专利名称：表皮短杆菌zjb-07021及其在制备(s)-2,2-二甲基环丙烷甲酰胺中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株新的菌种——表皮短杆菌ZJB-07021( 5wv/Z)acter/wm e戸Vferm/^s ZJB-07021 )，及其在微生物制备(5)-2，2-二曱基环丙烷曱酰胺 中的应用。
(二)
背景技术：
2，2-二曱基环丙烷曱酰胺的化学结构为
外消旋2，2-二曱基环丙烷曱酰胺由(5>2,2-二曱基环丙烷曱酰胺和 (/0-2，2-二甲基环丙烷曱酰胺两个对映体构成。
(5>2,2-二曱基环丙烷曱酰胺是西司他丁合成的关键手性中间体。西 司他丁，化学名为(Z)-7-[(2i )-(2氨基-2-羧基乙基)硫]-[(15)-2，2-二甲基环 丙烷曱酰胺基]-2-庚烯酸，是第一个应用临床的肾脱氢肽酶抑制剂。西司 他丁与亚胺培南(imipenem)的复方制剂泰能(Tienam)是美国默克(Merck) 公司在1979年研制开发的一种广谱(3-内酰胺抗生素，于1985年在德国 首次上市。西司他丁本身无抗菌作用，对(3-内酰胺酶也无抑制作用，作 为肾脱氢二肽酶的特异性抑制剂，它能阻断亚胺培南在肾脏内(被肾脱氢 二肽酶)的代谢，减轻药物的肾毒性，从而增加泌尿道内未经改变的亚胺 培南的浓度，增加疗效。
利用传统的化学法制备光学纯(5>2，2-二曱基环丙烷曱酰胺，需在反
应中添加大量溶剂和昂贵并具有毒性的手性催化剂，会对环境造成^fe大危
害。而用生物催化法制备(5)-2,2-二曱基环丙烷甲酰胺具有反应条件温和、 产物单一、立体选择性强、环境友好等优点。目前，文献报道的生物法制 备光学纯(5)-2，2-二曱基环丙烷曱酰胺主要有以下几种
瑞士 Lonza公司Robins等(US Patent 5273903 、 5427934) 曾报道， 从外消旋的2，2-二曱基环丙曱酰胺出发，通过含光学选择性酰胺酶的微生 4勿Cbwa附owas ac/dovoraws A: 18(DSM No.6315)、 C"omormowas ac/(iovon3"s TG 308(DSM No.6552)、尸^z^wwo"os sp. NSAK:42(DSM No.6433)、 5acfen'ww sp.Vffl:II( DSM No.6316)的动力学拆分，将其中的(及)-(-)-2,2-二 曱基环丙甲酰胺转化为相应的酸来制备(5)- (+)-2,2-二曱基环丙曱酰胺。浙 江工业大学郑裕国等(Research in Microbiology, 2007， 158: 258-264)筛选到 的Z)e辨/a towra/^m^ ZJB-05174 (CCTCC M 205114)也能选择性地降解 外消旋体中i -异构体而制备(5)-2,2-二曱基环丙烷曱酰胺。韩国Lim等报 道先将外消旋的2,2-二曱基环丙曱酸衍生化为对应的乙酯，通过光学选择 性脂酶选择性水解其中的(5>2,2-二曱基环丙曱酸乙酯为对应的酸和乙 醇，再通过(5)-2,2-二曱基环丙曱酸的加氨来制备S-酰胺(WO2004/005241 Al)。
中国科学院化学研究所王梅祥等(Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2002, 18: 267-272)曾报道以外消旋的2,2-二曱基环丙曱腈为 底物，以/^c^ococcws sp. AJ270为催化剂来制备及-(-)-2,2-二曱基环丙烷 f酰胺和(5)-(+)-2，2-二曱基环丙烷曱酸。
发明内容
本发明是为了提供一林可用于制备光学纯(5)-2，2-二曱基环丙烷曱酰 胺的新菌种--表皮短杆菌ZJB-07021 ( 5rev/6acten'Mm e/ /cfe 7wVfo ZJB-07021 ),及其在微生物制备(5)-2,2-二曱基环丙烷曱酰胺中的应用。 本发明釆用的技术方案是
表皮短才干菌ZJB-07021 ( 5rev/6flcfen'wm ZJB-07021 ), <呆
藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉武汉大学，保藏日期
2007年6月8日，保藏编号CCTCC NO: M 207076。 该新菌抹的特征如下
菌落形态30。C培养40h,在牛肉膏蛋白胨平板培养上的菌落呈圓 形，直径1毫米，隆起形状为凸镜状，淡黄色，边缘整齐，光滑。菌落随 时间的延长而增大，数天后直径可达5mm以上。
细胞形态20 h培养物的细胞呈杆状，0.6 1.2拜xi.5 3.0 |im。无 芽孢形成，不运动。培养时间延长，菌体逐步变短，老培养物变成球状。
生理生化特征革兰氏阳性，接触酶阳性，硝酸盐还原弱阳性，其他 阳性项目是吐温40、吐温80、 L-树胶醛糖、D-阿拉伯糖、D-果糖、七 叶苷，甘露醇、甘露糖、D-洛酮糖、松二糖、D-木糖、羟基丁酸、琥珀 酸甲酯、丙酮酸曱酯、丙三醇利用；全部阴性的项目是菊糖、(3-葡糖醛 酸酶、a-葡萄糖苷酶、N-乙酰基-D-葡萄糖、海藻糖、山梨醇、木糖醇、 松三糖、甘露醇、水杨苷、脲酶、葡萄糖、核糖、乳糖、蔗糖、肝糖原产 酸、明胶液化、水苏糖、麦芽糖、丙二酸盐利用。
综合上述结果，该菌林被鉴定为表皮短杆菌&evA"cfen'ww
通过Plackett-Burman考察了碳源、氮源、诱导剂与金属离子等培养 基组分对表皮短杆菌CCTCC M.207076菌抹酶活的影响；同时采用旋转 中心组合设计法对葡萄糖、酵母粉和乙酰胺等3个因素进行优化，得到表 皮短杆菌CCTCC M.207076的培养基组成为(终浓度)葡萄糖10.0 20.0
g/L，酵母粉13.0~18.0 g/L, KH2PO40.5 2.0 g/L, K2HPO40.5~2.0 g/L, NaCl 1 3g/L，乙酰胺5-11.0 g/L。
表皮短杆菌CCTCCM.207076的培养条件为起始pH 6.0-8.5，装液 量5 30%,培养温度20-35 。C,摇床转速100~300 rpm,培养时间48~72 小时。
本发明所涉及的微生物是通过以下的程序筛选得到的 1 )将由全国各地采回的土样和污水样接种到富集培养基中，在30 °C, 150 rpm的摇床上培养4天，待培养基变混浊后，取1 ml培养液转接到新 鲜的富集培养基中，再培养4天。如此重复4 5个循环。富集培养基的 配方如下(终浓度)2,2-二甲基环丙烷曱酰胺1 ~ 2.5 g/L ， K2HP04.12H20: 1.0 ~ 2.5 g/L， KH2P04: 1.0 ~ 2.0 g/L， MgS04.7H20: 0.2~0.5g/L， FeS04'7H20 : 0.01 ~ 0.05 g/L， CaCl2: 0.01 ~ 0.06 g/L, k乂 自来水配制，用1.0mol/L的盐酸或NaOH溶液调节pH值6.0 8.0。
2) 最后一次富集培养液稀释后涂布到平板培养基上，挑取单菌落至 斜面保藏。平板培养基为富集培养基中加入1.5%~2.0°/。的琼脂。
3) 挑取的单菌落接种到发酵培养基，组份如下(终浓度)葡萄糖 10.0 — 20.0 g/L,酵母膏5.0 ~ 10.0 g/L，蛋白胨2.0 ~ 5.0 g/L, NaCll.O — 3.0g/L, K2HPO41.0~2.0g/L， KH2P04 1.0 ~ 2.0 g/L, MgSO40.2 ~ 0.5 g/L， FeS04 0.01 ~ 0.05 g/L, CaCl2 0.05 ~ 0.1 g/L,乙酰胺2.0 ~ 5.0 g/L, pH自 然(121。C下，灭菌20min); 25 45 。C下，摇瓶转速100~300 rpm，培养 48 h~72 h;离心后悬浮于磷酸緩冲体系中。然后根据浙江工业大学郑裕 国等(Applied Microbiology and Biotechnology. 2007， 74: 256-262)所述的立 体选择性酰胺酶的筛选方法进行产及-酰胺酶菌抹的筛选。
4) 对通过上述方法筛选到的产及-酰胺酶菌抹，通过水解转化反应进
行复婶。按照上述方法培养得到的菌体，离心后悬浮于嶙酸緩冲体系中，
加入2，2-二曱基环丙烷曱酰胺作为底物，进行转化；用手性气相色谱法分 析产物和底物的含量及光学纯度。
手性色镨法的具体操作条件为日本岛津GC-14C气相色谱爿f义，GC Solution色语工作站；瑞士 BGB-175手性毛细管气相色镨柱；载气为高 纯氦气，流量为1.5mL/min;进样量0.8 分流比为40:1;检测器及进 样口温度均为220 。C。分离底物2，2-二甲基环丙烷甲酰胺及产物2，2-二曱 基环丙烷曱酸时，柱温分别为170。C和130。C。
本发明还涉及所述的表皮短杆菌ZJB-07021在孩i生物发酵制备 (5>2,2-二曱基环丙烷曱酰胺中的应用。
具体的，所述的应用为以外消旋2，2-二甲基环丙烷甲酰胺为底物， 加入表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞，25-45 。C下、于pH 6.5-9.0的緩 冲液中反应1~4小时，反应液经分离纯化得到(6)-2,2-二曱基环丙烷曱酰胺。
优选的，所述反应在pH 6.5~7.8的磷酸盐緩冲液中进行。或者，所 述反应在pH 7.4~9.0的Tris-HCl緩沖液中进行。
优选的，所述反应体系中还可添加有体积为緩冲液体积3~10%的共 溶剂，可以显著提高反应的活力和光学选择性。所述共溶剂包括但不限于 下列之一①曱醇、②乙醇、③乙酸乙酯、④丙酮、 正丙醇、 异丙醇、 ⑦乙腈等。 ..
所述反应体系中，表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞的初始浓度为 80~300 g/L,底物外消旋2,2-二曱基环丙烷曱酰胺的初始浓度为5~15 g/L。
所述表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞可由如下方法制备得到培养
基终浓度组成葡萄糖10.0 20.0g/L,酵母粉13.0 18.0 g/L,KH2PO40.5 2.0 g/L, K2HPO40.5~2.0g/L, NaCl 1 3 g/L,乙酰胺5~11.0 g/L， pH6.0 8.5; 接种表皮短杆菌ZJB-07021 ， 20 35°C 、 100-300 rpm振荡培养48~72小时， 将菌体离心经生理盐水洗涤，收集得湿菌体细胞。
具体的，所述应用如下
(1 )培养基终浓度组成葡萄糖15 g/L，酵母粉14.5 g/L, KH2P04 1.0 g/L, K2HP04 1.0 g/L， NaCl 1.0 g/L，乙酰胺5.6 g/L， pH 6.0 8.5; 摇瓶装液量30%,接种表皮短杆菌ZJB-07021,于20 。C 、 100 300 rpm振荡培养72h，将菌体离心经生理盐水洗涤，收集得湿菌体 细胞；
(2 )取50 mMpH 7.8的磷酸盐緩沖液，加入步骤(1 )所得湿菌体细 胞至细胞浓度为200 g/L，并加入底物外消旋2，2-二甲基环丙烷 曱酰胺至底物浓度为10g/L, 35 t恒温水浴摇床振荡反应2小 时，反应结束后将反应液离心，取上清液，加入等体积的乙酸
乙酯萃取，得5H+)-2,2-二甲基环丙甲酰胺。 本发明的有益效果主要体现在提供了一种具有立体选择性、可制备 光学纯(5)-2,2-二曱基环丙烷曱酰胺的新菌种，通过该菌种可制备高光学 纯度的CS)-2,2-二甲基环丙烷曱酰胺；本发明通过筛选得到不同于以往研 究的新菌种，从而为考察在手性拆分方面的微生物菌种的多样性、进而比 较不同菌种在转化途輝及反应机理上的差异提供了 &出。 . 具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围 并不^f又限于此
实施例1:菌^f朱的分离
产i -酰胺酶产生菌的分离在9mL 0.85%的生理lt水中加入1 g 土样、 适量玻璃珠，摇匀，使成均匀的土壤悬液；吸取0.5mL的土壤悬液接种 到装有30mL富集培养基的250mL的三角瓶中，置于30。C， 150rpm的 摇床培养4天，等富集液出现浑浊后，再吸取0.5 mL转接到新鲜的培养 基中，继续培养4天；如此重复4 5个循环后，将富集液稀释多个梯度， 涂布到分离平板上，获得单菌落；
富集培养基以2，2-二曱基环丙曱酰胺为唯一氮源，组成如下(终浓 度)K2HP04.12H20: 2.5 g/L， KH2P04: 2 g/L， MgS04'7H20: 0.5 g/L, FeS04.7H20: 0.01 g/L， CaCl2: 0.06 g/L, 2,2-二甲基环丙烷曱酰胺1.5 g/L, 用自来水配制，pH调为7.0;
挑取的单菌落接种到富集培养基中，培养48h、 72h后取样，用手性 气相色镨法检测产物S-(+)-2,2-二曱基环丙曱酰胺的对应体过量值(e.e. 值)，e.e.值超过98。/。的，即为所述的微生物表皮短杆菌ZJB-07021。
实施例2:菌林的培养
斜面培养基组成(终浓度)牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L,NaC15g/L, 琼脂18g/L,用自来水配制；
于平板上挑取CCTCCM.207076的单菌落，接种至斜面，于30。C恒 温培养箱内培养48h后，放入4 。C水箱内保藏备用。
实施例3:湿菌体细胞的获得
培养基配制葡萄糖10.0g，酵母粉13.0g， KH2PO40.5g, K2HP040.5g, NaCllg,乙酰胺5g,自来水补足至1L， pH6.5;
250 ml摇瓶装液量30。/。，接种一环表皮短杆菌CCTCC M.207076， 于20。C、 300 rpm振荡培养72 h;培养结束后发酵液离心并用生理盐水 洗涤两次，收集湿菌体细胞，悬浮于50mM、 pH 7.8的磷酸盐緩沖溶液 中，得湿菌体细胞含量为0.5g/mL的菌悬液，备用。
实施例4:湿菌体细胞的获得
培养基配制葡萄糖20.0g,酵母粉18.0 g, KH2PO42.0g， K2HPO42.0 g， NaC13g，乙酰胺11.0g，自来水补足至1L, pH8.0;
250 ml摇lf瓦装液量30。/。，接种一环表皮短杆菌CCTCC M.207076， 于35。C、 100 rpm振荡培养48 h;培养结束后发酵液离心并用生理盐水 洗涤两次，收集湿菌体细胞，悬浮于50mM、 pH 7.8的磷酸盐緩沖溶液 中，得湿菌体细胞含量为0.5g/mL的菌悬液，备用。
实施例5:
在10mL、 50mM的磷酸盐緩沖溶液中(pH7.8),加入4mL实施例 3所得菌悬液；加入100 mg外消旋2，2-二曱基环丙烷曱酰胺作为底物。 于35 。C恒温水浴摇床振荡反应2小时。反应液离心，取上清液，经等体 积的乙酸乙酯萃取，产物5*-(+)-2,2-二甲基环丙甲酰胺的光学纯度98.5% e.e.,转化率52%。
实施例6:
在10ml、 50 mM的磷酸盐緩沖溶液中(pH7.8)，加入1.6mL实施 例3所得菌悬液；加入100mg外消旋2,2-二甲基环丙烷曱酰胺作为底物。
于35。C恒温水浴摇床振荡反应3小时。反应液离心，取上清液，经等体 积的乙酸乙酯萃取，产物S-(+)-2,2-二曱基环丙曱酰胺的光学纯度95.6% e.e.，转化率41%。
实施例7:
在10 ml、 50 mM的磷酸盐緩冲溶液中(pH 7.8 )，加入6mL实施例 4所得菌悬液；加入100 mg外消旋2，2-二曱基环丙烷甲酰胺作为底物。 于35 。C恒温水浴摇床振荡反应1小时。反应液离心，取上清液，经等体 积的乙酸乙酯萃取，产物5"-(+)-2，2-二甲基环丙曱酰胺的光学纯度99% e.e.,转化率54%。
实施例8:
在10ml、 50mM的磷酸盐緩冲溶液中(pH7.8),加入4mL实施例 3所得菌悬液；加入50 mg ( 0.5%)外消旋2，2-二曱基环丙烷曱酰胺作为 底物。于35 。C恒温水浴摇床振荡反应2小时。反应液离心，取上清液， 经等体积的乙酸乙酯萃取，产物S-(+)-2，2-二曱基环丙曱酰胺的光学纯度 98.3%e.e.，转化率52%。
实施例9:
在10 ml、 50 mM的磷酸盐緩冲溶液中(pH 7.8 )，加入4mL实施例 4所得菌悬液「加入150 mg外消旋2，2-二曱基环丙烷甲酰胺作为底物。 于35。C恒温水浴摇床振荡反应4小时。反应液离心，取上清液萃取，产 物5K+)-2,2-二曱基环丙曱酰胺的光学纯度97.9% e.e.,转化率48%。
实施例10:
在10ml、 50mM的磷酸盐緩冲溶液中(pH6.5),加入4mL实施例 3所得菌悬液；加入IOO mg外消旋2,2-二甲基环丙烷曱酰胺作为底物。 于25。C恒温水浴摇床振荡反应4.5小时。反应液离心，取上清液萃取， 产物5K+)-2，2-二曱基环丙甲酰胺的光学纯度98.9% e.e.，转化率52%。
实施例11:
在10 ml、 50 mM的Tris-HCl緩冲溶液中(pH 9.0 ),加入4 mL实施 例3所得菌悬液；加入100 mg ( 1.0%)外消旋2，2-二曱基环丙烷曱酰胺 作为底物。于45。C恒溫水浴摇床振荡反应3小时。反应液离心，取上清 液，经等体积的乙酸乙酯萃取，产物S-(+)-2，2-二曱基环丙甲酰胺的光学 纯度99% e.e.，转化率55%。
实施例12:
在10 ml、 50 mM的磷酸緩冲溶液中(pH 7.8 )，加入4mL实施例4 所得菌悬液；加入100 mg外消旋2,2-二甲基环丙烷曱酰胺作为底物和0.3 mL甲醇。于35 。C恒温水浴摇床振荡反应1.5小时。反应液离心，取上 清液，经等体积的乙酸乙酯萃取，产物S-(+)-2，2-二曱基环丙曱酰胺的光 学纯度99.3% e.e.,转化率51%。
实施例13:
在10 ml、 50 mM的磷酸緩沖溶液中(pH 7.8 )，加入4mL实施例4 所得菌悬液；加入IOO mg外消旋2,2-二曱基环丙烷曱酰胺作为底物和1 mL曱醇。于35 。C恒温水浴摇床振荡反应1.8小时。反应液离心，取上
清液，经等体积的乙酸乙酯萃取，产物5H+)-2，2-二曱基环丙曱酰胺的光 学纯度99.5% e.e.,转化率53%。
实施例14:
在10 ml、 50 mM的Tris-HCl緩沖溶液中(pH 7.4 )，加入4 mL实施 例3所得菌悬液；加入IOO mg外消旋2,2-二曱基环丙烷曱酰胺和0.6mL 乙酸乙酯。于40 。C恒温水浴摇床振荡反应2.5小时。反应液离心，取上 清液，经等体积的乙酸乙酯萃取，产物5H+)-2,2-二曱基环丙曱酰胺的光 学纯度99.2% e.e.，转化率52%。
权利要求
1.表皮短杆菌ZJB-07021(Brevibacterium epidermidis ZJB-07021)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2007年6月8日，保藏编号CCTCC M.207076。
2. 如权利要求1所述的表皮短杆菌ZJB-07021,其特征在于所述表皮短杆 菌ZJB-07021菌落特征如下30。C培养40h,在牛肉膏蛋白胨平板培 养上的菌落呈圆形，直径1毫米，隆起形状为凸镜状，淡黄色，边缘 整齐，光滑，菌落随时间的延长而增大，数天后直径可达5mm以上； 20 h培养物的细胞呈杆状，0.6 1.2 nmxl.5 3.0 nm;无芽孢形成，不 运动；培养时间延长，菌体逐步变短，老培养物变成球状；革兰氏阳 性，接触酶阳性，硝酸盐还原弱阳性，吐温40、吐温80、 L-树胶醛糖、 D-阿拉伯糖、D-果糖、七叶苷、甘露醇、甘露糖、D-洛酮糖、松二糖、 D-木糖、羟基丁酸、琥珀酸曱酯、丙酮酸曱酯、丙三醇利用为阳性； 菊糖、J3-葡糖醛酸酶、a-葡萄糖苷酶、N-乙酰基-D-葡萄糖、海藻糖、 山梨醇、木糖醇、松三糖、甘露醇、水杨苷、脲酶、葡萄糖、核糖、 乳糖、蔗糖、肝糖原产酸、明胶液化、水苏糖、麦芽糖、丙二酸盐利 用为阴性。
3. 如权利要求1或2所述的表皮短杆菌ZJB-07021在微生物制备(5)-2，2-二甲基环丙烷甲酰胺中的应用。
4. 如权利要求.3所述的应用，其特征在于所述的应用为以外消旋2，2-二甲基环丙烷曱酰胺为底物，加入表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞， 25 45。C下、于pH6.5-9.0的緩沖液中反应1~4小时，反应液经分离纯 化得到(5)-2,2-二曱基环丙烷曱酰胺。
5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应在pH 6.5 7.8的磷酸 盐緩冲液中进行。
6. 如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应在pH 7.4~9.0的 Tris-HCl缓冲液中进行。
7. 如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应体系中还添加有体 积为緩沖液体积3 10%的共溶剂，所述共溶剂为下列之一①甲醇、 ②乙醇、③乙酸乙酯、④丙酮、⑤正丙醇、 异丙醇、⑦乙腈。
8. 如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应体系中，表皮短杆 菌ZJB-07021湿菌体细胞的初始浓度为80~300 g/L，底物外消旋2,2-二曱基环丙烷曱酰胺的初始浓度为5~15g/L。
9. 如权利要求4所述的应用，其特征在于所述表皮短杆菌ZJB-07021湿 菌体细胞由如下方法制备得到培养基终浓度组成葡萄糖 10.0 20.0g/L,酵母粉13.0~18.0 g/L， KH2P04 0.5~2.0 g/L， K2HP04 0.5~2.0 g/L， NaCl 1~3 g/L，乙酰胺5~11.0 g/L, pH 6.0 8.5;接种表皮 短杆菌ZJB-07021, 20~35°C、 100-300 rpm振荡培养48~72小时，将 菌体离心经生理盐水洗涤，收集得湿菌体细胞。
10. 如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用如下(1 )培养基终浓度组成葡萄糖15 g/L,酵母粉14.5 g/L, KH2P04 1.0 g/L, K2HP04 1.0 g/L， NaCl 1.0 g/L，乙酰胺5.6 g/L, pH 6.0 8.5; 摇瓶装液量30°/。，接种表皮短杆菌ZJB-07021 ，于20 。C、 100-300 rpm振荡培养72h，将菌体离心经生理盐水洗涤，收集得湿菌体 细胞； (2 )取50 mM pH 7.8的磷酸盐緩沖液，加入步骤(1 )所得湿菌体细 胞至细胞浓度为200g/L,并加入底物外消旋2，2-二曱基环丙烷曱 酰胺至底物浓度为10g/L, 35 。C恒温水浴摇床振荡反应2小时， 反应结束后将反应液离心，取上清液，加入等体积的乙酸乙酯萃 取，得S-(+)-2,2-二甲基环丙曱酰胺。
全文摘要
本发明提供了一株新的菌种——表皮短杆菌ZJB-07021(Brevibacterium epidermidis ZJB-07021)，及其在微生物制备(S)-2，2-二甲基环丙烷甲酰胺中的应用。本发明的有益效果主要体现在提供了一种具有立体选择性、可制备光学纯(S)-2，2-二甲基环丙烷甲酰胺的新菌种，通过该菌种可制备高光学纯度的(S)-2，2-二甲基环丙烷甲酰胺；本发明通过筛选得到不同于以往研究的新菌种，从而为考察在手性拆分方面的微生物菌种的多样性、进而比较不同菌种在转化途径及反应机理上的差异提供了基础。
文档编号C12N1/20GK101182480SQ20071007075
公开日2008年5月21日 申请日期2007年8月10日 优先权日2007年8月10日
发明者沈寅初, 王宝峰, 王远山, 郑仁朝, 郑裕国, 金少军 申请人:浙江工业大学