定容，摇匀，配制成每lml含1. OOOmg天麻素对照品溶液。
[0090] 2)取批号为20140301的大川芎片，去除包衣后，研细；精密称定大川芎片粉末 2. 00g，置于100mL圆底烧瓶中，加甲醇80mL，加热进行回流提取1次，提取时间为2h ;然后 过滤，滤液浓缩后，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，再采用0. 22 μ m微孔滤膜进行过滤， 滤液即为供试品溶液。
[0091] 3)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，色谱条件 如下：
[0092] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的Aglient TC-C18色谱柱（4.6mmX250mm， 5 μ m)，以体积百分比浓度为0. 04%的甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度 洗脱，梯度洗脱的技术参数如下[0min(2 % A) - 10min(2 % A) - 90min(24% A)]，流速 1. OmL · min 1 ;柱温30°C ;检测波长210、225、254、270、320nm下同时进行检测；理论塔板数 按天麻素计算，不低于3000 ;
[0093] 测定天麻素对照品和大川芎片中天麻素的峰面积，根据天麻素对照品的浓度和峰 面积，计算得到大川芎片样品中天麻素含量为2. 841mg/g。
[0094] 大川芎片在210、225、254、270、320nm下的色谱图如图2-6所示。
[0095] 4)全时段多波长融合
[0096] 将AglientllOO色谱工作站中210、225、254、270、32〇11111波长下测定的天麻素对照 品、大川芎片的HPLC指纹图图谱数据，按照dif格式数据文件导出，分别使用计算机信息处 理软件（Matlab软件），对dif格式数据分别进行全时段多波长融合，得到2张能同时反映 5个波长信息的色谱图和一组图谱数据，其中一张图谱为大川芎片的全时段多波长融合指 纹图谱（如图7)，另一张图谱为天麻素对照品的全时段多波长融合指纹图谱（如图8);大 川芎片的指纹图谱数据如表6所示；
[0097] 表6大川芎片指纹峰图谱数据
[0098]
[0099] 天麻素作为大川芎片指纹图谱的参照峰，对照品指纹图谱目的在于参照峰的指认 及计算样品中的含量。
[0100] 实施例2批号为20140302的大川芎片中天麻素含量测定
[0101] 除了步骤2)中称取批号为20140302的大川芎片之外，其余与实施例1相同，测定 的批号为20140302的大川芎片中天麻素含量为2. 813mg/g ;其中210、225、254、270、320nm 下的色谱图与实施例1相同；全时段多波长融合后的指纹图谱与实施例1相同。
[0102] 实施例3批号为20140303的大川芎片中天麻素含量测定
[0103] 除了步骤2)中称取批号为20140303的大川芎片之外，其余与实施例1相同，测定 的批号为20140303的大川芎片中天麻素含量为2. 799mg/g ;其中210、225、254、270、320nm 下的色谱图与实施例1相同；全时段多波长融合后的指纹图谱与实施例1相同。
[0104] 本发明的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱的质量控制方法得到的指纹图谱 谱图不仅可以用于大川芎片的指纹定性分析，还可以用于其它制剂（例如大川芎颗粒、胶 囊、注射剂、肠溶片、咀嚼片、口服液等）的指纹定性分析。
【主权项】
1. 大川芎片全时段多波长融合指纹图谱的质量控制方法，其特征在于包括如下顺序进 行的步骤： (1) 制备供试品溶液： 取大川芎片适量，用甲醇进行加热回流提取，提取液过滤后即得供试品溶液； (2) 制备对照品洛液： 取天麻素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lmL含天麻素对照品0. 4-0. 5mg的溶 液，即得； (3) 色谱条件与系统适用性试验： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱； 流动相：以甲酸溶液与乙腈的混合溶液为流动相，进行梯度洗脱，其中甲酸溶液为流动 相A，乙腈为流动相B ;流速1. OmL ·π?η 1 ;柱温30°C;检测波长210-320nm下同时进行检测； 进样量10 μ L ;理论塔板数计算，应不低于3000 ; (4) 全时段多波长融合： 将210-320nm波长下的谱图数据利用计算机软件进行全时段融合，得到一张能够同时 反映多波长融合后的色谱图和一组图谱数据； (5) 样品含量测定： 应用融合后的指纹图谱数据，计算样品中指标成分的含量； (6) 对上述确定的含量测定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重 复性、稳定性、线性范围以及耐用性。2. 如权利要求1所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特征在 于步骤（3)中所述色谱柱的规格为4. 6_X 250_，5 μ m。3. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特 征在于步骤（3)中所述流动相的甲酸溶液选择体积百分比浓度为0.04%的甲酸水溶液。4. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特 征在于步骤（3)中所述流动相梯度洗脱的技术参数为： 时间（min) 流动相Α ?%) 流动相Β(%) 0 2 98 ?ο i m 90 24 7€5. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特 征在于步骤（3)中所述检测波长选择210、225、254、270、32011111的波长。6. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特 征在于步骤（1)中所述供试品溶液按照如下步骤制备而成： 取大川芎片适量，去除包衣后研细，接着精密称取样品粉末1. 9-2. lg，置于100mL圆底 烧瓶中，加甲醇80mL回流提取1次，提取时间为2h，然后过滤，滤液浓缩后，加甲醇定容至 10mL容量瓶中，摇匀，再采用0. 45 μ m微孔滤膜进行过滤，滤液即为供试品溶液。7. 如权利要求6所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特征在 于精密称取大川芎片去除包衣后研细的粉末样品2. Og进行供试品溶液的制备。8. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特 征在于步骤（2)中所述天麻素对照品溶液的浓度为每lmL含天麻素对照品0. 5mg。9. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其 特征在于步骤（4)中所述计算机软件为Aglient 1100色谱工作站中使用Matlab软件，对 210-320nm波长下的谱图数据进行所述的全时段多波长融合，获得能够同时反映多波长融 合后的色谱图和一组图谱数据。10. 如权利要求1或2所述的大川芎片全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，其特 征在于：所述方法用于检测提取方法相同或相近的含有大川芎片组成的任何一种剂型，又 可适用于任何一种由名贵中药材组成的中药复方的质量控制。
【专利摘要】本发明公开了大川芎片多波长融合指纹图谱的质量控制方法，它是将现代分析检测手段和信息处理手段结合起来，建立综合、全面、有效的质量评价标准。目的在于避免大川芎片中名贵药材天麻被其单一指标性成分天麻素所替代导致的中药复方质量问题，消除单波长单一指标反映制剂质量的不完备性。本发明的质量控制方法操作简单、安全有效、重现性较好，可用于中药材及中成药的质量评价、质量控制及新药研发。特别是可将其作为评价名贵药材中药复方质量控制的有效方法。
【IPC分类】G01N30/88, G01N30/06
【公开号】CN105467051
【申请号】CN201410459432
【发明人】孟宪生, 富力, 包永睿, 王帅, 唐爽
【申请人】富力
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2014年9月11日