一种检测PKU和CAH的串联质谱试剂盒制备及其应用的制作方法

文档序号:12657499阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种检测PKU和CAH的串联质谱试剂盒,其特征在于该试剂盒由校准品、质控品、内标准液、萃取液、流动相A液、流动相B液、96孔微孔板、操作说明书及其分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒组成;所述试剂盒各组成成分及其配制方法分别如下所述:

1)校准品:在抗凝的正常人全血中同时加入适量的苯丙氨酸和17-羟孕酮原料,配制成包括6个浓度剂量点的校准品,滴制成滤纸干血片,即校准品A~F;

2)质控品:在抗凝的正常人全血中同时加入适量的苯丙氨酸和17-羟孕酮原料,配制成包括高、低2个浓度的,滴制成滤纸干血片,即质控品C1和C2;

3)内标准品:使用50%~90%甲醇作为稀释液,将13C6苯丙氨酸和D8 17-羟孕酮稀释至终浓度为300ng/mL~400ng/mL;

4)萃取液:由80%甲醇与草酸配制而成,草酸的含量为1nM%~4nM;

5)流动相A:由甲酸与纯化水配制而成,甲酸的含量为0.05%~0.2%;

6)流动相B:由甲酸与纯甲醇配制而成,甲酸的含量为0.05%~0.2%;

7)96孔微孔板:使用耐腐蚀的聚丙乙烯材料制成,包括无包被的96孔微孔板作为反应板和无包被的96孔微孔板作为进样板;

8)封片:用于实验过程尽量减少有机溶剂的挥发。

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征还在于所述校准品A~F分别对应的苯丙氨酸和17-羟孕酮浓度依次为:1)苯丙氨酸:0.5mg/dL、1.0mg/dL、2.0mg/dL、4.0mg/dL、8.0mg/dL、16.0mg/dL;2)17-羟孕酮:0nmol/L、15nmol/L、30nmol/L、60nmol/L、120nmol/L、240nmol/L。

3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征还在于所述的质控品C1和C2分别对应的苯丙氨酸和17-羟孕酮浓度依次为:1)苯丙氨酸:1.5mg/dL、6.0mg/dL;2)17-羟孕酮:20nmol/L、90nmol/L)。

4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在还在于,所述试剂盒通过检测滤纸干血片中的代谢物苯丙氨酸和17α-羟孕酮,能够同时检测苯丙酮尿症和先天性肾上腺皮质增生症两种新生儿遗传代谢病。

5.一种检测PKU和CAH的串联质谱试剂盒的应用,其特征在于试剂盒的使用包括以下步骤:

1)内标工作液的配制:按内标准品∶萃取液=1∶99把内标准品稀释100倍,配制成内标工作液;

2)孵育:用打孔器分别在校准品、质控品和待测样品滤纸干血片上轧下约3mm直径的小血片,按顺序把扎下的血片移入96孔微孔板反应板孔中,然后各孔加入100μL内标工作液,盖上封片,37℃振动孵育45分钟;

3)移液:从反应板孔中将75μL萃取后的溶液转移到96孔微孔板进样板孔内;

4)设置色谱和质谱条件:根据实际仪器型号分别设置高效液相色谱和串联质谱仪的工作参数和条件;

5)上机检测:选取萃取后液体各20μL进入高效液相色谱-串联质谱仪进行检测分析,并记录色谱图与检测样品中苯丙氨酸和17-羟孕酮的峰面积与内标峰面积;

6)检测结果的计算:绘制标准曲线和计算曲线回归方程,计算出样品中苯丙氨酸和17-羟孕酮的浓度。

6.根据权利要求1和5所述的试剂盒及其应用,其特征在还在于试剂盒适用于高效液相色谱-串联质谱仪。

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