反应更接近液相，反应更充分和迅速，而使结合的 免疫复合物更易分离。；
[0066] 2、本发明利用磁微粒子与化学发光技术相结合，提供了一种检测范围宽、灵敏度 高、精密度好、测值稳定的定量检测方法，操作简单，检测快速，可满足快速、大量检测样本 的需求。
[0067] 本发明所采用的检测方法是磁微粒分离化学发光免疫检测，酶标记技术，磁分离 技术和化学发光技术相结合，其操作方便、简单，反应条件溫和，发光值稳定且受外界条件 影响较小。相比于现有检测方法，本发明具有样本处理过程简单，检测成本低，检测快速，测 试结果准确、重复性好等优点。
【附图说明】
[0068] 图1为磁微粒分离化学发光免疫法检测甲状腺球蛋白示意图。
[0069] 图2为贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司的检测试剂盒测定甲状腺球蛋白结 果。
【具体实施方式】
[0070] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0071] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0072] 本发明检测试剂盒中的所有组分均能通过商业途径从生物试剂或化学试剂公司 购买得到。本发明中所用标记异硫氯酸巧光素单克隆抗体为Fitzgerald公司生产，货 号为：10-7834 ;标记碱性憐酸酶抗体为Fitzgerald公司生产，货号为：10-7835 ;抗原为 Fitzgerald公司生产，货号为：30-1219 ;碱性憐酸酶购自英国BBI公司，批号为：1693AA; 簇基磁珠胶体溶液购自merk公司；羊抗异硫氯酸巧光素抗体血清血清购自解放军总医院 第一附属医院实验动物科；异硫氯酸巧光素（門TC)购自SIGMA公司，CAT:3326-32-7,货号 为：F7250;SMCC购自thermofisherscientific公司，货号为：22360 ;2-ΙΤ购自thermo fisherscientific公司，CAS:4781-83-3 ;货号为：26101 ;N服购自SIMGA公司，CAS: 6066-82-6,货号：130672;EDC购自SIMGA公司，CAS:25952-53-8,货号：E7750。
[0073] 实施例1、甲状腺球蛋白定量检测试剂盒组分及其方法
[0074] -、甲状腺球蛋白定量检测试剂盒的制备
[0075] 将如下8种组分独立包装后再整体包装为试剂盒，即为甲状腺球蛋白定量检测试 剂盒：1、校准品（含一系列浓度的TG，用于建立标准曲线）；2、质控品（含一定浓度的TG); 3、试剂A(含一定浓度的异硫氯酸巧光素标记的TG单克隆抗体溶液）；4、试剂B(含一定 浓度的碱性憐酸酶标记的TG抗体）5、样本稀释液（含0. 2-1. 0 %牛血清白蛋白度SA)的 trizmabase(t;ris)缓冲液）；6、磁分离试剂（结合有抗异硫氯酸巧光素抗体的磁微粒混悬 液）；7、清洗液（用于配制磁珠清洗液）；8、底物溶液。试剂盒中1、2、3、4、5、6、8为必备试 剂，7可通过购买其他公司类似产品代替使用。上述试剂盒置于冰箱中4度保存。
[0076] 具体如下；
[0077] 1、校准品
[0078] 1)校准品缓冲液的配制
[0079] 校准品缓冲液由Na\牛血清白蛋白、羊血清、P;roclin-300、Trizmabase和水 组成，各组分的终浓度如下：化+源于化Cl，其浓度为0.Imol/L;牛血清白蛋白，其浓度为 0. 5% (质量百分含量）；Proclin-300,其浓度为0. 1% (体积百分含量）；Trizmabase 浓度为0.Imol/L;羊血清，其浓度为0.2% (体积百分含量）；校准品缓冲液的抑值为 8. 0 + 0. 05。
[0080] 校准品缓冲液的配置方法具体如下：
[0081] a)取Trizmabase12. 06g，NaCl5. 82g与 1. 0L试剂瓶中；
[0082] b)取600血纯化水于1.化试剂瓶中，充分揽拌直至完全溶解，调节PH至 10. 0 + 0. 05 ;
[008引 C)加入羊血清2.OmL，牛血清白蛋白5.Og，充分揽拌混匀至完全溶解；
[0084] d)加入P;rocLin-3001. 0血，纯化水定量至1000血，充分混匀4h;
[0085] e)调节PH至为 8. 0 + 0. 05 ;
[008引 f)使用0. 22μm滤膜过滤并收集滤液，贴好标签，2~8°C保存。
[0087] 。校准品的制备
[0088] 将TG抗原（抗原为Fitzgerald公司生产，货号为：30-1219)用上述1)中校准品 缓冲液稀释成750ng/mL，300ng/mL，150ng/mL, 50ng/mL，lOng/mL的校准品，等量分装成浓 度为 0、10ng/mL、50ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、750ng/mL的校准品。
[0089] 2、质控品（含一定浓度的TG)
[0090] W上述浓度为lOng/mL和30化g/mL的校准品作为质控品；
[0091] 3、试剂A(异硫氯酸巧光素标记的TG单克隆抗体溶液）
[0092] 1)、抗试剂缓冲液的配制
[0093] 抗试剂缓冲液按照如下方法制备：将溶液A、牛血清、马血清、羊血清和 P;rocLin-300混匀得到抗试剂缓冲液；溶液A由^\Mg2+Jn2\T;rizmabase、牛血清白蛋白 和水组成。溶液A、牛血清、马血清、羊血清、ProcLin-300和水的配比为lOOOg:25ml:2ml: 4. 5ml:1. 0ml;
[0094] 溶液A中，化+源于化Cl，其浓度为0.Imol/L;
[009引 1肖2+源于MgCl2,其浓度为1.Ommol/L;
[0096] Zn2+源于化化2,其浓度为0.Immol/L;
[0097] 牛血清白蛋白的质量百分含量为0. 5% ;
[0098] Trizmabase的浓度为 0.Imol/L。
[0099] 抗试剂缓冲液的配置方法具体如下：
[0100] a)取Trizmabase12. 06g，化C1 5. 82g于 1L烧杯中；
[0101] b)取500g纯化水于1L烧杯中，充分揽拌直至完全溶解；
[010引c)加入MgCl295mg，ZnCL2!3. 6mg，充分溶解混匀，调节PH至 10. 0±0. 05 ;
[010引 d)加入牛血清白蛋白5.Og，充分揽拌混匀，放置1. 0小时；
[0104] e)加入纯化水定重至lOOOg，充分揽拌混匀后，调节PH至8. 0 + 0. 05 ;得到溶液A; 此时溶液体积为1L;
[0105] f)吸取牛血清25血，马血清2. 0血，羊血清4. 5血，ProcLin-3001. 0血，充分混匀 4小时；
[0106] g)调节抑值至 8. 0 + 0. 05 ;
[0107] h)使用0. 22μm滤膜过滤并收集滤液，贴好标签，2~8°C保存。
[010引 2)、异硫氯酸巧光素标记TG单克隆抗体
[0109] 异硫氯酸巧光素标记TG单克隆抗体为用异硫氯酸巧光素标记TG单克隆抗体得到 的产物，具体方法如下：
[0110] 取ImgTG单克隆抗体（抗体为Fitzgerald公司生产，货号为：10-7834),用 Se地adexG25柱子更换缓冲液（脱去原抗体保存缓冲液，更换为0. 2mol/L碳酸盐缓冲液 PH9. 5,16. 8g碳酸氨钢溶于lOOOg纯化水中，PH9. 5)，并通过离屯、浓缩至5mg/mU加入浓 度为0. 5mg/mL的异硫氯酸巧光素溶液（溶剂为浓度为0. 2mol/L、抑值为9. 5碳酸盐缓冲 液）100μL(TG单克隆抗体与异硫氯酸巧光素的配比为Img:0. 05mg)，混合均匀。室溫避光 反应20小时，得到异硫氯酸巧光素标记TG单克隆抗体。
[0111] 再使用Se地adexG25柱子除去未反应的异硫氯酸巧光素，用0. 2mol/L碳酸盐缓 冲液PH9. 5洗脱，收集黄色液体，保存于-20°C，得到纯化后异硫氯酸巧光素标记TG单克隆 抗体。
[011引 3)、试剂A的配制
[0113] 将上述2)的纯化后异硫氯酸巧光素标记TG单克隆抗体与上述1)的抗试剂缓冲 液混匀，得到试剂A，其中异硫氯酸巧光素标记抗TG的浓度为0. 3ug/ml。
[0114] 4、试剂B(含一定浓度的碱性憐酸酶标记TG单克隆抗体）
[0115] 1)碱性憐酸酶标记TG单克隆抗体
[0116] 碱性憐酸酶标记TG单克隆抗体为用碱性憐酸酶标记TG另一种单克隆抗体得到的 产物，具体方法如下：
[0117]取ImgTG另一种单克隆抗体化tzgerald公司生产，货号为：10-7835), 用Se地adexG25柱子更换缓冲液化05mol/LΞ乙醇胺缓冲液，溶剂是水，P册.6)， 并通过离屯、浓缩至2. 5mg/mL，加入浓度为13. 76mg/mL的活化剂2-Iminothiolane hy化ochlo;ride(2-IT)溶液（2-IT厂家：thermofisherscientific,货号：26101 ;溶剂为 0. 05mol/LΞ乙醇胺缓冲液WHO. 5) 5μL(是体积比80:1)，室溫放置20分钟后加甘氨酸终 止活化反应，室溫下放置10分钟。再使用Se地adexG25柱子除盐，收集活化后抗体。
[om] 取1. 5mg碱性憐酸酶（厂家：BBI，批号：1693AA)，上Se地adexG25柱子更换缓冲 液化05mol/LΞ乙醇胺缓冲液P册.6)，并通过离屯、浓缩至5mg/mU加入浓度为6. 69mg/ mL的Succinimidyl4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-l-carboxylate(SMCC)溶液 (SMCC厂家：thermofisherscientific,货号：22360,溶剂为DMF，厂家：sigma,货号： 227056) 12μL室溫放置20分钟，加入甘氨酸终止活化反应，室溫放置10分钟。使用 Se地adexG25柱子除盐，得到活化后碱性憐酸酶。（说明：此处为较通用方法，不用详细描 述）。