专利名称：通过酶法生产啶南平衍生物的方法
技术领域：
本发明涉及用于生产可用作为害虫控制剂的唳南平(pyripyropene)衍生物的方法。更具体地，其涉及用于生产在I位和11位具有酰氧基以及在7位具有羟基的啶南平衍生物的方法。
背景技术：
如W02006/129714(专利文件I)和W02008/066153 (专利文件2)中所述，在I位
和11位具有酰氧基以及在7位具有羟基的啶南平衍生物是对昆虫害虫发挥控制作用的化合物。作为用于生产在I位和11位具有酰氧基以及在7位具有羟基的啶南平衍生物的方法，W02006/129714和日本特开259569/1996 (专利文件3)中已经公开了使用1，7，11-三酰氧基衍生物作为原料、从通过非选择性水解酰氧基产生的多个产物中纯化和分离所述啶南平衍生物的方法。此外，日本特开259569/1996描述了使用保护基的组合用于合成啶南平衍生物的用途。Journal of Antibiotics第49卷,第11期,第1149页，1996年(非专利文件I)和Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷,第 22 期,第 2683 页，1995 年(非专利文件2)和日本特开269065/1996(专利文件4)已经公开了合成实例，其中使用保护基将酰基引入到7位。W02009/022702(专利文件5)已经公开了使用保护基从1，7，11-三去乙酰基啶南平A生产1，11- 二酰基-1，7，11-三去乙酰基啶南平A的方法。迄今为止，在I位和11位具有酰氧基以及在7位具有羟基的啶南平衍生物的已知生产方法是使用1，7，11-三酰氧基衍生物的非选择性水解或者在多步骤中使用保护基的生产方法，但在工业生产中，期望进一步改进生产效率，例如降低生产费用、改进产率、简化纯化和分离或者缩短步骤的数目。现有技术参考专利文件[专利文件1]冊2006/129714[专利文件2]W02008/066153[专利文件3]日本特开259569/1996[专利文件4]日本特开269065/1996
[专利文件5]冊2009/022702非专利文件[非专利文件I] Journal of Antibiotics 第 49 卷,第 11 期,第 1149 页，1996 年[非专利文件2]Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷，第 22 期，第2683 页，1995 年发明概述本发明人已经发现了用于在更简单的条件下和以更短的步骤、使用啶南平类似物作为合成原料、通过借助微生物的酶法或者通过酶法和化学转化的组合获得所需1，11-二酰氧基衍生物的方法，所述啶南平类似物作为天然存在的产物获得(Journal of Antibiotics (1996)49 (3)，292-298，Pure AppI. Chem.，第 71 卷，第 6 期，第 1059-1064页，1999 年；W094/09147 ；日本特开 239385/1996 ；日本特开 259569/1996 (专利文件 3)；Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷,第 22 期,第 2683 页，1995 年(非专利文件 2);和 W02004/060065)。因此，本发明的目的是提供用于使用微生物酶法生产1，11- 二酰氧基衍生物的方法。根据本发明的一个实施方案，提供了用于生产由下式A所表示的化合物的方法[化学式I]
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RO[其中R表示线性、分支或者环状C2_6烷基羰基(当该基团的的烷基部分是分支或者环状时R为C3_6烧基擬基)]，该方法包括以下步骤，用由下式B所表示的化合物培养其中引入了至少一种下文(I)至(III)的多核苷酸或者包含该至少一种多核苷酸的重组载体的微生物[化学式2]
权利要求
1.用于生产由下式A所表示的化合物的方法 [化学式I]
2.根据权利要求I的生产方法，其中根据权利要求I的由式B所表示的化合物是下式BI所表示的化合物 [化学式3]
3.根据权利要求I的生产方法，包括以下步骤用根据权利要求I的式B所表示的化合物培养包含质粒pCCl-PPl、质粒pPP2或质粒pPP3或者选自这些质粒的一个或多个载体的微生物,并分离根据权利要求I的式A所表示的化合物。
4.根据权利要求I或2的生产方法，其包括以下步骤用根据权利要求I的式B所表示的化合物培养其中引入了至少一种下文(IV)至(V)的多核苷酸或者包含该至少一种多核苷酸的重组载体的微生物，并分离根据权利要求I的式A所表示的化合物 (IV)分离的多核苷酸，具有编码SEQID NO :270的氨基酸序列或者与其基本上等同的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (V)分离的多核苷酸，具有至少一种选自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)的核苷酸序列， (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的16220至18018的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在严格条件下与(I)的核苷酸序列的互补序列杂交，并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替换、插入或者添加了一个或多个核苷酸，并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质，和 (4)核苷酸序列，其与(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质。
5.根据权利要求1-4中任一项的生产方法，进一步包括以下步骤使用酰化剂酰化由下式D所表示的化合物的I和11位的羟基[化学式4]
6.根据权利要求5的生产方法，进一步包括以下步骤水解下式C所表示的化合物的I 位的乙酰基和当V为乙酰基时11位的乙酰基 [化学式5]
7.根据权利要求6的生产方法，进一步包括以下步骤用啶南平E培养其中引入了至少一种下文(VI)至(VII)的多核苷酸或者包含该至少一种多核苷酸的重组载体的微生物，并分离根据权利要求6的式C所表示的化合物 (VI)分离的多核苷酸，具有编码至少一种选自SEQID NO :269和275的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (VII)分离的多核苷酸,具有至少一种选自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)和(b)的核苷酸序列 (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的13266至15144的核苷酸序列，和 (b)SEQID NO 266中所示的核苷酸序列的25824至27178的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在严格条件下与(I)的核苷酸序列的互补序列杂交，并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替换、插入或者添加了一个或多个核苷酸，并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质，和 (4)核苷酸序列，其与(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质。
8.根据权利要求7的生产方法，包括以下步骤用啶南平E培养包含质粒pPP2或质粒PPP9的微生物，并分离根据权利要求6的式C所表示的化合物。
9.根据权利要求6的生产方法，进一步包括以下步骤用去乙酰啶南平E培养其中引入了至少一种下文(VIII)至(IX)的多核苷酸或者包含该至少一种多核苷酸的重组载体的微生物,并分离根据权利要求6的式C所表示的化合物 (VIII)分离的多核苷酸，具有编码至少一种选自SEQID NO :269、274和275的氨基酸序列或者与其基本上等同的氨基酸序列的核苷酸序列；和 (IX)分离的多核苷酸,具有至少一种选自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)、(b)和(c)的核苷酸序列 (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的13266至15144的核苷酸序列，和 (b)SEQID NO 266中所示的核苷酸序列的23205至24773的核苷酸序列，和 (c)SEQID NO :266中所示的核苷酸序列的25824至27178的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在严格条件下与(I)的核苷酸序列的互补序列杂交，并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替换、插入或者添加了一个或多个核苷酸，并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质，和 (4)核苷酸序列，其与(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,并且其编码与由每一核苷酸序列所编码的蛋白质基本上等同的蛋白质。
10.根据权利要求9的生产方法，包括以下步骤用去乙酰啶南平E培养包含质粒PPP2或质粒pPP9且还包含质粒pPP7的微生物，并分离根据权利要求6的式C所表示的化合物。
11.质粒pCCl-PPl、质粒pPP2、质粒pPP3、质粒pPP7或质粒pPP9、或者一个或多个选自这些质粒的载体的用途，用于生产由式A所表示的化合物。
12.包含质粒pCCl-PPl、质粒pPP2、质粒pPP3、质粒pPP7或质粒pPP9、或一个或多个选自这些质粒的载体的转化体的用途，用于生产由式A所表示的化合物。
13.根据权利要求2的式BI所表示的化合物。
14.根据权利要求5的式D所表示的化合物。
全文摘要
提供了通过酶法生产由下式A所表示的啶南平衍生物的方法。本发明的生产方法允许在更简单的条件下并以更短的步骤生产啶南平衍生物，[化学式1][其中R表示线性、分支或者环状C2-6烷基羰基(当该基团的烷基部分是分支或者环状时R为C3-6烷基羰基)]。
文档编号C12N15/09GK102791871SQ20118000718
公开日2012年11月21日 申请日期2011年1月19日 优先权日2010年1月26日
发明者三富正明, 后藤公彦, 土田麻里子, 尾山和彦, 山本憲太朗 申请人:明治制果药业株式会社