人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种制备人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的方法，所述方法包括：利用wnt通路抑制剂，例如DKK1预孵育人源脂肪干细胞；诱导经预孵育的人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化；和利用神经营养因子，例如BDNF、NGF和NT3促进所得的神经元样细胞成熟。本发明方法得到的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞高度成熟，能够表达成熟的神经元标记物以及离子通道，还可观察到复杂的突触结构，从而可用于治疗神经退行性疾病和神经损伤性疾病以及制备相应的药物。
【专利说明】人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及干细胞及生物医药领域。具体地说，本发明涉及人源脂肪干细胞(Human-Adipose Derived Stem Cell, hADSC)来源的神经兀样细胞(neuron-like cell,NLC)及其制备方法和在预防或治疗神经退行性疾病中的应用。
【背景技术】
[0002]胚胎干细胞(ESC)因其特有的自我更新和分化全能性而成为治疗各种变性类疾病的提供充足的细胞来源。但同时，ESC的这些特性，也成为其在临床治疗中的主要困难。已有报道，尽管即便移植经过预分化或预分选的ESC来源的细胞，也仍有肿瘤形成。这为ESC来源的细胞在人类中应用提出了安全性的担忧。此外，应用胚胎干细胞在伦理上也极具争议。
[0003]目前，多潜能人源脂肪干细胞(hADSC)已成为治疗人类一些严重疾很好的细胞来源，如脊髓损伤、脑卒中等。
[0004]人源脂肪干细胞(hADSC)易于取材，对病人损伤性小，脂肪组织足够多，体外扩增快，生物安全性高，无免疫排斥等，已成为最有前景的细胞来源之一。Zuk等人首先发现，由人体抽脂得来的脂肪干细胞具有向脂肪细胞，成骨细胞，软骨细胞和肌纤维细胞分化的潜能(Zuk, P.A, et al.， Tissue Eng7, 211，2001)。此外，Gronthos 等人也证实 hADSC 表达类似人源骨髓间充质干细胞(hBMSC)的CD表面标志物(Gronthos, S., et al.，J CellPhys1l 189，54，2001)，提示 hADSC 是 hBMSC 的一种替代物(Zhu, Y., et al., Cell B1chemFunct26，664，2008)。因此，hADSCs向脂肪细胞，成骨细胞，软骨细胞多系谱分化为人类疾病提供 T 一个新的解决办法(Denker, A.E., et al., Differentiat1n59, 25, 1995 ；Sanchez-Ramos, J., et al., Exp Neurol 164, 247, 2000)。在过去 5 年，hADSC 向神经兀细胞分化引起了转化医学科学家和临床医生的广大关注，原因在于其在帕金森、阿尔茨海默病等神经退行性疾病的临床应用中具有巨大潜力。
[0005]然而，之前的研究更多涉及hADSC或hBMSC体外神经元分化的评价和机制，而较少考虑临床转化应用。而由于胚胎干细胞本身具有强大的增殖能力和分化潜能，目前应用于胚胎干细胞的方法无法应用于脂肪干细胞。此外，现有技术中hADSC诱导所用的诱导剂往往对人体有毒性，分化后获得的神经元样细胞存活率低，同时分化得到的神经元样细胞也存在成熟度不高，例如不表达标志神经元成熟的一些神经元标记物，如NeuN、Synapsin和vGAT，分化效率低，均一性差和稳定性低等等缺陷，从而阻碍了其进一步的临床应用。
[0006]综上所述，本领域急需能将hADSC诱导分化成高度成熟的神经元样细胞的方法以及由此得到的神经元样细胞群，从而能进一步应用于临床。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种能将hADSC诱导分化成高度成熟的神经元样细胞的方法以及由此得到的神经元样细胞群。
[0008]在第一方面，本发明提供一种制备高度成熟的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的方法，所述方法包括以下步骤:
[0009]I)诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化；和
[0010]2)利用神经营养因子促进I)所得的神经元样细胞成熟。
[0011]在一优选例中，所述神经营养因子选自下组:BDNF、NGF、NT3、CNTF、⑶NF或IGF。
[0012]在另一优选例中，所述神经营养因子是BDNF、NGF或NT3 ;更优选BDNF、NGF和NT3的组合。
[0013]在另一优选例中，在I)诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化之前，还利用wnt通路抑制剂对人源脂肪干细胞作预孵育。
[0014]在另一优选例中，所述wnt通路抑制剂选自:Dkk家族、分泌型卷曲相关蛋白。
[0015]在另一优选例中，Dkk家族选自:DKK-l/DKKl、DKK-2/DKK2、或 DKK-3/DKK3 ;分泌型卷曲相关蛋白选自:SFRP1、SFRP3或SFRP5。
[0016]在另一优选例中，所述wnt通路抑制剂是DKKl。
[0017]在另一优选例中，步骤I)的处理时间为2-4天，优选3天。
[0018]在另一优选例中，步骤2)的处理时间为2-4天，优选3天。
[0019]在另一优选例中，所述预孵育时间为12-36小时,优选24小时。
[0020]在第二方面，本发明提供一种人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群，所述细胞群具有选自下组的任一或多种特征:
[0021](I)有50%以上，优选60%以上，最优选80%以上的细胞表达神经元标记物；
[0022](2)有40%以上，优选50%以上，最优选60%以上的细胞可观察到复杂的突触结构
[0023](3)有30%以上，优选40%以上，最优选50%以上的细胞表达离子通道蛋白，具备神经电生理特性
[0024]在一优选例中，所述离子通道蛋白包括但不限于钠、钾和钙离子通道。
[0025]在另一优选例中，所述细胞群采用权利要求1-4中任一项所述的方法制备。
[0026]在另一优选例中，所述神经元标记物选自NeuN、Synapsin或vGAT。
[0027]在第三方面，本发明提供本发明第二方面的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群的用途，所述神经元样细胞群用于制备治疗神经退行性疾病或神经损伤性疾病药物。
[0028]在一优选例中，所述神经退行性疾病选自:帕金森病、阿尔茨海默病、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细管扩张症、牛海绵状脑病、克雅二氏病、亨廷顿病、小脑萎缩症、多发性硬化症、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症；和
[0029]所述神经损伤性疾病选自脊髓损伤、脑卒中或新生儿缺氧缺血脑病。
[0030]在第四方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含:
[0031](1)有效量的如权利要求5或6所述的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群；和
[0032](2)药学上可接受的载体。
[0033]在第五方面，本发明提供一种预防和/或治疗神经退行性疾病或神经损伤性疾病的方法，所述方法包括给需要的对象施用本发明第二方面的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群、或本发明第三方面的药物组合物。
[0034]应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，
在此不再一一累述。
【专利附图】
【附图说明】
[0035]图1显示通过细胞形态和⑶表面标记物表征hADSC。hADSC显示润旋式生长并具有纺锤体形态。(A)显示超过85%的第三代hADSC表达⑶29、⑶44和⑶105，不到5%的hADSC表达CD45 ;第三代hADSC涂布在塑料培养皿上补充了 10%FBS的DMEM/F12培养基中，(B)显示了白色视野(WF)下取像，苏木精和伊红(HE)染色来观察hADSC形态和核；(C)显示了通过取至少5个显微镜视野的平均值来定量测定细胞的⑶阳性率。基准尺=100um。
[0036]图2显示了人ADSC的多分化潜能。A.通过ES细胞标记物Sox2、0ct4、c_Myc和Nanog染色人ADSC。B.ES细胞标记物阳性染色的人ADSC百分比。C.RT-PCR证明人ADSC表达ES细胞基因标记物。D和E，“未处理(untreated)”表示hADSC在普通培养基中培养，随后用相应的分化标记物进行平行染色。每2天更换培养基。取至少5个显微镜视野的平均值来收集三系分化的阳性率。基准尺=100um。图中:Actin:肌动蛋白；Untreated:未处理；Adipocyte:脂肪细胞；0steoblast:成骨细胞；Chondrocyte:软骨细胞。
[0037]图3显示了 hADSC分化成神经元样细胞(hADSC_NLC)。A.亮视野图像显示了从第O天(DO)到第6天(D6)的hADSC-NLC形态；B.不作任何处理，hADSC表达Tujl和MAP2,不表达NeuN、Synapsinl/2和vGAT ;C，用神经元混合培养基孵育3天后，大多数hADSC-NLC表达Tujl、MAP2，但不表达Synapsinl/2 ;D，用补充了神经营养因子的混合培养基再孵育3天后，大多数细胞开始表达成熟神经元标记物，NeuN、Synapsinl/2和vGAT ；E和F，qRT-PCR数据证明与未处理的细胞相比，神经元标记物，例如NFL、NFM以及离子通道相关标记物,例如MaxiK、Kv4.2,NE-Na和CACNA1G在第6天均上调。A的基准尺=25um，C-D的基准尺=50um。图中:Factor:因子；Merged:合并！Enlarged:放大。
【具体实施方式】
[0038]发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现通过用wnt途径抑制剂预处理hADSC，然后将其诱导分化为神经元样细胞(NLC)，最后利用神经营养因子后处理分化的细胞可以得到高度成熟的神经元样细胞(hADSC-NLC)，该细胞表达成熟而且有功能的神经元标记物并且可以观察到复杂的突触结构，从而可应用于临床。在此基础上完成了本发明。
[0039]神经退行性疾病
[0040]神经退行性疾病(Neurodegenerative disease)是大脑和脊髓的细胞神经元丧失的疾病状态。大脑和脊髓由神经元组成，神经元有不同的功能，如控制运动，处理感觉信息，并作出决策。大脑和脊髓的细胞一般不会再生，所以过度的损害可能是毁灭性的，不可逆转的。神经退行性疾病是由神经元或其髓鞘的丧失所致，随着时间的推移而恶化，以导致功能障碍。神经退行性疾病按表型分为两组:一类影响运动，如小脑共济失调；一类影响记忆以及相关的痴呆症 ，如阿尔茨海默病。
[0041]人源脂肪干细胞
[0042]脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSC)是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。它是来源于脂肪组织的一种间充质干细胞，可以分化为间质类细胞，如骨细胞、软骨细胞或脂肪细胞等。ADSC细胞能够在体外稳定增殖且衰亡率低，同时具有取材容易、少量组织即可获取大量干细胞，适宜大规模培养，对机体损伤小等优点，而且其来源广泛，体内储备量大，适宜自体移植，逐渐成为近年来新的研究热点之一。
[0043]近年来，多潜能人源脂肪干细胞(hADSC)已成为治疗人类一些严重疾病，如脊髓损伤、脑卒中等的很好的细胞来源。
[0044]本发明的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞
[0045]本发明的“人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞”是指通过诱导人源脂肪干细胞(hADSC)分化得到的神经元样细胞。
[0046]对体内分离得到的hADSC进行免疫荧光染色，发现其可表达间充质干细胞表面标记物⑶29、⑶44、和⑶105，同时在mRNA水平和蛋白水平都可表达干细胞标志物Sox_2、Oct-4、c-Myc、Nanog和Klf-4。而且hADSC向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞三种系谱分化已经证实了其多向分化潜能的性质。此外本发明还发现，在体外，hADSCs向神经细胞分化，并通过Tujl、MAP2、NeuN和Synapsin免疫染色证实。除此之外，hADSC-NLC在塑料培养皿上培养后与未分化的hADSC相比，均高表达神经元和离子通道相关的蛋白标志物。表明体内移植hADSC，为神经退行性疾病的治疗应用提供了一个很好的前景。
[0047]本发明所用的“人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群”是指本发明方法所得的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的群体，而非指单个神经元样细胞。
[0048]在本发明的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群中，
[0049]有50%以上，优选60%以上，最优选80%以上的细胞表达神经元标记物:NeuN、Synapsin 和 vGAT ；
[0050]有40%以上，优选50%以上，最优选60%以上的细胞可观察到复杂的突触结构；
[0051]有30%以上，优选40%以上，最优选50%以上的细胞表达离子通道蛋白，具备神经电生理特性，所述离子通道蛋白包括但不限于钠、钾和钙离子通道。
[0052]鉴于现有知识，本领域技术人员还应知道，表达神经元标记物、复杂的突触结构和表达离子通道不是在同一水平上表征神经元样细胞成熟程度的特征，它们标志着神经元样细胞的成熟程度逐渐升高，即，表达神经元标记物表示神经元样细胞成熟，可观察到突触结构表示该神经元样细胞进一步成熟，而表达离子通道蛋白，具备电生理特性，则表示该神经元样细胞高度成熟。
[0053]制备高度成熟的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的方法
[0054]现有技术得到的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的成熟度不高，发明人经过研究，开发了一种制备高度成熟的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的方法，所述方法包括:
[0055]I)诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化；和
[0056]2)利用神经营养因子促进I)所得的神经元样细胞成熟。
[0057]在优选的实施方式中，所述神经营养因子选自下组:BDNF、NGF、NT3、CNTF、⑶NF或IGF。
[0058]在优选的实施方式中，所述神经营养因子是BDNF、NGF或NT3 ;更优选BDNF、NGF和NT3的组合。
[0059]本发明方法得到的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞(hADSC-NLC)成熟度高，表达成熟且有功能的神经元标记物:例如NeuN、Synapsin和vGAT ;本发明的hADSC-NLC可观察到复杂的突触结构；本发明的hADSC-NLC可表达离子通道。
[0060]鉴于现有技术的教导，本领域技术人员可以利用任何已知的诱导培养基诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化，例如但不限于Safford, K.M等(B1chem B1phys ResCommun294, 371，2002)描述的混合培养基。
[0061]发明人还发现，在I)诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化之前，利用wnt通路抑制剂对人源脂肪干细胞作预孵育能够进一步提高人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的分化效率(达到80%以上)及其均一性和稳定性。
[0062]在具体的实施方式中，所述wnt通路抑制剂包括但不限于:Dkk家族、分泌型卷曲相关蛋白。
[0063]在优选的实施方式中，所述Dkk家族选自:DKK-1/DKK1、DKK-2/DKK2、或DKK-3/DKK3 ;所述分泌型卷曲相关蛋白选自:SFRP1、SFRP3或SFRP5。
[0064]在进一步优选的实施方式中，所述wnt通路抑制剂是DKKl。
[0065]在优选的实施方式中，步骤I)的处理时间为2-4天，优选3天。
[0066]在优选的实施方式中，步骤2)的处理时间为2-4天，优选3天。
[0067]在优选的实施方式中，所述预孵育时间为12-36小时，优选24小时。
[0068]本发明的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群的用途
[0069]本领域技术人员鉴于本发明的教导可以明白，本发明所得的hADSC-NLC可用于治疗神经退行性疾病，包括但不限于:帕金森病、阿尔茨海默病、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细管扩张症、牛海绵状脑病、克雅二氏病、亨廷顿病、小脑萎缩症、多发性硬化症、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症等等。
[0070]鉴于本发明的教导和现有技术的知识，本领域技术人员还应明白，本发明所得的hADSC-NLC还可用于治疗神经损伤性疾病，例如脊髓损伤、脑卒中或新生儿缺氧缺血脑病坐寸ο
[0071]药物组合物及其应用
[0072]本发明还提供了一种药物组合物，它含有有效量的本发明人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞，以及药学上可接受的载体。
[0073]通常，可将本发明人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，如生理盐水中，其中pH通常约为5-8，较佳地，pH约为7-8。
[0074]如本文所用，术语“有效量”或“有效剂量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
[0075]如本文所用，“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。
[0076]本发明的药物组合物含有的载体包括(但并不限于):盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量。本发明的药物制剂还可制成缓释制剂。
[0077]本发明的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的有效量可随给药的模式和待治疗疾病的严重程度等具体选择。例如，可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于:所述药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。
[0078]本发明的药物组合物优选为皮下注射试剂与及静脉注射试剂同时使用。在另一优选例中，所述皮下注射试剂的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的浓度为17个/ml，较佳地为18个/ml，更佳地为19个/ml。
[0079]在本发明中，给所需要的对象施用人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的施用部位是在所述对象的损伤区作原位注射或者进行静脉注射。
[0080]本发明的主要优点包括:
[0081]1.本发明开发了一种制备高度成熟的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的方法，从而能得到成熟程度高于现有技术所得的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞；
[0082]2.本发明方法操作简便易行；
[0083]3.本发明的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的成熟度更高，从而更易用于临床治疗神经退行性疾病和损伤性疾病；和
[0084]4.本发明方法促使人源脂肪干细胞的分化效率更高，所得神经元样细胞的也具备更高的均一性和稳定性。
[0085]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如 Sambrook 等人，分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
[0086]实施例
[0087]材料与方法
[0088]hADSC 的分离
[0089]根据已发表的文献分离hADSC (Zuk, P.A, et al., Tissue Eng7, 211，2001 ;和Gronthos, S., et al., J Cell Phys1ll89，54，2001)。将临床抽脂手术获得的新鲜脂肪悬浮液用乳酸林格液(LR)溶液冲洗，去除受污染的碎片和红细胞。然后用无菌手术剪剪碎组织，加入0.075%的I型胶原酶(Roche Diagnostics, Japan), 37°C恒温水浴消化40分钟，并在消化过程中摇动。消化后用10um的尼龙网过滤，去除细胞碎片，收集到新的管子里。然后用含10%血清的培养基中和胶原酶。之后取400克在室温下离心5分钟，然后将细胞悬浮在培养基中，将此铺到培养皿，置于37°C、含5%C02湿度饱和的培养箱。培养24小时后，用PBS冲洗去除残存的未贴壁的红细胞。为了使hADSC扩增，加入含20%血清(JRH B1science, USA)、100 单位青霉素和 100mg/ml 链霉素(Invitrogen, Japan)的 DMEM/F12 (Invitrogen, Japan)培养基，接种在 T~75f lasks (Falcon, Becton Dickinson, Japan)，浓度为6 X 14个细胞/cm2，置于37°C、含5%C02湿度饱和的培养箱中培养
[0090]提取RNA 和 qRT-PCR
[0091]按照Qiagen RNeasy Mini Kit (#74104)的标准操作指南从~16 个 hADSCs、胚胎干细胞(ESCs) 和hADSC-NLCs中提取总的RNA。只有当0D260/280值高于1.8时，提取的RNA才有效。用 Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis kit (#K1621)反转录以上提取的总RNA。RT-PCR包括在70°C加热5分钟使反应终止，之后在42°C放置60分钟。这些引物应用于用引物设计软件设计5种干细胞转录因子。顺序在表1中列出。半定量RT-PCR使用上述准备的第一股cDNA作为模板，根据下列步骤进行:模板500~lOOOng，引物 luL，2XPfu PCR Master Mix (TIANGEN，KP201) 6.25 μ L，加不含 DNA 酶-RNA 酶的水使总体积为12.5μL。在B1-Rad (S1000TM Thermal Cycler)进行的PCR反应为半定量RT-PCR，在AB应用生物系统7500进行的反应为定量RT-PCR。用2.0%的琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行图谱分析。用ABI7500软件处理数据。
[0092]表1.相关基因的引物序列
[0093]
【权利要求】
1.一种制备高度成熟的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤: 1)诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化；和 2)利用神经营养因子促进I)所得的神经元样细胞成熟。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述神经营养因子选自下组:BDNF、NGF、NT3、CNTF、⑶NF 或 IGF。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在I)诱导人源脂肪干细胞向神经元样细胞分化之前，还利用wnt通路抑制剂对人源脂肪干细胞作预孵育。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述wnt通路抑制剂选自:Dkk家族、分泌型卷曲相关蛋白。
5.一种人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群，其特征在于，所述细胞群具有选自下组的任一或多种特征: (1)有50%以上，优选60%以上，最优选80%以上的细胞表达神经元标记物； (2)有40%以上，优选50%以上，最优选60%以上的细胞可观察到复杂的突触结构 (3)有30%以上，优选40%以上，最优选50%以上的细胞表达离子通道蛋白，具备神经电生理特性。
6.如权利要求5所述的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群，其特征在于，所述细胞群采用权利要求1-4中任一项所述的方法制备。
7.如权利要求5或6所述的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群的用途，其特征在于，用于制备治疗神经退行性疾病或神经损伤性疾病药物。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于， 所述神经退行性疾病选自:帕金森病、阿尔茨海默病、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细管扩张症、牛海绵状脑病、克雅二氏病、亨廷顿病、小脑萎缩症、多发性硬化症、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症；和 所述神经损伤性疾病选自脊髓损伤、脑卒中或新生儿缺氧缺血脑病。
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含: (1)有效量的如权利要求5或6所述的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群；和 (2)药学上可接受的载体。
10.一种预防和/或治疗神经退行性疾病或神经损伤性疾病的方法，其特征在于，给需要的对象施用如权利要求5或6所述的人源脂肪干细胞来源的神经元样细胞群、或权利要求9所述的药物组合物。
【文档编号】C12N5/0775GK104130975SQ201310161558
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2013年5月3日 优先权日:2013年5月3日
【发明者】徐俊, 高山峨 申请人:上海市东方医院