。在一个变型中，R3和–CH2-R4中的一者或两者可为–(CH2)1-3N(R7)-(CH2)1-3-，其中R7为–(CH2)1-6-芳基，其中芳基(例如，苯基)可被如上文所限定的反应性基团Z取代。在另一个变型中，R3和–CH2-R4中的一者或两者可为–(CH2)1-3N(R8)-(CH2)1-3-Chr、–(CH2)1-3O(CH2)1-3-Chr或–(CH2)1-3S(CH2)1-3-Chr，其中R8选自(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-10OH、-(CH2)1-10OR5、-(CH2)1-10NH2、-(CH2)1-10NHR5、-(CH2)1-10NCH3R5、-(CH2)1-10SH、-(CH2)1-10SR5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-和反应性基团Z，并且其中Chr表示另一个发色团部分。在又一个变型(可与其他实施例相结合)中，R3和–CH2-R4中的一者或两者独立地选自–CH2-N(CH2COOH)2和–CH2-N(CH2COO-)2。在又一个变型(可与其他实施例相结合)中，其中R3和–CH2-R4独立地选自–COOH、–COO-、-PO3H2–PO32-、-P(CH3)O2H、-P(CH3)O2-、-P(Ph)O2H和-P(Ph)O2-。代表性R3和R4以及螯合物设计(其中所公开的基于吡啶的发色团部分可被本发明的发色团替代)的例子可见于例如以下出版物中：Hovinen,J.,etal.,BioconjugateChem.,20(2009)404(Hovinen,J.等人，《生物共轭化学》，2009年，第20卷，第404页)；He.,S.,etal.,OrganicLett.,13(2011),5036(He.,S.等人，《有机化学通讯》，2011年，第13卷，第5036页)；Wang.,Q.,etal.,Inorg.Chem.,52(2013)8461(Wang.,Q.等人，《无机化学》，2013年，第52卷，第8461页)；Butler,S.J.,etal.,ChemEur.J.,19(2013)9511(Butler,S.J.等人，《欧洲化学杂志》，2013年，第19卷，第9511页)和WO2013/011236。在一个实施例中，基团-R3和-CH2-R4各自独立地选自(CH2)1-6H、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6OH、-(CH2)1-6OR5、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6SH、-(CH2)1-6SR5、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5、-CONH(CH2)1-6OH、-CONH(CH2)1-6OR5、-CONH(CH2)1-6SH、-CONH(CH2)1-6SR5、-CONH(CH2)1-6NH2、-CONH(CH2)1-6NHR5，其中R5选自氢、C1-12烷基、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、亲水基团(任选包含间隔基)、反应性基团(任选包含间隔基)、寡肽、多肽和核苷酸。在一个特别受关注的变型中，基团-R3和-CH2-R4各自独立地选自-(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6SO3H、(CH2)1-6SO3-、(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2、-(CH2)1-6PO32-、-(CH2)1-6NHR5、-(CH2)1-6NCH3R5、-(CH2)1-6NEtR5、-(CH2)1-6N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2)1-6SO3H、-(CH2)1-6SO3-、-(CH2)1-6-O-PO3H2、-(CH2)1-6-O-PO32-、-(CH2)1-6PO3H2和-(CH2)1-6PO32-。在一个实施例(可与其他实施例相结合)中，R3和–CH2-R4中的一者或两者独立地选自–CH2-N(CH2COOH)2和–CH2-N(CH2COO-)2。在一个实施例(可与其他实施例相结合)中，R3和–CH2-R4中的一者独立地选自-(CH2)1-6NHC(＝O)R5、-(CH2)1-6NCH3C(＝O)R5、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5和-(CH2)1-6-C6H4-R5，其中R5选自亲水基团(任选包含间隔基)、反应性基团(任选包含间隔基)、寡肽、多肽和核苷酸。在一个变型中，R5是反应性基团(任选包含间隔基)。取代基R6通常选自氢、-Cl、-Br、-F、-I、-CH3、-CF3、-CN、-NO2、-OH、-OCH3、-SCH3、-CONH2、-CONHCH3、-CON(CH3)2、-NHCOCH3、反应性基团Z和亲水基团。在一些实施例中，不存在R6。在其他实施例中，一个R6是反应性基团，参见上文。在一些受关注的实施例中，螯合物总共具有两个或三个发色基团，例如由化合物47、48、49、50、53、54、57、58、64、65、66、78、79和80所示例的。术语“镧系离子”或“Ln3+”旨在意指元素周期表中镧系元素的三价离子，例如，铕(III)、铽(III)、钐(III)和镝(III)，即Eu3+、Tb3+、Sm3+或Dy3+。在许多实施例中，铕(III)(Eu3+)是优选的。此外，本发明为所有镧系元素提供了高度发光的标记物，这提供了多标记物可能性。具体实施例在一些具体实施例中，螯合物具有以下结构式(A-I)、(A-III)、(B-I)、(B-I*)、(B-III)、(B-III*)、(C-I)、(C-III)、(D-I)和(D-III)中的一者：与化合物14、40、41、42对应的(A-I)：与化合物11、12、26、27、28、30对应的(A-III)：与化合物45、46、47、48、49、50对应的(B-I)：(B-I*)：与化合物52、53、54、56、57、58对应的(B-III)：(B-III*)：与化合物64、65、66对应的(C-I)：其中n＝1-5(C-III)：其中n＝1-5与化合物78、79对应的(D-I)：其中n＝1-5(D-III)：在式(A-I)、(A-III)、(B-I)、(B-I*)、(B-III)、(B-III*)、(C-I)、(C-III)、(D-I)和(D-III)每一者中，X、R3、R4、R6和R8分别表示如上文针对式(I)和(III)所限定的基团X、R3、R4、R6和R8。上文针对式(I)和(III)所述的每个说明、实施例、变型和优选形式(诸如此类)也应理解为式(A-I)、(A-III)、(B-I)、(B-I*)、(B-III)、(B-III*)、(C-I)、(C-III)、(D-I)和(D-III)的对应实施例、变型和优选形式。在一个优选的实施例中，螯合物具有式(A-I)或(A-III)。在其一个变型中，X是–NHR1或–CR1R2-，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-。具体地讲，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3和-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-；尤其选自氢、-CH2COOH、-CH2COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-CH2C(＝O)N(CH2COOH)2和-CH2C(＝O)N(CH2COO-)2。在另一个优选的实施例中，螯合物具有式(B-I)、(B-I*)、(B-III)或(B-III*)。在其一个变型中，X是–NHR1或–CR1R2-，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-。具体地讲，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、-(CH2)1-6COOH、-(CH2)1-6COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3和-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-；尤其选自氢、-CH2COOH、-CH2COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-CH2C(＝O)N(CH2COOH)2和-CH2C(＝O)N(CH2COO-)2。在又一个优选的实施例中，螯合物具有式(C-I)或(C-III)。在其一个变型中，X是–NHR1或–CR1R2-，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-。具体地讲，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3和-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-；尤其选自氢、-CH2COOH、-CH2COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-CH2C(＝O)N(CH2COOH)2和-CH2C(＝O)N(CH2COO-)2。在又一个优选的实施例中，螯合物具有式(D-I)或(D-III)。在其一个变型中，X是–NHR1或–CR1R2-，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、(CH2)1-6N+(CH3)2R5、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-(CH2)1-6C(＝O)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)NCH3R5、-(CH2)1-6C(＝O)NEtR5、-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2、-(CH2)1-6NHC(＝O)NHR5、-(CH2)1-6NHC(＝S)NHR5、-(CH2)1-6C(＝O)R5、-(CH2)1-6-C6H4-R5、–COR5、-CO(CH2)1-6NHR5和-CO(CH2)1-6NCH3R5，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-。具体地讲，R1和R2(如果存在)各自独立地选自氢、(CH2)1-6COOH、(CH2)1-6COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3和-(CH2)1-6C(＝O)N(R5)2，其中R5选自-(CH2)1-6COOH和-(CH2)1-6COO-；尤其选自氢、-CH2COOH、-CH2COO-、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OH、-(CH2CH2O)1-4CH2CH2OCH3、-CH2C(＝O)N(CH2COOH)2和-CH2C(＝O)N(CH2COO-)2。还可以设想的是，尽管在由式(A-I)、(A-III)、(B-I)、(B-I*)、(B-III)、(B-III*)、(C-I)、(C-III)、(D-I)和(D-III)表示的螯合物中Eu3+是优选的，但它可被选自Tb3+、Sm3+或Dy3+的任何其他镧系元素替代。特别受关注的是基于结构11、12、14、49、54、66和80中任一者的镧系螯合物。镧系螯合配体因此，本发明的另一方面涉及一种镧系螯合配体，其包含一个或多个式(II)或(IV)的发色团部分其中X、R3、R4和R6中的每一者分别表示如上文针对式(I)和(III)所限定的基团X、R3、R4和R6。在一些受关注的实施例中，镧系螯合配体具有上述式(A-I)、(A-III)、(B-I)或(B-III)中的一者(排除Eu3+)。可检测的分子本发明的又一个方面涉及一种可检测的分子，其包含与如上文所限定的发光镧系螯合物缀合的生物特异性结合反应物。缀合通常通过所述螯合物的反应性基团实现。生物特异性结合反应物应当能够特异性结合目标分析物，以便对样品中的所述分析物进行定量或定性分析。生物特异性结合反应物的例子是选自下列物质的那些：抗体、抗原、受体配体、特异性结合蛋白、DNA探针、RNA探针、寡肽、寡核苷酸、经修饰的寡核苷酸(例如，经LNA修饰的寡核苷酸)、经修饰的多核苷酸(例如，经LNA修饰的多核苷酸)、蛋白质、低聚糖、多糖、磷脂、PNA、类固醇、半抗原、药物、受体结合配体和凝集素。在一个优选的实施例中，生物特异性结合反应物选自抗体，例如肌钙蛋白I抗体(抗-TnI)。用于进行生物特异性结合测定法的方法本发明的又一方面涉及一种进行生物特异性结合测定法的方法，其中该方法包括下列步骤：a)在分析物与用如本文所限定的镧系螯合物标记的生物特异性结合反应物之间形成生物复合物；b)用具有一定激发波长的辐射激发所述生物复合物，从而形成激发的生物复合物；以及c)检测由所述激发的生物复合物发出的发射辐射。在步骤b)中，激发波长优选为300nm或更长(例如，约320-380nm)，并且在360至380nm之间可实现激发的显著扩展。所述方法遵循常规的测定法步骤，这对技术人员来讲是显而易见的。由此，本发明的另一方面涉及如上文所限定的可检测分子在基于特异性生物亲和力的结合测定法中的用途，其中该测定法利用特异性发光的时间分辨荧光测定。在一个实施例中，基于特异性生物亲和力的结合测定法是非均相免疫测定法、均相免疫测定法、DNA杂交测定法、受体结合测定法、免疫细胞化学测定法或免疫组织化学测定法。固体载体本发明的又一方面涉及一种与如上文所限定的发光镧系螯合物缀合的固体载体材料。发光镧系螯合物通常以共价或非共价方式固定到固体载体材料上。在一些受关注的实施例中，固体载体材料选自纳米颗粒、微粒、玻片、板和固相合成树脂。新型镧系螯合物配体和对应的发光镧系螯合物以及标记的生物特异性结合反应物均基于开链(即无环)配体结构，这种结构使螯合的镧系离子实现令人惊讶地高效激发。同时，可保持发光镧系螯合物和标记的生物特异性结合反应物的所有重要特征，而不会有任何额外的聚集体形成和纯化问题。本发明的螯合物旨在将若干重要特征结合在单个标记物中，诸如：(a)激发朝向较长波长漂移(参见实例部分)使得能够使用UVLED作为激发源，这会降低仪器制备制造成本，并为仪器小型化提供可能性。(b)高吸光系数(ε)与适当的量子产率(Φ)相结合可提供增大的亮度(ε×Φ)以用于灵敏的时间分辨生物测定法中。(c)所述螯合物适用于不同的镧系元素。(d)可降低标记程度，而不损失信号。(e)较低的标记程度可改善生物分子的亲和力，并降低测定法过程中的非特异性结合。因此，可实现较快的动力学，并观察到较低的背景，这也可提高测定法灵敏度。(f)通过改善的水溶性减少发色团部分的不期望的吸收特性，尤其是对于具有若干芳族发色团部分的螯合物。这应当降低标记抗体的非特异性结合，并改善测定法灵敏度。实例以下非限制性实例旨在进一步展示本发明。FC＝快速色谱法。RT＝室温。微波合成器是引发系统(拜泰齐公司(Biotage))。使用SiMe4作为内标，在BrukerAVANCE500DRX(德国卡尔斯鲁厄的布鲁克公司(Bruker,Karlsruhe,Germany))上记录1HNMR和13CNMR谱图，化学位移δ以ppm表示。在VoyagerDEPro(美国加利福尼亚州福斯特城的应用生物系统公司(AppliedBiosystems,FosterCity,CA))质谱仪上记录质谱。通过DionexUltimate3000系统(包括DionexUltimate3000二极管阵列检测器(Dionex’sUltimate3000DiodeArrayDetector))运行HPLC分析。所用的色谱柱是ThermoHypersil150mm×4mm5μmODS。所用的洗脱液是100mMTEAA和CH3CN。通过使用以下洗脱液梯度运行分析：起始为75％H20、20％100mMTEAA和5％CH3CN，在30分钟内梯度变化至30％H20、20％TEAA和50％CH3CN。对于HPLC分析，样品浓度为大约1mg螯合物/mL水。取样量为20-25μL。摩尔吸光系数(ε)、最大激发波长(λ激发)、发光寿命(τ)、量子产率(Φ)和三重态能量(T)的仪器、测量和计算原理参见例如M.,etal.,2014,J.Luminescence,146,211-217(M.等人，2014年，《发光杂志》，第146卷，第211-217页)。实例1.化合物1的合成使用氩气对2-溴芴(0.74g，3.0mmol)、联硼酸频那醇酯(1.22g，4.8mmol)和KOAc(0.88g，9.0mmol)在DMF(30mL)中的混合物脱气。加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与CH2Cl2的络合物(0.12g，0.15mmol)之后，将反应混合物在60℃下搅拌22小时。然后加入水(30mL)，用Et2O(50mL+20mL)萃取该混合物，并用Na2SO4干燥合并的有机相。通过FC(硅胶，20％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：0.88g(100％)。1H-NMR(CDCl3)：1.37(12H,s)；7.32(1H,td,J＝7.4和1.1Hz)；7.38(1H,t,J＝7.4Hz)；7.55(1H,d,J＝7.4Hz)；7.80(1H,d.J＝7.7Hz)；7.82(1H,d.J＝7.4Hz)；7.84(1H,d,J＝7.7Hz)；8.00(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：24.99；36.74,83.78；119.29；120.39；125.14；126.76；127.23；131.29；133.40；134.76；141.54；142.47；143.92；144.59。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为293.19；实测值为293.51。实例2.化合物2的合成在氩气下，将2-溴芴(1.23g，5mmol)加入至NaH(0.36g，15mmol)和无水DMF(25mL)的混合物中。搅拌5分钟之后，加入BrCH2COOtBu(2.21mL，15mmol)，将该混合物在RT下搅拌10分钟，在65℃下搅拌23小时。将该混合物溶于CH2Cl2(60mL)中，用H2O(3×30mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，首先5％EtOAc的石油醚溶液，然后10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：1.89g(80％)。1H-NMR(CDCl3)：1.06(18H,s)；2.89(2H,d,J＝14.2Hz)；2.98(2H,d,J＝14.2Hz)；7.33(1H,td,J＝7.3和1.5Hz),7.35(1H,td,J＝7.3和1.5Hz)；7.48(1H,dd,J＝8.1和1.7Hz)；7.50-7.73(1H,m),7.55(1H,d.J＝8.1Hz)；7.64-7.68(1H,m)；7.69(1H,d,J＝1.7Hz)。13C-NMR(CDCl3)：27.58；44.42；50.70；80.43；119.81；120.80；121.03；123.96；127.59；127.65；127.94；130.72；139.46；139.68；148.02；150.51。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为473.13和475.12；实测值为473.14和475.13。实例3.化合物3的合成采用类似于实例2所述的合成方法，由2-溴芴和{2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基}对甲苯磺酸合成化合物3。通过FC(硅胶，首先CH2Cl2，然后5％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。收率：100％。1H-NMR(D6-DMSO)：2.25-2.39(4H,m)；2.64-2.71(4H,m)；3.04-3.14(4H,m)；3.19(6H,s)；3.22-3.26(4H,m)；3.32-3.35(4H,m)；3.35-3.39(4H,m)；7.33-7.28(2H,m)；7.52(1H,dd,J＝8.1和1.8Hz)；7.54-7.57(1H,m)；7.76(1H,d,J＝8.1Hz)；7.81-7.84(1H,m)；7.82(1H,d,J＝1.8Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：38.38；51.27；57.39；66.24；69.71；69.4369.56；71.11；120.13；120.38；121.65；123.19；126.44；127.29；127.52；127.70；138.83；139.12；148.56；151.57。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为537.19和539.18；实测值为536.91和539.73。实例4.化合物4的合成采用类似于实例1所述的合成方法，由化合物2合成化合物4。通过FC(硅胶，首先10％EtOAc的石油醚溶液，然后20％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：100％。1H-NMR(CDCl3)：1.03(18H,s)；1.36(12H,s)；2.95(2H,d,J＝14.0Hz)；2.99(2H,d,J＝14.0Hz)；7.32(1H,td,J＝7.3和1.3Hz)；7.35(1H,td,J＝7.3和1.3Hz)；7.55-7.58(1H,m)；7.68(1H,d,J＝7.5Hz)；7.69-7.72(1H,m)；7.81(1H,dd,J＝7.5和0.7Hz)；9.94(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：24.93；28.11；44.55；50.56；80.16；83.51；119.04；120.16；124.17；127.64；127.68；130.23；134.44；134.74；140.39；143.47；147.55；148.85；169.32。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为521.31；实测值为520.99。实例5.化合物5的合成使用氩气对化合物2(0.48g，1.0mmol)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(35mg，50μmol)、CuI(10mg，50μmol)在二异丙基乙胺(1.5mL)和无水DMF(0.5mL)中的混合物脱气。加入三甲基甲硅烷基乙炔(0.198mL，1.4mmol)之后，将该混合物放入微波合成器中，在120℃下保持25分钟。然后将该混合物溶于Et2O(30mL)中，用H2O(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：0.47g(96％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.25(9H,s),0.84(18H,s)；2.95(2H,d,J＝13.9Hz)；3.06(2H,d,J＝13.9Hz)；7.32(1H,td,J＝7.3和1.3Hz)；7.35(1H,td,J＝7.3和1.1Hz)；7.43(1H,dd；J＝7.8和1.1Hz)；7.57-7.60(1H,m)；7.72(1H,d,J＝1.1Hz)；7.77(1H,d,J＝7.8Hz)；7.79-7.82(1H,m)。13C-NMR(D6-DMSO)：-0.12；26.94；44.09；50.56；79.07；93.75；106.26；119.82；120.12；120.20；124.05；127.45；127.48；127.56；130.91；139.78；141.46；148.33；148.56；168.33。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为491.25；实测值为491.05。实例6.化合物6的合成采用类似于实例5所述的合成方法，由化合物3合成化合物6。通过FC(硅胶，首先CH2Cl2，然后1％至2％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。收率：67％。1H-NMR(D6-DMSO)：0.25(9H,s),2.26-2.40(4H,m),2.56-2.67(4H,m)；3.03-3.13(4H,m)；3.19(6H,s)；3.21-3.26(4H,m)；3.32-3.35(4H,m)；3.35-3.39(4H,m)；7.34-7.39(2H,m)；7.44(1H,dd,J＝7.8和1.2Hz)；7.54-7.58(1H,m)；7.69(1H,s)；7.80(1H,d,J＝7.8Hz)；7.81-7.75(1H,m)。13C-NMR(D6-DMSO)：-0.13；38.45；50.97；57.92；66.24；69.22；69.42；69.57；71.11；93.94；106.03；120.04；120.38；120.59；123.19；126.42；127.29；127.88；130.91；139.03；140.61；149.20；149.22。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为555.32；实测值为555.55。实例7.化合物7的合成在氩气下，在RT下搅拌化合物5(0.45g，0.92mmol)、四丁基氟化铵(0.34g，1.06mmol)在CH2Cl2(15mL)中的混合物1小时。然后迅速用10％柠檬酸(15mL)、H2O(2×15mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：0.35g(91％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.86(18H,s)；2.96(2H,d,J＝13.9Hz)；3.04(2H,d,J＝13.9Hz)；4.16(1H,s)；7.32(1H,td,J＝7.4和1.3Hz)；7.35(1H,td,J＝7.4和1.3Hz)；7.45(1H,dd,J＝7.8和1.1Hz)；7.57-7.60(1H,m)；7.73(1H,d,J＝1.1Hz)；7.77-7.81(2H,m)。13C-NMR(D6-DMSO)：26.96；44.09；50.56；79.07；80.38；84.39；119.77；119.81；120.10；124.07；127.41；127.49；127.57；131.07；139.76；141.37；148.39；148.44；168.30。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为419.22；实测值为419.12。实例8.化合物8的合成采用类似于实例7所述的合成方法，由化合物6合成化合物8。收率：99％。1H-NMR(D6-DMSO)：2.26-2.39(4H,m)；2.60-2.69(4H,m)；3.06-3.12(4H,m)；3.19(6H,s)；3.22-3.26(4H,m)；3.32-3.35(4H,m)；3.35-3.38(4H,m)；4.20(1H,s)；7.33-7.39(2H,m)；7.46(1H,dd,J＝7.8和1.2Hz)；7.55-7.59(1H,m)；7.70(1H,s)；7.80(1H,d,J＝7.8Hz)；7.82-7.86(1H,m)。13C-NMR(D6-DMSO)：38.43；50.94；57.92；66.27；69.21；69.42；69.56；80.63；84.19；120.04；120.17；120.37；123.22；126.54；127.28；127.85；130.95；139.03；140.53；149.19；149.21。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为483.28；实测值为483.14。实例9.化合物9的合成使用氩气对化合物1(0.260g，0.71mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-[(4-溴吡啶-2,6-二基)双(亚甲基腈基)]四(乙酸酯)(H.Takalo,etal.,1988,ActaChem.Scand.,SerB,42,614(H.Takalo等人，1988年，《斯堪的纳维亚化学学报》，B辑，第42卷，第614页))(0.314g，0.41mmol)和CsCO3(0.266g，0.80mmol)在无水DMF(2mL)中的混合物脱气。加入四(三苯基膦)钯(11mg，9.5μmol)之后，将该混合物在85℃下搅拌20小时。然后将该混合物溶于CH2Cl2(30mL)中，用H2O(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，40％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃)和0.5％三乙胺)纯化产物。收率：0.14g(39％)。1H-NMR(D6-DMSO)：1.40(36H,s)；3.47(8H,s)；3.98(4H,s)；4.02(2H,s)；7.37(1H,td,J＝7.4和0.7Hz)；7.43(1H,t,J＝7.4Hz)；7.62(1H,d,J＝8.0Hz)；7.76(1H,dd,J＝7.4和0.7Hz)；7.77(2H,s)；7.95(1H,s)；7.98(1H,d,J＝7.4Hz)；8.05(1H,d,J＝8.0Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.68；36.43；55.26；59.22；80.15；117.99；120.39；120.55；123.25；125.17；125.45；126.84；127.19；136.25；140.31；141.97；143.39；143.87；148.18；159.03；169.99。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为758.44；实测值为758.86。实例10.化合物10的合成使用氩气对化合物4(78mg，0.15mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-[(4-溴吡啶-2,6-二基)双(亚甲基腈基)]四(乙酸酯)(67mg，0.10mmol)、CsCO3(55mg，0.17mmol)在无水DMF(2mL)中的混合物脱气。加入四(三苯基膦)钯(11mg，9.5μmol)和H2O(9μL，0.50mmol)之后，将该混合物在85℃下搅拌2.5小时，然后将该混合物溶于CH2Cl2(20mL)中，用H2O(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，首先15％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃)，然后40％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃)和1％三乙胺)纯化产物。收率：76mg(77％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.86(18H,s)；1.40(36H,s)；3.02(2H,d,J＝14.0Hz)；3.07(2H,d,J＝14.0Hz)；3.47(8H,s)；3.99(4H,s)；7.34(1H,td,J＝7.4和1.2Hz)；7.37(1H,td,J＝7.4和1.1Hz)；7.61(1H,d,J＝7.4Hz)；7.71(1H,dd,J＝7.9Hz和1.2Hz)；7.74(2H,s)；7.85(1H,d,J＝7.4Hz)；7.93(1H,d,J＝7.9Hz)；7.95(1H,d,J＝1.2Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：26.86；27.69；44.07；50.52；54.79；55.27；59.20；78.95；80.10；118.25；119.95；120.15；122.29；123.99；126.02；127.17；127.40；136.49；139.74；141.43；148.37；148.50；149.09；158.81；168.19；169.89。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为986.58；实测值为987.39。实例11.化合物11的合成在RT下，将化合物9(70mg，92μmol)在CF3COOH(2.7mL)中的溶液搅拌2小时。在不加热的条件下蒸发之后，用Et2O(10mL)研磨此混合物，然后离心，并用Et2O(2×5mL)洗涤。收率：58mg(83％)。1H-NMR(D6-DMSO)：3.67(8H,s)；4.07(2H,s)；4.32(4H,s)；7.41(1H,t,J＝7.3Hz)；7.46(1H,t,J＝7.3Hz)；7.67(1H,d,J＝7.3Hz)；7.99(1H,d,J＝7.8Hz)；8.04(1H,d,J＝7.3Hz)；8.14(1H,d,J＝7.8Hz)；8.19(1H,s)；8.27(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：36.44；54.94；56.10；115.26；120.10；120.84；120.89；124.17；125.30；126.47；126.96；127.78；133.51；139.91；144.77；144.20；155.27,157.80；172.45。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为535.19；实测值为535.06。实例12.化合物12的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物10合成化合物12。收率：98％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.02(2H,d,J＝15.4Hz)；3.16(2H,d,J＝15.4Hz)；3.58(8H,s)；4.15(4H,s)；7.34(1H,t,J＝7.4Hz)；7.38(1H,t,J＝7.4Hz)；7.63(1H,d,J＝7.4Hz)；7.81(1H,d,J＝7.9Hz)；7.89(1H,d,J＝7.4Hz)；7.91(2H,s)；7.97(1H,d,J＝7.9Hz)；8.07(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：42.00；49.50；54.81；58.11；118.88；120.44；120.57；122.09；122.23；123.71；126.44；127.41；127.59；135.33；139.19；141.67；149.39；150.46；157.73；171.13；172.50。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为651.20；实测值为651.29。实例13.化合物13的合成使用氩气对化合物7(92mg，0.22mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-[(4-溴吡啶-2,6-二基)双(亚甲基腈基)]四(乙酸酯)(135mg，0.20mmol)在无水三乙胺(1mL)和THF(2mL)中的混合物脱气。加入双(三苯基膦)氯化钯(II)(14mg，20μmol)、CuI(8mg，40μmol)之后，将该混合物在55℃下搅拌20小时。蒸发至干后，将残余物溶于CH2Cl2(20mL)中，用H2O(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，20％至30％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：90mg(45％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.86(18H,s)；1.42(36H,s)；2.97(2H,d,J＝13.9Hz)；3.09(2H,d,J＝13.9Hz)；3.44(8H,s)；3.92(4H,s)；7.35(1H,td,J＝7.2和1.3Hz)；7.38(1H,td,J＝7.2和1.2Hz)；7.55-7.58(1H,m)；7.57(2H,s)；7.59-7.64(2H,m)；7.83-7.86(2H,m)；7.87(1H,d,J＝7.9Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：26.96；27.81；44.10；50.61；55.54；59.18；79.09；80.34；87.29；93.90；119.25；120.09；120.26；122.06；124.06；127.57；127.59；127.67；130.99；131.14；139.68；142.10；148.59；148.65；159.27；168.27；170.05。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1010.58；实测值为1011.07。实例14.化合物14的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物13合成化合物14。收率：87％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.04(2H,d,J＝15.5Hz)；3.09(2H,d,J＝15.5Hz)；3.51(8H,s)；3.97(4H,s)；7.34(1H,td,J＝7.3和1.2Hz)；7.37(1H,td,J＝7.3和1.1Hz)；7.58(2H,s)；7.61(1H,dd,J＝7.6和1.2Hz)；7.61-7.64(1H,m)；7.86(1H,d,J＝7.3Hz)；7.89(1H,d,J＝1.2Hz)；7.89(1H,d,J＝7.6Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：41.90；49.54；54.55；58.98；87.36；94.17；119.32；120.41；120.63；122.31；123.70；127.09；127.91；131.29；131.37；139.12；141.56；149.63；149.75；159.24；171.27；172.42。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为675.20；实测值为675.16。实例15.化合物15的合成将3-溴-9H-咔唑(0.25g，1.0mmol)、乙酸酐(0.95mL，10mmol)在三乙胺(5mL)和CH2Cl2(20mL)中的混合物在RT下搅拌22小时。加入水(20mL)，之后将该混合物搅拌15分钟。分离有机相，并用5％NaHCO3(20mL)、水(2×20mL)洗涤，接着用Na2SO4干燥。收率：0.29g(100％)。1H-NMR(D6-DMSO)：2.89(3H,s)；7.35(1H,t,J＝7.3Hz)；7.57(1H,td,J＝7.3和1.2Hz)；7.66(1H,dd,J＝8.8和2.1Hz)；8.21(1H,d,J＝8.8Hz)；8.23-8.28(2H,m)；8.47(1H,d,J＝2.1Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.35；115.91；116.07；118.14；120.68；122.72；123.64；124.35；127.62,128.10；129.68；136.94；138.22；170.42。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为287.99和289.99；实测值为288.03和288.83。实例16.化合物16的合成在冰浴下向亚氨基二乙酸二叔丁酯(0.245g，1.0mmol)、无水K2CO3(0.691g，5.0mmol)和无水MeCN(5mL)的混合物中加入溴乙酰氯(100μL，1.2mmol)，将该混合物在0℃下搅拌30分钟，在RT下搅拌2小时。然后加入CH2Cl2(40mL)，之后用水(2×20mL)洗涤该混合物，并用Na2SO4干燥。收率：0.34g(93％)。1H-NMR(D6-DMSO)：1.40(9H,s)；1.43(9H,s)；3.94(2H,s)；4.14(2H,s)；4.21(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.33；27.74；49.39；51.14；80.89；81.57；166.92；167.60；167.90。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为366.08和367.08；实测值为367.78和368.80。实例17.化合物17的合成将3-溴-9H-咔唑(0.22g，0.9mmol)、化合物16(0.66g，1.8mmol)、无水K2CO3(0.25g，1.8mmol)和无水MeCN(10mL)的混合物回流48小时。加入CH2Cl2(40mL)，然后用水(2×20mL)洗涤该混合物，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，10％至30％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：0.41g(85％)。1H-NMR(D6-DMSO)：1.37(9H,s)；1.51(9H,s)；3.97(2H,s)；4.44(2H,s)；5.32(2H,s)；7.23(1H,td,J＝7.8和0.7Hz)；7.37(1H,d,J＝8.7Hz)；7.40(1H,d,J＝7.8Hz)；7.47(1H,td,J＝7.8和1.0Hz)；7.56(1H,dd,J＝8.7和2.0Hz)；8.22(1H,d,J＝7.8Hz)；8.40(1H,d,J＝2.0Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.73；27.80；27.80；43.87；49.52；50.17；80.86；81.94；109.35；111.13；111.15；119.47；120.81；121.33；122.84；124.28；126.46；127.97；139.55；141.11；167.76；168.58。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为531.14和533.14；实测值为530.94和532.90。实例18.化合物18的合成采用类似于实例1所述的合成方法，由化合物15合成化合物18。通过FC(硅胶，10％至30％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：98％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.35(12H,s)；2.90(3H,s)；7.43(1H,t,J＝7.4Hz)；7.53(1H,td,J＝7.4和0.9Hz)；7.82(1H,d,J＝8.4Hz)；8.25(1H,d,J＝8.4Hz)；8.27-8.31(2H,m)；8.47(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：24.64；27.46；83.67；115.62；116.04；120.26；123.67；125.12；125.31；126.34；127.42；133.49；138.06；140.14；170.58。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为336.17；实测值为337.04。实例19.化合物19的合成采用类似于实例1所述的合成方法，由3-溴二苯并呋喃(Li,W.,etal.,2009,J.Med.Chem.,52,1799(Li,W.等人，2009年，《药物化学杂志》，第52卷，第1799页))合成化合物19。通过FC(硅胶，5％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：48％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.35(12H,s)；7.42(1H,td,J＝7.7和0.6Hz)；7.54(1H,td,J＝7.7和1.2Hz)；7.70(1H,d,J＝8.2Hz)；7.71(1H,d,J＝8.2Hz)；7.83(1H,dd,J＝7.7和1.2Hz)；8.27(1H,dd,J＝7.7和0.6Hz)；8.49(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：24.76；83.81；111.33；111.64；121.51；123.28；123.39；123.49；127.77；127.83；133.80；155.51；157.63。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为295.14；实测值为295.05。实例20.化合物20的合成采用类似于实例1所述的合成方法，由3-溴二苯并噻吩(Tedjamulia,M.L.,etal.,1983,J.HeterocyclicChem.,20,1485(Tedjamulia,M.L.等人，1983年，《杂环化学杂志》，第20卷，第1485页))合成化合物20。通过FC(硅胶，CH2Cl2)纯化产物。收率：45％。1H-NMR(CDCl3)：1.40(12H,s)；7.42-7.48(2H,m)；7.82-7.90(3H,m)；8.22-8.27(1H,m)；8.62(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：24.93；83.96；121.84；122.12；122.72；124.46；126.68；128.27；132.55；135.10；135.59；139.17；142.76。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为311.12；实测值为311.18。实例21.化合物21的合成采用类似于实例1所述的合成方法，由2-溴-9-芴酮合成化合物21。通过FC(硅胶，10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：88％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.32(12H,s)；7.43(1H,td；J＝7.4和0.8Hz)；7.65(1H,d,J＝7.4Hz)；7.64(1H,td,J＝7.4和1.0Hz)；7.81(1H,s)；7.83(1H,d,J＝7.4Hz)；7.85(1H,dd,J＝7.4和0.8Hz)；7.90(1H,dd,J＝7.4和1.0Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：24.69；84.09；120.82；121.72；123.99；129.01；129.76；130.10；132.68；133.53；135.43；141.54；143.55；146.59；192.88。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为307.14；实测值为307.93。实例22.化合物22的合成采用类似于实例1所述的合成方法，由化合物17合成化合物22。通过FC(硅胶，30％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：91％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.34(12H,s)；1.38(9H,s)；1.52(9H,s)；3.89(2H,s)；4.46(2H,s)；5.32(2H,s)；7.23(1H,td,J＝7.5和0.8Hz)；7.39(1H,d,J＝8.0Hz)；7.40(1H,d,J＝8.0Hz)；7.44(1H,td,J＝7.5和0.9Hz)；7.73(1H,dd,J＝7.5和0.9Hz)；8.24(1H,d＝7.5Hz)；8.48(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：24.78；27.73；27.80；43.80；49.54；50.20；80.85；81.93；83.38；108.64；109.18；119.57；120.41；122.11；122.35；125.82；127.16；128.11；131.73；140.85；142.91；167.78；167.79；168.60。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为579.32；实测值为579.23。实例23.化合物23的合成使用氩气对化合物18(0.17g，0.50mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-[(4-溴吡啶-2,6-二基)双(亚甲基腈基)]四(乙酸酯)(0.22g，0.33mmol)、CsCO3(0.18g，0.56mmol)在无水DMF(1.4mL)和1,2-乙二醇(1.4mL)中的混合物脱气。加入四(三苯基膦)钯(8mg，6.6μmol)之后，将该混合物在85℃下搅拌1小时。然后将该混合物溶于CH2Cl2(30mL)中，用H2O(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，首先40％至50％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃)，然后是包含10％三乙胺的50％EtOAc石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：80mg(32％)。1H-NMR(D6-DMSO)：1.40(36H,s)；3.49(8H,s)；3.99(4H,s)；7.21(1H,td,J＝7.7和0.8Hz)；7.43(1H,td,J＝7.7和1.0Hz)；7.53(1H,d,J＝7.7Hz)；7.61(1H,d,J＝8.5Hz)；7.77(1H,dd,J＝8.5和1.7Hz)；7.82(2H,s)；8.18(1H,d,J＝7.7Hz)；8.52(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.68；55.28；59.26；80.13；111.21；111.41；118.00；118.34；118.86；120.09；122.29；122.94；124.27；125.95；128.18；140.12；140.18；149.03；158.72；170.02。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为759.43；实测值为760.28。实例24.化合物24的合成采用类似于实例10所述的合成方法，由化合物19合成化合物24。通过FC(硅胶，20％至40％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：72％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.39(36H,s)；3.50(8H,s)；4.01(4H,s)；7.46(1H,td,J＝7.8和0.6Hz)；7.58(1H,td,J＝7.8和1.3Hz)；7.76(1H,d,J＝7.8Hz)；8.81(2H,s)；7.84-7.87(2H,m)；8.21(1H,dd,J＝7.8和0.6Hz)；8.51(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.79；55.46；59.42；80.26；111.92；112.31；118.65；119.48；121.26；123.34；123.42；124.43；126.49；128.11；133.45；148.22；155.90；156.04；159.15；170.11。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为760.41；实测值为760.98。实例25.化合物25的合成采用类似于实例10所述的合成方法，由化合物20合成化合物25。通过FC(硅胶，20％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：68％。1H-NMR(CDCl3)：1.46(36H,s)；3.56(8H,s)；4.14(4H,s)；7.48(1H,td,J＝3.6和0.6Hz)；7.49(1H,td,J＝3.6和0.4Hz)；7.84(1H,dd,J＝8.3和1.2Hz)；7.86-7.89(1H,m),7.92(1H,d,J＝8.3Hz)；7.96(2H,s)；8.32-8.37(1H,m)；8.60(1H,d,J＝1.2Hz)。13C-NMR(CDCl3)：28.20；55.98；60.19；81.00；118.75；120.27；122.02；122.85；123.08；124.46；125.78；126.97；135.07；135.52；136.23；139.84；140.03；149.18；159.57；170.66。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为776.39；实测值为776.94。实例26.化合物26的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物23合成化合物26。收率：73％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.61(8H,s)；4.20(4H,s)；7.25(1H,td,J＝7.7和0.7Hz)；7.46(1H,td,J＝7.7和1.1Hz)；7.56(1H,d,J＝7.7Hz)；7.65(1H,d,J＝8.2Hz)；7.93(1H,dd,J＝7.7和1.1Hz)；8.11(2H,s)；8.23(1H,d,J＝8.2Hz)；8.72(1H,s)；11.61(1H.s)。13C-NMR(D6-DMSO)：54.88；57.43；111.34,111.67；118.68；119.16；120.37；122.31；123.15；124.07；125.67；126.22；140.26；140.83；152.36；156.67；172.62。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为536.18；实测值为536.21。实例27.化合物27的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物24合成化合物27。收率：70％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.64(8H,S)；4.23(4H,s)；7.49(1H,t,J＝7.7Hz)；7.60(1H,td,J＝7.7和1.2Hz)；7.77(1H,d,J＝7.7Hz)；7.91(1H,d,J＝8.6Hz)；8.01(1H,dd,J＝8.6和1.5Hz)；8.11(2H,s)；8.25(1H,d,J＝7.7Hz)；8.68(1H,d,J＝1.5Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：54.82；57.56；111.81；112.43；119.48；120.06；121.29；123.05；123.40；124.50；126.74；128.16；131.62；150.86；155.95；156.34；157.07；172.37。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为537.16；实测值为536.84。实例28.化合物28的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物25合成化合物28。收率：67％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.63(8H,s)；4.24(4H,s)；7.59(1H,t,J＝3.5Hz)；7.61(1H,t,J＝3,5Hz)；8.00(1h,dd,J＝8.4和1.5Hz)；8.08-8.12(1H,m)；8.19(2H,s)；8.24(1H,d,J＝8.4Hz)；8.50-8.55(1H,m)；8.87(1H,d,J＝1.5Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：55.50；58.26；119.99；121.11；122.84；123.78；124.50；125.52；126.14；128.17；133.55；135.23；136.43；139.65；141.09；157.82；158.51,173.10。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为553.16；实测值为552.80。实例29.化合物29的合成采用类似于实例23所述的合成方法，由化合物22合成化合物29。反应时间为6小时。通过FC(硅胶，20％至50％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：55％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.39(36H,s)；3.48(8H,s)；3.98(4H,s)；7.44(1H,td,J＝7.4和0.7Hz)；7.66(1H,td,J＝7.4和1.0Hz)；7.67(1H,d,J＝7.4Hz)；7.78(2H,s)；7.89(1H,dd,J＝7.4和1.0Hz)；7.93(1H,s)；7.97-7.99(2H,m)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.67；55.38；59.22；80.19；117.88；121.56；121.73；121.87；124.04；129.76；133.38；133.49；134.17；135.50；138.89；143.28；144.27；146.69；159.28；170.00；192.45。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为772.41；实测值为773.03。实例30.化合物30的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物29合成化合物30。收率：77％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.61(8H,s)；4.16(4h,s)；7.45(1H,td,J＝7.6和0.7Hz)；7.65-7.70(2H,m)；7.91(1H,d,J＝7.6Hz)；8.00(1H,d,J＝7.8Hz)；8.02(2H,s)；8.04(1H,d,J＝1.4Hz)；8.08(1H,dd,J＝7.8和1.4Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：54.78；58.00；119.02；121.70；121.96；122.16；124.08；129.93；133.55；133.84；134.25；135.53；137.79；139.87；143.17；144.92；157.76；172.35；192.40。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为549.16；实测值为549.37。实例36.化合物36的合成将7-碘代-2-硝基芴(1.7g，5mmol；Marhevka,V.C.,etal.,1985,J.Med.Chem.,28,18(Marhevka,V.C.等人，1985年，《药物化学杂志》，第28卷，第18页))、SnCl2·2H2O(5.6g，25mmol)在无水EtOH(100mL)中的混合物回流18小时。将该冷混合物倒入H2O(70mL)中，用固体NaHCO3中和，然后用CH2Cl2(200mL和2×100mL)萃取，并用Na2SO4干燥。收率：1.5g(97％)。％。1H-NMR(CDCl3)：3.76(2+2H,s)；6.89(1H,dd,J＝8.1和2.1Hz)；6.84(1H,s)；7.36(1H,d,J＝8.0Hz)；7.52(1H,d,J＝8.1Hz)；7.61(1H,d,J＝8.0Hz)；7.78(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：36.52；89.52；111.52；114.10；120.24；120.87；131.94；133.79；135.58；141.82；144.60；144.73；146.33。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为307.99；实测值为307.89。实例37.化合物37的合成采用类似于实例31所述的合成方法，由化合物36合成化合物37。反应时间为3小时。通过FC(硅胶，50％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：99％。1H-NMR(CDCl3)：0.26(9H,s)；3.76(2+2H,s)；6.69(1H,dd,J＝8.0和2.0Hz)；6.84(1H,s)；7.43(1H,d,J＝8.0Hz)；7.53(2+2H,d,J＝8.0Hz)；7.56(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：0.10；36.56；93.25；106.30；111.61；114.11；118.27；119.28；121.10；128.26；130.88；132.30；142.03；142.61；145.69；146.25。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为278.13；实测值为278.12。实例38.化合物38的合成采用类似于实例7所述的合成方法，由化合物31合成化合物32。收率：95％。1H-NMR(CDCl3)：3.07(1H,s)；3.78(2+2H,s)；6.70(1H,dd,J＝8.1和2.1Hz)；6.85(1H,s)；7.45(1H,d,J＝7.8Hz)；7.54(1H,d,J＝8.1Hz)；7.55(1H,d,J＝7.8Hz)；7.57(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：36.58；76.37；84.74；111.60；114.12；118.19；118.34；121.15；128.39；131.03；132.16；142.13；142.92；145.66；146.34。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为206.09；实测值为205.82。实例39.化合物39的合成采用类似于实例13所述的合成方法，由化合物38合成化合物39。通过FC(硅胶，30％至50％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：51％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.42(36H,s)；3.44(8H,s)；3.78(2H,s)；3.91(4H,s)；6.61(1H,dd,J＝8.2和1.6Hz)；6.78(1H,s)；7.48(1H,d,J＝7.8Hz)；7.53(2H,s)；7.57(1H,d,J＝8.2Hz)；7.62(1H,s)；7.85(1H,d,J＝7.8Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：28.26；36.49；55.94；55.94；80.79；87.22；94.95；110.50；113.52；116.77；118.64；121.85；122.46；128.26；128.98；131.03；131.88；142.49；144.31；146.00；149.81；159.58；170.51。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为797.44；实测值为797.43。实例40.化合物40的合成采用类似于实例11所述的合成方法，由化合物39合成化合物40。收率：91％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.60(8H,s)；3.88(2H,s)；4.10(4H,s)；6.86(1H,d,J＝7.9Hz)；7.03(1H,s)；7.59(1H,d,J＝7.9Hz)；7.68(2H,s)；7.73(1H,d,J＝7.9Hz)；7.74(1H,s)；7.79(1H,d,J＝7.9Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：36.02；54.45；57.91；86.63；96.30；112.90；115.61；116.79；118.00；121.66；123.13；128.13；128.15；130.85；131.70；133.14；142.44；143.36；145.46；145.53；157.39；171.96。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为574.21；实测值为574.09。实例41.化合物41的合成将四元酸40(44mg，48μmol)溶于H2O(0.78mL)中，用固体NaHCO3将pH调节至6.5。在15分钟内加入EuCl3·6H2O(20mg，55μmol)的H2O(0.39mL)溶液，并用固体NaHCO3使pH保持在5-7之间。搅拌1.5小时之后，用1MNaOH将pH提高到8.5，离心除去沉淀，用丙酮研磨上清液，将沉淀离心并用丙酮洗涤。将所得产物不进行进一步纯化直接用于下一步骤。实例42.化合物42的合成在10分钟内，向SCCl2(26μL，0.34mmol)、NaHCO3(40mg，0.48mmol)和CHCl3(1.3mL)的混合物中加入氨基螯合物41(48μmol)的水溶液(1.3mL)。搅拌30分钟之后，用CHCl3(3×1.3mL)洗涤H2O相，加丙酮研磨，将沉淀离心并用丙酮洗涤。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为786.03；实测值为787.50。Rf(HPLC)：30.9分钟。UV(HPLC)：346和360nm。实例43.化合物43的合成使用氩气对化合物7(0.23g，0.55mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-{[2-(4-氨基苯基)乙基亚胺基)双(亚甲基)双(4-溴吡啶-6,2-二基)双(亚甲基腈基)}四(乙酸酯)(Takalo,H.,etal.,1996,Helv.Chim.Acta.,79,789(Takalo,H.等人，1996年，《瑞士化学学报》，第79卷，第789页))(0.23g，0.23mmol)在无水三乙胺(2mL)和无水THF(4mL)中的混合物脱气。加入双(三苯基膦)氯化钯(II)(10mg，14μmol)、CuI(5.3mg，28μmol)之后，将该混合物在55℃下搅拌22小时。蒸发至干后，将残余物溶于CH2Cl2(30mL)中，用H2O(3×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，5％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。收率：0.25g(65％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.85(36H,s)；1.40(36H,s)；2.64-2.71(4H,m)；2.87(4H,d,J＝13.9Hz)；3.08(4H,d,J＝13.9Hz)；3.45(8H,s)；3.87(4H,s)；3.95(4h,s)；4.77(2H,s)；6.56(2H,d,J＝8.2Hz)；6.81(2H,d,J＝8.2Hz)；7.32-7.39(4H,m)；7.49(2H,s)；7.56-7.65(6H,m)；7.78-7.83(4H,m)；7.88(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：26.84；27.68；32.17；43.95；50.47；55.42；56.13；59.10；59.20；78.98；80.19；87.22；93.83；113.90；119.22；120.02；120.10；122.06；122.19；123.98；126.94；127.47；127.54；128.80；130.93；131.02；131.91；139.53；141.88；146.37；148.46；148.53；159.10；159.19；168.17；169.91。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1666.91；实测值为1665.47。实例44.化合物44的合成采用类似于实例43所述的合成方法，由化合物8合成化合物44。通过FC(硅胶，从CH2Cl2到10％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。收率：44％。1H-NMR(D6-DMSO)：1.40(36H,s)；2.26-2.41(8H,m)；2.61-2.74(4+8H,m)；3.00-3.10(8H,m)；3.16(12H,s)；3.19-3.23(8H,m)；3.29-3.32(8H,m)；3.32-3.36(8H,m)；3.44(8H,s)；3.85(4H,s)；3.95(4H,s)；4.74(2H,s)；6.47(2H,d,J＝8.1Hz)；6.81(2H,d,J＝8.1Hz)；7.32-7.42(4H,m)；7.50(2H,s)；7.53-7.61(6H,m)；7.72-7.79(4H.m)；7.83(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.65；32.12；38.44；51.05；55.33；56.33；57.88；59.06；59.33；66.26；69.18；69.41；69.54；71.09；80.18；87.49；93.74；113.89；119.76；120.19；120.42；121.99；122.30；123.30；126.58；126.90；127.33；128.06；128.79；129.53；130.93；131.06；138.90；141.08；149.36；149.42；159.02；159.30；169.87。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1795.02；实测值为1794.46。实例45.化合物45的合成在RT下，将化合物43(130mg，78μmol)在CF3COOH(2.3mL)中的溶液搅拌2小时。在不加热的条件下蒸发之后，用Et2O(10mL)研磨此混合物，然后离心，并用Et2O(5×5mL)洗涤。收率：105mg(86％)。1H-NMR(D6-DMSO)：2.94-3.14(2+8H,m)；3.28-3.37(2H,m)；3.56(8H,s)；4.07(4H,s)；4.59(4H,s)；6.80(2H,d,J＝7.6Hz)；7.05(2H,d,J＝7.6Hz)；7.34(2H,t,J＝7.4Hz)；7.38(2H,t,J＝7.0Hz)；7.60(2H,d,J＝7.9Hz)；7.63(2H,d,J＝7.0Hz)；7.65(2H,s)；7.79(2H,s)；7.85(2H,d,J＝7.4Hz)；7.87(2H,d,J＝7.9Hz)；7.89(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：29.26；41.73；49.42；54.41；54.96；56.61；58.99；86.59；95.20；117.30；118.92；120.33；120.54；123.61；123.93；124.51；126.97；127.47；127.89；129.44；131.30；131.86；138.92；141.69；149.49；149.69；151.15；157.70；157.96；160.11；171.12；172.24。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1217.42；实测值为1217.63。实例46.化合物46的合成采用类似于实例45所述的合成方法，由化合物44合成化合物46。收率：100％。1H-NMR(D6-DMSO)：2.30-2.42(8H,m)；2.62-2.72(8H,m)；3.03-3.13(8+2H,m)；3.14-3.19(2H,m)；3.17(12H,s)；3.20-3.26(8H,m)；3.29-3.36(8H.m)；3.36-3.39(8H,m)；3.56(8H,s)；4.09(4H,s)；4.59(4H,s)；6.94(2H,d,J＝6.7Hz)；7.14(2H,d,J＝6.7Hz)；7.36-7.42(4H,m)；7.56-7.62(4H,m)；7.64(2H,s)；7.79(2H,s)；7.83-7.89(6H,m)。13C-NMR(D6-DMSO)：29.38；38.44；51.09；54.39；55.12；56.64；57.89；58.95；66.26；69.20；69.41；69.55；71.09；86.80；95.20；118.78；119.30；120.30；120.56；123.34；123.94；124.51；126.66；127.38；128.18；129.58；131.18；131.98；138.87；141.48；149.36；149.53；151.15；157.88；158.14；159.97；172.16。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1569.77；实测值为1569.33。实例47.化合物47的合成将化合物45(94mg，60μmol)溶于H2O(0.96mL)中，用固体NaHCO3将pH调节至6.5。在15分钟内加入EuCl3·6H2O(25mg，69μmol)的H2O(0.48mL)溶液，并用固体NaHCO3使pH保持在5-7之间。在RT下搅拌2.5小时之后，用1MNaOH将pH提高到8.5，离心除去沉淀，用苯酚(约0.75g)萃取上清液。然后用H2O(0.5mL)和Et2O(10mL)处理苯酚相，并用Et2O(2×10mL)洗涤水相。加入NaCl(17.5mg，0.3mmol)，之后用丙酮研磨该混合物，将沉淀离心，并用丙酮洗涤。将所得产物不进行进一步纯化直接用于下一步骤。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1477.22；实测值为1477.78。Rf(HPLC)：22.0分钟。UV(HPLC)：345nm。实例48.化合物48的合成采用类似于实例47所述的合成方法，由化合物46合成化合物48。苯酚萃取之后，将水相蒸发至干，这是由于产物可溶于丙酮。将所得产物不进行进一步纯化直接用于下一步骤。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1741.65；实测值为1741.50。实例49.化合物49的合成采用类似于实例42所述的合成方法，由化合物47合成化合物49。反应0.5小时之后，用Et2O(2×5mL)洗涤该混合物，并将该水溶液蒸发至干。MALDITOF-MS质量：(负离子模式下)计算值为1518.17；实测值为1518.78。Rf(HPLC)：34.6分钟。UV(HPLC)：350nm。实例50化合物50的合成采用类似于实例42所述的合成方法，由化合物48合成化合物50。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1783.68；实测值为1783.59。Rf(HPLC)：24.9分钟。UV(HPLC)：340和349nm。实例51.化合物51的合成使用氩气对化合物4(0.33g，0.63mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-{[2-(4-氨基苯基)乙基亚胺基)双(亚甲基)双(4-溴吡啶-6,2-二基)双(亚甲基腈基)}四(乙酸酯)(Takalo,H.,etal.,1996,Helv.Chim.Acta.,79,789(Takalo,H.等人，1996年，《瑞士化学学报》，第79卷，第789页))(0.21g，0.21mmol)、CsCO3(0.23g，0.71mmol)在无水DMF(2mL)和1,2-乙二醇(1mL)中的混合物脱气。加入四(三苯基膦)钯(10mg，8.4μmol)之后，将该混合物在85℃下搅拌3.5小时。然后将该混合物溶于CH2Cl2(40mL)中，用H2O(3×15mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，首先2％至3％MeOH的CH2Cl2溶液(杂质)，然后5％至10％MeOH的CH2Cl2溶液(产物))纯化产物。收率：0.13g(38％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.84(36H,s)；1.37(36H,s)；2.70-2.76(4H,m)；2.98(4H,d,J＝13.9Hz)；3.05(4H,d,J＝13.9Hz)；3.39(8H,s)；3.91(4H,s)；4.02(4h,s)；6.43(2H,d,J＝8.2Hz)；6.81(2H,d,J＝8.2Hz)；7.34(2H,t,J＝7.4Hz)；7.36(2H,t,J＝7.4Hz)；7.61(2H,d,J＝7.4Hz)；7.66(2H,d,J＝7.1Hz)；7.75(4H,s)；7.78(2H,d,J＝7.1Hz)7.88(2H,J＝7.4Hz)；7.96(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：24.84；26.84；27.66；43.92；50.51；54.60；55.26；59.25；59.41；78.95；80.08；113.85；118.07；118.28；119.87；120.22；122.37；124.01；126.10；127.19；127.40；128.24；128.82；135.96；136.43；139.60；141.30；146.32；148.42；148.99；158.82；159.52；168.25；169.86。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1618.92；实测值为1618.88。实例52.化合物52的合成采用类似于实例45所述的反应时间为4小时的合成方法，由化合物51合成化合物52。收率：93％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.01(4H,d,J＝15.4Hz)；3.17(4H,d,J＝15.4Hz)；3.30-3.37(4H,m)；3.59(8H,s)；4.16(4H,s)；4.65(4H,s)；6.60(2H,d,J＝7.9Hz)；6.95(2H,d,J＝7.9Hz)；7.34(2H,td,J＝7.4和0.7Hz)；7.38(2H,td,J＝7.4和1.0Hz)；7.63(2h,d,J＝7.4Hz)；7.77(2H,dd,J＝7.9和0.9Hz)；7.86(2H,d,J＝7.4Hz)；7.87(2H,s)；7.95(2H,d,J＝7.9Hz)；8.01(2H,s)；8.06(2H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：29.31；41.97；49.50；54.59；54.98；56.92；59.24；115.29；118.28；119.91；120.38；120.52；120.60；121.85；123.73；126.27；127.41；127.55；129.23；135.36；139.20；141.46；149.30；150.50；151.43；157.57；157.83；159.79；171.13；172.42。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1169.42；实测值为1169.49。实例53.化合物53的合成采用类似于实例47所述的合成方法，由化合物52合成化合物53。MALDITOF-MS质量：(负离子模式下)计算值为1428.21；实测值为1428.03。实例54.化合物54的合成采用类似于实例42所述的合成方法，由化合物53合成化合物54。MALDITOF-MS质量：(负离子模式下)计算值为1470.17；实测值为1471.36。Rf(HPLC)：24.7分钟。UV(HPLC)：326nm。实例55.化合物55的合成使用氩气对化合物22(0.19g，0.33mmol)、四(叔丁基)2,2’,2”,2”’-{[2-(4-氨基苯基)乙基亚胺基)双(亚甲基)双(4-溴吡啶-6,2-二基)双(亚甲基腈基)}四(乙酸酯)(Takalo,H.,etal.,1996,Helv.Chim.Acta.,79,789(Takalo,H.等人，1996年，《瑞士化学学报》，第79卷，第789页))(0.11g，0.11mmol)、CsCO3(0.12g，0.37mmol)在无水DMF(1mL)中的混合物脱气。加入四(三苯基膦)钯(10mg，8.4μmol)和H2O(10μL，0.55mmol)之后，将该混合物在85℃下搅拌3.5小时。然后将该混合物溶于CH2Cl2(20mL)中，用H2O(2×10mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，首先40％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃)，然后40％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃)和10％三乙胺)纯化产物。收率：0.12g(63％)。1H-NMR(D6-DMSO)：1.36(36+18H,s)；1.53(18H,s)；2.76-2.83(4H,m)；3.47(8H,s)；3.97(4H,s)；3.99(4H,s)；4.00(4H,s)；4.44(4H,s)；4.69(2H,宽峰)；5.26(4H,s)；6.43(2H,d,J＝8.3Hz)；6.87(2H,d,J＝8.3Hz)；7.15(2H,t,J＝7.8Hz)；7.39(2H,d,J＝7.8Hz)；7.43(2H,t,J＝7.8Hz)；7.46(2H,d,J＝8.7Hz)；7.75(2H,dd,J＝8.7和1.1Hz)；7.82(4H,s)；8.07(2H,d,J＝8.7Hz)；8.49(2H,d,J＝1.1Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：27.71；27.79；35.80；43.88；49.53；50.21；54.92；55.49；59.57；59.70；80.19；80.84；81.94；109.34；109.71；113.95；118.02；118.26；118.34；119.37；120.27；122.32；122.94；124.44；126.00；126.02；127.38；128.83；129.02；141.22；148.72；158.81；159.35；162.31；167.79；168.58；170.12。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1734.95；实测值为1735.18。实例56.化合物56的合成采用类似于实例52所述的合成方法，由化合物55合成化合物56。收率：94％。1H-NMR(D6-DMSO)：3.05-3.13(2H,m)；3.31-3.43(2H,m)；3.61(8H,s)；4.03(4H,s)；4.18(4H,s)；4.49(4H,s)；4.68(4H,s)；5.34(4H,s)；6.73(2H,d,J＝8.0Hz)；7.06(2H,d,J＝8.0Hz)；7.25(2H,t,J＝7.6Hz)；7.44(2H,d,J＝7.6Hz)；7.47(2H,t,J＝7.6Hz)；7.51(2H,d,J＝8.6Hz)；7.88(2H,dd,J＝8.6和1.1Hz)；7.98(2H,s)；8.13(2H,s)；8.18(2H,d,J＝7.6Hz)；8.60(2H,d,J＝1.1Hz)。13C-NMR(D6-DMSO)：34.75；45.89；48.69；49.49；54.77；55.30；57.11；59.26；109.62；109.98；118.19；118.83；119.51；119.57；119.83；120.35；120.52；122.26；123.03；124.52；126.25；127.37；129.51；141.38；141.72；150.26；157.86；158.12；159.41；167.91；170.28；170.97；172.58。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为1286.45；实测值为1286.46。实例57.化合物57的合成采用类似于实例47所述的合成方法，由化合物56合成化合物57。MALDITOF-MS质量：(负离子模式下)计算值为1544.25；实测值为1543.99。Rf(HPLC)：18.4分钟。UV(HPLC)：285(sh)、300和329nm。实例58.化合物58的合成采用类似于实例42所述的合成方法，由化合物57合成化合物58。MALDITOF-MS质量：(负离子模式下)计算值为1586.20；实测值为1585.17。Rf(HPLC)：21.1分钟。UV(HPLC)：285、298和340nm。实例59.Eu(III)与化合物11、12、14、27和28的螯合物的发光值测量在pH为8.3的10mMNH3-HCl缓冲液中，测量Eu(III)与配体11、12、14、27、28和35的络合物的发光参数。摩尔吸光系数(ε)、最大激发波长(λ激发)、发光寿命(τ)、量子产率(Φ)、所计算的发光产额(ε×Φ)和三重态能量(T)示于表1中。将参照配体2,2’,2”,2”’-[(4-苯乙炔基吡啶-2,6-二基)双(亚甲基腈基)]四-(乙酸)(Latva,M,etal.,1997,J.Luminescence,75,149(Latva,M等人，1997年，《发光杂志》，第75卷，第149页))用作参照，以证实本发明的配体相比于现有技术七齿配体有所改善。表1配体ε/cm-1M-1λ激发/nmτ/μsΦε×Φ/cm-1M-1T/cm-1111040003233800.04648002000012350003283900.1035002010014382003423550.1142001920027367002883870.1244002200028260003153820.10260021300参照配体269502933850.067180021600就配体28而言，相比于参照配体，该配体螯合物的吸光系数有所减小，背后的原因最可能是因为能量通过较低的CT态或三重态从天线发色团转移到Eu(III)离子上。但是，即使鉴于CT态和/或三重态能量较低，其仍具有比参照配体更高的量子产率，因此发射更强，即更亮。实例60.螯合物49和54以及与蛋白质的偶联使用30倍摩尔过量的螯合物，在pH为8.6-9.0的10mM硼酸盐缓冲液中进行标记。反应通常在+4℃或在室温下过夜进行。使用pH为7.75的Tris-盐水-叠氮化物(86.1g/LTris，9.0g/LNaCl和0.5g/LNaN3)作为洗脱缓冲液，在Superfex200HR10/30或Superdex200HiLoad26/60凝胶过滤柱上纯化标记的抗体。收集含抗体的级分，并对照铕校准物计算铕浓度。通过计算蛋白质收率，或通过测量280nm处的吸光度并减去由添加的螯合物所引起的吸收来定量纯化的抗体缀合物和标记物比率(即螯合物/蛋白质)。将此前公布的九齿标记物{2,2’,2”,2”’-{[2-(4-异硫氰酸酯基-苯基)乙基亚胺基]双(亚甲基)双{4-{[4-(α-半乳糖吡喃氧基)苯基]-乙炔基}-吡啶-2,6-二基}双(亚甲基腈基)}四(乙酸根)}铕(III)(vonLoden,P.,etal.,2003,Anal.Chem.75,3193(vonLoden,P.等人，2003年，《分析化学》，第75卷，第3193页))用作参照标记物。实例61.用螯合物标记的抗体进行的模型免疫测定法在模型cTnI测定法中测试两个标记物49和54。根据已公布的方法(vonLoden,P.,etal.,2003,Anal.Chem.75,3193(vonLoden,P.等人，2003年，《分析化学》，第75卷，第3193页))中描述的主要原理，通过使用生物素酰化捕集cTnI抗体连同上文所述的标记的cTnI检测抗体进行cTnI免疫测定法。合并的测定/洗涤缓冲液含有5mmolHEPES、2.1g/LNaCl、0.1mmolEDTA、0.055g/LTween20和1g/LGernallII，pH为7.75。将生物素酰化捕集抗体在测定孔中预温育。先将标准物施加到孔中，再将分别稀释于20μL和10μL测定缓冲液中的检测标记物抗体施加到孔中。在36℃下温育一小时之后，洗涤这些孔，干燥并测量。表2显示与参照Eu-标记物相比，所测试的螯合物标记物49和54具有显著改善的信号水平。表2值得指出的是，在与蛋白质偶联之后标记物49在350nm附近表现出宽激发，这使得可由基于LED的低价位仪器进行激发。实例62.化合物59的合成采用类似于实例2所述的合成方法，由2-溴芴和BrCH2COOEt合成该化合物59。通过FC(硅胶，4％至10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：50％。1H-NMR(CDCl3)：1.01(6H,t,J＝7.2Hz)；3.01(2H,d,J＝15.3Hz)；3.06(2H,d,J＝15.3Hz)；3.93(4H,q,J＝7.2Hz)；7.32(1H,td,J＝7.4和1.2Hz)；7.37(1H,td,J＝7.4和1.2Hz)；7.49(1H,dd,J＝8.1和1.8Hz)；7.66-7.69(1H,m)；7.57(1H,d,J＝8.1Hz)；7.50-7.53(1H,m)；7.70(1H,d,J＝1.8Hz)。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为417.07和419.07；实测值为417.72和419.79。实例63.化合物60的合成采用类似于实例5所述的合成方法，由化合物59合成化合物60。反应时间为20分钟。通过FC(硅胶，10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：88％。1H-NMR(CDCl3)：0.27(9H,s)；1.00(6H,t,J＝7.1Hz)；3.02(2H,d,J＝15.2Hz)；3.06(2H,d,J＝15.2Hz)；3.92(4H,q,J＝7.1Hz)；7.31(1H,td,J＝7.4和1.1Hz)；7.36(1H,td,J＝7.4和1.1Hz)；7.48(1H,dd,J＝7.8和1.3Hz)；7.53(1H,d,J＝7.4Hz)；7.63(1H,d,J＝7.8Hz)；7.63(1H,J＝1.3Hz)；7.68(1H,d,J＝7.4Hz)。13C-NMR(CDCl3)：0.01；13.84；42.07；49.73；60.22；94.29；105.69；119.73；120.27；121.76；123.82；127.39；127.80；128.00；131.90；139.43；140.48；148.56；148.88；170.36。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为435.20；实测值为435.10。实例64.化合物61的合成采用类似于实例7所述的合成方法，由化合物60合成化合物61。通过FC(硅胶，10％EtOAc的石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：100％。1H-NMR(CDCl3)：1.00(6H,t,J＝7.2Hz)；3.03(2H,d,J＝15.6Hz)；3.06(2H,d,J＝15.6Hz)；3.11(1H,s)；3.91(2H,q,J＝7.2Hz)；3.92(2H,q,J＝7.2Hz)；7.32(1H,td,J＝7.5Hz和1.2Hz)；7.37(1H,td,J＝7.5和1.2Hz)；7.51(1H,d,J＝7.8Hz)；7.53(1H,d,J＝7.4Hz)；7.65(1H,d,J＝7.8Hz)；7.68(1H,d,J＝1.2Hz)；7.70(1H,d,J＝7.4Hz)。13C-NMR(CDCl3)：13.85；42.04；49.77；60.22；77.23；84.21；119.81；120.33；120.68；123.81；127.66；127.92；128.05；132.06；139.29；140.81；148.62；148.89；170.31。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为363.16；实测值为393.98。实例65.化合物63的合成使用氩气对化合物61(91mg，252μmol)、化合物62(WO201326790)(116mg，105μmol)在无水三乙胺(1mL)和THF(2mL)中的混合物脱气。加入双(三苯基膦)氯化钯(II)(10mg，14μmol)、CuI(6mg，28μmol)之后，将该混合物在55℃下搅拌18小时。蒸发至干后，通过FC(硅胶，包含1％TEA的70％EtOAc石油醚溶液(沸点40-65℃))纯化产物。收率：125mg(71％)。MALDITOF-MS质量：计算值(M+Na+)为1690.62和1692.62；实测值为1690.96和1692.70。实例66.化合物64的合成将化合物63(113mg，67μmol)和0.5MKOH在EtOH(9mL)中的混合物在RT下搅拌0.5小时，然后加入H2O(2mL)。在RT下搅拌3小时之后，蒸发掉EtOH，然后将混合物在RT下搅拌5小时，接着用6MHCl将pH调节至大约6.5。在10分钟内加入EuCl3·6H2O(25mg，67μmol)的H2O(0.2mL)溶液，并用固体NaHCO3使pH保持在5-7之间。在RT下搅拌20小时之后，用1MNaOH将pH提高到8.5，过夜搅拌该混合物，然后离心除去沉淀，用苯酚(一次0.75g，三次0.5g)萃取上清液。用H2O(1mL)和Et2O(20mL)处理合并的苯酚相，用Et2O(2×20mL)洗涤水相，然后用丙酮研磨。将沉淀离心，并用丙酮洗涤。将所得产物不进行进一步纯化直接用于下一步骤。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1602.09；实测值为1602.25。实例67.化合物65的合成采用类似于实例42所述的合成方法，由化合物64合成化合物65。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1644.15；实测值为1643.01。实例68.化合物66的合成将50mMNa2CO3缓冲液(pH9.8；0.55mL)中的牛磺酸(12.5mg，100μmol)加入至化合物65(16.4mg，10μmol)在50mMNa2CO3缓冲液(pH9.8；0.55mL)中的溶液中。在RT下搅拌过夜后，将反应混合物蒸发至干，使用反相HPLC(RP-18色谱柱)纯化产物。溶剂为A：三乙基乙酸铵缓冲液(20mM，pH7)以及B：50％乙腈的三乙基乙酸铵缓冲液溶液(20mM，pH7)。以5％溶剂B开始梯度洗脱，在25分钟内溶剂B的量线性增加到100％。Rf(HPLC)：20.9分钟。UV(HPLC)：280和352nm。实例69.化合物67的合成将7-碘代-2-硝基芴(0.51g，1.5mmol)、无水K2CO3(0.83g，6.0mmol)和BrCH2COOEt(0.48mL，4.4mmol)在无水DMF中的混合物在100℃下搅拌1小时。过滤该混合物，用DMF洗涤，并将滤液蒸发至干。通过FC(硅胶，5％至15％EtOAc的石油醚溶液(沸点50-65℃))纯化产物。收率：0.51g(67％)。1H-NMR(CDCl3)：1.03(6H,t,J＝7.1Hz)；3.06(2H,d,J＝15.6Hz)；3.12(2H,d,J＝15.6Hz)；3.94(4H,q,J＝7.1Hz)；7.74(1H,d,J＝8.0Hz)；7.78(1H,dd,J＝8.0和1.2Hz)；7.80(1H,d,J＝8.4Hz)；7.94(1H,d,J＝1.2Hz)；8.30(1H,dd,J＝8.4和1,9Hz)；8.42(1H,d,J＝1.9Hz)。13C-NMR(CDCl3)：13.82；41.67；49.99；60.56；95.24；119.35；120.16；122.76；124.20；133.30；137.52；137.55；145.66；147.45；149.22；151.87；169.43。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为510.04；实测值为510.29。实例70.化合物68的合成将化合物67(0.50g，0.98mmol)和SnCl2×HCl(1.03g，4.64mmol)在无水EtOH(20mL)中的混合物回流2.5小时。将该冷混合物倒入H2O(20mL)中，用固体NaHCO3中和，然后用CH2Cl2(2×40mL)萃取，并用Na2SO4干燥。通过FC(硅胶，30％至40％EtOAc的石油醚溶液(沸点50-65℃))纯化产物。收率：0.39g(83％)。1H-NMR(CDCl3)：1.06(6H,t,J＝7.1Hz)；2.95(2H,d,J＝15.4Hz)；3.01(2H,d,J＝15.4Hz)；3.7-3.9(2H,bs)；3.96(2H,qd,J＝14.2和7.1Hz)；3.97(2H,qd,J＝14.2和7.1Hz)；6.66(1H,dd,J＝8.1和2.0Hz)；6.87(1H,d,J＝2.0Hz)；7.29(1H,d,J＝8.0Hz)；7.44(1H,d,J＝8.1Hz)；7.61(1H,dd,J＝8.0和1.4Hz)；7.77(1H,d,J＝1.4Hz)。13C-NMR(CDCl3)：13.89；41.76；49.44；60.17；89.82；110.35；114.78；120.25；120.96；129.81；132.75；136.60；140.16；146.74；149.99；150.21；170.46。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为480.07；实测值为479.92。实例71.化合物69的合成采用类似于实例31所述的合成方法，由化合物68合成化合物69。反应时间为3小时。通过FC(硅胶，40％EtOAc-石油醚(沸点40-65℃))纯化产物。收率：100％。1H-NMR(CDCl3)：0.26(9H,s)；1.04(6H,t,J＝7.1Hz)；2.99(4H,s)；3.94(2H,qd,J＝14.2和7.1Hz)；3.96(2H,qd,J＝14.2和7.1Hz)；6.67(1H,dd,J＝8.1和2.0Hz)；6.89(1H,d,J＝2.0Hz)；7.42(1H,dd,J＝7.8和1.1Hz)；7.45(1H,d,J＝8.1Hz)；7.46(1H,J＝7.8Hz)；7.59(1H,d,J＝1.1Hz)。13C-NMR(CDCl3)：0.06；13.90；41.93；49.35；60.21；93.47；106.10；110.59；114.84；118.35；119.76；121.27；127.14；130.30；131.89；141.00；146.72；147.74；151.08；170.64。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为450.21；实测值为449.93。实例72.化合物70的合成采用类似于实例7所述的合成方法，由化合物69合成化合物70。收率：100％。1H-NMR(CDCl3)：1.04(6H,t,J＝7.2Hz)；2.98(2H,d,J＝15.4Hz)；3.02(2H,d,J＝15.4Hz)；3.07(1H,s)；3.95(2×2H,qd,J＝14.3和7.2Hz)；6.67(1H,dd,J＝8.2和2.0Hz)；6.88(1H,d,J＝2.0Hz)；7.44(1H,dd,J＝7.9和1.1Hz)；7.47(1H,d,J＝8.2Hz)；7.48(1H,d,J＝7.9Hz)；7.58(1H,d,J＝1.1Hz)。13C-NMR(CDCl3)：13.91；41.91；49.39；60.22；76.53；84.56；110.52；114.86；118.43；118.66；121.33；127.38；130.13；132.05；141.33；146.85；147.80；151.08；170.59。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为378.17；实测值为377.95。实例73.化合物71的合成在冰水上在10分钟内将化合物70(1.04g，2.76mmol)的无水THF(15mL)溶液加入至无水THF(10mL)和三氟乙酸酐(1.53mL，11.0mmol)的溶液中。在冰上搅拌10分钟之后，在RT下搅拌30分钟，然后将该溶液倒入冰水(100mL)中，用固体NaHCO3中和，接着用CH2Cl2(2×40mL)萃取，并用Na2SO4干燥。收率：1.31g(100％)。1H-NMR(CDCl3)：1.01(6H,t,J＝7.2Hz)；3.03(2H,d,J＝15.4Hz)；3.08(2H,d,J＝15.4Hz)；3.13(1H,s)；3.92(2H,qd,J＝14.3和7.2Hz)；3.93(2H,qd,J＝14.3和7.2Hz)；7.51(1H,dd,J＝7.9和1.3Hz)；7.57(1H,dd,J＝8.3和1.9Hz)；7.62(1H,d,J＝7.9Hz)；7.65(1H,d,J＝1.3Hz)；7.67(1H,d,J＝8.3Hz)；7.86(1H,d,J＝1.9Hz)；8.12(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：13.82；42.06；49.94；60.45；77.62；83.97；112.23；114.53；116.14；116.82；119.13；119.87；120.28；120.92；120.99；127.53；132.28；135.00；137.49；139.88；148.49；150.23；154.16；154.47；154.75；170.12。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为474.16；实测值为474.95。实例74.化合物72的合成使用氩气对化合物71(1.10g，2.40mmol)、6-溴-2,6-二羟基甲基吡啶(Takalo,H.,etal.,1988,ActaChem.Scand.SerB,42,614(Takalo,H.等人，1988年，《斯堪的纳维亚化学学报》，B辑，第42卷，第614页))(0.44g，2.00mmol)在无水三乙胺(5mL)和无水THF(10mL)中的混合物脱气。加入双(三苯基膦)氯化钯(II)(28mg，0.04mmol)、CuI(15mg，0.08mmol)之后，将该混合物在55℃下搅拌23小时。蒸发至干后，加入CH2Cl2(40mL)，过滤该冷混合物，并用冷CH2Cl2洗涤。收率：0.97g(80％)。1H-NMR(D6-DMSO)：0.79(6H,t,J＝7.1Hz)；3.12(2H,d,J＝15.0Hz)；3.19(2H,d,J＝15.0Hz)；3.78(4H,q,J＝7.1Hz)；4.55(4H,s)；5.51(2H,s)；7.36-7.56(2H,bs)；7.62(1H,dd,J＝7.9和1.3Hz)；7.68(1H,dd,J＝8.3和1.8Hz)；7.86(1H,d,J＝7.9Hz)；7.89(1H,d,J＝8.3Hz)；7.90-7.94(2H,m)；11.39(1H,s)。13C-NMR(D6-DMSO)：13.98；42.51；50.49；59.91；88.13；94.28；112.83；115.13；117.04；117.42；119.71；119.84；120.64；121.30；121.41；127.63；131.95；136.40；137.41；141.36；149.47；149.85；154.36；154.58；155.02；169.59。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为611.20；实测值为612.47。实例75.化合物73的合成将PBr3(0.22mL，2.36mmol)加入至化合物71(0.96g，1.57mmol)在无水且不含EtOH的CHCl3(65mL)中的悬浮液中。在60℃下搅拌3天之后，用5％NaHCO3(50mL)中和该混合物。用CHCl3(50mL)萃取水相，并用Na2SO4干燥合并的有机相。通过FC(硅胶，0.5％至3％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。收率：0.72g(62％)。1H-NMR(CDCl3)：1.02(6H,t,J＝7.2Hz)；3.07(2H,d,J＝15.5Hz)；3.11(2H,d,J＝15.5Hz)；3.94(2H,qd,J＝14.4和7.2Hz)；3.95(2H,qd,J＝14.4和7.2Hz)；4.54(2H,s)；7.48(2H,s)；7.58(1H,dd,J＝7.9和1.2Hz)；7.60(1H,dd,J＝8.2和1.9Hz)；7.70(1H,d,J＝7.9Hz)；7.72(1H,d,J＝8.2Hz)；7.74(1H,d,J＝1.2Hz)；7.89(1H,d,J＝1.9Hz)；8.10(1H,s)。13C-NMR(CDCl3)：13.87；33.04；42.04；50.00；60.49；86.70；95.36；112.48；114.53；116.82；119.12；120.10；120.35；120.53；121.18；124.52；127.44；132.20；133.67；135.18；137.37；140.60；148.83；150.42；154.18；154.42；154.78；156.97；170.04。MALDITOF-MS质量：计算值(M+2H+)为738.04、736.03和740.03；实测值为737.95、735.85和740.01。实例76.化合物75的合成在65℃下将化合物73(0.71g，0.96mmol)、无水K2CO3和化合物74(WO201326790)(0.67g，1.92mmol)在无水MeCN(30mL)中的混合物搅拌4小时。过滤固体物质，并用MeCN洗涤，然后将滤液蒸发至干。通过FC(硅胶，5％至10％EtOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。产量为0.69g(57％)。1H-NMR(CDCl3)：1.01(6H,t,J＝7.1Hz)；1.29(6H,t,J＝6.8Hz)；1.41(6H,t,J＝7.0Hz)；1.65-1.85(1H,bs)；3.06(2H,d,J＝15.4Hz)；3.13(2H,d,J＝15.4Hz)；3.52(4H,s)；3.93(2H,qd,J＝14.3和7.1Hz)；3.94(2H,qd,J＝14.3和7.1Hz)；3.99(4H,s)；4.13(4H,s)；4.19(4H,d,J＝6.8Hz)；4.45(4H,d,J＝7.0Hz)；7.46(2H,s)；7.60(1H,d,J＝7.9Hz)；7.64(1H,dd,J＝8.3和1.5Hz)；7.70(1H,d,J＝7.9Hz)；7.73(1H,d,J＝8.3Hz)；7.76(1H,d,J＝1.5Hz)；7.90(1H,s)；8.12(2H,2×s)；8.17(2H,s)。13C-NMR(CDCl3)：13.79；14.17；14.18；42.04；49.91；55.31；59.63；59.76；60.31；60.37；60.59；62.15；87.60；94.16；112.17；114.47；116.77；116.77；119.06；119.94；120.27；120.73；121.01；123.33；126.86；127.23；129.19；132.30；134.01；137.45；140.21；148.48；148.74；150.23；154.40；154.69；154.99；158.40；161.85；164.06；169.90；170.95。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1265.25、1263.21和1267.25；实测值为1265.86、1263.01和1267.81。实例77.化合物77的合成采用类似于实例73所述的合成方法，由化合物75和76(WO201326790)合成化合物77。反应时间为23小时。通过FC(硅胶，5％至25％EtOH的CH2Cl2溶液)纯化产物。收率：75％。1H-NMR(D6-DMSO)：0.79(6H,t,J＝7.1Hz)；1.18(6H,t,J＝7.1Hz)；1.20(12H,t,J＝7.1Hz)；1.21(6H,t,J＝7.1Hz)；1.32(6H,t,J＝7.1Hz)；3.08(2H,d,J＝15.0Hz)；3.17(2H,d,J＝15.0Hz)；3.32(4H,s)；3.70(4H,q,J＝7.1Hz)；3.07(4H,s)；4.03(4H,s)；4.06(4H,q,J＝7.1Hz)；4.16(4H,q,J＝7.1Hz)；4.17(8H,q,J＝7.1Hz)；4.33(4H,q,J＝7.1Hz)；4.79(4H,s)；4.87(8H,s)；6.25(4H,s)；7.46(2H,s)；7.47(1H,d,J＝7.8Hz)；7.75(1H,d,J＝7.8Hz)；7.69(1H,dd,J＝8.3和1.6Hz)；7.77(2H,2x2s)；7.82(1H,d,J＝8.3Hz)；7.84(1H,s)；7.86(2H,2×2s)；7.92(1H,d,J＝1.6Hz)。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1920.69；实测值为1920.31。实例78.化合物78的合成采用类似于实例66所述的合成方法，由化合物77合成化合物78。将所得产物不进行进一步纯化直接用于下一步骤。Rf(HPLC)：14.4分钟。UV(HPLC)：260和364nm。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1834.03；实测值为1833.95。实例79.化合物79的合成采用类似于实例42所述的合成方法，由化合物78合成化合物79。将所得产物不进行进一步纯化直接用于下一步骤。Rf(HPLC)：19.9分钟。UV(HPLC)：255和361nm。MALDITOF-MS质量：计算值(M+H+)为1876.09；实测值为1877.06。实例80.化合物80的合成采用类似于实例68所述的合成方法，由化合物79合成化合物80。Rf(HPLC)：13.9分钟。UV(HPLC)：255和357nm。实例81.与牛磺酸缀合的新型螯合物(螯合物66和80)的光物理特性如上文在实例68中所述将制备的经异硫氰酸酯活化的螯合物(65和79)与牛磺酸缀合。通过半制备型反相HPLC(RP-18色谱柱)纯化所得产物。使产物级分蒸发之后，将残余物溶于50mMTRIS缓冲液中。所测量的50mMTRIS缓冲液(pH7.75)中的新型螯合物(66和80)的光物理特性激发波长(λ激发)、发光衰减时间(τ)、摩尔吸光系数(ε)、估计的发光产额(εΦ)示于表3中。将九齿标记物{2,2’,2”,2”’-{[2-(4-异硫氰酸酯基-苯基)乙基亚胺基]双(亚甲基)双{4-{[4-(α-半乳糖吡喃氧基)苯基]-乙炔基}-吡啶-2,6-二基}双(亚甲基腈基)}四(乙酸根)}铕(III)(vonLoden,P.,etal.,2003,Anal.Chem.75,3193(vonLoden,P.等人，2003年，《分析化学》，第75卷，第3193页))用作参照标记物。表3螯合物ε/cm-1M-1λ激发/nmτ/μsε×Φ/cm-1M-1661000003465408700801050003542905600参照螯合物5500032510004800实例58.用螯合物66标记抗体按照实例61所述制备TnI标记的抗体。由所测量的光物理特性得到，50mMTRIS缓冲液(pH7.75)中用螯合物66标记的cTnI的激发波长(λ激发)为354nm，发光衰减时间(τ)为460μs，摩尔吸光系数(ε)为142000cm-1M-1，并且发光产额(εΦ)为10500cm-1M-1。干测量过程得出发光产额为16500cm-1M-1，其表示在完成如实例61所述的干免疫测定法之后基于信号测量值的估计发光产额。方案1方案7方案8方案9方案10方案11方案12方案13方案14方案15方案16方案17方案18方案19用于实例59中的参照配体用于实例60和80中的参照九齿标记物。当前第1页1 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