波长融合指纹图谱。
[0043] 图8是天麻素对照品多波长融合指纹图谱。
【具体实施方式】
[0044] 下面通过【具体实施方式】来进一步描述本发明所述大川芎片的质量检测方法，以下 实施例包括了本发明的大川芎片的含量测定方法和该方法的专属性、准确度、精密度、重复 性、稳定性、线性范围以及耐用性试验。这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构 成任何限制。
[0045] Aglient液相色谱仪（G1312A二元输液泵；DAD检测器）；
[0046] 色谱柱（型号：AglientTC-C18色谱柱，4. 6mmX250mmX5ym，安捷伦科技有限公 司）；
[0047] 供试品：大川芎片样品3批（批号：20140301、20140302、20140303 ;棕色固体，大 连富生天然药物开发有限公司生产），其中，批号：20140301的大川芎片的含水率为2. 4% ;
[0048] 天麻素标准品（纯度〉98%，购自中国药品生物制品检定所（fil]称中检所），批 号：110807-201306);
[0049] 甲酸（色谱纯，Fisher公司）；乙腈（色谱纯，Fisher公司）；纯净水（杭州娃哈 哈集团有限公司）；其他试药均为分析纯。
[0050] 试验例1
[0051] 1、制备供试品溶液
[0052] 取批号为20140301的大川芎片，去除包衣后，研细；精密称定大川芎片粉末2. 0g， 置于100mL圆底烧瓶中，加甲醇80mL，加热进行回流提取1次，提取时间为2h ;然后过滤，滤 液浓缩后，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，再采用0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤，滤液即 为供试品溶液。
[0053] 2、制备对照品溶液
[0054] 取天麻素标准品适量，精密称定天麻素标准品（4. 802mg)，置于10ml容量瓶中，加 入无水甲醇，定容，摇匀，配制成每lml含0. 4802mg天麻素对照品溶液。
[0055] 3、色谱分析
[0056] 3. 1色谱条件及系统适用性的选择
[0057] 参照2010版中国药典有关天麻素含量测定方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂的Agl ient TC-C18色谱柱（4. 6_X 250_，5 μ m)，以体积百分比浓度为0. 04 %的甲酸 水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱的技术参数如表1所示：
[0058] 表1洗脱液洗脱梯度
[0059]
[0060] 流速 1. OmL · min 1 ;柱温 30°C ;检测波长 210、225、254、270、32〇11111下同时进行检 测；进样量10 μ L ;理论塔板数计算，不低于3000 ;天麻素及其他成分的分离度均> 1. 5,对 称度符合要求，分离效果好，表明本发明是系统适用性好。
[0061] 3. 2方法学考察
[0062] 3. 2. 1标准曲线的制备
[0063] 精密吸取步骤2制备的天麻素对照品溶液3、5、10、14、18、20 μ L，分别进样，注入 高效液相色谱仪，按色谱条件分析，测定各自峰面积，色谱条件如下：
[0064] 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Aglient TC-C18色谱柱（4.6mmX250mm， 5 μ m);以体积百分比浓度为0. 04%的甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗 脱[Omin (2 % A) - lOmin (2 % A) - 90min (24% A)]，流速 1. OmL · min 1 ;柱温 30°C ;检测 波长210、225、254、270、320nm下同时进行检测；理论塔板数按天麻素计算，不低于3000 ;
[0065] 以对照品进样量X为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程： Y = 1431402. 0950X+27. 9316, r = 0· 9994。结果表明：天麻素在 1. 50 ~10. 00 μ g 范围内 与峰面积呈良好的线性关系，如图1所示。
[0066] 3. 2. 2精密度试验
[0067] 精密吸取步骤2制备的天麻素对照品溶液10 μ L，按色谱条件分析，连续进样6次， 记录色谱峰的峰面积，测得峰面积值的RSD为1. 32% (η = 6)，表明本发明方法的仪器精密 度好，结果见表2,符合指纹图谱要求。
[0068] 表2精密度试验结果
[0069]
[0070] 3. 2. 3稳定性试验
[0071] Α)精密称取批号为20140301的去除包衣并研细后的大川芎片粉末1份 (2. 027g)，然后分别置于100mL圆底烧瓶中，加甲醇80mL，加热进行回流提取1次，提取时间 为2h ;然后过滤，滤液浓缩后，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，再采用0. 22μπι微孔滤 膜进行过滤，滤液即为大川芎片稳定性试验供试品溶液；
[0072] Β)于0, 2,4,8,12,18, 24h间隔分别精密吸取上述大川芎片稳定性试验供试品溶 液各10 μ 1，分别注入高效液相色谱仪中，按照试验例1的步骤3的色谱分析条件进行测定， 记录色谱峰，计算天麻素峰面积（Α)，天麻素峰面积值的RSD为2. 85% (η = 6)，表明大川芎 片供试品溶液在24小时内稳定，结果见表3,符合指纹图谱要求。
[0073] 表3稳定性试验结果
[0074]
[0075] 3. 2. 4重复性试验
[0076] Α)按照表4分别精密称取批号为20140301的去除包衣并研细后的大川芎片粉末 6份（每份约2. Og)，然后分别置于100mL圆底烧瓶中，加无水甲醇80mL，加热进行回流提 取1次，提取时间为2h ;然后过滤，滤液浓缩后，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，再采用 0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤，滤液即为大川芎片供试品溶液；
[0077] B)分别精密吸取上述大川芎片供试品液各10 μ 1，分别注入高效液相色谱仪中， 测定并记录色谱峰，计算大川芎片中天麻素的含量，测定的色谱条件按照实施例1步骤3的 色谱分析条件，测定结果如表4所示。
[0078] 表4 HPLC方法学重复性试验结果
[0079]
[0080] 本发明方法测定的原料药天麻素的平均含量为2. 841mg/g，RSD为2. 31% (η = 6)，符合要求，重复性良好。
[0081] 3. 2. 5回收率试验
[0082] Α)按照表5分别精密称取批号为20140301的去除包衣并研细后的大川芎片粉末 6份（每份约1. 〇g)，然后分别加入天麻素对照品溶液（3. 020mg/mL) lmL ;
[0083] B)将6份样品分别置于100mL圆底烧瓶中，加甲醇80mL，加热进行回流提取1次， 提取时间为2h ;然后过滤，滤液浓缩后，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，再采用0. 22 μ m 微孔滤膜进行过滤，滤液即为回收率-大川芎片供试品溶液；
[0084] C)分别精密吸取上述回收率-大川芎片供试品液各10 μ 1，分别注入高效液相色 谱仪中，测定并记录色谱峰，测定样品中含量，计算回收率，测定的色谱条件按照实施例1 步骤3的色谱分析条件，测定结果如表5所示。
[0085] 表5 HPLC方法学回收率测定试验结果
[0086]
[0087] 本发明方法测定的大川芎片中天麻素的平均回收率为96. 51%，RSD为1. 25% (η =6)，符合要求。
[0088] 实施例1批号为20140301的大川芎片中天麻素含量测定
[0089] 1)取天麻素标准品适量，精密称定天麻素标准品（10mg)，置于10ml容量瓶中，加 入无水甲醇，