实施例9:
[0106]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例1，除了加入的是I?20mL
0.2% 二氯喹啉酸乙醇溶液。
[0107]实施例10:
[0108]培养、处理酵母及包埋步骤同实施例2，除了加入的是I?20mL 0.2%二氯喹啉酸乙醇溶液。
[0109]对比实施例10:
[0110]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的是I?20mL
0.2% 二氯喹啉酸乙醇溶液。
[0111]实施例11:
[0112]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为 0.1 ?5%的 TritonX-1OO0
[0113]实施例12:
[0114]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为0.1?5%的吐温-80。
[0115]实施例13:
[0116]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为0.1?5%的溴化十六烷基三甲基铵。
[0117]实施例14:
[0118]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为0.1?5%的十二烷基硫酸钠。
[0119]实施例15:
[0120]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为0.5?10%的盐酸。
[0121]实施例16:
[0122]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为I?20%的氯化钠。
[0123]实施例17:
[0124]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为I?20%的氯化钾。
[0125]实施例18:
[0126]培养、处理酵母、包埋及封孔修饰步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为I?20%的乙醇。
[0127]实施例19:
[0128]培养、处理酵母及包埋步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为I?10% 的 EDTA。
[0129]实施例20:
[0130]培养、处理酵母及包埋步骤同对比实施例2，除了加入的化学试剂是重量为0.05 ?0.5%的 DTT0
[0131]从上述实施例的结果中，经过分析我们发现:
[0132](I)阳离子聚合物封孔修饰提高了酵母细胞微胶囊中芯物质的包埋度。壳聚糖封孔修饰后的阿维菌素酵母细胞微胶囊中阿维菌素的包埋度比封孔修饰前提高了 1.24?
2.82倍；壳聚糖修饰的精喹禾灵酵母细胞微胶囊中精喹禾灵的包埋度比封孔修饰前提高了 0.25 ?0.77 倍。
[0133](2)阳离子聚合物封孔修饰增强了酵母细胞微胶囊中芯物质的缓释性能。在0.2% TritonX-1OO溶液中，0.4%壳聚糖封孔修饰的阿维菌素酵母细胞微胶囊在最初2小时内阿维菌素的累积释放率由封孔修饰前的89.12%降低到了 70.44%，持续释放时间由4小时延长到了 18小时(见附图1)。0.4%壳聚糖封孔修饰的精喹禾灵酵母细胞微胶囊在0.2% CTAB中最初2小时内精喹禾灵的累积释放率由38.5%降低到了 26.1% (见附图2);壳聚糖修饰的绿原酸酵母细胞微胶囊在pH 6.0的PBS中最初2小时内绿原酸的累积释放率由43.5%增加到了 64.1%,48小时内的累积释放率则由59.9%增加到了 86.9% (见附图3);壳聚糖修饰的白藜芦醇酵母细胞微胶囊在pH 6.0的PBS中最初2小时内白藜芦醇的累积释放率由25.4%降低到了 19.6%,96小时内的累积释放率则由67.1%增加到了84.5% (见附图4) ο
[0134](3)阳离子聚合物封孔修饰提高了酵母细胞微胶囊中芯物质的热贮稳定性。在54±2°C贮存14天后，0.4%壳聚糖封孔修饰的酵母微胶囊中阿维菌素保有率为95.98%,比未经修饰的微胶囊高15.72%。
[0135](4)控释型酵母细胞微胶囊中芯物质的释放速度可以通过调节封孔时阳离子聚合物的浓度进行控制。阿维菌素酵母微胶囊分别采用0.1%、0.5%、1%和1.4%的壳聚糖进行封孔修饰后，在0.2%的TritonX-1OO溶液中，I小时内阿维菌素的累积释放率分别由封孔修饰前的87.66%降低为78.56%,72.02%,54.80%和32.36%；24小时内阿维菌素的累积释放率分别为98.84%,89.17%,88.28%和79.11 %，而未经壳聚糖封孔修饰的阿维菌素酵母微胶囊在4小时内已释放完全(见附图1和附图5)。
[0136](5)所得酵母细胞微胶囊大小均匀，不黏结，表面没有未包埋的芯物质。
【主权项】
1.一种控释型酵母细胞微胶囊的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: (1)采用酵母细胞为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养； (2)将所得的酵母细胞离心，洗涤后，冷冻干燥或重新悬浮在具有促进酵母细胞自溶的化学试剂中，在40?60°C的温度下进行振荡处理24?48小时，离心、洗涤； (3)重新悬浮在重量体积浓度为0.1?10 %的氢氧化钠溶液中，在20?40°C的温度下继续处理24?48小时，离心、洗涤后，冷冻干燥即得到所述的微胶囊壁材； (4)在20?40°C的温度下，将冻干后的酵母微胶囊壁材与待包埋的芯物质溶液高频度接触24?48小时进行微胶囊化处理； (5)在20?40°C的温度下，将步骤(4)所得微胶囊与阳离子聚合物溶液高频度接触24?48小时进行封孔修饰，离心、洗涤后，冷冻干燥即得控释型酵母细胞微胶囊产品。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的芯物质为杀虫剂阿维菌素，所述的溶液为乙醇溶液。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的芯物质为除草剂精喹禾灵或二氯喹啉酸，所述的溶液为乙醇溶液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述的芯物质为水溶性抗氧化剂绿原酸，所述的溶液为水溶液。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)中所述的芯物质为脂溶性抗氧化剂为白藜芦醇，所述的溶液为乙醇溶液。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述的化学试剂任一选自: 加入重量为0.1?5%的吐温-80 ;或 加入重量为0.1?5%的TritonX-1OO ;或 加入重量为0.1?5%的溴化十六烧基三甲基钱；或 加入重量为0.1?5%的十二烷基硫酸钠；或 加入重量为0.5?10%的盐酸；或 加入重量为0.5?10%的氢氧化钠；或 加入重量为I?20%的乙醇；或 加入重量为I?10%的EDTA ;或 加入重量为0.05?0.5%的二硫苏糖醇； 加入重量为I?20%的氯化钾；或 加入重量为I?20%的氯化钠。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(5)中所述的阳离子聚合物为壳聚糖(分子量为?1.5 X 105，脱乙酰度>90% )，所述的溶液为1% HAc溶液，所述的阳离子聚合物的最终浓度为0.1?2%，所述的时间为24?48小时。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于所述的菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Han.)，斜面培养基为PDA培养基，种子培养基为高糖培养基，发酵培养基为高糖培养基。
9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于:种子培养基和发酵培养基均为Yro培养基，组成如下:蛋白胨20.0g、酵母提取物10.0g、葡萄糖10.0g、添水至1000mL，pH4-50
10.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于:种子培养基和发酵培养基均为产脂培养基，组成如下:蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g、添水至1000mL。
11.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于:种子培养基和发酵养基都为豆芽汁蔗糖培养基，配制如下:取黄豆芽200.0g,洗净，放入水中煮沸30min，用纱布过滤，取豆芽汁加鹿糖30.0g，添水至lOOOmL，调节pH = 7.2。
12.根据权利要求1-11中任一项的方法所制备的微胶囊壁材。
13.根据权利要求1-12中任一项的方法所制备的微胶囊产品。
【专利摘要】本发明提供一种控释型酵母细胞微胶囊产品及其制备方法，涉及到酵母细胞的培养和处理，获得微胶囊壁材，并对其壁材进行封孔修饰获得微胶囊产品。将在合适的条件下摇瓶培养的酵母细胞经过十二烷基硫酸钠、二硫苏糖醇等化学试剂进行处理后，离心、洗涤，再用氢氧化钠溶液进行进一步处理。离心、洗涤后，冷冻干燥。将酵母细胞壁材与待包埋的芯物质溶液高频度接触完成包封后，再用阳离子聚合物进行封孔修饰。离心，洗去表面未包封的芯物质和多余的阳离子聚合物，冻干后磨细，即得大小均匀、不黏结的控释型酵母细胞微胶囊。
【IPC分类】A01N43-90, C09K15-08, A01N25-28, A01P13-00, A01N43-42, A01N43-60, A01P7-04, B01J13-02
【公开号】CN104801247
【申请号】CN201510170323
【发明人】石国荣
【申请人】湖南农业大学
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年4月13日