人源抗h7n9禽流感病毒中和性抗体d5、其制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种利用噬菌体表面展示技术筛选获得的人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体D5，其轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示。该抗体能够特异性识别H7N9病毒颗粒抗原，可与H7N9病毒发生显著的酶联免疫反应且具有抗H7N9病毒感染的中和活性功能。此外，可将本发明的抗体制成预防和治疗H7N9禽流感病毒的特异性抗体药物，从而在临床中用于预防和治疗由H7N9病毒引起的急性呼吸道传染病。
【专利说明】人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体D5、其制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因工程及噬菌体表面展示技术，具体地说，涉及人源抗H7N9禽流感 病毒中和性抗体D5、其制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] H7N9禽流感是由H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。自2013年2月以 来，上海市、安徽省、江苏省先后发生不明原因重症肺炎病例。患者一般表现为流感样症状， 如发热，咳嗽，少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适。重症患者病情发展迅速，表现为重 症肺炎，体温大多持续在39°C以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰；可快速发展出现急性呼 吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等，死亡率较高。
[0003] 由H7N9病毒引起的急性呼吸道传染病目前没有相应的疫苗和特异性药物，因此 制备高效、价廉、副反应小的被动免疫制剂成为研究的热点。利用含有特异性抗体的人源或 动物血清免疫球蛋白来预防和治疗传染病由来已久。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和 体内保护机体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明，如汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病 毒等中和性单克隆抗体可以在体内100%保护动物免受病毒攻击。
[0004] 免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig)作为抗体成分主要来自捐献者（恢复期病人） 免疫血清，从获得阳性血清到通过安全性检测耗时较长，且需投入大量的人力和财力，这就 使其大量制备受到限制，同时由于抗体主要来源于血清，因此容易发生血源性传播疾病的 感染。而使用人源基因工程产品替代血制品则可克服这些缺陷，随着人源基因工程抗体研 究的不断深入，给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和广阔前景。
[0005] 90年代初兴起的噬菌体抗体基因库技术（Barbas, C. F.等，1991)和整个基因工程 抗体技术研究领域的发展，极大促进了人源或基因工程抗体的开发研究，并已由基础研究 阶段步入实质性应用研究和开发阶段。人源抗病毒基因工程抗体，尤其是人源全抗体的研 究成功，给各种病毒性传染病的特异性预防和治疗开辟了新思路，并在抗病毒感染生物医 药领域中逐渐开发出一类新的抗病毒药物。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体D5、其制备方法及 应用。
[0007] 为了实现本发明目的，本发明的一种人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体D5或其 活性片段，其轻链高变区⑶R1、⑶R2和⑶R3以及重链高变区⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸 序列如表1所示：
[0008] 表1轻链和重链高变区的氨基酸序列
[0009]
【权利要求】
1. 人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体D5或其活性片段，其特征在于，其轻链及重链高 变区⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列如下表所示：
2. 根据权利要求1所述的中和性抗体D5,其特征在于， i) 其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个 或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；以及 ii) 其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示，或该序列经替换、缺失或添加一 个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
3. 编码权利要求2所述中和性抗体D5的基因。
4. 根据权利要求3所述的基因，其特征在于，编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸 序列分别如SEQ ID No. 3和SEQ ID No. 4所示。
5. 含有权利要求3或4所述基因的载体。
6. 含有权利要求3或4所述基因的宿主细胞。
7. 权利要求1所述中和性抗体D5或其活性片段经改造得到的单链抗体ScFv或全抗体 免疫球蛋白IgG。
8. -种制备人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体方法，其特征在于，利用噬菌体表面 展示技术，采集H7N9禽流感病人恢复期外周血淋巴细胞，通过基因工程方法构建了人源抗 H7N9禽流感病毒基因工程抗体文库，并筛选获得特异性抗H7N9禽流感病毒的基因工程抗 体Fab段。
9. 权利要求1或2所述中和性抗体D5或其活性片段在制备预防或治疗由H7N9禽流 感病毒引起的疾病的药物中的应用。
10. 含有权利要求1或2所述中和性抗体D5或其活性片段的药物或检测试剂。
【文档编号】C12N1/21GK104045710SQ201410273356
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月18日 优先权日:2013年8月2日
【发明者】陈哲, 金奇 申请人:中国医学科学院病原生物学研究所