专利名称：一种蛋清粉源糖肽的制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于食品制备的技术领域，涉及一种具有体外抗S180肉瘤细胞作用的蛋清粉源糖肽制备工艺。
背景技术：
糖蛋白(Glycoprotein)是一种糖链通过共价键与蛋白质或者多肽结合形成的结合蛋白质。大多数情况下，糖链所占比例远小于蛋白质或者多肽。糖蛋白作为一种蛋白质糖基化修饰物，普遍存在于生物体内，参与细胞分化、免疫调解、肿瘤转移等机体功能活动。在生物体外，源于食物的植物糖蛋白及动物糖蛋白也呈现了不同程度的功能作用，如金蚝蘑中提取得到的糖蛋白成分对U937白血病细胞具有生长抑制作用；山药糖蛋白的抗氧化活性；甘薯可溶性蛋白的降血脂及增强免疫力活性等。糖肽(Glycopeptide) 作为糖蛋白的酶解产物同样拥有多种生理活性。TakashiY，Hisanori T, Hifumi 0, et al.的文章 Interaction betweenl20kDa fragment in -subunit from egg white ovomucin and Sarcoma_180cells through basic fibroblastgrowth factor receptor [J].Food Sci Technol, 2000，6 (4): 275-279.给出从鲜蛋清中提取得到卵粘蛋白酶解片段的方法，并指出产物能有效抑制S180肉瘤细胞生长。但是，公开的卵粘蛋白酶解片段的制备方法过程繁杂，并不利于环境保护。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服背景技术的缺点，提供一种蛋清粉源功能性糖肽的制备方法，得到一种在体外可抑制S180肉瘤细胞生长的糖肽。本发明工艺参数是经过单因素结合Box-Behnken响应面法优化而来。具体技术方案如下:一种蛋清粉源糖肽的制备工艺，取鲜蛋清粉加水溶解，料液质量比为1: 3 4，添加NaCl，使NaCl在水中的浓度为100 300mmol/L，在40 50°C温度下提取30 50min，滤过不溶物得到滤液；按照滤液与赛维试剂(sevage试剂)体积比1: 2 3的比例在滤液中添加赛维试剂，脱蛋白30 50min，取上层提取液；按上层提取液计80 100U/g的埃尔克斯酶(alcalase酶)添加到上层提取液中，在pH值8 10，温度40 60°C下酶解80 120min,灭酶,酶解液冷冻干燥得到目标物。本发明最佳的技术方案见实施例3。所述的赛维试剂，是正丁醇与氯仿按体积比为1: 3 4的混合物。制得的目标物，即蛋清粉源糖肽可以在4°C冷藏备用。使用本发明方法制得的目标物是蛋清粉源糖肽。目标物经紫外光谱测定，在280nm及220nm波长下均存在紫外吸收峰，说明氨基与糖基在目标物中同时存在；测试表明，蛋清粉源糖肽对S180肉瘤细胞具有体外抑制作用。所述的蛋清粉源糖肽的水解度在19.77% 21.83%。
本发明的方法过程简单，反应条件温和，成本低，产物活性高易溶于水，对环境没有任何污染；制得的具有体外抗S180肉瘤细胞作用的蛋清粉源糖肽，在糖肽浓度40 100ug/mL范围内对S180肉瘤细胞的抑制率可达23.45% 43.89%。
具体实施例方式以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何限定。实施例1本发明优选的实施方式(I)取新鲜蛋清粉，温和条件下加水溶解，料液质量比为1: 3，适当添加NaCl，浓度控制在100mM/L,在50°C温度下提取50min,滤过不溶物得滤液。按照体积比滤液:sevage试剂为1: 3的比例添加sevage试剂,其中sevage试剂中的正丁醇与氯仿体积比例为1: 3,脱蛋白50min，取上层提取液。酶添加量按上层提取液计，范围控制在80U/g添加alcalase酶进行酶解，pH值为10，酶解时间80min，温度60°C，所得蛋清粉源糖肽的水解度为19.91%。最后灭酶，酶解液冷冻干燥得到目标物。实施例2本发明优选的实施方式(2)取新鲜蛋清粉，温和条件下加水溶解，料液质量比为1: 4，适当添加NaCl，浓度控制在300mM/L,在40°C温度下提取30min,滤过不溶物得滤液。按照体积比滤液:sevage试剂为1: 2的比例添加sevage试剂,其中sevage试剂中的正丁醇与氯仿体积比例为1: 4,脱蛋白30min，取上层提取液。酶添加量按上层提取液计，范围控制在100U/g添加alcalase酶进行酶解，pH值为8，酶解时间120min，温度40°C，所得蛋清粉源糖肽的水解度为19.77%。最后灭酶，酶解液冷冻干燥得到目标物。实施例3本发明的最佳实施方式取新鲜蛋清粉，温和条件下加水溶解，料液质量比为1: 4，适当添加NaCl，使NaCl的浓度控制在100mM/L，在45.5 46°C温度下提取38 38.5min，滤过不溶物得滤液。按照体积比滤液:sevage试剂为1: 3的比例添加sevage试剂,其中sevage试剂中的正丁醇与氯仿体积比例为1: 4，脱蛋白37 37.5min，取上层提取液。酶添加量按上层提取液计，范围控制在92U/g添加alcalase酶进行酶解，pH值为9.3 9.5，酶解时间116min，温度50.5 51°C，所得蛋清粉源糖肽的水解度为21.83%。最后灭酶，酶解液冷冻干燥得到目标物。实施例4对本发明方法制得的产物抗体外S180肉瘤细胞作用的测试RPM1-1640干粉按照1%的浓度溶解于去离子水，调解pH值在7.0 7.2范围内，过滤除菌，加青霉素和链霉素各100U/mL，加10%小牛血清配制成完全培养液。S180肉瘤细胞接种于培养基，温度37°C，CO2浓度5%饱和湿度培养箱条件下传代培养，取对数期细胞配制成1.5 X 105/mL溶液，96孔板(除四周36孔)每孔添加100 u L，培养24h后，加入不同浓度由完全培养液配制而成的蛋清粉源糖肽溶液100 u L，设立空白对照组，每组6个复孔，置于CO2培养箱中培养24h、48h后，MTT法570nm波长下测吸光度OD值，计算S180肉瘤细胞
抑制率。
权利要求
1.一种蛋清粉源糖肽的制备工艺，取鲜蛋清粉加水溶解，料液质量比为1: 3 4，添加NaCl，使NaCl在水中的浓度为100 300mmol/L，在40 50°C温度下提取30 50min，滤过不溶物得到滤液；按照滤液与赛维试剂体积比1: 2 3的比例在滤液中添加赛维试齐U，脱蛋白30 50min，取上层提取液；按上层提取液计80 100U/g的埃尔克斯酶添加到上层提取液中，在pH值8 10，温度40 60°C下酶解80 120min，灭酶，酶解液冷冻干燥得到目标物。
2.根据权利要求1所述的蛋清粉源糖肽的制备工艺，其特征在于，取鲜蛋清粉加水溶解，料液质量比为1: 4，添加NaCl，使NaCl在水中的浓度为100mmol/L，在45.5 46°C温度下提取38 38.5min，滤过不溶物得到滤液；按照滤液与赛维试剂体积比1: 3的比例在滤液中添加赛维试剂，脱蛋白37 37.5min，取上层提取液；按上层提取液计92U/g的埃尔克斯酶添加到上层提取液中，在PH值9.3 9.5，温度50.5 51°C下酶解116min，灭酶，酶解液冷冻干燥得到目标物。
3.根据权利要求1或2所述的蛋清粉源糖肽的制备工艺，其特征在于，所述的赛维试齐U，是正丁醇与氯仿按体积比为1: 3 4的混合物。
4.一种权利要求1 蛋清粉源糖肽的制备工艺制得的目标物蛋清粉源糖肽。
5.根据权利要求4所述的目标物蛋清粉源糖肽，其特征在于，所述的蛋清粉源糖肽紫外光谱测定，在280nm及220nm波长下均存在紫外吸收峰，并对S180肉瘤细胞具有体外抑制作用。
6.根据权利要求4或5所述的目标物蛋清粉源糖肽，其特征在于，所述的蛋清粉源糖肽，水解度在19.77% 21.83%。
全文摘要
本发明的一种蛋清粉源糖肽的制备工艺属于食品制备的技术领域。取鲜蛋清粉加水溶解，添加NaCl进行水浸提，得到滤液；在滤液中添加sevage试剂脱蛋白，取上层提取液；将alcalase酶添加到上层提取液中，在pH值8～10，温度40～60℃下酶解80～120min，灭酶，酶解液冷冻干燥得到目标物蛋清粉源糖肽。本发明提供一种简单、低成本、活性高的蛋清粉源糖肽的制备方法，产物易溶于水，在糖肽浓度40～100ug/mL范围内对S180肉瘤细胞的抑制率可达23.45%～43.89%。
文档编号C12P21/06GK103224969SQ201310099419
公开日2013年7月31日 申请日期2013年3月26日 优先权日2013年3月26日
发明者刘静波, 陆春婷, 张燕 申请人:吉林大学