一种检测TORCH IgM抗体的方法及试剂盒和该试剂盒的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测TORCH?IgM抗体的试剂盒，所述试剂盒包括：包被有与TORCH?IgM抗体结合的抗体的固相载体，镧系元素标记的TORCH抗原，TORCH?IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液。本发明所述试剂盒能够在相对同一检测条件下同时检测TORCH病原体中多种病原体IgM抗体，灵敏度高，特异性强，精密度好，准确度高，用血量少，快速方便，有利于TORCH病原体感染的早期诊断；本方法又具有检测线性范围宽的特点，可以减少高值样本的稀释次数或稀释倍数，可以提高检测结果的准确性。
【专利说明】-种检测TORCH I gM抗体的方法及试剂盒和该试剂盒的制 备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种TORCH IgM抗体的方法及试剂盒，具体涉及一种基于多元标记时 间分辨荧光免疫法检测TORCH IgM抗体的方法及试剂盒和该试剂盒的制备方法。
【背景技术】
[0002] TORCH -词是美国学者Nahmias等于1971年将数种孕妇患病后将引起子宫内 胚胎（胎儿）感染引发流产、甚至造成先天缺陷或发育异常的病原体英文名词的第一个 字母组合而成。是指一组病原体：T即刚地弓形虫（Toxoplasma) ;0即others,比如乙 型肝炎病毒、HIV病毒、梅毒螺旋体等；R即风疫病毒（Rubellavirus) ;C即巨细胞病毒 (Cytomegalovirus) ;H 即单纯疱疫病毒（herpes simplex virus)。
[0003] 上述四种病原体具有以下几个共同点：1.可以通过胎盘垂直传播，引起胎儿宫内 感染。2.宫内感染后可能导致流产、早产、死胎和畸形。3.病原体感染对胎儿造成的危害， 与孕妇感染的孕龄相关。
[0004] TORCH综合征患者造成孕妇流产、死胎，出生后有严重的智力障碍，生活不能自理， 造成极大的精神及经济负担。我国每年约有26000个TORCH患儿出生，平均每小时就有3 人，对优生优育与人口素质构成极大的威胁，因此它的感染诊治工作引起普遍关注。
[0005] TORCH感染是严重危害新生儿健康的重要因素之一。可导致多器官损害及一系列 严重后遗症。因此，为减少病残儿的出生率及提高出生人口素质，临床工作者应进一步加 强对孕妇的宣传教育，积极做好TORCH感染的血清学筛查以便及早发现不良妊娠并及时处 理。对新生儿也应常规开展TORCH检测，了解新生儿TORCH感染情况，以便早干预、早治疗。 TORCH感染的血清学筛查对优生优育具有重要现实意义。
[0006] TORCH抗体检测试剂是指一类利用免疫学方法，如酶免疫技术、化学发光免疫分析 技术等，对育龄妇女、孕妇血清或血浆样本中，TORCH特异性抗体进行体外定性和/或半定 量和/或定量检测的试剂。结合临床表现和其他实验室指标，可作为TORCH感染辅助诊断 的指标之一，用于治疗方案的制定及免疫状态的评估。
[0007] TORCH抗体检测试剂，主要检测的Ig为病原体特异性IgG和IgM。在病原体感染 的初次体液免疫应答中（原发性感染），特异性IgM抗体首先出现，但其普遍反应短暂，一般 几周后即不易再测到。病原体特异性IgM抗体阳性常提示早期感染，可用于感染急性期的 辅助判断。特异性IgG抗体，在免疫接种后、原发性感染及再次感染时都可检出，且长时间 存在。
[0008] 实时荧光定量PCR能早期、灵敏地检测到TORCH病原体DNA/RNA，并可对抗TORCH 病原体治疗的效果监测，但是TORCH病原体DNA/RNA阳性只能反映 TORCH病原体某一片段 的存在，不能准确反映 TORCH病原体活动状态，对亚临床型或潜伏型感染，实时荧光定量 PCR结果可为阳性。
[0009] 目前用于检测TORCH IgM抗体常分别采用单一试剂盒，即一个试剂盒仅能检测 TORCH病原体中的一种病原体的IgM抗体，此种方式存在以下缺点：1.检测步骤繁多，特别 是手工法容易导致实验出现错误；2.加样时间长，检测时间长，费时费力；3.样本需要量 大，导致采血量增加。
[0010] 目前常用免疫方法有放射免疫分析法（radioimmunoassay, RIA)、酶 联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA)、化学发光 免疫分析法（chemiluminescent immunoassay, CLIA)、电化学发光免疫分析法 (electro-chemiluminescence immunoassay，ECLI)等。RIA 由于放射性污染，对环境和 操作者影响较大，批内批间变异较大，难于自动化；ELISA采用大分子酶标记，且酶容易 失活，这种依靠比色法或偏振光法的检测技术所受的干扰因素太多（即使是优秀的"管 式ELISA"，其试管形状的变化也会影响试验的结果），其灵敏度、线性和稳定性未能高于 RIA ;CLIA的化学发光通常是瞬间完成，发光峰值很快衰减，温度和pH值对发光有很大影 响，该类因素影响了该类方法的应用；ECLI仍为非开放系统，试剂依赖进口，试剂昂贵， 维修及检测成本高，这也限制了其推广应用。由于时间分辨荧光免疫法（time-resolved fluoroisnmunoassay，TRFIA)独特的技术原理，有区别于传统的免疫标记技术的特点和优 势，已被人们广泛接受，与现在广泛使用的RIA、ELISA、CLIA和ECLI相比，TRFIA克服了 RIA 放射性污染的不足、酶标记物的不稳定性和定量范围窄的缺陷、化学发光仅能一次发光、 一般荧光标记受环境干扰的难点和ECLI的非直接标记等缺点，Eu标记TRFIA的灵敏度可 达l(T 19m〇l/L，应用范围广，致使其试剂盒的生产和检测仪器的更新换代进展甚速，目前已 实现了分析技术的自动化，TRFIA已成为生物医学研究和临床超微量生化检验中一项最有 发展前景的分析手段。
【发明内容】
[0011] 本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种基于多元标记时 间分辨荧光免疫法检测TORCH IgM抗体的试剂盒，以及所述试剂盒的制备方法，本发明还提 供了采用所述试剂盒检测TORCH IgM抗体的方法。本发明建立了定量测定TORCH病原体中 多种病原体IgM抗体的时间分辨突光免疫多兀标记捕获法，同时提供了一种能够在相对同 一检测条件下同时检测TORCH病原体中多种病原体IgM抗体的定量测定试剂盒，所述TORCH 病原体包括弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒，其中所述单纯疱疹病毒为单纯 疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒Π 型中的至少一种。
[0012] 为实现上述目的，所采取的技术方案：一种检测TORCH IgM抗体的试剂盒，所述试 剂盒包括：包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体，镧系元素标记的TORCH抗原， TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液。
[0013] 优选地，所述包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体为包被有鼠抗人 IgM μ链单克隆抗体的固相载体。
[0014] 优选地，所述包被有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体是采用以下步骤制备 而得的：
[0015] 将鼠抗人IgM μ链单克隆抗体用包被缓冲液稀释至0. 01?10 μ g/mL，在固相载体 上进行包被，将固相载体洗涤1次，然后再用含1% BSA的50mmol/L、pH7. 8的Tris-HCl缓 冲液进行封闭，将固相载体甩干，晾干，真空包装，2?8°C保存备用。
[0016] 优选地，所述镧系元素标记的TORCH抗原为镧系元素1标记的弓形虫抗原、镧系元 素2标记的风疹病毒抗原、镧系元素3标记的巨细胞病毒抗原和镧系元素4标记的单纯疱 疹病毒抗原的组合，所述镧系元素1、镧系元素2、镧系元素3、镧系元素4分别选自铕、钐、 镝和铽中的一种，且所述镧系元素1、镧系元素2、镧系元素3、镧系元素4互不相同；所述 镧系元素标记的TORCH抗原中TORCH抗原为TORCH天然抗原和TORCH重组抗原中的至少一 种。
[0017] 优选地，所述镧系元素4标记的单纯疱疹病毒抗原中单纯疱疹病毒抗原为单纯疱 疹病毒I型抗原和单纯疱疹病毒Π 型抗原中的至少一种。
[0018] 优选地，所述镧系元素4标记的单纯疱疹病毒抗原中单纯疱疹病毒抗原为单纯疱 疹病毒Ι+Π 型重组抗原。所述单纯疱疹病毒I+II型重组抗原上同时含有单纯疱疹病毒I 型抗原和单纯疱疹病毒Π 型抗原。
[0019] 优选地，所述镧系元素标记的TORCH抗原是参照相应的镧系元素标记试剂盒说明 书制备而成的。
[0020] 本发明还提供了一种采用上述所述试剂盒检测TORCH IgM抗体的方法，所述方法 包括以下步骤：
[0021] (1)用实验缓冲液配制镧系元素标记的TORCH抗原，用纯化水将浓缩洗液稀释成 工作洗涤液；
[0022] (2)将待检样本用样本稀释液稀释，然后在包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体 的固相载体上预设的校准品孔、样本孔相应位置分别加入TORCH IgM抗体校准品、预先稀释 好的待检样本；
[0023] (3)将步骤（2)中得到的固相载体在室温条件下缓慢振荡孵育；
[0024] (4)用步骤⑴中工作洗涤液洗涤步骤（3)中孵育后的固相载体；
[0025] (5)分别向步骤（4)中获得的固相载体上校准品孔和样本孔中加入步骤⑴中配 制好的镧系元素标记的TORCH抗原，在室温下孵育；
[0026] (7)用步骤⑴中工作洗涤液洗涤步骤（5)中孵育后的抗原固相载体；
[0027] (8)分别向步骤（7)中获得的固相载体上校准品孔和样本孔中加入增强液的共解 离剂部分，继续孵育，再加入增强液的共增强剂；
[0028] (9)孵育结束后，采用相应的镧系元素窗口程序进行检测并分析。
[0029] 优选地，所述步骤（2)中包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体为包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体；所述步骤⑴中镧系元素标记的TORCH抗原为 镧系元素1标记的弓形虫抗原、镧系元素2标记的风疹病毒抗原、镧系元素3标记的巨细胞 病毒抗原和镧系元素4标记的单纯疱疹病毒抗原的组合，所述镧系元素1、镧系元素2、镧系 元素3、镧系元素4分别选自铕、钐、镝和铽中的一种，且所述镧系元素1、镧系元素2、镧系元 素3、镧系元素4互不相同；所述步骤（1)中镧系元素标记的TORCH抗原中TORCH抗原为 TORCH天然抗原和TORCH重组抗原中的至少一种。
[0030] 本发明还提供了一种上述所述试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0031] (1)制备包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体，镧系元素标记的TORCH 抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液；
[0032] (2)贴标签；
[0033] (3)组装为试剂盒。
[0034] 本发明的有益效果在于：在TORCH病原体感染的初次体液免疫应答中（原发性感 染），特异性IgM抗体首先出现，但其普遍反应短暂，一般几周后即不易再测到。病原体特异 性IgM抗体阳性常提示早期感染，检测TORCH病原体特异性IgM抗体可用于TORCH病原体 感染急性期的辅助判断。
[0035] 本发明采用鼠抗人IgMy链单克隆包被固相载体，避免了以往的IgM抗体试剂采 用间接法检测IgM抗体时因同型抗体间对抗原位点的竞争而导致敏感性差的问题，也避免 如类风湿因子（rheumatoid factor, RF)等引起的非特异性反应。
[0036] 本发明采用时间分辨荧光免疫法多元标记技术，研制了一种能够在相对同一检测 条件下同时检测TORCH病原体中多种病原体IgM抗体的定量测定试剂盒，降低了由于人为 原因造成的检测误差，减少了操作人员的工作量，也减少了样本用量。妊娠期发生初次感染 或复发感染，体内产生IgG或IgM是一个急剧变化的过程，只有通过定量分析浓度变化才能 检测到。定量分析有助于发现假阳性或假阴性结果。对于那些孕前未做过基础免疫状况评 估的孕妇，选择两个时间点（T1，T2)检测IgG或IgM浓度（C1，C2)，计算单位时间内浓度变 化梯度，能有效的发现机体受到病毒攻击而发生的特异性免疫反应，但目前还没有参考值， 较为常用的是C2/C1 > 4倍。所有这些必须以定量检测为前提。
[0037] 本发明所述试剂盒能够在相对同一检测条件下同时检测TORCH病原体中多种 病原体IgM抗体，灵敏度高，特异性强，精密度好，准确度高，用血量少，快速方便，有利于 TORCH病原体感染的早期诊断；本方法又具有检测线性范围宽的特点，可以减少高值样本 的稀释次数或稀释倍数，可以提高检测结果的准确性。
【专利附图】
【附图说明】
[0038] 图1为采用本发明所述试剂盒检测TORCH病原体IgM抗体时同一检测微孔内反应 体系的一种实施例的原理不意图；
[0039] 图中1为鼠抗人IgMy链单克隆抗体,2为为弓形虫病毒IgM抗体,3为风疫病毒 IgM抗体,4为巨细胞病毒IgM抗体,5为单纯疱疫病毒IgM抗体,6为铕（Eu3+)标记的弓形 虫重组抗原，7为杉（Sm 3+)标记的风疫病毒重组抗原,8为镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒重组 抗原，9为铽（Te 3+)标记的单纯疱疹病毒I+II型重组抗原。
【具体实施方式】
[0040] 为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明 作进一步说明。实施例中的鼠抗人IgMy链单克隆抗体、弓形虫重组抗原、弓形虫天然抗 原、风疹病毒重组抗原、风疹病毒天然抗原、巨细胞病毒天然抗原、巨细胞病毒重组抗原、单 纯疱疹病毒I型天然抗原、单纯疱疹病毒I型重组抗原、单纯疱疹病毒II型天然抗原、单纯 疱疹病毒II型重组抗原、单纯疱疹病毒I+II型重组抗原购于深圳市菲鹏生物股份有限公 司；固相载体为96孔微孔空白板（8X12孔）购于深圳市金灿华实业有限公司；铕（Eu 3+) 标记试剂盒、钐（Sm3+)标记试剂盒、镝（Dy3+)标记试剂盒和铽（Te 3+)标记试剂盒购于芬兰 Wallac公司；琼脂糖凝胶Sepharose CL-6B购于瑞典Pharmacia公司；人类优生优育病毒 (TORCH)系列检测试剂盒（酶联免疫法）由德国维润赛润研发有限公司提供；共荧光增强 液、浓缩洗液、实验缓冲液、FWZ- I型微量振荡仪、DEM- III型全自动酶标洗板均由广州市丰 华生物工程有限公司提供。VictorTM2D1420型TRFIA仪购于美国Perkin Elmer公司。其 他试剂为国产分析纯。所述单纯疱疹病毒I+II型重组抗原上同时含有单纯疱疹病毒I型 抗原和单纯疱疹病毒II型抗原。
[0041] 实施例1
[0042] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，铕（Eu3+)标记的弓形虫重组抗原，钐（Sm 3+)标记 的风疹病毒重组抗原，镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒重组抗原，铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒 I型重组抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液；所 述增强液为共荧光增强液。
[0043] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0044] (1)包被有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体：将鼠抗人IgMy链单克隆抗 体用包被缓冲液稀释至〇. 01?10 μ g/mL，在固相载体上进行包被，将固相载体洗涤1次，然 后再用含1% BSA的50mmol/L pH 7. 8的Tris-HCl缓冲液进行封闭，将固相甩干，晾干，真 空包装，2?8°C保存备用。所述包被缓冲液为50mmol/L pH 9. 6的碳酸缓冲液，20mmol/L pH 4. 5的磷酸盐缓冲液，50mmol/LpH 7. 8的Tris-HCl缓冲液和50mmol/L pH 4. 5的柠檬 酸盐缓冲液中的一种。
[0045] TORCH IgM抗体校准品为TORCH病原体IgM抗体混合校准品，采用厂商选定测量程 序校准，将TORCH病原体IgM抗体原料用含有10g/L BSA的50mmol/L pH 7. 8的Tris-HCl 缓冲液稀释成A、B、C、D、E和F 6个校准品。由于目前尚无弓形虫IgM抗体正式的国际标 准品和定量的国家标准品，弓形虫IgM抗体校准品采用德国维润赛润研发有限公司的弓形 虫IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标化，所述弓形虫IgM 抗体在A、B、C、D、E和F 6个校准品中的浓度分别为0,2,8,32，128, 256U/mL。由于目前尚 无风疫病毒IgM抗体正式的国际标准品和定量的国家标准品，风疫病毒IgM抗体校准品采 用德国维润赛润研发有限公司的风疹病毒IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标 仪组成的测量程序标化，所述风疹病毒IgM抗体在A、B、C、D、E和F 6个校准品中的浓度分 别为0, 2,8, 32,128, 256U/mL。由于目前尚无巨细胞病毒（CMV) IgM抗体国际标准品和定量 的国家标准品，巨细胞病毒IgM抗体校准品采用德国维润赛润研发有限公司的巨细胞病毒 IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标化，所述巨细胞病毒 IgM抗体在A、B、C、D、E和F 6个校准品中的浓度分别为0,2,8,32，128,256 U/mL。由于目 前尚无单纯疱疹病毒（HSV) IgM国际标准品和定量的国家标准品，单纯疱疹病毒I型IgM抗 体校准品以德国维润赛润研发有限公司的单纯疱疹病毒I型IgM抗体定量检测试剂盒（酶 联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标化，所述单纯疱疹病毒I型IgM抗体在A、B、C、D、E 和F6个校准品中的浓度分别为0, 2,8, 32,128, 256U/mL。
[0046] 铕（Eu3+)标记的弓形虫重组抗原：按照铕（Eu3+)标记试剂盒说明书操作。将1. Omg 的弓形虫抗原加入Millipore公司的截留分子量为10000的超滤离心管中，8000r/min离 心5?6min，再用标记缓冲液重复离心洗涤3?5次，将处理得到的200 μ L弓形虫抗原加 入到1. 〇mg的预先用标记缓冲液溶解的铕（Eu3+)标记试剂DTTA-EuNa充分混匀，2?8°C振 荡孵育24?72h。反应液经分别用50mmol/L pH 7. 80Tris_HCl缓冲液平衡的Sepharose CL-6B柱（lcmX4〇Cm)层析，在A280下监测收集第一洗脱峰。然后采用棋盘方阵滴配法确定 最适工作浓度，然后用含有〇· 2%BSA、30ppm Procline-300 的ρΗ7· 8 的 50mmol/L Tris-HCl 缓冲液稀释成最适工作浓度的1/20倍即为所述铕（Eu3+)标记的弓形虫重组抗原。
[0047] 钐（Sm3+)标记的风疹病毒重组抗原：按照钐（Sm3+)标记试剂盒说明书操作。将 1. 〇mg的风疹病毒重组抗原加入Millipore公司的截留分子量为10000的超滤离心管中， 8000r/min离心5?6min，再用标记缓冲液重复离心洗漆3?5次，将处理得到的200 μ L风 疹病毒重组抗原加入到1. Omg的预先用标记缓冲液溶解的钐（Sm3+)标记试剂DTTA-SmNa充 分混匀，2?8°C振荡孵育24?72h。反应液经分别用50mmol/L pH 7. 80Tris-HCl缓冲液 平衡的Sepharose CL-6B柱（lcmX40cm)层析，在A280下监测收集第一洗脱峰。然后采用 棋盘方阵滴配法确定最适工作浓度，然后用含有〇. 2% BSA、30ppm Procline-300的pH7. 8 的50mmol/L Tris-HCl缓冲液稀释成最适工作浓度的1/20倍即为所述钐（Sm3+)标记的风 疹病毒重组抗原。
[0048] 镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒重组抗原：按照镝（Dy3+)标记试剂盒说明书操作。将 1. Omg的巨细胞病毒重组抗原加入Millipore公司的截留分子量为10000的超滤离心管中， 8000r/min离心5?6min，再用标记缓冲液重复离心洗漆3?5次，将处理得到的200μ L 巨细胞病毒抗原加入到l.Omg的预先用标记缓冲液溶解的镝（Dy3+)标记试剂DTTA-DyNa充 分混匀，2?8°C振荡孵育24?72h。反应液经分别用50mmol/L pH 7. 80Tris-HCl缓冲液 平衡的Sepharose CL-6B柱（lcmX40cm)层析，在A280下监测收集第一洗脱峰。然后采用 棋盘方阵滴配法确定最适工作浓度，然后用含有〇. 2% BSA、30ppm Procline-300的pH7. 8 的50mmol/L Tris-HCl缓冲液稀释成最适工作浓度的1/20倍即为所述镝（Dy3+)标记的巨 细胞病毒重组抗原。
[0049] 铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒I型重组抗原：按照铽（Te3+)标记试剂盒说明书 操作。将1. Omg的单纯疱疹病毒重组抗原加入Millipore公司的截留分子量为10000的 超滤离心管中，8000r/min离心5?6min，再用标记缓冲液重复离心洗涤3?5次，将 处理得到的200 μ L单纯疱疹病毒抗原加入到1. Omg的预先用标记缓冲液溶解的Te3+标 记试剂DTTA-TeNa充分混匀，2?8°C振荡孵育（24?72)h。反应液经分别用50mmol/L pH 7. 80Tris-HCl缓冲液平衡的S印harose CL-6B柱（lcmX40cm)层析，在A280下监测 收集第一洗脱峰。然后采用棋盘方阵滴配法确定最适工作浓度，然后用含有0.2% BSA、 30ppmProcline-300的ρΗ7· 8的50mmol/L Tris-HCl缓冲液稀释成最适工作浓度的1/20倍 即为所述铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒I型重组抗原。
[0050] 样本稀释液：在洁净容器中准确加入6. 06g三羟甲基氨基甲烷（Tris)，8. 50g氯 化钠，加入适量的纯化水搅拌溶解后，加入3mL浓盐酸混匀，再向其中加入20mg硫柳汞，lmL Procline-300,50g牛血清白蛋白（BSA)，搅拌溶解后，加纯化水至1000mL。
[0051] 实验缓冲液：在洁净容器中准确加入6. 06g三羟甲基氨基甲烷（Tris)，8. 50g氯化 钠，加入适量的纯化水搅拌溶解后，加入3mL浓盐酸混匀，再向其中加入0. 05g曙红、5g聚乙 二醇 2000、0· Olmg EDTA、20mg 硫柳汞、lmLProcline-300、100mL 小牛血清、6mL Tween20,搅 拌溶解后，加纯化水至l〇〇〇mL ;分装成30mL/瓶。
[0052] 浓缩洗液：在洁净容器中准确加入6.06g三羟甲基氨基甲烷（Tris)，8.50g氯 化钠，加入适量的纯化水搅拌溶解后，加入3mL浓盐酸混匀，再向其中加入20mg亮蓝、4mL Tween20、lmL Procline-300,搅拌溶解后，加纯化水至lOOOmL ;分装成40mL/瓶。
[0053] 共荧光增强液：共荧光增强液含有共解离剂和共增强剂，共解离剂为在洁净容器 中准确加入120 μ mol精对苯二甲酸（PTA)、10 μ mol氧化钇用300mL的乙醇溶解，加入适量 的纯化水混匀，然后加入0. 5mL曲拉通-100、0. 8mL冰乙酸、0. 5g乙酸钠后充分溶解,用纯化 水定容至l〇〇〇mL。共增强剂为在洁净容器中准确加入0. 5mmol邻菲罗啉、0. 2mol三羟甲基 氨基甲烷（Tris)，加入适量的纯化水搅拌溶解后，再用纯化水定容至1000mL ;分装成40mL/ 瓶。
[0054] (2)贴标签。
[0055] (3)成品组装。
[0056] 实施例2
[0057] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，铽（Te3+)标记的弓形虫重组抗原，镝（Dy 3+)标记 的风疹病毒重组抗原，钐（Sm3+)标记的巨细胞病毒重组抗原，铕（Eu3+)标记的单纯疱疹病毒 II型重组抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液；所 述增强液为共荧光增强液。
[0058] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法中除了铽（Te3+)标记的弓形 虫重组抗原、镝（Dy3+)标记的风疫病毒重组抗原、杉（Sm 3+)标记的巨细胞病毒重组抗原和铕 (Eu3+)标记的单纯疱疹病毒II型重组抗原分别参照相应的镧系元素标记试剂盒说明书而 制备，TORCH IgM抗体校准品中由于目前尚无单纯疱疹病毒（HSV) IgM国际标准品和定量的 国家标准品，单纯疱疹病毒II型IgM抗体校准品以德国维润赛润研发有限公司的单纯疱疹 病毒II型IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标化，所述单 纯疱疹病毒Π 型IgM抗体在A、B、C、D、E和F6个校准品中的浓度分别为0, 2,8, 32,128， 256U/mL外，其他同实施例1的制备方法。
[0059] 实施例3
[0060] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，镝（Dy3+)标记的弓形虫重组抗原，铽（Te3+)标记 的风疹病毒重组抗原，铕（Eu 3+)标记的巨细胞病毒重组抗原，钐（Sm3+)标记的单纯疱疹病毒 I+II型重组抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液； 所述增强液为共荧光增强液。
[0061] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法中除了镝（Dy3+)标记的弓形 虫重组抗原、铽（Te3+)标记的风疹病毒重组抗原、铕（Eu 3+)标记的巨细胞病毒重组抗原和 钐（Sm3+)标记的单纯疱疹病毒I+II型重组抗原分别参照相应的镧系元素标记试剂盒说明 书而制备，TORCH IgM抗体校准品中由于目前尚无单纯疱疹病毒（HSV) IgM国际标准品和定 量的国家标准品，单纯疱疹病毒I+II型IgM抗体校准品以德国维润赛润研发有限公司的单 纯疱疹病毒Ι+Π 型IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标 化，所述单纯疱疹病毒Ι+Π 型IgM抗体在A、B、C、D、E和F 6个校准品中的浓度分别为0， 2,8, 32,128, 256U/mL外，其他同实施例1的制备方法。
[0062] 实施例4
[0063] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，钐（Sm3+)标记的弓形虫天然抗原，铽（Te3+)标记 的风疹病毒天然抗原，铕（Eu3+)标记的巨细胞病毒天然抗原，镝（Dy3+)标记的单纯疱疹病毒 I+II型重组抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液； 所述增强液为共荧光增强液。
[0064] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法中除了钐（Sm3+)标记的弓形 虫天然抗原，铽（Te3+)标记的风疹病毒天然抗原，铕（Eu 3+)标记的巨细胞病毒天然抗原，镝 (Dy3+)标记的单纯疱疹病毒I+II型重组抗原分别参照相应的镧系元素标记试剂盒说明书 而制备，TORCH IgM抗体校准品中由于目前尚无单纯疱疹病毒（HSV) IgM国际标准品和定量 的国家标准品，单纯疱疹病毒I+II型IgM抗体校准品以德国维润赛润研发有限公司的单纯 疱疹病毒Ι+Π 型IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标化， 所述单纯疱疹病毒I+II型IgM抗体在A、B、C、D、E和F 6个校准品中的浓度分别为0,2,8， 32，128,256U/mL外，其他同实施例1的制备方法。
[0065] 实施例5
[0066] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，铕（Eu3+)标记的弓形虫天然抗原，钐（Sm 3+)标记 的风疹病毒天然抗原，镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒天然抗原，铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒 I型天然抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液；所 述增强液为共荧光增强液。
[0067] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法中除了铕（Eu3+)标记的弓形 虫天然抗原、钐（Sm3+)标记的风疹病毒天然抗原、镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒天然抗原和铽 (Te3+)标记的单纯疱疹病毒I型天然抗原分别参照相应的镧系元素标记试剂盒说明书而制 备外，其他同实施例1的制备方法。
[0068] 实施例6
[0069] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，铕（Eu3+)标记的弓形虫天然抗原，钐（Sm 3+)标记 的风疹病毒天然抗原，镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒天然抗原，铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒 II型天然抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液；所 述增强液为共荧光增强液。
[0070] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法中除了铕（Eu3+)标记的弓 形虫天然抗原、钐（Sm3+)标记的风疹病毒天然抗原、镝（Dy 3+)标记的巨细胞病毒天然抗原 和铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒II型天然抗原分别参照相应的镧系元素标记试剂盒说明 书而制备，TORCH IgM抗体校准品中由于目前尚无单纯疱疹病毒（HSV) IgM国际标准品和定 量的国家标准品，单纯疱疹病毒II型IgM抗体校准品以德国维润赛润研发有限公司的单纯 疱疹病毒Π 型IgM抗体定量检测试剂盒（酶联免疫法）及酶标仪组成的测量程序标化，所 述单纯疱疹病毒II型IgM抗体在A、B、C、D、E和F 6个校准品中的浓度分别为0,2,8,32， 128,256U/mL外，其他同实施例1的制备方法。
[0071] 实施例7
[0072] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的一种实施例，所述试剂盒包括：包被 有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体，铕（Eu3+)标记的弓形虫天然抗原，钐（Sm 3+)标记 的风疹病毒天然抗原，镝（Dy3+)标记的巨细胞病毒天然抗原，铽（Te3+)标记的单纯疱疹病毒 I型重组抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液；所 述增强液为共荧光增强液。
[0073] 本发明所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法中除了铕（Eu3+)标记的弓形 虫天然抗原、钐（Sm3+)标记的风疹病毒天然抗原、镝（Dy 3+)标记的巨细胞病毒天然抗原和铽 (Te3+)标记的单纯疱疹病毒I型重组抗原分别参照相应的镧系元素标记试剂盒说明书而制 备外，其他同实施例1的制备方法。
[0074] 实施例8
[0075] 本发明所述检测戊型肝炎病毒抗体的试剂盒的使用方法，具体操作如下：
[0076] 1)试剂准备
[0077] 固相载体：将试剂及所需数量的鼠抗人IgM μ链单克隆抗体固相载体平衡至室温 (20?25°C )。余下的固相载体及时置入自封袋密闭并于2?8°C保存。
[0078] 洗涤工作液：将40mL浓缩洗液和960mL纯化水在干净的容器中混合，作为工作洗 涤液备用。纯化水敬请用户自备。
[0079] 镧系元素标记物混合工作液：使用前30min内配制，铕标记物、钐标记物、镝标记 物和铽标记物四种镧系元素标记物与实验缓冲液按体积比1:1:1:1:20加进洁净的同一个 一次性容器中并混匀；当次实验用完。在实施例3所述试剂盒的使用方法中，镝标记物为镝 (Dy 3+)标记的弓形虫重组抗原，铽标记物为铽（Te3+)标记的风疹病毒重组抗原，铕标记物为 铕（Eu 3+)标记的巨细胞病毒重组抗原，钐标记物为钐（Sm3+)标记的单纯疱疹病毒I+II型 重组抗原，其他实施例所述试剂盒的使用方法中铕标记物、钐标记物、镝标记物和铽标记物 分别为相应镧系元素标记的病原体抗原。
[0080] 2)试验操作
[0081] ①将待检样本用样本稀释液按1:100稀释，然后在包被有鼠抗人IgM μ链单克隆 抗体的固相载体上预设的校准品孔、样本孔相应位置分别加入100 μ LTORCH IgM抗体校准 品和100 μ L预先稀释好的待检样本；
[0082] ②将步骤①中得到的固相载体在室温条件下缓慢振荡孵育45min ;
[0083] ③第一步孵育结束后，小心将封片揭下并弃掉，用洗板机洗涤4次，拍干；
[0084] ④分别向步骤③中获得的固相载体上校准品孔和样本孔中加入100 μ 1配制好的 镧系元素标记物混合工作液，在室温下缓慢振荡孵育45min ;
[0085] ⑤第二步孵育结束后，小心将封片揭下并弃掉，用洗板机洗涤6次，拍干；
[0086] ⑥分别向步骤⑤中获得的固相载体上校准品孔和样本孔中加入100 μ 1加入增强 液的共解离剂部分，继续孵育5min，再加入100 μ 1增强液的共增强剂；
[0087] ⑦步骤⑥中获得的固相载体于室温下缓慢振荡5min后，在相应的镧系元素检测 窗口检测，铕标记物、钐标记物、镝标记物、铽标记物分别在铕窗口、钐窗口、镝窗口、铽窗口 检测，在30min内完成检测并进行分析。
[0088] 实施例9
[0089] 本发明所述试剂盒的性能分析
[0090] (1)弓形虫IgM抗体定量测定的分析性能：
[0091] ①最低检出量（稀释度）：用6份企业灵敏度参考品进行检定，S1?S3检测结果 S/CO或COI彡L 0, S4、S5检测结果S/CO或COI < L 0或彡L 0, S6检测结果S/CO或COI < 1. 0 ；
[0092] ②重复性：用1份企业精密度参考品检定，试剂盒批内变异系数CV彡15. 0% (n = 10);
[0093] ③阴性参考品符合率：用10份企业阴性参考品检定，结果均为阴性；
[0094] ④阳性参考品符合率：用10份企业阳性参考品检定，结果均为阳性；
[0095] ⑤稳定性试验：取有效期内试剂盒于37°C放置至少6天（有效期为1年）检测， 其性能无明显改变。
[0096] ⑥交叉反应：检测以下样本均无交叉反应，弓形虫IgG抗体高浓度样本10例，风 疹病毒IgM抗体阳性样本5例，巨细胞病毒IgM抗体阳性样本5例，单纯疱疹病毒I型IgM 抗体阳性样本5例，单纯疱疹病毒II型IgM抗体阳性样本5例，抗核抗体阳性样本5例，类 风湿因子阳性样本5例，异嗜细胞抗体阳性样本5份，胆红素样本5份，甘油三酯样本5份， 溶血样本15份，EB病毒IgM抗体阳性样本5例，乙型肝炎病毒表面抗体阳性（彡100mIU/ mL)样本20例；乙型肝炎病毒e抗体阳性（彡4NCU/mL) 20例；乙型肝炎病毒核心抗体IgM 阳性200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗体阳性样本5例，水痘带状疱疹病毒IgM 抗体阳性样本5例，肺炎支原体IgM抗体阳性样本10例，大肠杆菌BL21抗体（2. 50mg/mL) 1 份（仅代表本实验室研究结果）。
[0097] ⑦干扰物质：胆红素浓度818ymol/L，血红蛋白浓度180g/L，甘油三酯浓度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 浓度 2. 2mg/mL，草酸钾浓度 2mg/mL，肝素浓度 15U/mL，枸橼酸钠 浓度21. 8mmol/L，氟化钠浓度lmg/mL对检测结果无干扰性。
[0098] ⑧IgM破坏性试验：10份含有特异性弓形虫（Τ0Χ) IgM抗体的样本，采用0· 2 mol/ L的2-巯基乙醇37°C灭活IgM抗体2h后对比检测处理前和处理后的样本，处理样本后，IgM 抗体检测结果均为阴性。
[0099] 2)风疹病毒IgM抗体定量测定的分析性能：
[0100] ①最低检测限：用国家参考品或标化的企业参考品检定，3份最低检测限参考品 (L1?L3)，L1和L2检测结果均为阳性，L3检测结果为阴性或阳性；
[0101] ②重复性：用国家参考品或标化的企业参考品检定，试剂盒批内变异系数（CV)不 大于 15. 0% (η = 10);
[0102] ③阴性参考品符合率：用10份国家参考品或标化的企业参考品检定，结果均为阴 性；
[0103] ④阳性参考品符合率：用5份国家参考品或标化的企业参考品检定，结果均为阳 性；
[0104] ⑤稳定性试验：试剂盒自成品生产之日起于37°C放置6天（有效期为12个月）； 成品剩余效期内，则按37°C放置6天有效期为12个月推算37°C放置的时间进行检测，其性 能无明显改变。
[0105] ⑥交叉反应：检测以下样本均无交叉反应，风疹病毒IgG抗体高浓度样本10例，弓 形虫IgM抗体阳性样本5例，巨细胞病毒IgM抗体阳性样本5例，单纯疱疹病毒I型IgM 抗体阳性样本5例，单纯疱疹病毒II型IgM抗体阳性样本5例，抗核抗体阳性样本5例，类 风湿因子阳性样本5例，异嗜细胞抗体阳性样本5份，胆红素样本5份，甘油三酯样本5份， 溶血样本15份，EB病毒IgM抗体阳性样本5例，乙型肝炎病毒表面抗体阳性（彡lOOmlU/ mL)样本20例；乙型肝炎病毒e抗体阳性（彡4NCU/mL)20例；乙型肝炎病毒核心抗体IgM 阳性（> 200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗体阳性样本5例，水痘带状疱疹病毒IgM 抗体阳性样本5例，肺炎支原体IgM抗体阳性样本10例，大肠杆菌BL21抗体（2. 50mg/mL) 1 份（仅代表本实验室研究结果）。
[0106] ⑦干扰物质：胆红素浓度818ymol/L，血红蛋白浓度180g/L，甘油三酯浓度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 浓度 2. 2mg/mL，草酸钾浓度 2mg/mL，肝素浓度 15U/mL，枸橼酸钠 浓度21. 8mmol/L，氟化钠浓度lmg/mL对检测结果无干扰性。
[0107] ⑧IgM破坏性试验：10份含有特异性风疹病毒（RV) IgM抗体的样本，采用0. 2mol/ L的2-巯基乙醇37°C灭活IgM抗体2h后对比检测处理前和处理后的样本，处理样本后，IgM 抗体检测结果均为阴性。
[0108] (3)巨细胞病毒IgM抗体定量测定的分析性能：
[0109] ①最低检测限：用国家参考品或标化的企业参考品检定，S1?S3检测为阳性，S4、 S5检测为阴性或阳性，S6检测为阴性；
[0110] ②重复性：用国家参考品或标化的企业参考品检定，试剂盒批内变异系数 CV ^ 15. 0% (η = 10)；
[0111] ③阴性参考品符合率：用9份国家参考品或标化的企业阴性参考品检定，结果均 为阴性；
[0112] ④阳性参考品符合率：用5份国家参考品或标化的企业阳性参考品检定，结果均 为阳性；
[0113] ⑤稳定性试验：试剂盒自成品生产之日起于37°C放置6天（有效期为12个月）； 成品剩余效期内，则按37°C放置6天有效期为12个月推算37°C放置的时间进行检测，其性 能无明显改变。
[0114] ⑥交叉反应：检测以下样本均无交叉反应，巨细胞病毒IgG抗体高浓度样本10例， 风疹病毒IgM抗体阳性样本5例，弓形虫IgM抗体阳性样本5例，单纯疱疹病毒I型IgM抗 体阳性样本5例，单纯疱疹病毒II型IgM抗体阳性样本5例，抗核抗体阳性样本5例，类 风湿因子阳性样本5例，异嗜细胞抗体阳性样本5份，胆红素样本5份，甘油三酯样本5份， 溶血样本15份，EB病毒IgM抗体阳性样本5例，乙型肝炎病毒表面抗体阳性（彡lOOmlU/ mL)样本20例；乙型肝炎病毒e抗体阳性（彡4NCU/mL) 20例；乙型肝炎病毒核心抗体IgM 阳性200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗体阳性样本5例，水痘带状疱疹病毒IgM 抗体阳性样本5例，肺炎支原体IgM抗体阳性样本10例，大肠杆菌BL21抗体（2. 50mg/mL) 1 份（仅代表本实验室研究结果）。
[0115] ⑦干扰物质：胆红素浓度818ymol/L，血红蛋白浓度180g/L，甘油三酯浓度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 浓度 2. 2mg/mL，草酸钾浓度 2mg/mL，肝素浓度 15U/mL，枸橼酸钠 浓度21. 8mmol/L，氟化钠浓度lmg/mL对检测结果无干扰性。
[0116] ⑧IgM破坏性试验：10份含有特异性巨细胞病毒（CMV) IgM抗体的样本，采用 0. 2mol/L的2-巯基乙醇37°C灭活IgM抗体2h后对比检测处理前和处理后的样本，处理样 本后，IgM抗体检测结果均为阴性。
[0117] (4)单纯疱疹病毒I+II型IgM抗体定量测定的分析性能：
[0118] ①最低检测限：用企业参考品检测，S1?S3均为阳性，S4、S5为阴性或阳性，S6为 阴性；
[0119] ②重复性：用企业参考品检测，试剂盒批内变异系数CV彡15% (η = 10);
[0120] ③阴性参考品符合率：用20份企业阴性参考品检测，检测结果应为阴性；
[0121] ④阳性参考品符合率：用10份企业阳性参考品进行检测，检测结果为阳性；
[0122] ⑤稳定性试验：试剂盒自成品生产之日起于37°C放置6天（有效期为12个月）； 成品剩余效期内，则按37°C放置6天有效期为12个月推算37°C放置的时间进行检测，其性 能无明显改变。
[0123] ⑥交叉反应：检测以下样本均无交叉反应，单纯疱疹病毒I型IgG抗体高浓度样本 10例，单纯疱疹病毒II型IgG抗体高浓度样本10例，风疹病毒IgM抗体阳性样本5例，弓 形虫IgM抗体阳性样本5例，巨细胞病毒IgM抗体阳性样本5例，抗核抗体阳性样本5例，类 风湿因子阳性样本5例，异嗜细胞抗体阳性样本5份，胆红素样本5份，甘油三酯样本5份， 溶血样本15份，EB病毒IgM抗体阳性样本5例，乙型肝炎病毒表面抗体阳性（彡100mIU/ mL)样本20例；乙型肝炎病毒e抗体阳性（彡4NCU/mL) 20例；乙型肝炎病毒核心抗体IgM 阳性200PEI U/L) 20例；甲型肝炎病毒IgM抗体阳性样本5例，水痘带状疱疹病毒IgM 抗体阳性样本5例，肺炎支原体IgM抗体阳性样本10例，
[0124] 大肠杆菌 BL21 抗体（2. 50mg/mL) 1 份。
[0125] ⑦干扰物质：胆红素浓度818ymol/L，血红蛋白浓度180g/L，甘油三酯浓度 21. 54mmol/L，EDTA-K2-2H20 浓度 2. 2mg/mL，草酸钾浓度 2mg/mL，肝素浓度 15U/mL，枸橼酸钠 浓度21. 8mmol/L，氟化钠浓度lmg/mL对检测结果无干扰性。
[0126] ⑧IgM破坏性试验：10份含有特异性单纯疱疹病毒I+II型IgM抗体的样本，采用 0. 2mol/L的2-巯基乙醇37°C灭活IgM抗体2h后对比检测处理前和处理后的样本，处理样 本后，IgM抗体检测结果均为阴性。
[0127] 实施例10
[0128] 本发明所述试剂盒与德国维润赛润研发有限公司的产品比较，比较结果如下：
[0129] 表1弓形虫IgM抗体检测结果
[0130]
【权利要求】
1. 一种检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体，镧系元素标记的TORCH抗原，TORCH IgM抗体校准品，样本 稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液。
2. 根据权利要求1所述的检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述包被有与 TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体为包被有鼠抗人IgMy链单克隆抗体的固相载体。
3. 根据权利要求2所述的检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述包被有鼠抗 人IgMy链单克隆抗体的固相载体是采用以下步骤制备而得的： 将鼠抗人IgM μ链单克隆抗体用包被缓冲液稀释至0. 01?10 μ g/mL，在固相载体上进 行包被，将固相载体洗涤1次，然后再用含1% BSA的50mmol/L、pH 7. 8的Tris-HCl缓冲 液进行封闭，将固相载体甩干，晾干，真空包装，2?8°C保存备用。
4. 根据权利要求1所述的检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述镧系元素 标记的TORCH抗原为镧系元素1标记的弓形虫抗原、镧系元素2标记的风疹病毒抗原、镧系 元素3标记的巨细胞病毒抗原和镧系元素4标记的单纯疱疹病毒抗原的组合，所述镧系元 素1、镧系元素2、镧系元素3、镧系元素4分别选自铕、钐、镝和铽中的一种，且所述镧系元素 1、镧系元素2、镧系元素3、镧系元素4互不相同；所述镧系元素标记的TORCH抗原中TORCH 抗原为TORCH天然抗原和TORCH重组抗原中的至少一种。
5. 根据权利要求4所述的检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述镧系元素 4标记的单纯疱疫病毒抗原中单纯疱疫病毒抗原为单纯疱疫病毒I型抗原和单纯疱疫病毒 II型抗原中的至少一种。
6. 根据权利要求5所述的检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述镧系元素4 标记的单纯疱疹病毒抗原中单纯疱疹病毒抗原为单纯疱疹病毒Ι+Π 型重组抗原。
7. 根据权利要求4所述的检测TORCH IgM抗体的试剂盒，其特征在于，所述镧系元素标 记的TORCH抗原是参照相应的镧系元素标记试剂盒说明书制备而成的。
8. -种采用如权利要求1所述试剂盒检测TORCH IgM抗体的方法，其特征在于，所述方 法包括以下步骤： (1) 用实验缓冲液配制镧系元素标记的TORCH抗原，用纯化水将浓缩洗液稀释成工作 洗涤液； (2) 将待检样本用样本稀释液稀释，然后在包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固 相载体上预设的校准品孔、样本孔相应位置分别加入TORCH IgM抗体校准品、预先稀释好的 待检样本； (3) 将步骤（2)中得到的固相载体在室温条件下缓慢振荡孵育； (4) 用步骤（1)中工作洗涤液洗涤步骤（3)中孵育后的固相载体； (5) 分别向步骤（4)中获得的固相载体上校准品孔和样本孔中加入步骤（1)中配制好 的镧系元素标记的TORCH抗原，在室温下孵育； (7) 用步骤（1)中工作洗涤液洗涤步骤（5)中孵育后的抗原固相载体； (8) 分别向步骤（7)中获得的固相载体上校准品孔和样本孔中加入增强液的共解离剂 部分，继续孵育，再加入增强液的共增强剂； (9) 孵育结束后，采用相应的镧系元素窗口程序进行检测并分析。
9. 根据权利要求8所述的采用试剂盒检测TORCH IgM抗体的方法，其特征在于，所述 步骤（2)中包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体为包被有鼠抗人IgMy链单克 隆抗体的固相载体；所述步骤（1)中镧系元素标记的TORCH抗原为镧系元素1标记的弓形 虫抗原、镧系元素2标记的风疹病毒抗原、镧系元素3标记的巨细胞病毒抗原和镧系元素4 标记的单纯疱疹病毒抗原的组合，所述镧系元素1、镧系元素2、镧系元素3、镧系元素4分别 选自铕、钐、镝和铽中的一种，且所述镧系元素1、镧系元素2、镧系元素3、镧系元素4互不相 同；所述步骤（1)中镧系元素标记的TORCH抗原中TORCH抗原为TORCH天然抗原和TORCH 重组抗原中的至少一种。
10. -种如权利要求1所述检测TORCH IgM抗体的试剂盒的制备方法，其特征在于，所 述制备方法包括以下步骤： (1) 制备包被有与TORCH IgM抗体结合的抗体的固相载体，镧系元素标记的TORCH抗 原，TORCH IgM抗体校准品，样本稀释液，实验缓冲液，浓缩洗液以及增强液； (2) 贴标签； (3) 组装为试剂盒。
【文档编号】G01N33/533GK104155449SQ201410363969
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年7月28日 优先权日:2014年7月28日
【发明者】谭玉华, 范主桥, 李奕辉, 卢德祥 申请人:广州市丰华生物工程有限公司