本发明涉及植物多酚的提取及检测领域，尤其是一种六堡茶中茶多酚的提取及检测方法。
背景技术：
六堡茶在梧州市行政辖区范围内，选用苍梧县群体种、广西大中叶种及其分离、选育的品种、品系茶树(camelliasinensis(l.)o.kuntze)的鲜叶为原料，按特定的工艺进行加工，具有独特品质特征的黑茶。
六堡茶是黑茶中的一类属于温性茶。味甘性平是六堡茶的独有特点，六堡茶最显著的保健功效在于有效平衡肠道、调理肠胃。这也是六堡茶最具魅力的所在。中国茶叶学会对六堡茶进行了长期一系列研究得出。六堡茶在许多黑茶类当中保健养生的作用是最独特的一类。研究结论表面，六堡茶不仅具有减肥降脂作用外还具有其它八大功效作用。如，平衡体内肠道的菌群、抵抗炎症、调理肠胃、预防肝损伤、美容抗衰等八大作用。研究员们将六堡茶提取的物质在一定才程度上能够显著提高肠道内的乳杆菌和双歧杆菌，并降低肠道内的肠球菌及大肠杆菌等有害菌体。六堡茶的平衡肠道菌群改善了肠道使其更加适合菌群的生存环境的同时也对菌群进行了有益的调控。
茶多酚(greenteapolyphenols,简称gtp)是茶叶中儿茶素类、黄酮类、酚酸类和花色素类化合物的总称，约占茶叶干重的15％-25％。茶多酚中最重要的成分是黄烷醇类的多种儿茶素(catechins)。茶多酚分子中带有多个活性羟基(-oh)可终止人体中自由基链式反应，清除超氧离子，类似sod之功效，茶多酚对超氧阴离子与过氧化氢自由基的消除率达98％以上，呈显著的量效关系，其效果优于维生素e和c；茶多酚对细胞膜与细胞壁有保护作用，对脂质过氧化自由基的消除作用十分明显。茶多酚还有抑菌、茶菌作用，能有效降低大肠对胆固醇的吸收，防治动脉粥样硬化，是艾滋病毒(hiv)逆转酶的强抑制物，有增强机体免疫能力，抗肿瘤、抗辐射，具有抗氧化延缓衰老机理。毒理学研究证实，茶多酚安全、无毒。茶多酚在医药、日化、轻化、化妆品、食品、油脂、保健等诸多方面具有广阔的应用前景。
经过研究员的研究得出六堡茶中的茶多酚的营养价值以及保健功效更显著，本申请人根据六堡茶的特性以及在现有技术基础上提供一种提取茶多酚的方法。
茶多酚因为其独特的分子结构，有很强的氧化性以及螯合性，所以能很好的清除人体内的自由基，起到抗氧化、抗衰老的效果，同样也因为其分子结构中的酚羟基，所以茶多酚有很好的螯合性能，能够与蛋白质、金属离子相结合。据了解，茶多酚能与20多种离子产生络合，与其中10多种产生沉淀，再者，络合产物很多会产生明显的色泽变化。茶叶的许多作用都是因为茶叶中的茶多酚在起作用。茶多酚可用于食品保鲜防腐，无毒副作用，食用安全。茶多酚参入其他有机物(主要是食品)中，能够延长贮存期，防止食品褪色，提高纤维素稳定性，有效保护食品各种营养成份。
茶多酚的检测方法有很多：蛋白质沉淀法、金属离子螯合法、氧化法目前使用的比较多的就是gb/t8313-2008中的福林酚试剂法与gb/t8313-2002的酒石酸亚铁法。
酒石酸亚铁法也有自身的缺点：茶多酚是一种复合物，并非单一组分，其中包括了儿茶素、黄酮素、花青素等等，不同组分与铁离子络合颜色并非完全一致，所以对于一般成分比较复杂的植物多酚并不适用。
福林酚法：福林酚法主要利用福林酚的强氧化性，与多酚反应变蓝，在765nm处进行检测，且福林酚还用于蛋白质的检测中，正是因为这点，所以福林酚并不能有效区分茶多酚，一些还原性氨基酸，植物中非多酚类酸性物质，抗坏血酸等等，因此检测领域较为局限。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种六堡茶中茶多酚的提取方法及检测方法，以解决上述现有技术中的不足。
为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种六堡茶中茶多酚的提取方法，包括以下步骤：
步骤1：将茶叶于微波处理20～70s，之后将煎茶叶填充到提取柱内，使用温度-6～6℃的水以200～600ml/min的流速进行一次循环提取6～10min，水与茶叶的质量比例为5～8:3，得到提取液ⅰ和茶叶残渣ⅰ；
步骤2：于真空度0.02～0.08mpa条件下，使用温度45～65℃的水以500～800ml/min的流速进行二次循环提取茶叶渣ⅰ6～10min，水与茶叶的质量比例为10～15:3，得到提取液ⅱ和茶叶残渣ⅱ；
步骤3：将步骤一中得到的提取液ⅰ和步骤二中得到的提取液ⅱ混匀，得到茶多酚提取液；
步骤4：将茶叶残渣ⅱ利用超临界co2萃取方法于温度50～60℃，压力20～25mpa，co2流速150～180l/h的条件下萃取2～4h得到萃取液；
步骤5：将步骤4中得到的萃取液与步骤3中得到的茶多酚提取液混匀，干燥后得到茶多酚干粉。
需要说明的是，步骤1中，所述微波处理的辐照功率为500～1000w。
一种如上所述的一种六堡茶中茶多酚的检测方法，包括以下步骤：
步骤s1：0.1g硫酸亚铁+0.1g酒石酸钾钠溶于100ml蒸馏水中，得a试剂；
步骤s2：1.9870g磷酸氢二钾+0.1362g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，得茶多酚b试剂；
步骤s3：将样品与水按5：9-10的比例混合并充分摇匀后，备用即可；
步骤s4：取0.8ml样品液加入l0ml比色管中，分别加蒸馏水2.2ml、a试剂2ml，然后加茶多酚b试剂至l0ml刻度线，盖塞混匀，得样品管；
步骤s5：取3ml蒸馏水加入l0ml比色管中，加a试剂2ml，加茶多酚b试剂至10ml刻度线，盖塞混匀，得空白管；
步骤s6：样品的测试，使用ok-zsp36综合食品检测仪进行检测。
需要说明的是，所述的步骤s6具体的操作方法为：连接电源，将装有空白溶液的比色皿放入相应的检测通道，点击“校零”；然后将装有样品液的比色皿放入相应的检测通道，点击“启动测量”，当检测进入测量模块，点击“配置参数”，在弹出的“信息录入”窗口中选择检测项目“茶多酚”，然后点击“确定输入”，保存信息，系统自动返回测量界面，结果在下方显示时，检测完成，可进行下一个样品的检测。
本发明与传统方法相比，具有以下优点：
1.本发明对提取过程，以乙醇为提取溶剂，具有无污染，成本低、无毒害的优点；
2.采用超声波提取，对提取过程进行超声波强化处理，是利用超声波的机械破碎和空化作用，加速茶多酚浸提物从茶叶中向溶剂扩散的速度，缩短浸提时间，增加有效成分的提取率；
3.本发明具有工艺简单、回收率高、氧化损耗小、节时、节能、提取率高等优点，同时避免了有毒溶剂的使用，具有良好的工业推广价值。通入惰性气体，对超声提取得到易氧化的茶多酚进行保护，在此条件浸出率显著提高，且成品品质高。利用本发明的方法，提取茶多酚，一次提取率能达到28％以上，纯度达到96％；
4.本发明提供的检测茶多酚的方法检测特异性强，针对多酚类物质特异性反应设计，试剂用量少，使检测过程大大简便易行，检测灵敏度高，能够充分检测出茶多酚物质，检测耗时短，节省大量时间。
具体实施例
下面结合具体实施方式对本发明的权利要求书做进一步说明，但不构成对本发明的任何限制，任何以本发明的技术方案为基础所作出的有限次修改仍然属于本发明所要保护的内容。
实施例1
提取工艺：
步骤1：将茶叶于微波处理70s，之后将煎茶叶填充到提取柱内，使用温度-6℃的水以600ml/min的流速进行一次循环提取6min，水与茶叶的质量比例为5～3，得到提取液ⅰ和茶叶残渣ⅰ；
步骤2：于真空度0.02mpa条件下，使用温度65℃的水以500ml/min的流速进行二次循环提取茶叶渣ⅰ10min，水与茶叶的质量比例为10～15，得到提取液ⅱ和茶叶残渣ⅱ；
步骤3：将步骤一中得到的提取液ⅰ和步骤二中得到的提取液ⅱ混匀，得到茶多酚提取液；
步骤4：将茶叶残渣ⅱ利用超临界co2萃取方法于温度60℃，压力20mpa，co2流速180l/h的条件下萃取2h得到萃取液；
步骤5：将步骤4中得到的萃取液与步骤3中得到的茶多酚提取液混匀，干燥后得到茶多酚干粉。
需要说明的是，步骤1中，所述微波处理的辐照功率为1000w。
实施例2
检测工艺：
步骤s1：0.1g硫酸亚铁+0.1g酒石酸钾钠溶于100ml蒸馏水中，得a试剂；
步骤s2：1.9870g磷酸氢二钾+0.1362g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，得茶多酚b试剂；
步骤s3：将实施例1所得样品与水按5：9的比例混合并充分摇匀后，备用即可；
步骤s4：取0.8ml样品液加入l0ml比色管中，分别加蒸馏水2.2ml、a试剂2ml，然后加茶多酚b试剂至l0ml刻度线，盖塞混匀，得样品管；
步骤s5：取3ml蒸馏水加入l0ml比色管中，加a试剂2ml，加茶多酚b试剂至10ml刻度线，盖塞混匀，得空白管；
步骤s6：使用ok-zsp36综合食品检测仪进行检测：连接电源，将装有空白溶液的比色皿放入相应的检测通道，点击“校零”；然后将装有样品液的比色皿放入相应的检测通道，点击“启动测量”，当检测进入测量模块，点击“配置参数”，在弹出的“信息录入”窗口中选择检测项目“茶多酚”，然后点击“确定输入”，保存信息，系统自动返回测量界面，结果在下方显示时，检测完成，可进行下一个样品的检测。
以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。