专利名称：一种psa检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种试剂盒，属于PSA化学发光免疫分析技术领域。
背景技术：
前列腺特异性抗原(PSA)是由前列腺上皮细胞合成分泌至精液中，是精浆的主要成分之一。在上个世纪60年代末，在研究免疫避孕过程中Hare等人发现，在前列腺液及精液中含有一种分子量大约34000的精液特异性蛋白质。1979年从前列腺组织中提取并纯化了这种蛋白质。由于这种蛋白只在前列腺组织中存在，被命名为前列腺特异性抗原。PSA用于科学研究过程中，对于微量检测要求较高。目前PSA测定方法有胶体金免疫层析(GICA);蛋白印迹(WB);酶联免疫吸附试验(ELISA)，化学发光法免疫分析(CLIA);其中GICA、ELISA、WB的优点是相对成本低廉，缺点是灵敏度低，PSA含量少的情况下检测不出；而化学发光法CLIA试剂盒检测灵敏度比上述方法试剂盒高，但还是不能满足科研上对PSA超微量检测的需要。
实用新型内容本实用新型克服了当前化学发光法试剂盒不能满足对PSA超微量检测的技术问题，提供了一种PSA检测试剂盒，解决目前PSA蛋白超微量检测的问题。本实用新型采用了以下技术方案来解决技术问题一种PSA检测试剂 盒，包括盒体和盒盖，盒体(I)上方连接盒盖(2)，盒体(I)的底部放置有2cm厚与盒的尺寸大小相同的海绵托(3)，所述海绵托(3)的左半部设有11个第一凹槽、中间区域设有3个第二凹槽、右半部设有2个第三凹槽，第一凹槽内分别装有11个校准品瓶(5)，第二凹槽内分别装有磁性颗粒瓶￠)、生物素化合物瓶(7)和标记物瓶(8)，第三凹槽分别装有化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)。作为本实用新型进一步改进，所述的盒体(I)、盒盖(2)均采用塑化防水纸质材料制成。作为本实用新型进一步改进，第一凹槽的截面形状与所述校准品瓶(5)的截面形状匹配。作为本实用新型进一步改进，3个第二凹槽的截面形状分别与磁性颗粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)以及标记物瓶(8)的截面形状匹配。作为本实用新型进一步改进，2个第三凹槽的截面形状分别与化学发光底物瓶
(9)和浓缩洗涤液瓶(10)的截面形状匹配。作为本实用新型进一步改进，所述的校准品瓶(5)，磁性颗粒瓶￠)，生物素化合物瓶(7)，标记物瓶(8)，化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)均采用玻璃瓶。与现有技术相比，本实用新型的有益效果是发光信号明显提高，对超微量的PSA检测效果明显优于现有化学发光免疫分析试剂盒，本实用新型试剂盒具有灵敏度高，稳定的特点。
图1是本实用新型整体结构示意图。图中1盒体；2盒盖；3海绵托；4第三凹槽；5校准品瓶；6磁性颗粒瓶；7生物素化合物瓶；8标记物瓶；9化学发光底物瓶；10浓缩洗涤液瓶。
具体实施方式
如图1所示，为本实用新型PSA检测试剂盒的一种实施例。该PSA检测试剂盒包括盒体I和盒盖2，盒体1、盒盖2均采用塑化防水纸质材料制成。盒体上方连接盒盖，盒体的底部放置有2cm厚与盒的尺寸大小相同的海绵托3。所述海绵托3的左半部设有11个第一凹槽、中间区域设有3个第二凹槽、右半部设有2个第
三凹槽4。第一凹槽内分别装有11个校准品瓶5，并且第一凹槽的截面形状与所述校准品瓶5的截面形状匹配。第二凹槽内分别装有磁性颗粒瓶6、生物素化合物瓶7和标记物瓶8，并且3个第二凹槽的截面形状分别与磁性颗粒瓶6、生物素化合物瓶7以及标记物瓶8的截面形状匹配。第三凹槽4分别装有化学发光底物瓶9和浓缩洗涤液瓶10，并且2个第三凹槽的截面形状分别与化学发光底物瓶9和浓缩洗涤液瓶10的截面形状匹配。在本实施例中，校准品瓶5，磁性颗粒瓶6，生物素化合物瓶7，标记物瓶8，化学发光底物瓶9和浓缩洗涤液瓶10均采用玻璃瓶。制备本实用新型PSA检测试剂盒一、校准品瓶的制备用校准品基质液及PSA纯品配制校准品，浓度分别为0、0. 1,0. 2,0. 5、1、2、5、10、20、50、100ng/mL，(其中Ong/mL为校准品基质液，不含PSA)，配制11种系列浓度校准品，各浓度校准品分别用3mL规格的西林玻璃瓶分装ImL/瓶，冻干处理后，-20°C保存，得到本实用新型校准品瓶5。二、磁性颗粒瓶的制备(I)称取250mg氨基末端磁性颗粒置于烧杯；(2)加入甲醇及丙酮各5mL反复清洗5遍；(3)磁性分离，弃去上清；(4)加入DMF溶解的IOmLO. 2%的1，4 一苯二异硫氰酸酯(PDITC)溶液，置于恒温振荡器，反应IOh ；(5)将反应后的磁性颗粒用丙酮及超纯水反复清洗6遍；(6)取新制备经PDITC活化的磁性颗粒置于30mL离心管中；(7)加入PBS25mL，加入4mg链亲和素，置于恒温振荡器中反应20min ；(8)磁性分离，测定反应前后溶液在280nm的OD值，以PBS清洗3次，收集，加入等量丙三醇，_20°C保存.通过实验检测效价，在根据最近效价稀释比例配制链亲和素化固相磁性颗粒工作液。用5mL规格西林玻璃瓶分装ImL/瓶，冻干处理后，_20°C保存，得到本实用新型磁性颗粒瓶6。三、生物素化合物瓶的制备(I)将生物素-N-羟基磺酸基琥珀酰亚胺酯(Sulf0-NHS-Biotin)冰箱取出平衡至
室温;(2) O. OlM的PBS稀释PSA单克隆抗体至浓度2mg/mL ；(3)称取Sulfo-NHS_Biotin2mg于西林瓶中加超纯水300 μ L，轻轻摇匀活化。(4)立即将活化的生物素溶液54 μ L缓慢加入2mLPSA单克隆抗体溶液中，室温反应 30min ；(5)反应液用0.0现的？85透析41811(换液4次)，收集，加入等量丙三醇，-201保存。通过实验检测效价，在根据最近效价稀释比例配制PSA单克隆抗体生物素化工作液。用5mL规格西林玻璃瓶分装ImL/瓶，冻干处理后，_20°C保存，得到本实用新型生物素化合物瓶7。四、标记物瓶的制备(I)将1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)冰柜取出平衡至室温；(2)取10mg5，10，15-三(4-吡啶基)-20-对苯乙酸卟啉和20mgEDC分别溶于Iml超纯水中使其溶解； (3)将上述5，10，15-三(4_吡啶基)_20_对苯乙酸卟啉溶液和EDC溶液，在4°C混合搅拌反应30min ；(4)然后向此混合液中缓慢滴加入含30mg/mL PSA单克隆抗体溶液，室温搅拌反应2h，层析纯化后，-20°C保存。通过实验检测效价，在根据最近效价稀释比例配制5，10，15_三(4-吡啶基)-20-对苯乙酸卟啉偶联标记PSA单克隆抗体化工作液。用5mL规格西林玻璃瓶分装ImL/瓶，冻干处理后，_20°C保存，得到本实用新型标记物瓶8。五、化学发光底物瓶的制备
权利要求1.一种PSA检测试剂盒，包括盒体和盒盖，其特征在于盒体(I)上方连接盒盖(2)，盒体(I)的底部放置有2cm厚与盒的尺寸大小相同的海绵托(3)，所述海绵托(3)的左半部设有11个第一凹槽、中间区域设有3个第二凹槽、右半部设有2个第三凹槽，第一凹槽内分别装有11个校准品瓶(5)，第二凹槽内分别装有磁性颗粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)和标记物瓶(8)，第三凹槽分别装有化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)。
2.根据权利要求1所述的一种PSA检测试剂盒，其特征在于所述的盒体(I)、盒盖(2)均采用塑化防水纸质材料制成。
3.根据权利要求1所述的一种PSA检测试剂盒，其特征在于第一凹槽的截面形状与所述校准品瓶(5)的截面形状匹配。
4.根据权利要求1所述的一种PSA检测试剂盒，其特征在于3个第二凹槽的截面形状分别与磁性颗粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)以及标记物瓶⑶的截面形状匹配。
5.根据权利要求1所述的一种PSA检测试剂盒，其特征在于2个第三凹槽的截面形状分别与化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)的截面形状匹配。
6.根据权利要求1所述的一种PSA检测试剂盒，其特征在于所述的校准品瓶(5)，磁性颗粒瓶￠)，生物素化合物瓶(7)，标记物瓶(8)，化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)均采用玻璃瓶。
专利摘要本实用新型公开了一种PSA检测试剂盒，涉及化学发光免疫分析技术领域，解决目前PSA超微量检测的技术问题。本实用新型PSA检测试剂盒，包括盒体和盒盖，盒体上方连接盒盖，盒体的底部放置有2cm厚与盒的尺寸大小相同的海绵托，所述海绵托的左半部设有11个第一凹槽、中间区域设有3个第二凹槽、右半部设有2个第三凹槽，第一凹槽内分别装有11个校准品瓶，第二凹槽内分别装有磁性颗粒瓶、生物素化合物瓶和标记物瓶，第三凹槽分别装有化学发光底物瓶和浓缩洗涤液瓶。本实用新型试剂盒主要用途为PSA超微量检测。
文档编号G01N33/68GK202870099SQ20122036936
公开日2013年4月10日 申请日期2012年7月27日 优先权日2012年7月27日
发明者胡庆锋, 常立峻, 李勇, 徐海伟, 陈秀发 申请人:苏州长光华医生物试剂有限公司