专利名称：一种扁座壳孢菌半合成培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种扁座壳孢培养基，特别涉及一种扁座壳孢半合成培养基。
背景技术：
扁座壳抱\_Aschersonia placenta Berk.]隶属于真菌界(Kingdom Fungi)、子囊菌门(Ascomycota)、幾菌纲{Sordariomycetes)、肉座菌目 iffypocreales)、麦角菌科(67avi_ci]pi_taceae)、座壳抱属(Aschersonia)，是粉風( Jileyrodidae)和介壳虫{Coccidae)的重要病原真菌,广泛分布于热带和亚热带地区。早期国内外研究表明，扁座壳孢能有效控制粉虱和介壳虫这两类刺吸式口器害虫，在害虫生物防治、环保农药开发等方面有较好的应用前景。但是，近年来国内外许多单位进行了扁座壳孢菌的人工培养研究，有的进入了工业化生产，但发酵培养基均采用天然培养基(如用动物、植物、微生物或其他天然有机成分配制而成的培养基)。因为天然培养基成分复杂，各批次原料营养成分含量不稳定，发酵过程和产品质量不易控制。此外，天然培养基各营养成分不明确，不适于扁座壳孢菌生理生化的研究。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种扁座壳孢菌半合成培养基，其组成成分明确，发酵产品质量可控，适于该菌工业化发酵生产。本发明的一种扁座壳孢菌半合成培养基，由碳源、氮源、磷酸二氢钾、硫酸镁和水组成，其中碳(按分子量计算的碳元素含量)5. 0 20. 0克，氮(氮元素含量)0. 5 2. 5克，磷酸二氢钾0. 5 I. 5克，硫酸镁0. 5 I. 0克，用水定容至I升；所述碳源为蔗糖、可溶性淀粉或甘露醇，氮源为酵母浸粉、胰蛋白胨或牛肉浸膏。在所述扁座壳孢菌半合成培养基中加入质量百分含量为I. 5 2. 0%的琼脂得到固体培养基。优选地，所述扁座壳孢菌半合成培养基为蔗糖25. 0 45. 0克，酵母浸粉5. 0
10.0克，磷酸二氢钾0.5 I. 5克，硫酸镁0.5 1.0克，用水定容至I升。在所述扁座壳孢菌半合成培养基中加入质量百分含量为I. 5 2. 0%的琼脂得到固体培养基。更优选地，所述扁座壳孢菌半合成培养基为蔗糖45. 0克，酵母浸粉10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，用水定容至I升。在所述扁座壳孢菌半合成培养基中加入质量百分含量为I. 5 2. 0%的琼脂得到固体培养基。上述扁座壳孢菌半合成培养基都可按常规方法配制，如秤取上述质量配比的原料放入容器，加热溶解，混合均匀，灭菌即可。本发明的扁座壳孢菌半合成培养基，其组成成分明确，发酵的原料均一，发酵产品质量可以控制，利用这一培养基发酵生产扁座壳孢具有工艺简单、不存在重金属污染，菌体生长速度快，菌丝产率高(可达28 g/L以上)，产品质量稳定等优点，既适于扁座壳孢菌生理生化特性的研究，也适于该菌工业化发酵生产。
具体实施例方式实施例I、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(23 g/L) 28 g/L,对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为蔗糖(35.0克)45. 0克，酵母浸粉(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。上述括号中表示不同配方得到的菌丝产率。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸馏水I升。实施例2、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(22 g/L) 26 g/L，对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为甘露醇(35. 0克)45. 0克，酵母浸粉(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸懼水I升。实施例3、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(12 g/L) 15 g/L，对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为甘露醇(35. 0克)45. 0克，牛肉浸膏(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸懼水I升。实施例4、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(20 g/L) 24 g/L,对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为蔗糖(35.0克)45. 0克，胰蛋白胨(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸馏水I升。实施例5、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(15 g/L) 18 g/L,对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为蔗糖(35.0克)45. 0克，牛肉浸膏(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸馏水I升。实施例6、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(19 g/L) 23 g/L,对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为可溶淀粉(35. 0克)45. 0克，酵母浸粉(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸懼水I升。实施例7、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(12 g/L) 17 g/L,对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为可溶淀粉(35. 0克)45. 0克，胰蛋白胨(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸懼水I升。实施例8、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(9 g/L) 12 g/L,对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为可溶淀粉(35. 0克)45. 0克，牛肉浸膏(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸懼水I升。实施例9、利用扁座壳孢菌半合成培养基生产扁座壳孢菌丝
将从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上分离纯化，并借助形态特征和分子生物学证据鉴定为真正扁座壳孢的菌株接种至扁座壳孢菌半合成培养基和对照培养基中，分别按照常规方法发酵生产菌丝。结果表明扁座壳孢菌半合成培养基的菌丝产率达(16 g/L) 20 g/L，对照培养基的菌丝产率仅为5. I g/L。其中，扁座壳孢菌半合成培养基的配方为甘露醇(35. 0克)45. 0克，胰蛋白胨(7. 5克)10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，蒸馏水I升。对照培养基配方为硫酸铵2g、氯化钾0. 5g、硫酸镁0. 5g、磷酸二氢钾0. 5g、磷酸氢二钠0. 65g、蒸懼水I升。
权利要求
1.一种扁座壳孢菌半合成培养基，由碳源、氮源、磷酸二氢钾、硫酸镁和水组成，其中碳5. O 20. O克，氮0. 5 2. 5克，磷酸二氢钾0. 5 I. 5克，硫酸镁0. 5 I. 0克，用水定容至I升；所述碳源为蔗糖、可溶性淀粉或甘露醇，氮源为酵母浸粉、胰蛋白胨或牛肉浸膏。
2.根据权利要求I所述的扁座壳孢菌半合成培养基，其特征在于在所述扁座壳孢菌半合成培养基中加入质量百分含量为I. 5 2. 0%的琼脂得到固体培养基。
3.根据权利要求I所述的扁座壳孢菌半合成培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌半合成培养基为蔗糖25. 0 45. 0克，酵母浸粉5. 0 10. 0克，磷酸二氢钾0. 5 I. 5克，硫酸镁0. 5 I. 0克，用水定容至I升。
4.根据权利要求3所述的扁座壳孢菌半合成培养基，其特征在于在所述扁座壳孢菌半合成培养基中加入质量百分含量为I. 5 2. 0%的琼脂得到 固体培养基。
5.根据权利要求3所述的扁座壳孢菌半合成培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌半合成培养基为蔗糖45. 0克，酵母浸粉10. 0克，磷酸二氢钾0. 5克，硫酸镁0. 5克，用水定容至I升。
6.根据权利要求5所述的扁座壳孢菌半合成培养基,其特征在于在所述扁座壳孢菌半合成培养基中加入质量百分含量为I. 5 2. 0%的琼脂得到固体培养基。
全文摘要
本发明涉及一种扁座壳孢培养基，特别涉及一种扁座壳孢半合成培养基。本发明所提供的扁座壳孢菌半合成培养基，包括5.0～20.0克碳，0.5～2.5克氮，0.5～1.5克磷酸二氢钾和0.5～1.0克硫酸镁，用水定容至1升。所述碳源为蔗糖或可溶性淀粉或甘露醇，氮源为酵母浸粉或胰蛋白胨或牛肉浸膏。本发明的扁座壳孢菌半合成培养基，其组成成分明确，采用该培养基发酵生产扁座壳孢菌丝体具有工艺简单、不存在重金属污染，菌体生长速度快，菌丝产率高(可达28g/L以上)，产品质量稳定等优点，既适合于扁座壳孢菌生理生化的研究，也适合其工业化发酵生产。
文档编号C12N1/14GK102676402SQ20121016622
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月26日 优先权日2012年5月26日
发明者关雄, 宋飞飞, 苏玉斌, 谢小聪, 邱云锋, 邱君志 申请人:福建农林大学