专利名称：胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术的制作方法
技术领域：
本发明胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术涉及一种胡杨组培快繁技术。
背景技术：
胡杨是生长在沙漠地区的大乔木，杨柳科植物。具有很好的耐盐碱、耐干旱和耐寒冷的特性。但是由于种种原因胡杨的数量已经较少，被列为国家三级濒危保护植物名单。中国政府重视改变西北地区的干旱和沙漠环境，胡杨作为改善环境的优良植物具备以下几个条件第一、适应性强，是当地的传统树种；第二，最有效，胡杨作为乔木类忍受逆境的能力最强；第三，经济价值高，能提供木材和胡杨碱等产品。缺点种苗数量太少。原有的胡杨林目前已进入成熟和衰退期，幼林缺乏。当地部门除保护现有资源外，也进行了一些育种和提高繁育的研究。但尚未解决胡杨种苗的快速繁育问题。为此，本发明提出一种新的技术方案。
发明内容
本发明目的在于提供一种胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，建立以瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖的技术途径。从而解决种苗数量太少的问题。
本发明目的可通过下述技术方案一种胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，对胡杨进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，大量分化成再生植株，包括外植体取材及处理、接种分化培养、生根培养、练苗移栽，其中外植体取材挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。
在上述方案基础上，所述的外植体取材是在4-5月份晴朗天气，挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。
对外植体的无菌处理清水冲洗1小时，再用5-10％的过氧化氢消毒10-15分钟，用无菌水冲洗干净，取出放无菌滤纸吸干水分。
所述的接种分化培养在无菌操作台取消毒好的嫩枝茎段，切成为0.3-0.5cm长度的小段，接种于培养基1或培养基2培养；10天左右，茎段的两端切口出现愈伤组织，将愈伤组织转至培养基3或培养基4进行分化培养观察，结果在上述培养基上愈伤均出现分化芽团。
其中，所述的培养基分别为培养基1MS+BA(0.5-1.0)mg/L+NAA)(0.5-1.0)mg/L；培养基2MS+BA(1.0-2.0)mg/L+2，4-D(0.1-0.5)mg/L+；培养基3MS+BA(1.0-2.0)mg/L+NAA(0.5-1.0)mg/L+GA(0.1-0.5)mg/L+LH500mg/L和培养基4MS+BA1.0mg/L+NAA0.25mg/L+LH500mg/L。
所述的生根培养将生长到2-3cm长的小芽接种于1/2MS+NAA(0.5-1.0)mg/L+IBA(0.5-1.0)mg/L+蔗糖2％mg/L培养基，7-8天根原基形成，根系达到2-3cm后，进行练苗移栽。
本发明的优越性在于本发明方法可行，通过实验胡杨可以进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，分化成再生植株，进行大量扩繁。利用本发明方法可解决每年上千万苗的供应，解决百万亩地的胡杨造林需求。
附图1胡杨胚性愈伤图片。
附图2胡杨胚性芽增殖图片。
具体实施方法本发明一种胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，对胡杨进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，大量分化成再生植株，包括外植体取材及处理、接种分化培养、生根培养、练苗移栽，其中外植体取材挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。取材料与方法1、取材与无菌处理4-5月份晴朗天气，挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。清水冲洗1小时，再用5-10％的过氧化氢消毒10-15分钟，用无菌水冲洗4-5次，取出放无菌滤纸吸干水分。
2、分化培养在无菌操作台取消毒好的嫩枝茎段，切成0.3-0.5cm长度的小段，接种于培养基1MS+BA(0.5-1.0)mg/L+NAA(0.5-1.0)mg/L或者培养基2MS+BA1.0-2.0mg/L+2，4-D(0.1-0.5)mg/L+培养。10天左右，茎段的两端切口出现愈伤组织，如附图1胡杨胚性愈伤图片所示。将形成的愈伤组织转培养基3MS+BA(1.0-2.0)mg/L+NAA(0.5-1.0)mg/L+GA(0.1-0.5)mg/L+LH500mg/L和培养基4MS+BA(1.0-2.0)mg/L+NAA(0.5-1.0)mg/L+LH500mg/L进行分化培养，附图2胡杨胚性芽增殖图片所示。经观察，在以上培养基均出现分化，分化的频率是85％和93％，每块愈伤组织分化芽的个数在8-13个左右。
3、生根培养同样，将生长到2-3cm长的小芽接种于1/2MS+NAA(0.5-1.0)mg/L+IBA(0.5-1.0)mg/L+蔗糖2％mg/L培养基，7-8天根原基形成，20天生根率达95％以上。根系达到2-3cm后，可进行练苗移栽。
实验结果通过实验胡杨也可以进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，分化成再生植株，进行大量扩繁。
权利要求
1.一种胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，对胡杨进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，分化成再生植株，包括外植体取材及处理、接种分化培养、生根培养、练苗移栽，其中外植体取材挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。
2.根据权利要求1所述的胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，其特征在于外植体取材是在4-5月份晴朗天气，挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。
3.根据权利要求1或2所述的胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，其特征在于所述的无菌处理清水冲洗1小时，再用5-10％的过氧化氢消毒10-15分钟，用无菌水冲洗干净，取出用无菌滤纸吸干水分。
4.根据权利要求1所述的胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，其特征在于所述的接种分化培养在无菌操作台取消毒好的嫩枝茎段，切成为0.3-0.5cm长度的小段，接种在培养基1或培养基2上培养10天左右，茎段的两端切口出现愈伤组织，将愈伤组织转培养基3或培养基4培养，最后在培养基上出现分化。
5.根据权利要求4所述的胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，其特征在于所述的培养基1MS+BA(1.0-2.0)mg/L+NAA(0.5-1.5)mg/L；培养基2MS+BA(1.0-2.0)mg/L+2，4-D(0.5-1.0)mg/L+；培养基3MS+BA1.5-2.0mg/L+NAA0.5-1.0mg/L+GA(0.1-0.5)mg/L+LH500mg/L；培养基4MS+BA1.0-2.0mg/L+NAA0.5-1.0mg/L+LH500mg/L。
6.根据权利要求1所述的胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，其特征在于所述的生根培养将生长到2-3cm长的小芽接种于1/2MS+IAA(1.0-1.5)mg/L+IBA(1.0-2.0)mg/L+蔗糖2％mg/L培养基，7-8天根原基形成后转1/2MS培养基，根系达到2-3cm后，进行练苗移栽。
全文摘要
本发明胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术涉及一种胡杨组培快繁技术。本发明一种胡杨瓶苗诱导胚性愈伤组织分化快速繁殖技术，对胡杨进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，分化成再生植株，包括外植体取材及处理、接种分化培养、生根培养、练苗移栽，其中外植体取材挑选胡杨优良母株，剪取当年生无病虫嫩枝，作为外植体。本发明方法可行，通过实验胡杨可以进行体细胞胚的诱导，产生具有胚性的愈伤组织，分化成再生植株，进行大量扩繁。利用本发明方法可解决每年上千万苗的供应，解决百万亩地的胡杨造林需求。
文档编号A01G17/00GK1647617SQ20051002388
公开日2005年8月3日 申请日期2005年2月6日 优先权日2005年2月6日
发明者苏敏, 宋学孟, 庞瑞华, 章振华, 王凌健, 董举文, 何燕红, 王涛, 陈权, 苏峰 申请人:上海光兆植物速生技术有限公司