一种基于末端延伸酶的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法与流程

文档序号:12112960阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于末端延伸酶的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一、电化学传感器的制备:(a)金电极的清洗:以NaBH4溶液浸泡后打磨,然后超声清洗;(b)自清洁表面的制备:室温下在金电极表面自组装3’末端标记巯基的癌胚抗原核酸适体捕获探针溶液,然后用HS-(CH2)11-EG2-OH(OEG)室温下浸泡封闭不小于4小时,得到自清洁表面;(c)信号探针的引入:在自清洁表面滴加癌胚抗原溶液反应不少于1小时,然后滴加信号探针溶液反应不少于1小时,制得有3’末端裸露的电极表面;(d)末端延伸:步骤(3)制得的电极表面在末端脱氧核糖核酸转移酶的作用下延伸出一条生物素标记的核酸长链,再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶反应不少于15分钟,通过生物素-亲和素相互作用,在电极表面修饰辣根过氧化物酶,制得电化学传感器;

步骤二、电化学信号检测:将制备完成的电化学传感器放在三电极体系中以循环伏安法和时间电流曲线法进行检测,得到电化学信号。

2.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤一(b)中,3’端巯基标记癌胚抗原捕获探针的浓度为0.2-5μmol/L,自组装时间不小于4小时;OEG的浓度为0.5-2mmol/L。

3.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤一(c)中,癌胚抗原核酸适体信号探针的浓度为0.2-5μmol/L。

4.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的方法,其特征在于,步骤一(d)中,末端脱氧核糖核酸转移酶的浓度为1U,生物素标记的核苷酸为生物素标记的腺嘌呤脱氧核糖核苷酸,浓度为5.7μmol/L,延伸时间不小于1小时。

5.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的方法,其特征在于,癌胚抗原核酸适体信号探针序列为:5’-CC CAT AGG GAA GTG GGG GA-3’。

6.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的方法,其特征在于,3’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体捕获探针序列为:5’-TTA ACT TAT TCG ACC ATA TTT TT-SH-3’。

7.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的方法,其特征在于,电化学检测体系为 三电极体系,工作电极为金电极,参比电极为Ag/AgCl电极,对电极为铂丝电极,其中,电解液为3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液,循环伏安法扫描高电位为0.7V,低电位为0V,扫描速度为0.1V/s;时间电流曲线法的扫描电位为0.1V,扫描时间为100s。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1