裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指纹图谱的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法。方法包括：（a)对照品?谷液的制备；（b)供试品?谷液的制备；（c)色谱条件；（d)以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定；（e)指纹图谱的质量控制。该方法对各供试品的前处理方法简单，特征性成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，具一定的专属性；所得指纹图谱中各特征峰分离效果较好，裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱具有较好的相关性；可用于鉴别裸花紫珠药材的伪劣，增加裸花紫珠制剂生产过程的可控性，有利于保证裸花紫珠制剂的质量稳定和临床疗效。本发明还公开了根据上述指纹图谱检测方法得到的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的标准指纹图谱。
【专利说明】裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标 准指纹图谱
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物质量控制【技术领域】，特别涉及一种裸花紫珠、中间体及其制剂的 指纹图谱检测方法，并由此得到其标准指纹图谱。
【背景技术】
[0002] 裸花紫珠为马鞭草科植物裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook, et Arn.)的干 燥叶。分布广东、广西、海南等地，生长于海拔1200米的地区。裸花紫珠主要成分为黄酮甙、 缩合鞣酸、中性树脂、酚类、多糖、羟基化合物及镁、钙、铁盐等。现代研究表明其有效成分具 有止血、抗菌、收敛、解毒、镇痛、以及促进愈合的作用。其抗菌、抗病毒作用，尤其对金葡萄 球菌、伤寒杆菌、肺炎双球菌等均有不同的抑制作用，其中对金葡萄球菌，伤寒杆菌抑菌作 用最强。裸花紫珠还可抑制毛细血管的通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反 应作用，同时可明显缩短出、凝血时间，止血效果显著。目前，市场上裸花紫珠制剂主要有颗 粒剂、胶囊剂、片剂、栓剂、合剂等。
[0003] 裸花紫珠制剂作为中成药，其药效是多种活性成分共同作用的结果。针对裸花紫 珠药材或制剂的质量检测方法已公开了不少方法，如CN102955010A记载了一种中药裸花 紫珠制剂的质量检测方法，其以木犀草苷为对照品，建立的指纹图谱具有5个共有峰，以木 犀草苷为参照峰；中成药2011年第33卷第3期《HPLC法测定裸花紫珠片中毛蕊花糖苷及连 翘酯苷的含量》记载了一种测定裸花紫珠片中毛蕊花糖苷及连翘酯苷的含量的HPLC方法。 但是现有技术中尚无较好的质量控制方法来准确的反映现有中药材、中间体及成品的质量 状况，也无法用于生产过程中、以及产品质量的有效控制，不能较好地保证其临床疗效。因 此，建立裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法和标准指图谱具有非常重要 的意义。
[0004]
【发明内容】
[0005] 的花紫珠02]本发明的目的就是针对裸花紫珠药材、中间体及其制剂的质量控制 现状，提供一种基于高效液相色谱法的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方 法及根据该方法建立得到的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的高效液相色谱指纹图谱，有 利于对其原料药材、中间体及其终产品质量的有效控制及保证其临床疗效。
[0006] 裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括下述主要步骤： (1) 对照品溶液的制备： 称取异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加509Γ95%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀， 制成对照品溶液； (2) 供试品溶液的制备： 裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末，置锥形瓶中，加水或 509Γ95%乙醇，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液； 裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠中间体，置锥形瓶中，加水或 509Γ95%乙醇，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液； 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：取裸花紫珠制剂，置锥形瓶中，加水或509Γ95%乙 醇，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液； (3) HPLC 检测： 分别吸取步骤（2)所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶 液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图； 其中，色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；DAD检测器；柱温为3(T35°C;检测波长为 32(T340nm ;流动相A为乙腈，流动相B为0. 1?0. 5%磷酸溶液，总流速为0. 8?1. 2ml/min ;分 析时间25分钟； 采用下述梯度洗脱方式洗脱：(Γ15分钟时，流动相A:流动相B=16:84~25:75 ;15~25分 钟时，流动相A:流动相B=25:75?39. 7:60. 3 ; (4) 以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定 吸取步骤（2)所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液各 10 μ 1，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10 批裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具 有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷Β，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷； (5) 指纹图谱的质量控制 将裸花紫珠药材、中间体、制剂指纹图谱与步骤（4)制定的标准指纹图谱进行比较，计 算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。
[0007] 所述步骤（2)供试品溶液的制备优选为下述方法进行： 裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末〇. 5~3. 0g，置锥形瓶中，力口 水或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同 种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液； 裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠浸膏〇. 25~1. 0g，置锥形瓶中，加水 或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种 溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液； 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：根据裸花紫珠制剂剂型不同，选择下述方法之一制 备裸花紫珠制剂供试品溶液-- a、若裸花紫珠制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂：取裸花紫珠制剂内容物，研细，称 取0. f 3. 0g，置锥形瓶中，加水或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取或超声处理 3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花 紫珠制剂供试品溶液。
[0008] b、若裸花紫珠制剂为合剂、口服液：取裸花紫珠制剂混匀，量取5~10ml，置锥形瓶 中，加水或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重 量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液。
[0009] 所述步骤（3)中的色谱柱优选柱长为250mm的C18反相色谱柱。
[0010] 所述步骤（3)中检测波长优选为327nm。
[0011] 所述步骤（3)中流动相B优选为0. 4%磷酸溶液。
[0012] 所述步骤（3)中总流速优选为lml/min。
[0013] 所述步骤（5)中所述的确定相似度是指将裸花紫珠药材、中间体、制剂指纹图谱与 步骤（4)制定的标准指纹图谱进行比对，其相似度为0. 9(Tl. 00,共有峰有14个，共有峰峰 面积总和占总峰面积的90%以上，以11号峰异毛蕊花糖苷为参照峰，计算相对保留时间和 相对峰面积； 计算结果如下所示： 裸花紫珠药材包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 202~0. 214、（2) 0· 266?0· 282、（3) 0· 33(Γ〇· 355、（4) 0· 499?0· 518、（5) 0· 561 ?0· 577、（6) 0· 631 ?0· 642、 (7) 0· 68(Γ〇· 688、（8) 0· 788?0· 818、（9) 0· 827?0· 860、（10) 0· 873?0· 914、（S) 1. 000、 (12) L 442?L 481、（13) L 503?L 536、（14) L 854?L 889 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 32(Γ?· 754、（2)0· 251 ?1. 468、（3)0· 069?0· 749、（4)0· 19(Γ〇· 995、（5)0· 122?3. 073、（6) 0· 162?1. 882、（7) 0· 123?0· 745、（8) 0· 102?2. 079、（9) 3. 572?12. 508、（10) 0· 118?2. 177、 (S) 1. 000、（ 12) 0· 225?1. 730、（ 13) 0· 055?0· 376、（ 14) 0· 103?1. 180 ; 裸花紫珠中间体包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 215~0. 223、 (2)0. 278^0. 295,(3)0. 338^0. 356,(4)0. 470^0. 489,(5)0. 547^0. 560,(6)0. 620^0. 637, (7) 0· 68(Γ〇· 694、（8) 0· 806?0· 821、（9) 0· 854?0· 863、（10) 0· 879?0· 899、（S) 1. 000、 (12) L 179?L 192、（13) L 339?L 357、（14) L 454?L 477 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 089?0· 594、（2)0· 143?1. 017、（3)0· 033?0· 199、（4)0· 025?1. 041、（5)0· 156?0· 885、（6) 0· 177?0· 930、（7)0· 035?0· 667、（8)0· 395?1. 514、（9)0· 787?4. 493、（10)0· 141 ?0· 723、（S) 1. 000、（ 12) 0· 177?0· 925、（ 13) 0· 094?0· 483、（ 14) 0· 127?0· 795 ; 裸花紫珠制剂包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 204~0. 211、（2) 0· 268?0· 281、（3) 0· 346?0· 352、（4) 0· 47(Γ〇· 483、（5) 0· 561 ?0· 575、（6) 0· 632?0· 649、 (7) 0· 686?0· 703、（8) 0· 815?0· 831、（9) 0· 859?0· 874、（10) 0· 887?0· 896、（S) 1. 000、 (12) L 183?L 192、（13) L 270?L 286、（14) L 445?L 463 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 063?0· 490、（2)0. 054?0· 370、（3)0. 013?0· 090、（4)0. 019?0· 075、（5)0. 039?0· 138、（6) 0· 039?0· 095、（7)0· 211 ?1. 343、（8)0· 055?0· 238、（9)0· 571 ?1. 452、（10)0· 036?0· 108、（S) 1. 000、（12) 0· 022?0· 113、（13) 0· 016?0· 072、（14) 0· 023?0· 117。
[0014] 根据本发明所述的裸花紫珠药材的指纹图谱检测方法建立的一种裸花紫珠药材 的标准指纹图谱，所述的标准指纹图谱在327nm检测波长下，标准指纹图谱具有14个特征 峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷；各峰的相对保 留时间分别为：（1)0. 202?0· 214、（2)0· 266?0· 282、（3)0· 330?0· 355、（4)0· 499?0· 518、（5) 0. 56Γ0. 577,(6)0. 63Γ〇. 642,(7)0. 680^0. 688,(8)0. 788^0. 818,(9)0. 827^0. 860,(10) 0· 873?0· 914、（S)1. 000、（12)1· 442?1. 481、（13)1· 503?1. 536、（14)1· 854?1. 889 ;各峰的相 对峰面积分别为：（1)0. 320?1· 754、（2)0· 251 ?1. 468、（3)0· 069?0· 749、（4)0· 190?0· 995、 (5)0. 122?3· 073、（6)0· 162?1. 882、（7)0· 123?0· 745、（8)0· 102?2· 079、（9)3· 572?12. 508、 (10) 0· 118?2· 177、（S) 1· 000、（ 12) 0· 225?1· 730、（ 13) 0· 055?0· 376、（ 14) 0· 103?1· 180。
[0015] 根据本发明所述的裸花紫珠中间体的指纹图谱检测方法建立的一种裸花紫珠中 间体的标准指纹图谱，所述的标准指纹图谱在327nm检测波长下，标准指纹图谱具有14 个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷；各 峰的相对保留时间分别为：（1) 〇· 215?223、（2) 0· 278?295、（3) 0· 338?356、（4) 0. 47(Γ〇. 489、（5) 0. 547?0. 560、（6) 0. 62(Γ〇. 637、（7) 0. 68(Γ〇. 694、（8) 0. 806?0. 821、 (9) 0· 854?0· 863、（10) 0· 879?0· 899、（S) 1. 000、（12) 1. 179?1. 192、（13) 1. 339?1. 357、 (14) 1.454?1.477 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0. 089?0.594、（2)0. 143?1.017、（3) 0. 033、. 199、（4) 0. 025?1. 041、（5) 0. 156、. 885、（6) 0. 177、. 930、（7) 0. 035?0. 667、 (8) 0. 395?1. 514、（9)0· 787?4. 493、（10)0· 141 ?0· 723、（S) 1. 000、（12)0· 177?0· 925、（13) 0· 094?0· 483、（ 14) 0· 127?0· 795。
[0016] 根据本发明所述的裸花紫珠制剂的指纹图谱检测方法建立的一种裸花紫珠制剂 的标准指纹图谱，其特征在于所述的标准指纹图谱在327nm检测波长下，标准指纹图谱具 有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷； 各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 204?211、（2) 0. 268?281、（3) 0. 346?352、（4) 0· 47(Γ〇· 483、（5) 0· 561 ?0· 575、（6) 0· 632?0· 649、（7) 0· 686?0· 703、（8) 0· 815?0· 831、 (9) 0· 859?0· 874、（10) 0· 887?0· 896、（S) 1. 000、（12) 1. 183?1. 192、（13) 1. 270?1· 286、 (14) L 445?L 463 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 063?490、（2) 0· 054?370、（3) 0· 013?0· 090、（4)0· 019?0· 075、（5)0· 039?0· 138、（6)0· 039?0· 095、（7)0· 211 ?1. 343、（8) 0· 055?0· 238、（9) 0· 571 ?1. 452、（10) 0· 036?0· 108、（S) 1. 000、（12) 0· 022?0· 113、（13) 0· 016?0· 072、（14) 0· 023?0· 117。
[0017] 本发明所述裸花紫珠制剂为：片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂、合剂、口服液。
[0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果是： (1) 、本发明裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法对各供试品的前处理 方法简单，特征性成分保留完整，且供试品溶液稳定； (2) 、该高效液相色谱方法的精密度较高、重现性良好，分析时间较短，具有一定的专属 性；所得指纹图谱中各特征峰分离效果较好，且裸花紫珠药材指纹图谱和中间体指纹图谱 和制剂指纹图谱具有较好的相关性； (3) 、本发明所建立的标准指纹图谱有14个共有峰，信息量较大，较完整的保留了供试 液中的化学成分； (4) 、本发明指认了 3个特征峰，经比较采用保留时间适中，分离度较好，峰面积较大的 异毛蕊花糖苷对照品作为参照峰； (5) 、裸花紫珠药材指纹图谱可用于鉴别裸花紫珠药材的伪劣，裸花紫珠中间体指纹图 谱的应用可增加裸花紫珠制剂生产过程的可控性，裸花紫珠制剂指纹图谱的应用则有利于 保证裸花紫珠制剂的质量稳定和临床疗效，本发明提供的方法有利地保障了从原料到终端 制剂的全程质量控制。
[0019]
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1检测波长3D图； 图2对照品叠加色谱图； 图3为裸花紫珠药材标准指纹图谱； 图4为10批裸花紫珠药材指纹图谱； 图5为裸花紫珠中间体标准指纹图谱； 图6为10批裸花紫珠中间体指纹图谱； 图7为裸花紫珠片标准指纹图谱； 图8为10批裸花紫珠片指纹图谱； 图9为裸花紫珠胶囊标准指纹图谱； 图10为10批裸花紫珠胶囊指纹图谱； 图11为裸花紫珠颗粒标准指纹图谱； 图12为10批裸花紫珠颗粒指纹图谱； 图13为裸花紫珠口服液标准指纹图谱； 图14为10批裸花紫珠口服液标准指纹图谱；
【具体实施方式】
[0021] 下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，这些实施例仅用于说明本发明，并 不限制本发明的范围。
[0022] 实施例1裸花紫珠药材指纹图谱的建立。
[0023] (1)药材的来源 为使药材具有足够的代表性，收集不同产地的药材或不同采收季节的药材作为供试 品。见表1。
[0024] 表1裸花紫珠药材来源
【权利要求】
1. 裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，包括如下步骤： (1) 对照品溶液的制备： 称取异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加509Γ95%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀， 制成对照品溶液； (2) 供试品溶液的制备： 裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末，置锥形瓶中，加水或 509Γ95%乙醇，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液； 裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠中间体，置锥形瓶中，加水或 509Γ95%乙醇，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液； 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备：取裸花紫珠制剂，置锥形瓶中，加水或509Γ95%乙 醇，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔 滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液； (3) HPLC 检测： 分别吸取步骤（2)所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶 液，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图； 其中，色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱；DAD检测器；柱温为3(T35°C;检测波长为 32(T340nm ;流动相A为乙腈，流动相B为0. 1?0. 5%磷酸溶液，总流速为0. 8?1. 2ml/min ;分 析时间25分钟； 采用下述梯度洗脱方式洗脱：(Γ15分钟时，流动相A:流动相B=16:84~25:75 ;15~25分 钟时，流动相A:流动相B=25:75?39. 7:60. 3 ; (4) 以异毛蕊花糖苷为参照峰的标准指纹图谱的制定 吸取步骤（2)所得的裸花紫珠对照品溶液和裸花紫珠药材、中间体、制剂供试品溶液各 10 μ 1，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10 批裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具 有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷Β，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖苷； (5) 指纹图谱的质量控制 将裸花紫珠药材、中间体、制剂指纹图谱与步骤（4)制定的标准指纹图谱进行比较，计 算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。
2. 根据权利要求1所述的裸花紫珠药材、中间体、制剂的指纹图谱检测方法，其特征在 于：所述步骤（2)供试品溶液的制备按照下述方法进行： 裸花紫珠药材供试品溶液的制备：称取裸花紫珠药材粉末〇. 5~3. 0g，置锥形瓶中，力口 水或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同 种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠药材供试品溶液； 裸花紫珠中间体供试品溶液的制备：称取裸花紫珠浸膏〇. 25~1. 0g，置锥形瓶中，加水 或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取或超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同种 溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠中间体供试品溶液； 裸花紫珠制剂供试品溶液的制备： a、 裸花紫珠制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂：取裸花紫珠制剂内容物，研细，称 取0. f 3. Og，置锥形瓶中，加水或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取/超声处理 3(T90min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花 紫珠制剂供试品溶液； b、 裸花紫珠制剂为合剂、口服液：取裸花紫珠制剂混匀，量取5~10ml，置锥形瓶中，力口 水或509Γ95%乙醇25?100ml，称重，回流提取/超声处理3(T90min，放冷，再称定重量，用同 种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得裸花紫珠制剂供试品溶液。
3. 根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其 特征在于：所述步骤（3)中的色谱柱是柱长为250mm的C 18反相色谱柱。
4. 根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其 特征在于：所述步骤（3)中检测波长为327nm。
5. 根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其 特征在于：所述步骤（3)中流动相B为0. 4%磷酸溶液。
6. 根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其 特征在于：所述步骤（3)中总流速为lml/min。
7. 根据权利要求1或2所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其 特征在于：所述步骤（5)中所述的确定相似度是指将裸花紫珠药材、中间体、制剂指纹图谱 与步骤（4)制定的标准指纹图谱进行比对，其相似度为0. 9(Tl. 00,共有峰有14个，共有峰 峰面积总和占总峰面积的90%以上，以11号峰异毛蕊花糖苷为参照峰，计算相对保留时间 和相对峰面积； 计算结果如下所示： 裸花紫珠药材包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 202~0. 214、（2) 0· 266?0· 282、（3) 0· 33(Γ〇· 355、（4) 0· 499?0· 518、（5) 0· 561 ?0· 577、（6) 0· 631 ?0· 642、 (7) 0· 680?0· 688、（8) 0· 788?0· 818、（9) 0· 827?0· 860、（10) 0· 873?0· 914、（S) 1. 000、 (12) L 442?L 481、（13) L 503?L 536、（14) L 854?L 889 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 320?1· 754、（2)0· 251 ?1. 468、（3)0· 069?0· 749、（4)0· 190?0· 995、（5)0· 122?3. 073、（6) 0· 162?1. 882、（7) 0· 123?0· 745、（8) 0· 102?2. 079、（9) 3. 572?12. 508、（10) 0· 118?2. 177、 (S) 1. 000、（ 12) 0· 225?1. 730、（ 13) 0· 055?0· 376、（ 14) 0· 103?1. 180 ; 裸花紫珠中间体包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：（1)0. 215~0. 223、 (2)0. 278^0. 295,(3)0. 338^0. 356,(4)0. 470^0. 489,(5)0. 547^0. 560,(6)0. 620^0. 637, (7) 0· 68(Γ〇· 694、（8) 0· 806?0· 821、（9) 0· 854?0· 863、（10) 0· 879?0· 899、（S) 1. 000、 (12) L 179?L 192、（13) L 339?L 357、（14) L 454?L 477 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 089?0· 594、（2)0· 143?1. 017、（3)0· 033?0· 199、（4)0· 025?1. 041、（5)0· 156?0· 885、（6) 0· 177?0· 930、（7)0· 035?0· 667、（8)0· 395?1. 514、（9)0· 787?4. 493、（10)0· 141 ?0· 723、（S) 1. 000、（ 12) 0· 177?0· 925、（ 13) 0· 094?0· 483、（ 14) 0· 127?0· 795 ; 裸花紫珠制剂包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 204~0. 211、（2) 0· 268?0· 281、（3) 0· 346?0· 352、（4) 0· 47(Γ〇· 483、（5) 0· 561 ?0· 575、（6) 0· 632?0· 649、 (7) 0· 686?0· 703、（8) 0· 815?0· 831、（9) 0· 859?0· 874、（10) 0· 887?0· 896、（S) 1. 000、 (12) L 183?L 192、（13) L 270?L 286、（14) L 445?L 463 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 063?0· 490、（2)0. 054?0· 370、（3)0. 013?0· 090、（4)0. 019?0· 075、（5)0. 039?0· 138、（6) 0· 039?0· 095、（7)0· 211 ?1. 343、（8)0· 055?0· 238、（9)0· 571 ?1. 452、（10)0· 036?0· 108、（S) 1. 000、（12) 0· 022?0· 113、（13) 0· 016?0· 072、（14) 0· 023?0· 117。
8. 根据权利要求1所述的裸花紫珠药材的指纹图谱检测方法建立的一种裸花紫珠药 材的标准指纹图谱，其特征在于所述的标准指纹图谱在327nm检测波长下，标准指纹图谱 具有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖 苷；各峰的相对保留时间分别为：（1) 〇. 202?0. 214、（2) 0. 266?0. 282、（3) 0. 33(Γ〇. 355、 (4)0. 499?0· 518、（5)0· 561 ?0· 577、（6)0· 631 ?0· 642、（7)0· 680?0· 688、（8)0· 788?0· 818、 (9) 0· 827?0· 860、（10) 0· 873?0· 914、（S) 1· 000、（12) 1· 442?1· 481、（13) 1· 503?1· 536、 (14) L 854?L 889 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) (λ 320?L 754、（2) (λ 251 ?L 468、（3) 0· 069?0· 749、（4)0· 19(Γ〇· 995、（5)0· 122?3· 073、（6)0· 162?1· 882、（7)0· 123?0· 745、（8) 0· 102?2· 079、（9) 3· 572?12. 508、（10) 0· 118?2· 177、（S) 1· 000、（12) 0· 225?1· 730、（13) 0· 055?0· 376、（ 14) 0· 103?1· 180。
9. 根据权利要求1所述的裸花紫珠中间体的指纹图谱检测方法建立的一种裸花紫珠 中间体的标准指纹图谱，其特征在于所述的标准指纹图谱在327nm检测波长下，标准指纹 图谱具有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花 糖苷；各峰的相对保留时间分别为：（1)0. 215?0· 223、（2) 0. 278?0· 295、（3) 0. 338?0· 356、 (4)0. 470^0. 489,(5)0. 547^0. 560,(6)0. 620^0. 637,(7)0. 680^0. 694,(8)0. 806^0. 82U (9) 0· 854?0· 863、（10) 0· 879?0· 899、（S) 1. 000、（12) 1. 179?1. 192、（13) 1. 339?1. 357、 (14) L 454?L 477 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0. 089?594、（2)0. 143?L 017、（3) 0. 033、. 199、（4) 0. 025?1. 041、（5) 0. 156、. 885、（6) 0. 177、. 930、（7) 0. 035?0. 667、 (8) 0. 395?1. 514、（9)0· 787?4. 493、（10)0· 141 ?0· 723、（S) 1. 000、（12)0· 177?0· 925、（13) 0· 094?0· 483、（ 14) 0· 127?0· 795。
10. 根据权利要求1所述的裸花紫珠制剂的指纹图谱检测方法建立的一种裸花紫珠 制剂的标准指纹图谱，其特征在于所述的标准指纹图谱在327nm检测波长下，标准指纹图 谱具有14个特征峰，其中7号峰为连翘酯苷B，9号峰为毛蕊花糖苷，11号峰为异毛蕊花糖 苷；各峰的相对保留时间分别为：（1) 0. 204?0. 211、（2) 0. 268?0. 281、（3) 0. 346?0. 352、 (4)0. 47(Γ〇· 483、（5)0. 561 ?0· 575、（6)0. 632?0· 649、（7)0. 686?0· 703、（8)0. 815?0· 831、 (9) 0· 859?0· 874、（ 10) 0· 887?0· 896、（S) 1. 000、（ 12) 1. 183?1. 192、（ 13) 1. 270?1· 286、 (14) L 445?L 463 ;各峰的相对峰面积分别为：（1) 0· 063?490、（2) 0· 054?370、（3) 0· 013?0· 090、（4)0. 019?0· 075、（5)0. 039?0· 138、（6)0. 039?0· 095、（7)0. 211 ?1. 343、（8) 0· 055?0· 238、（9) 0· 571 ?1. 452、（10) 0· 036?0· 108、（S) 1. 000、（12) 0· 022?0· 113、（13) 0· 016?0· 072、（14) 0· 023?0· 117。
11. 根据权利要求1所述的裸花紫珠药材、中间体及其制剂的指纹图谱检测方法，其特 征在于，其中裸花紫珠制剂包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂、合剂、口服液。
【文档编号】G01N30/02GK104215698SQ201310209502
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年5月31日 优先权日:2013年5月31日
【发明者】卢凤来, 张妮瑜, 谷陟欣, 辛秀, 李典鹏, 袁莉, 黄胜颜, 冬兰, 朱丽颜, 小捷, 陈诗圣 申请人:九芝堂股份有限公司, 海南九芝堂药业有限公司, 湖南九芝堂医药科技有限公司