2010版，完成方法学验证，包括系统适性 试验、破坏性试验、影响因素试验、回收率试验、以及耐用性试验。经过这些验证，本发明提 供的分析方法实用可靠，稳定性较好。
[0061] 实施例三:
[0062] 西罗莫司胶囊的含量和杂质的测定。
[0063] 高效液相色谱条件：
[0064] 色谱柱：迪马二代C18,规格为4. 6謹X 150謹，3 μ m ;
[0065] 流动相配比为：流动相A :流动相B = 22:78 (体积配比），流动相A由磷酸：庚烷 磺酸钠：水=〇· 1:0. 01:1(质量配比）组成，流动相B由甲醇：乙腈=15:85(体积配比） 组成；
[0066] 检测波长为277nm ;
[0067] 流速为 I. 8ml/min ;
[0068] 柱温 28 Γ;
[0069] 进样体积20 μ L。
[0070] 稀释剂：0· 1 %磷酸溶液：乙腈=50:65 (体积配比）。
[0071] 实验步骤：
[0072] 溶液配制：
[0073] 取西罗莫司胶囊内容物适量（约相当于西罗莫司25mg)，精密称定，置于25ml容 量瓶中，加适量稀释剂稀释至刻度，50°C超声20分钟、5000RPM离心10分钟、0. 45微米滤膜 过滤，续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液lml，置100mL量瓶中，加稀释剂稀释至 刻度作为杂质对照溶液；取胶囊空白辅料适量，置于25ml容量瓶中，加适量稀释剂稀释至 刻度，50°C超声20分钟、5000RPM离心10分钟、0. 45微米滤膜过滤，续滤液作为空白辅料溶 液；精密量取西罗莫司对照品l〇mg，置IOml量瓶中，加稀释剂至刻度，摇匀，作为含量对照 品溶液。精密量取供试品溶液、杂质对照溶液、空白辅料和含量对照品溶液各20 μ 1注入液 相色谱仪，记录液相色谱图，如图2所示，按照不加校正因子的自身对照法计算其杂质，按 照外标法计算其含量。
[0074] 结果表明，空白辅料不干扰西罗莫司胶囊的含量检测，也不干扰其杂质检测。西罗 莫司胶囊中各杂质可以得到有效分离，分离度均大于1. 8,峰形良好，峰纯度良好，理论塔板 数大于3000,拖尾因子小于1. 5,符合标准。
[0075] 西罗吴司I父囊，含M结果：相当于标不M的99. 2 % ;杂质结果：杂质RRTl. 07的含 量为0. 34%、杂质C的含量为1. 95%、杂质RRTL 14的含量为0. 32%。西罗莫司胶囊中关 键的3个杂质均能准确测定出。同时对西罗莫司胶囊进行破坏试验，降解杂质也得到了有 效的分离，分离度大于1. 8,主峰纯度较好，本发明可以有效的评价西罗莫司胶囊的质量。
[0076] 实施例四：
[0077] 西罗莫司口服液的含量和杂质的测定。
[0078] 高效液相色谱条件：
[0079] 色谱柱：热电 C18,规格为 4.6mmX150mm，3ym;
[0080] 流动相配比为：流动相A :流动相B = 20:80 (体积配比），流动相A由磷酸：庚烷 磺酸钠：水=〇· 1:0. 01:1(质量配比）组成，流动相B由甲醇：乙腈=15:85(体积配比） 组成；
[0081] 检测波长为277nm;
[0082] 流速为 2. Oml/min ;
[0083] 柱温 35 Γ;
[0084] 进样体积20 μ L。
[0085] 稀释剂：0. 1 %磷酸溶液：乙腈=50:72 (体积配比）。
[0086] 实验步骤：
[0087] 溶液配制：
[0088] 取西罗莫司口服液适量（约相当于西罗莫司25mg)，精密称定，置于25ml容量瓶 中，加稀释剂稀释至刻度，50°C超声5分钟、0. 45微米滤膜过滤，续滤液作为供试品溶液；精 密量取供试品溶液lml，置100mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度作为杂质对照溶液；取口服 液空白辅料适量，置于25ml容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，50°C超声5分钟、0. 45微米滤 膜过滤，续滤液作为空白辅料溶液；精密量取西罗莫司对照品l〇mg，置IOml量瓶中，加稀释 剂至刻度，摇匀，作为含量对照品溶液。精密量取供试品溶液、杂质对照溶液、空白辅料溶液 和含量对照品溶液各20 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，如图2所示，按照不加校正因子 的自身对照法计算其杂质，按照外标法计算其含量。
[0089] 结果表明，空白辅料不干扰西罗莫司口服液的含量检测，也不干扰其杂质检测。西 罗莫司口服液中各杂质可以得到有效分离，分离度均大于1.8，，峰形良好，峰纯度良好，理 论塔板数大于3000,拖尾因子小于1. 5,符合标准。
[0090] 西罗莫司口服液，含量结果：相当于标示量的99. 8% ;杂质结果：杂质RRTL 07的 含量为0. 42%、杂质C的含量为1. 68%、杂质RRTL 14的含量为0. 29%。西罗莫司口服液 中关键的3个杂质均能准确测定出。同时对西罗莫司口服液进行破坏试验，降解杂质也得 到了有效的分离，分离度大于1. 8,主峰纯度较好，本发明可以有效地评价西罗莫司口服液 的质量。
[0091] 上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说 明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施方式 或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
[0092] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在 不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论 从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权 利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有 变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
[0093] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包 含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当 将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员 可以理解的其他实施方式。
【主权项】
1. 一种西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于， 将含有西罗莫司的样品溶液通入色谱柱中，采用反向液相色谱外标百分比法定量分 析，所述液相色谱条件为： 色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料，规格4. 6_X150_，3μm; 流动相为：体积配比为18 :82~22:78的流动相A与流动相B的混合溶液，等度洗脱， 所述流动相A中磷酸、庚烷磺酸钠、水的质量配比为0. 1:0. 01:1，所述流动相B中甲醇与乙 腈的体积配比为15:85; 检测波长为270nm~280nm; 流速为 1· 5 ~2.Oml/min; 柱温25~35°C; 进样体积15~30μL。2. 根据权利要求1所述的西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述样品 溶液由含有西罗莫司的制剂与稀释剂组成。3. 根据权利要求2所述的西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述稀释 剂由0. 1 %磷酸溶液与乙腈组成，所述0. 1 %磷酸溶液与乙腈的体积配比为50:65~50:75。4. 根据权利要求2所述的西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述制剂 包括西罗莫司原料、西罗莫司片剂、西罗莫司胶囊或者西罗莫司口服溶液。5. 根据权利要求3所述的西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述稀释 剂中0. 1%磷酸溶液与乙腈的体积配比为50:70。6. 根据权利要求4所述的西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述制剂 为西罗莫司片剂。7. 根据权利要求1所述的西罗莫司的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述检测 波长为277nm，流速为1. 8ml/min，柱温30°C，进样体积20μL。
【专利摘要】本发明提供了西罗莫司的高效液相色谱分析方法，将含有西罗莫司的样品溶液通入色谱柱中，采用反向液相色谱外标百分比法定量分析，所述液相色谱条件为：色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料，规格4.6mm×150mm，3μm；流动相为：体积配比为18：82～22:78的流动相A与流动相B的混合溶液，等度洗脱，所述流动相A中磷酸、庚烷磺酸钠、水的质量配比为0.1:0.01:1，所述流动相B中甲醇与乙腈的体积配比15:85；检测波长为270nm～280nm；流速为1.5～2.0ml/min；柱温25～35℃；进样体积15～30μL。该高效液相分析方法具有实用可靠，稳定性较好，数据重现性强的优点，并且能够分离出杂质RRT1.07、杂质C、杂质RRT1.14。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105301159
【申请号】CN201510719100
【发明人】张莹, 史佳栋, 付静, 游云龙, 成梁, 曹峥, 赵文俊, 杨亮
【申请人】无锡福祈制药有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月29日