干细胞培养灌流装置制造方法
【专利摘要】本发明提供一种干细胞培养灌流装置，包括灌流瓶、饲养层细胞培养器、细胞灌流槽和废液瓶，所述待培养细胞灌流瓶瓶口处设置第一滤头和输入管，所述输入管上设置一可显示pH值和控制温度的第一控制器，所述输入管尾端浸入饲养层细胞培养器，通过基底设置半透膜的饲养层细胞培养器连接的第一连接管上设置第二控制器和第一蠕动泵，所述细胞灌流槽两端分别连接第二连接管和第三连接管，所述第二连接管另一端与所述第一蠕动泵相连，所述第三连接管另一端与所述第二蠕动泵相连，所述废液瓶瓶口设置输出管和第二滤头，所述输出管另一端连接所述第二蠕动泵。本发明通过第一控制器和第二控制器的作用，可观察不同温度和pH值变化，控制蠕动泵的速率，同时又可避免因人工观察记录而产生误差数值，通过细胞灌流槽的设备输出，可提高干细胞的培养速率。
【专利说明】干细胞培养灌流装置
【技术领域】
[0001 ] 本发明属于一种灌流装置，尤其涉及一种用于干细胞培养灌流装置。
【背景技术】
[0002]在胚胎干细胞体外培养中，除了正常的培养基外，需要先培养一层特殊的细胞(如小鼠胚胎成纤维-mouse embryonic fibroblast MEF细胞等)，然后再在其上接种要实验的干细胞。这些特殊的细胞就是饲养层细胞，通常是成纤维类细胞，这些细胞可以分泌一些未知的必须生长因子如白血病抑制因子(leukemia inhibitoryfactor, LIF)、干细胞因子(stem cell factor, SCF)和喊性成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast growthfactor,bFGF)等，提供胚胎干细胞、诱导多能干细胞更好的营养。这些因子对干细胞的存活和增殖是必需的，不仅可以使其数量增加，而且与干细胞在体内外的分化有关。实验证明，饲养层细胞的作用不仅仅是产生了一些细胞因子，在大多数细胞发育和分化过程中，细胞的黏附作用都发挥了相当重要的作用。ES细胞不能作为完全独立的细胞而生存，总是与周围的细胞相联系着，在信号传导中的黏附受体调节着细胞的运动、增殖和分化。通常在胚胎干细胞/诱导多能干细胞培养体系下，饲养层细胞与干细胞处于共培养状态，两者无法分离彻底。如果采用饲养层与干细胞分别静态培养的方式，无法实时将饲养层细胞分泌的因子传送到干细胞培养体系内，且操作过程多，大多不被采用。传统共培养方式影响干细胞纯度，已在干细胞应用等方面起到了很大的限制作用，提高培养装置的反应速率无疑是本领域技术人员的共同目标。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的问题是提供干细胞培养灌流装置，常规使用的灌流装置不方便实时观察，同时培养速率有待提高。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:
[0005]干细胞培养灌流装置，包括灌流瓶、饲养层细胞培养器、真空培养器和废液瓶，所述灌流瓶瓶口处设置第一滤头和输入管，所述第一滤头可以使所述灌流瓶内的压强和外界相同，并且可以隔绝外界空气中的细菌污染，所述输入管上设置一控制温度和PH值的第一控制器，所述输入管尾端浸入饲养层细胞培养器，通过基底设置半透膜的饲养层细胞培养器连接的第一连接管上设置一第二控制器和第一蠕动泵，确保饲养层细胞培养器内的细胞可在适应细胞繁殖的温度和流速下进行细胞培养，所述细胞灌流槽内腔体底部设置一形状规则经消毒处理的脱脂棉，脱脂棉贴合于细胞灌流槽内腔体底部，所述脱脂棉上部设置一网状结构，网状结构上部设置放置细胞的灌流槽支撑部，通过脱脂棉和网状结构共同作用，可抬高灌流槽支撑部的反应位置，使细胞充分接触带有营养物质的流动空气，脱脂棉和网状结构均不能与细胞培养液直接接触，同时脱脂棉和网状结构还能确保灌流槽支撑部与细胞灌流槽内腔体底部不直接接触起到保温的功效，所述细胞灌流槽下部设置一支撑架，确保细胞灌流槽在空中某位置处获得稳固支撑，所述细胞灌流槽两端分别连接第二连接管和第三连接管，所述第二连接管另一端与所述第一蠕动泵相连，所述第三连接管另一端与所述第二蠕动泵相连，所述废液瓶瓶口设置输出管和第二滤头，所述第二滤头可以使所述废液瓶内的压强和外界相同，并且可以隔绝外界空气中的细菌污染，所述输出管另一端连接所述第二蠕动泵。
[0006]进一步地，所述饲养层细胞培养器底部设置一细胞培养板，且所述半透膜位于所述细胞培养板上。
[0007]进一步地，所述细胞灌流槽两端设置防止培养细胞穿过的半透膜，但半透膜能使液体自由通过。
[0008]进一步地，所述细胞灌流槽中部设置一环形透明孔，方便观察细胞灌流槽内细胞繁殖情况。
[0009]本发明具有的优点和积极效果是:本发明所述的一种干细胞培养灌流装置，该装置通过第一控制器和第二控制器的作用，可观察不同温度下PH值变化以及通过不同pH值判断蠕动泵的流速，同时又可避免因人工测量而产生误差数值，两个蠕动泵、脱脂棉和网状结构的使用以及细胞灌流槽两端的半透膜的作用，提高干细胞的培养速率，还能使细胞灌流槽起到保温功效。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1是本发明的示意图
[0011]图中:
[0012]1-灌流瓶2-第一滤头 3-输入管 4-第一控制器
[0013]5-饲养层细胞培养器6-第一连接管 7-第二控制器
[0014]8-第一蠕动泵9-第二连接管10-细胞灌流槽
[0015]11-第三连接管12-第二蠕动泵 13-输出管
[0016]14-第二滤头15-废液瓶16-支撑架
【具体实施方式】
[0017]下面结合附图对本发明的具体实施例做详细说明。
[0018]如图1所示，干细胞培养灌流装置，包括灌流瓶1、饲养层细胞培养器5、细胞灌流槽10和废液瓶15，灌流瓶I瓶口处设置第一滤头2和输入管3，第一滤头2可以使灌流瓶I内的压强和外界相同，并且可以隔绝外界空气中的细菌污染，输入管3上设置一控制温度和PH值的第一控制器4，输入管3尾端浸入饲养层细胞培养器5，通过基底设置半透膜的饲养层细胞培养器5连接的第一连接管6上设置第二控制器7和第一蠕动泵8，确保饲养层细胞培养器5内的细胞可在适应细胞繁殖的温度和流速下进行细胞培养，细胞灌流槽10内腔体底部设置一形状规则经消毒处理的脱脂棉，脱脂棉贴合于细胞灌流槽10内腔体底部，脱脂棉上部设置一网状结构，网状结构上部设置放置细胞的灌流槽支撑部，通过脱脂棉和网状结构共同作用，可抬高灌流槽支撑部的反应位置，使细胞充分接触带有营养物质的流动空气，提高干细胞的培养速率，脱脂棉和网状结构均不能与细胞培养液直接接触，同时脱脂棉和网状结构还能确保灌流槽支撑部与细胞灌流槽10内腔体底部不直接接触起到保温的功效，细胞灌流槽10下部设置一支撑架16，确保细胞灌流槽10在空中某位置处获得稳固支撑，细胞灌流槽10两端分别连接第二连接管9和第三连接管11，第二连接管9另一端与第一蠕动泵8相连，第三连接管11另一端与第二蠕动泵12相连，废液瓶15瓶口设置输出管13和第二滤头14，第二滤头14可以使废液瓶15内的压强和外界相同，并且可以隔绝外界空气中的细菌污染，输出管13另一端连接第二蠕动泵12 ;饲养层细胞培养器5底部设置一细胞培养板；细胞灌流槽10两端设置防止培养细胞穿过的半透膜，但半透膜能使液体自由通过；细胞灌流槽10中部设置一环形透明孔，方便观察细胞灌流槽内细胞繁殖情况。
[0019]本发明在使用时，灌流瓶I内装入适于干细胞培养繁殖的养料，饲养层细胞培养器5内装入补充营养素，通过第一蠕动泵8和第二蠕动泵12的作用将灌流瓶I内的养料流入饲养层细胞培养器5和细胞灌流槽10中，为干细胞提供充足的营养，提高干细胞的培养速率，饲养层细胞培养器5底部的半透膜的具体孔径大小控制在能阻止干细胞通过但能实现液体通过即可，同样地，细胞灌流槽10两端的半透膜具体孔径大小控制在能阻止干细胞通过但能实现液体通过即可，此灌流装置可在第一控制器4和第二控制器7和两个蠕动泵(8、12)共同作用下完成干细胞的培养繁殖，方便记录不同温度、pH值时饲养层细胞培养器5及细胞灌流槽10内干细胞培养繁殖的情况，避免因人工观察测量而产生温度及PH值的误差数值，通过细胞灌流槽10设备输出，可提高干细胞的培养速率。
[0020]以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。
【权利要求】
1.干细胞培养灌流装置，其特征在于:包括灌流瓶(I)、饲养层细胞培养器(5)、细胞灌流槽(10)和废液瓶(15)； 所述灌流瓶(I)瓶口处设置第一滤头(2)和输入管(3)，所述输入管(3)上设置一可显示PH值和控制温度的第一控制器(4)，所述输入管(3)尾端浸入饲养层细胞培养器(5)，通过基底设置半透膜的饲养层细胞培养器(5)连接的第一连接管(6)上设置一可显示pH值和控制温度的第二控制器(7)和第一蠕动泵(8)，所述细胞灌流槽(10)内腔体底部设置一形状规则经消毒处理的脱脂棉，所述脱脂棉上部设置一网状结构，所述网状结构上部设置放置细胞的灌流槽支撑部，且脱脂棉和网状结构均不能与细胞培养液直接接触，所述细胞灌流槽(10)下部设置一支撑架(16)，所述细胞灌流槽(10)两端分别连接第二连接管(9)和第三连接管(11)，所述第二连接管(9)另一端与所述第一蠕动泵(8)相连，所述第三连接管(11)另一端与所述第二蠕动泵(12)相连，所述废液瓶(15)瓶口设置输出管(13)和第二滤头(14)，所述输出管(13)另一端连接所述第二蠕动泵(12)。
2.根据权利要求1所述的干细胞培养灌流装置，其特征在于:所述饲养层细胞培养器(5)底部设置一细胞培养板且所述半透膜位于所述细胞培养板上。
3.根据权利要求1所述的干细胞培养灌流装置，其特征在于:所述细胞灌流槽(10)两端设置半透膜。
4.根据权利要求1所述的干细胞培养灌流装置，其特征在于:所述细胞灌流槽(10)中部设置一环形透明孔。
【文档编号】C12M1/38GK104403946SQ201410812200
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月22日 优先权日:2014年12月22日
【发明者】孙丽娟, 申靖毅, 贾梦, 张雨时, 王冠华 申请人:顺昊细胞生物技术（天津）股份有限公司