一种藏灵菇菌冻干发酵剂及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及发酵领域，尤其是一种藏灵菇菌冻干发酵剂及其制备方法。该发酵剂，按照重量份数计，其原料组份包括：从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物70-90份、保护剂10-30份；其中，混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳杆菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物；保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、海藻糖、维生素以及谷氨酸钠中的一种或多种。本发明提供的发酵剂，发酵获得的酸乳还不易腐坏，保质期长；复活率高、发酵性能好、易于保存以及适合规模化生产。
【专利说明】一种藏灵薛菌冻干发酵剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及发酵领域，具体而言，涉及一种藏灵菇菌冻干发酵剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]藏灵菇又名西藏雪莲，是源自雪域高原海拔4500米处的特有珍稀菌种，是几百年来藏区牧民制作牦牛酸奶的必需菌种。形态为似米粒状的白色小颗粒，触觉较软、较韧、发粘，长期培养后，个体会逐渐长大，形态如盛开的雪莲，故谓之西藏雪莲。藏灵菇所发酵的酸奶，具有调理人体胃肠机能、预防感冒、治疗风湿病、增强肠道免疫力、提升肝脏解毒功能、降低血压血糖血脂、防癌抗癌等功效。食用藏灵菇是个巨大的宝库，迄今为大众所利用的，只是其中极少部分。
[0003]在相关技术中，在使用藏灵菇(一般采用藏灵菇菌菌团)作为发酵剂制作酸奶时，常见的方法是直接将藏灵菇菌菌团作为发酵剂使用。但是，由于藏灵菇菌菌团中的细菌种类较多，进而使得制成的酸奶不卫生，较易造成肠胃疾病。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种藏灵菇菌冻干发酵剂，以解决上述的问题。
[0005]本发明的另一个目的在于提供一种上述藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法。
[0006]在本发明的实施例中提供了藏灵菇菌冻干发酵剂，按照重量份数计，其原料组份包括:从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物70-90份、保护剂10-30份；其中，所述混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳杆菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物；所述保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、海藻糖、维生素以及谷氨酸钠中的一种或多种。
[0007]本发明提供的这种藏灵菇菌冻干发酵剂，其从藏灵菇中分离出四种优势菌种，四种优势菌(乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌、酵母菌)通过牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后，分别得到了四种菌的菌液沉淀物，将这四种菌液沉淀物按照既定的体积比在接入到牦牛脱脂乳培养基中培养，进而得到了混合菌沉淀物；在混合菌沉淀物中，这四种菌均作为风味菌，与保护剂以既定的重量比例混合之后，通过真空冷冻干燥，即可得到冻干发酵剂。
[0008]本发明实施例提供的这种冻干发酵剂，其来源于藏灵菇菌，通过分离培养只获得了四种优势菌种作为风味菌，进而克服了现有技术中直接将藏灵菇菌作为发酵剂时，其含有大量杂菌的缺陷，分离出的这四种菌，其以最佳的比例配合，通过培养并得到混合菌沉淀物，在作为发酵剂的时候，由于没有杂菌，其发酵获得的酸乳安全卫生。并且由于不含杂菌，其发酵获得的酸乳还不易腐坏，保质期长。
[0009]另外，通过实践证明，本发明实施例提供的这种冻干发酵剂，其还具有复活率高、发酵性能好、易于保存以及适合规模化生产的优点。[0010]可选的，所述乳球菌菌液沉淀物、乳明串珠菌液沉淀物、干酪乳杆菌菌液沉淀物和酵母菌菌液沉淀物为将从藏灵菇中分离出的乳球菌、乳明串珠、干酪乳杆菌和酵母菌分别用牦牛脱脂乳培养基培养后通过离心获得的絮状沉积物。
[0011]可选的，在所述保护剂中，按重量份数计；具体包括:脱脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、壳寡糖4份、维生素I份。
[0012]可选的，所述藏灵菇菌冻干发酵剂为粉末状。
[0013]本发明实施例还提供了一种根据上述藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法，包括以下步骤:
[0014](I)、从新鲜的藏灵菇中分离提取出乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌；
[0015](2)、分别将所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌接入到牦牛脱脂乳培养基中，振荡培养后离心，得到四种菌液沉积物；
[0016](3)、将四种所述菌液沉积物按照既定的体积比接种到牦牛脱脂乳培养基中，恒温振荡培养后离心，得到混合菌沉淀物；
[0017](4)、将所述混合菌沉淀物和保护剂按照既定的质量比混合，依次在4°C平衡20-25分钟、在_30°C预冻40-50分钟、在_80°C预冻60-70分钟，最后进行真空冷冻干燥，得到藏灵菇菌冻干发酵剂。
[0018]可选的，步骤(I)具体包括:将新鲜的藏灵菇进行研磨匀浆，得到均浆液；将均浆液振荡摇匀后用无菌生理盐水稀释，得到不同稀释倍数的菌悬液；利用培养基培养所述述菌悬液，并通过分离和纯化，得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌。
[0019]可选的，在步骤⑵中，具体包括:分别将所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌按照3.5%的接种量接入到牦牛脱脂乳培养基中，在28-31°C、转速180-190转/分，培养4-5小时后离心，得到四种菌液沉积物。
[0020]可选的，在步骤(3)中:所述恒温振荡培养的温度为37_42°C、时间为4小时_6小时、转速为180转/分-220转/分；所述离心的转速为5000转/分钟、时间为5分钟。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]为了更清楚地说明本发明【具体实施方式】或现有技术中的技术方案，下面将对【具体实施方式】或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0022]图1为本发明实施例四提供的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备流程示意图。
【具体实施方式】
[0023]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，基于本发明中的【具体实施方式】，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
[0024]本发明提供的这种藏灵菇菌冻干发酵剂，其原料组份包括:从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物70-90份、保护剂10-30份；其中，所述混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳杆菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物。所述保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、海藻糖、维生素以及谷氨酸钠中的一种或多种。
[0025]本发明实施例提供的这种藏灵菇菌冻干发酵剂，其从藏灵菇中分离出四种优势菌种，四种优势菌(乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌、酵母菌)通过牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后，分别得到了四种菌的菌液沉淀物，将这四种菌液沉淀物按照既定的体积比在接入到牦牛脱脂乳培养基中培养，进而得到了混合菌沉淀物；在混合菌沉淀物中，这四种菌均作为风味菌。与保护剂以既定的重量比例混合之后，通过真空冷冻干燥，即可得到冻干发酵剂。
[0026]本发明实施例提供的这种冻干发酵剂，其来源于藏灵菇菌，通过分离培养只获得了四种优势菌种作为风味菌，进而克服了现有技术中直接将藏灵菇菌作为发酵剂时，其含有大量杂菌的缺陷，分离出的这四种菌，其以最佳的比例配合，通过培养并得到混合菌沉淀物，在作为发酵剂的时候，由于没有杂菌，其发酵获得的酸乳安全卫生。并且由于不含杂菌，其发酵获得的酸乳还不易腐坏，保质期长。
[0027]另外，通过实践证明，本发明实施例提供的这种冻干发酵剂，其还具有复活率高、发酵性能好、易于保存以及适合规模化生产的优点。
[0028]作为可选的技术方案，在本发明中，所述乳球菌菌液沉淀物、乳明串珠菌液沉淀物、干酪乳杆菌菌液沉淀物和酵母菌菌液沉淀物为将从藏灵菇中分离出的乳球菌、乳明串珠、干酪乳杆菌和酵母菌分别用牦牛脱脂乳培养基培养后通过离心获得的絮状沉积物；并且，在所述保护剂中，按重量份数计；具体包括:脱脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、壳寡糖4份、维生素I份；另外，所述藏灵菇菌冻干发酵剂可为粉末状。
[0029]此外，本发明还结合上述的内容，对藏灵菇菌冻干发酵剂的组成提供了以下具体的实施例:
[0030]实施例一
[0031]本实施例的藏灵菇菌冻干发酵剂，按照重量份数计，其原料组份包括:
[0032]从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物70份、保护剂10份；
[0033]其中，所述混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物1.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5份、干酪乳杆菌菌液沉淀物2.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物。所述保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、维生素(脱脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、壳寡糖4份、维生素I份)。
[0034]实施例二
[0035]本实施例的藏灵菇菌冻干发酵剂，按照重量份数计，其原料组份包括:
[0036]从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物80份、保护剂20份；
[0037]其中，所述混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物2份、乳明串珠菌菌液沉淀物4份、干酪乳杆菌菌液沉淀物2份、酵母菌菌液沉淀物I份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物。所述保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、维生素以及谷氨酸钠(脱脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、壳寡糖4份、维生素I份、谷氨酸钠I份)。
[0038]实施例三[0039]本实施例的藏灵菇菌冻干发酵剂，按照重量份数计，其原料组份包括:
[0040]从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物90份、保护剂30份；
[0041]其中，所述混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物4.5份、干酪乳杆菌菌液沉淀物3.5份、酵母菌菌液沉淀物1.5份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物。所述保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、维生素以及谷氨酸钠(脱脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、壳寡糖4份、维生素I份、谷氨酸钠I份)。
[0042]为了使得本发明上述实施例的藏灵菇菌冻干发酵剂得到更好的应用，更加有效应用到发酵领域中，本发明还在上述实施例的基础之上提供了实施例四，实施例四给出了上述实施例的藏灵菇菌冻干发酵剂的制作方法，现做详细的阐述和解释，请参考图1:
[0043]实施例四
[0044]请参考图1，在本实施例中，藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法包括以下步骤:
[0045]步骤101:从新鲜的藏灵菇中分离提取出乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌；
[0046]在步骤101中，对新鲜的藏灵菇进行处理，然后再通过分离、提取以及纯化的操作，即可得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌，四种菌获得之后需要保藏在4°C冰箱中备用。
[0047]步骤102:分别将所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌接入到牦牛脱脂乳培养基中，振荡培养后离心，得到四种菌液沉积物；
[0048]在步骤102中，分别将4种菌利用牦牛脱脂乳培养基进行培养，进而获得四种菌的纯培养物，通过离心之后，即可获得四种菌液沉积物。
[0049]步骤103:将四种所述菌液沉积物按照既定的体积比接种到牦牛脱脂乳培养基中，恒温振荡培养后离心，得到混合菌沉淀物；
[0050]在步骤103中，将获得的4中菌液沉积物按照既定的体积比接种到牦牛脱脂乳培养基中，进行再次培养，通过离心后，获得混合菌沉淀物。
[0051]步骤104:将所述混合菌沉淀物和保护剂按照既定的质量比混合，依次在4°C平衡20-25分钟、在_30°C预冻40-50分钟、在_80°C预冻60-70分钟，最后进行真空冷冻干燥，得到藏灵菇菌冻干发酵剂；
[0052]在步骤104中，得到的混合菌沉淀物(絮状液体)，将其以既定的比例和保护剂混匀，通过平衡、预冻之后，进行真空冷冻干燥，进而获得粉末状的冻干发酵剂，得到发酵剂之后在4 C冰箱中保存，待用。
[0053]此外，为了使得上述的方法更加清楚明了、便于实施，本发明还在上述实施例四的基础之上提供了实施例五，实施例五是对实施例四提供的方法做出的进一步的限定以及增力口，具体的步骤请参考以下内容:
[0054]实施例五
[0055]本实施例的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法具体包括以下步骤:
[0056]S1:将新鲜的藏灵菇进行研磨匀浆，得到均浆液；
[0057]具体的，藏灵菇采用西藏当地的新鲜藏灵菇取(其重量约为5g)，无菌条件下研磨匀浆，进而得到匀浆液。[0058]S2:将均浆液振荡摇匀后用无菌生理盐水稀释，得到不同稀释倍数的菌悬液；
[0059]在稀释的过程中，取ImL匀浆液，加入9mL无菌生理盐水，稀释成10'再吸取ImL上级稀释液加入到9mL无菌生理盐水中稀释，配成10_2倍稀释液，依次按10倍法稀释，稀释到10_7梯度。
[0060]在本实施例中，为了保证菌种的生长条件，接种的均浆液的稀释倍数优选为:10_5、10_6、10_7浓度的梯度稀释液(菌悬液)。
[0061]S3:利用培养基培养所述述菌悬液，并通过分离和纯化，得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌；
[0062]具体的，将上述的稀释液(菌悬液)取0.1mL倒入MRS培养基中，轻轻摇晃使液体均匀的平铺在培养基上，37°C培养72小时。观察培养基上菌落，挑取有透明圈的菌落，进行革兰氏染色并观察其形态。挑取革兰氏染色阳性菌落再进行接触酶实验，阴性者为乳酸菌；将确定为乳酸菌菌落的再次在培养基上划线培养，重复2-3次，直至镜检为纯培养物止。纯化后的菌株接种至MRS斜面上培养，培养后至4°C冰箱中保存备用。
[0063]另外，进一步的，为了分离出乳酸菌球菌，分别从上述2种菌悬液中选择3个最高稀释度，每个稀释度取0.1ml，分别涂布于MRS+和LEE平板，30°C，培养48_72h，然后挑取不同形态的典型菌落制片，革兰氏染色观察并进行接触酶试验。凡属革兰氏阳性菌兼接触酶阴性的菌落继续在原培养基上划线纯化，重复3次，直至镜检为纯培养物止。纯化后的菌株接种至MRS斜面上培养，培养后至4°C冰箱中保存备用。
[0064]对于酵母菌的分离和纯化，可以按照以下的操作进行:分别从2种菌悬液中选择3个稀释度，每个稀释度取0.1ml分别涂布于YGC平板，30培养24_48h，挑取不同形态的单个菌落画线纯化，纯化重复3次，直至镜检为纯培养物止，纯化后的菌株接种至YGC斜面培养基上，培养后至4°C冰箱中保存、备用。
[0065]另外，对于菌种的鉴定操作，乳酸菌的生理生化鉴定包括明胶液化试验、石蕊牛乳试验、吲哚试验、淀粉水解试验、产硫化氢试验、硝酸盐还原试验、产黏液试验及糖发酵试验等完成。酵母菌的生理生化鉴定操作包括产淀粉类化合物试验、尿素分解试验、高渗透压试验、硝酸盐同化试验、产子囊孢子试验、产掷孢子试验、牛奶胨化试验、同化乙醇试验等完成。
[0066]具体的，通过上述的操作之后，从藏灵菇中分离到5株乳酸菌，其形态及部分生理学特性见表I。该5株菌均不运动，均在10°C下生长，45°C不生长，硝酸盐还原、明胶液化、产硫化氢及淀粉水解试验皆为阴性，其中ZLG2、ZLG4菌株产气，且能在7% NaCl中生长，初步确定:ZLG2为乳酸乳球菌；ZLG4为乳明串珠菌；ZLG7为干酪乳杆菌。具体结果请参照表
I:
[0067]表I藏灵菇中乳酸菌鉴定结果
[0068]
【权利要求】
1.一种藏灵菇菌冻干发酵剂，其特征在于，按照重量份数计，其原料组份包括: 从藏灵菇中分离出的混合菌沉淀物70-90份、保护剂10-30份； 其中，所述混合菌沉淀物为将按体积份数计的乳球菌菌液沉淀物1.5份-2.5份、乳明串珠菌菌液沉淀物3.5-4.5份、干酪乳杆菌菌液沉淀物2.5-3.5份、酵母菌菌液沉淀物0.5-1.5份同时接种到牦牛脱脂乳培养基恒温振荡培养、离心后获得的沉积物； 所述保护剂包括脱脂牦牛乳、牦牛奶油、壳寡糖、海藻糖、维生素以及谷氨酸钠中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的藏灵菇菌冻干发酵剂，其特征在于，所述乳球菌菌液沉淀物、乳明串珠菌液沉淀物、干酪乳杆菌菌液沉淀物和酵母菌菌液沉淀物为将从藏灵菇中分离出的乳球菌、乳明串珠、干酪乳杆菌和酵母菌分别用牦牛脱脂乳培养基培养后通过离心获得的絮状沉积物。
3.根据权利要求2所述的藏灵菇菌冻干发酵剂，其特征在于，在所述保护剂中，按重量份数计；具体包括: 脱脂牦牛乳13份、牦牛奶油2份、壳寡糖4份、维生素1份。
4.根据权利要求2所述的藏灵菇菌冻干发酵剂，其特征在于，所述藏灵菇菌冻干发酵剂为粉末状。
5.一种根据权利要求1所述的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)、从新鲜的藏灵菇中分离提取出乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌； (2)、分别将所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌接入到牦牛脱脂乳培养基中，振荡培养后离心，得到四种菌液沉积物； (3)、将四种所述菌液沉积物按照既定的体积比接种到牦牛脱脂乳培养基中，恒温振荡培养后离心，得到混合菌沉淀物； (4)、将所述混合菌沉淀物和保护剂按照既定的质量比混合，依次在4°C平衡20-25分钟、在_30°C预冻40-50分钟、在-80°C预冻60-70分钟，最后进行真空冷冻干燥，得到藏灵菇菌冻干发酵剂。
6.根据权利要求5所述的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)具体包括: 将新鲜的藏灵菇进行研磨匀浆，得到均浆液； 将均浆液振荡摇匀后用无菌生理盐水稀释，得到不同稀释倍数的菌悬液； 利用培养基培养所述述菌悬液，并通过分离和纯化，得到乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌。
7.根据权利要求6所述的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，具体包括: 分别将所述乳球菌、乳明串珠菌、干酪乳杆菌和酵母菌按照3.5%的接种量接入到牦牛脱脂乳培养基中，在28-31°C、转速180-190转/分，培养4_5小时后离心，得到四种菌液沉积物。
8.根据权利要求7所述的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中:所述恒温振荡培养的温度为37-42°C、时间为4小时-6小时、转速为180转/分-220转/分； 所述离心的转速为5000转/分钟、时间为5分钟。
9.根据权利要求5-8任一项所述的藏灵菇菌冻干发酵剂的制备方法，其特征在于，每100mL所述牦牛脱脂乳培养基中，包括: 葡萄糖1.5-2.5g、牦牛肉膏0.8-1.2g、柠檬酸三铵0.2g、乙酸钠0.5g、MgSO4.7Η200.058g、MnSO4.4Η200.025g、VB60.06g、吐温 7_9ml，余量为蒸馏水。
【文档编号】A23C9/12GK103999934SQ201410243682
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年6月3日 优先权日:2014年6月3日
【发明者】色珠, 佘永新, 马兴斌, 吴金措姆, 拉巴次旦, 巴桑旺堆, 朱彦宾, 四朗玉珍, 罗布顿珠, 姚海潮, 班旦 申请人:西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所