本发明涉及化学成分检测技术领域，具体涉及维生素a含量的检测方法，尤其是动物肝脏中维生素a的检测方法。
背景技术：
维生素a(vitamina,va)亦名视黄醇,是人体生长发育及维持机体生命活动所不可缺少的脂溶性维生素。维生素a不但可以维持正常的视觉功能防止夜盲症,而且还具有维持上皮细胞结构的完整与健康、促进机体正常生长发育、增强机体的造血功能和预防癌症等十分重要的功能。近年来发现维生素a对脑发育和学习记忆都有不同程度的影响。
动物肝脏被誉为食品中的“维生素a之王”。近年来，动物肝脏中维生素a的检测方法主要是高效液相色谱法(hplc)和高效液相色谱-质谱法(hplc-ms)。
hplc和hplc-ms分离度高、重现性好，灵敏度高，准确性好，但其仪器比较昂贵，普通理化实验室不具备仪器条件，并且仪器操作时间比较长，一般需要半小时至一小时。
分光光度计是理化实验室基本仪器，仪器操作简单，检测速度比较快，结果可靠，重现性好。
技术实现要素：
发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种简单快速的动物肝脏中维生素a的测定方法。
技术方案：
采用分光光度法测定动物肝脏中维生素a含量的方法，包括步骤：
(1)配置维生素a标准溶液：准确称取维生素a乙酸酯100.0mg于500ml皂化瓶中，加60ml无水乙醇、40ml30％koh甲醇溶液，于100℃回流皂化30min，冷却后用乙醚反复提取3次，并用甲醇定容至100ml容量瓶中，得维生素a的标准溶液；
(2)分别量取0.05-1.0ml的维生素a标准液于比色管中，分别用三氯甲烷定容至5ml，各管加入乙酸酐1滴；将比色管移至分光光度计前，在650nm波长处，用空白溶液调节吸光度至零点，加入5ml三氯化锑-三氯甲烷溶液，立刻测定其吸光度；以吸光度为纵坐标，维生素a含量为横坐标绘制标准曲线图；
(3)对动物肝脏样品经过研磨、提取及浓缩的前处理，得到动物肝脏提取液；测定所得到的动物肝脏提取液的吸光度，根据下列公式计算样品中维生素a的含量；
其中，x-试样中维生素a的含量，单位为mg/100g；c-根据测得的动物肝脏提取液的吸光度由标准曲线图上查得试样中维生素a的含量，单位为μg/ml；m-试样质量，单位为g；v-提取后加三氯甲烷定量之体积，单位为ml；100-以每百克试样计。
所述样品的前处理包括：
研磨：精确称量5g试样，放入盛有15g无水硫酸钠的研钵中，研磨至试样中水分完全被吸收，并均质化；
提取：小心地将全部均质化试样移入带盖的三角瓶中，准确加入50ml乙醚，压紧盖子，用力震荡5min，使试样中维生素a溶于乙醚中，使其自行澄清；
浓缩：取澄清的乙醚提取液5ml，放入比色管中，在80℃水浴上抽气蒸干，立刻加入1ml三氯甲烷溶解残渣。
所述标准曲线的绘制如下：分别准确量取0ml、0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.5ml和1.0ml的维生素a标准液于7个比色管中，分别用三氯甲烷定容至5ml，各管加入乙酸酐1滴；将7个比色管移至分光光度计前，在650nm波长处，用空白溶液调节吸光度至零点，迅速加入5ml三氯化锑-三氯甲烷溶液，立刻测定其吸光度；以吸光度为纵坐标，维生素a含量为横坐标绘制标准曲线图。
在经过前处理后的样品试样中加入一定量的维生素a，然后按照标准曲线步骤测定样品中维生素a的浓度，从而得到样品的加标回收率。
有益效果：本发明与现有技术相比，该方法仪器操作简单，检测速度快，结果可靠，重现性好。
附图说明
图1为本发明的标准曲线及回归方程示意图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作更进一步的说明。
所使用的仪器包括uv-4802h型紫外可见分光光度计、al204分析天平、hh-6数显恒温水浴锅以及回流冷凝装置。
所采用的试剂包括三氯化锑，三氯甲烷，乙醚；维生素a乙酸酯(色谱纯99.99％)；三氯化锑-三氯甲烷溶液(50g/l)；维生素a标准溶液。
除非另有说明，本发明所用的试剂均为分析纯，所用水均为蒸馏水。
其中，三氯化锑-三氯甲烷溶液(50g/l)用三氯甲烷配制三氯化锑溶液，储存于棕色瓶中。
维生素a标准溶液的配制：准确称取维生素a乙酸酯100.0mg于500ml皂化瓶中，加60ml无水乙醇、40ml30％koh甲醇溶液，于100℃回流皂化30min,冷却后用乙醚反复提取3次，并用甲醇定容至100ml容量瓶中，得浓度为1.0mg/ml的贮备液。
实验方法：
样品的处理：
(1)研磨：精确称量5g动物肝脏，放入盛有15g无水硫酸钠的研钵中，研磨至试样中水分完全被吸收，并均质化。
(2)提取：小心地将全部均质化试样移入带盖的三角瓶中，准确加入50ml乙醚，压紧盖子，用力震荡5min，使试样中维生素a溶于乙醚中，使其自行澄清。
(3)浓缩：取澄清的乙醚提取液5ml，放入比色管中，在80℃水浴上抽气蒸干，立刻加入1ml三氯甲烷溶解残渣，获得动物肝脏提取液。
标准曲线的绘制：
分别准确量取0ml、0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.5ml和1.0ml的维生素a标准液于7个比色管中，分别用三氯甲烷定容至5ml，各管加入乙酸酐1滴。将7个比色管移至分光光度计前，在650nm波长处，用空白溶液调节吸光度至零点，迅速加入5ml三氯化锑-三氯甲烷溶液，立刻测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，维生素a含量为横坐标绘制标准曲线图。
样品的测定：
采用样品的处理与分析的方法，处理鸡肝、鸭肝和猪肝三种动物肝脏，然后按照标准曲线的绘制步骤测定样品，根据下列公式计算样品中维生素a的含量；
其中，x-试样中维生素a的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)；c-由标准曲线图上查得试样中维生素a的含量，单位为微克每毫升(μg/ml)；m-试样质量，单位为克(g)；v-提取后加三氯甲烷定量之体积，单位为毫升(ml)；100-以每百克试样计。
实验中选取了鸡肝、鸭肝和猪肝三种动物肝脏，按照实验方法测定其维生素a的含量。
本发明的方法的精密度是通过测定样品的相对标准偏差(rsd))来考察的，分别测定鸡肝、鸭肝和猪肝三种动物肝脏中维生素a的含量6次，计算相对标准偏差(rsd)。
动物肝脏中维生素a的含量见表1：
表1
加标回收率的测定：
采用样品的处理方法，处理鸡肝、鸭肝和猪肝三种动物肝脏，同时往试样中加入一定量的维生素a，然后按照标准曲线步骤测定样品中维生素a的浓度，从而得到样品的加标回收。
本发明的方法的准确度是通过样品的加标回收率测定来考察的。按照加标回收率实验方法，进行动物肝脏中维生素a的加标回收率测定。
加标回收率实验结果见表2。
表2
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。