乳化-光聚合制备微米级含酶凝胶微球的方法及应用与流程

本发明属于雌激素去除技术领域，具体涉及一种乳化-光聚合制备微米级含酶凝胶微球的方法，及其协同利用凝胶微球的吸附和催化特性去除模拟废水中的双酚A的应用。

背景技术：

环境内分泌干扰物的污染问题是当前环境领域的研究热点，环境内分泌干扰物的分析检测方法、污染现状、环境化学行为、作用机制及环境毒理的研究工作也迅速开展，而环境治理方面研究的比较少，因而对水体中内分泌干扰物的去除变得日趋紧迫。近年来，国内外对于环境水中雌激素的处理方法主要有微生物降解法、吸附法、电化学法、光降解法等。这些方法在处理过程中均有显著效果，有些方法也可用于实际应用。然而，从经济性、技术性和使用性方面考虑，这些方法仍然存在一定的缺陷，如运行管理要求高、成本高、操作复杂、净化不彻底、产生有毒的副产物、以及处理范围狭窄等。因此，需研发一种更加快速、便捷、低成本且无有毒副产物产生的处理方法。

漆酶(laccase)是一种含铜的多酚氧化酶，广泛存在于真菌、植物和昆虫中。它可以在分子氧存在条件下催化氧化酚类物质，使其羟基氧化成游离自由基或醌类物质，继而通过聚合形成难溶于水的高分子化合物而沉淀。由于漆酶易于提取、来源广，因此近年来国外众多学者对于漆酶处理环境雌激素的研究特别关注。但是，液相酶去除水溶液中的污染物存在以下缺点：1、酶溶解在溶液中造成二次污染；2、酶与形成的醌反应而失活；3、无法重新利用；4、处理成本高。基于此，需要通过酶的固定化技术提高它的稳定性以及可再利用性，克服溶解酶的缺点，同时尽可能的保留酶原有的活性，这样就可以提高酶对底物的处理效率、延长酶的使用寿命和降低处理成本。综上所述，如何获得高效、稳定的固定化酶是漆酶处理雌激素研究的新方向。

技术实现要素：

本发明的目的就在于针对上述现有技术的不足，提供一种乳化-光聚合制备微米级含酶凝胶微球的方法及应用。

本发明采用乳化-光聚合法，将PEG溶液和酶溶液组成的水相经过振荡，使之在矿物油中充分分散成液滴状，紫外光照射时，受到光引发剂的引发，聚合成微米级的含酶凝胶微球，再用戊二醛进行交联以提高酶的稳定性。

一种乳化-光聚合制备微米级含酶凝胶微球的方法，包括以下步骤：

A、油相为1mL的矿物油，内含1％的乳化剂Span 80和1％的非离子型去污剂Tween 20；水相200μL，其中PEG混合液133μL(PEGDA/PEGMA＝4：1)，漆酶溶液67μL；

B、在水相中加入1％的光引剂HMPP，PEG、漆酶溶液和光引剂充分混匀后滴入到油相中，振荡10s后进行紫外光照3min；

C、得到的固体材料进行充分的清洗，直至油相和光引剂全部洗掉，再用0.5％的交联剂戊二醛进行交联，然后存放于4℃的冰箱进行保存。

所述漆酶溶液浓度为100mg/mL。

本发明的微米级含酶凝胶微球可应用于雌激素去除，其对双酚A具有吸附聚集的作用，能够协同利用凝胶微球的吸附和催化特性去除模拟废水中的双酚A。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明制备的微球粒径范围为几百微米，可以自然沉淀分离，方便再次回收利用；2、水相可以100％转化成固体颗粒材料，且酶的包埋率可以达到100％；3、对双酚A具有较强的吸附能力，15min后上清液中检测不出双酚A，说明双酚A全部被凝胶微球吸附，并且微球中包埋的酶可进一步对双酚A进行酶催化降解，提高凝胶球的重复利用次数；4、产物不会从凝胶球中泄露，防止二次污染。

附图说明

图1为乳化—光聚合制备微米级含酶凝胶微球的方法的示意图；

图2为含酶凝胶微球的外观；

图3为含酶凝胶微球的粒径分布图；

图4为含酶凝胶微球对模拟BPA废水的酶降解过程图；

图5为含酶凝胶微球对不同浓度的BPA废水的酶降解效率图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明不仅限于此。

实施例1

A、油相为1mL的矿物油，内含1％的乳化剂Span 80和1％的非离子型去污剂Tween 20；水相200μL，其中PEG混合液占133μL(PEGDA/PEGMA＝4：1)，漆酶溶液浓度100mg/mL，共67μL；

B、在水相中加入1％的光引剂HMPP，PEG、漆酶溶液和光引剂充分混匀后滴入到油相中，振荡10s后进行紫外光照3min；

C、得到的固体材料进行充分的清洗，直至油相和光引剂全部洗掉。

称取制备的材料30mg，加入25mg/L的双酚A溶液，于室温下进行反应，10h后BPA的酶降解能力在pH3、pH5和pH7条件下分别达到56％、66％和60％。

实施例2

A、油相为1mL的矿物油，内含1％的Span 80和1％的非离子型去污剂Tween 20；水相200μL，其中PEG混合液占133μL(PEGDA/PEGMA＝4：1)，Tris-HCl 67μL；

B、在PEG混合溶液中加入1％的光引剂HMPP，充分混匀后滴入到油相中，振荡10s后进行紫外光照3min；

C、得到的固体材料进行充分的清洗，直至油相和光引剂全部洗掉。

称取制备的材料30mg，加入pH 5的25～200mg/L的双酚A溶液0.5mL，于室温下进行反应，15min后上清液中检测不到双酚A，即双酚A被全部吸附到了凝胶微球上，说明材料对双酚A这种污染物具有较好的富集作用。

实施例3

A、油相为1mL的矿物油，内含1％的Span 80和1％的非离子型去污剂Tween 20；水相200μL，其中PEG混合液占133μL(PEGDA/PEGMA＝4：1)，含酶溶液(失活的酶对于对照试验)67μL；

B、在水相中加入1％的光引剂HMPP，PEG、酶溶液和光引剂充分混匀后滴入到油相中，振荡10s后进行紫外光照3min；

C、得到的固体材料进行充分的清洗，直至油相和光引剂全部洗掉。

称取制备的材料30mg，加入pH 5的25mg/L的双酚A溶液0.5mL，于室温下进行反应，每1h后移除上清液，加入新鲜的双酚A溶液，循环14次后，含酶微球的重复利用性较好，且产生的酶降解产物“困”在微球中，不会造成二次污染。

如图2-图5所示，本发明所制备的含酶凝胶微球为圆形，微米级，表面粗糙，其粒径主要集中在250μm左右，酶的包埋率可以达到100％，光聚合转化率达到100％；其对双酚A具有吸附聚集的作用，且吸附作用和酶的催化特性对协同去除双酚A具有较好的效果。协同利用凝胶微球对双酚A的吸附和酶催化特性，不仅可以快速的富集污染物，而且微球中酶的作用使得双酚A发生降解，释放了吸附位点，方便了重复利用，并且产生的聚合沉淀“困”在凝胶微球中，不会发生二次污染。