一种伊维菌素检测方法及试剂盒与流程

文档序号:12451293阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种伊维菌素检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包含有:(1)包被伊维菌素抗原的酶联板或包被伊维菌素特异性抗体的酶联板;(2)酶标记伊维菌素特异性抗体或酶标记伊维菌素抗原;(3)伊维菌素标准品溶液;(4)底物显色液;(5)终止液;(6)浓缩洗涤液和(7)浓缩复溶液;所述包被伊维菌素抗原的酶联板或包被伊维菌素特异性抗体的酶联板的制备步骤为:(1)用包被缓冲液将伊维菌素半抗原与载体蛋白偶联物或抗体以0.02-0.08µg/ml浓度稀释成抗原稀释液或抗体稀释液;(2)向酶联板的每孔中加入100µl已经稀释好的抗原稀释液或抗抗体稀释液,37℃温育2h,倾去包被液,用洗涤液洗涤4次,每次15-30s,拍干;(3)向酶联板的每孔中加入150-200µl封闭液,37℃温育1-2h,倾去孔内液体,干燥后用铝膜真空密封保存。

2.使用如权利要求1所述的试剂盒检测伊维菌素的方法,其特征在于,使用伊维菌素系列标准溶液浓度分别为:0.1ng/mL(0标准)、0.5ng/mL、0.8ng/mL、lng/mL、5ng/mL、10ng/mL,向酶联板中加入50μL/孔的伊维菌素系列标准浓度溶液或样品溶液,然后加入伊维菌素抗体工作液50μL/孔,室温(25℃)恒温孵育2.5h;2)洗涤:倾出孔中液体,向酶联板中加入200μL/孔的洗涤液,静置5min后拍干,重复三次;3)加酶标二抗:每孔加入酶标二抗工作液100μL,室温恒温孵育1.5h;4)洗涤:倾出孔中液体,向酶联板中加入280μL/孔的洗涤液,静置5min后拍干,重复三次;5)加发光液:每孔加入发光液l00μL;6)检测:用化学发光免疫分析仪测定每孔的发光强度;7)结果判定:以所测得的伊维菌素系列标准浓度溶液对应的孔的发光值,除以第一个标准(0标准)的发光值再乘以100,得到抑制率B/B0%,以抑制率为纵坐标,各伊维菌素系列标准浓度溶液浓度的对数为横坐标作标准曲线,根据样品溶液所对应的孔的发光值和所得标准曲线,计算得到样品溶液的浓度。

3.根据权利要求1所述的所述的伊维菌素检测试剂盒,其特征在于,缓冲液为pH值9.6、0.05mol/L、含有0.5%甲醇的碳酸盐缓冲液;所述的洗涤液为含有8%-15%吐温-20℃的去离子水或超纯水;所述的封闭液为含有8%-15%的脱脂奶和1%惰性蛋白的溶液;所述的载体蛋白为兔血清蛋白、人血清白蛋白、人血纤维蛋白或血蓝蛋白。

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