一种麝香草酚纳米脂质体及其制备方法与流程

本发明属于微胶囊包埋技术领域，更具体地说，尤其涉及一种麝香草酚纳米脂质体。同时，本发明还涉及一种麝香草酚纳米脂质体的制备方法。

背景技术：

麝香草酚又称百里香酚，化学名称为5-甲基-2-异丙基苯酚，存在于百里香油、牛至油、丁香罗勒油等植物精油中，具有特殊香气和较强的防腐杀菌及抗氧化性能，常用于配制胶姆糖、蘑菇香和柑桔等香型香精。麝香草酚通过破坏细胞膜完整性、影响无机离子平衡和pH稳定性而发挥其抑菌性能。麝香草酚苯环上的羟基能够提供H⁺给自由基，从而延缓氧化过程。此外，麝香草酚还具有潜在的护肝、抗癌和抗肿瘤作用。尽管麝香草酚被FDA认证为GRAS的食品添加剂，但其较差的水分散性和稳定性，限制了其在工业中的应用。通过构建合适的载体，可提高其水溶性，扩大反应界面，并进一步提高其抑菌和抗氧化活性。

脂质体(liposome)是由磷脂或其类似物分散于水相中形成的具有双分子层结构的封闭囊泡。目前，认同较广的脂质体形成机制是磷脂和水分子之间相互作用，磷脂极性头部位于脂双层内外表面，疏水性尾部位于脂双层中间，自发形成了双分子层囊泡结构。这种结构特性使得脂质体可以同时包埋亲水性、疏水性和两亲性物质。因其制备方法简单，且具有靶向性、缓释性、细胞亲和性和组织相容性，在食品领域已被成功应用于抗菌剂、酶、食品添加剂和营养素的包埋和运载。将脂质体的粒径控制在纳米尺度，可进一步提高其生物相容性、穿透性和体内靶向性。

目前尚无关于麝香草酚纳米脂质体的报道，传统的脂质体配方和制备方法仍存在使用有毒有机溶剂、粒径大且分散不均一、稳定性不高和工业化较难实现等不足。

为扩大麝香草酚的应用范围，提高其水分散性、稳定性和生理利用程度，本发明采用薄膜分散法制备麝香草酚纳米脂质体，开发一种同时具有抗氧化和抗菌作用的水分散性食品添加剂。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种麝香草酚纳米脂质体及其制备方法，作为一种新型食品、化妆品添加剂，以提高麝香草酚的分散性、稳定性和生物利用率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种麝香草酚纳米脂质体，所述麝香草酚纳米脂质体的配方如下：按照质量组份计：其麝香草酚9-25份、大豆卵磷脂90-200份、二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000 4-10份、胆固醇3-8份、抗氧化剂0.5-1.2份和吐温80 0.15-0.4份。

优选的，所述麝香草酚为提取自百里香油、牛至油的天然产物。

优选的，所述胆固醇为蛋黄胆固醇。

优选的，所述抗氧化剂为维生素E和表没食子儿茶素没食子酸酯。

本发明还提供一种麝香草酚纳米脂质体的制备方法，包括如下步骤：

S1、按量称取麝香草酚、维生素E、大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000，经磁力搅拌溶于食用酒精中；

S2、将S1所得溶液经减压蒸发除去溶剂，溶质形成均匀薄膜；

S3、将溶解表没食子儿茶素没食子酸酯的磷酸盐缓冲液和吐温80加入至薄膜中，冰浴超声8-10min，即得麝香草酚纳米脂质体。

优选的，在S1中，大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000质量比为10-20：1，麝香草酚与大豆卵磷脂质量比为1：8-14，维生素E与大豆卵磷脂质量比为0.005-0.01：1，磁力搅拌时间为0.5-2h，按照mg/mL为单位计，固液比为5：1。

优选的，在S2中，减压蒸发温度为40℃，真空度为0.05-0.1Mpa。

优选的，在S3中，缓冲液为pH7.2的0.05M的磷酸盐缓冲液，按照以mg/ml为单位计的液固比，缓冲液体积为大豆卵磷脂用量的10-15倍，表没食子儿茶素没食子酸酯与磷酸盐缓冲液的固液比为0.0001-0.0002：1，吐温80与缓冲液的体积比为0.002-0.005：1。

优选的，在S3中，所述冰浴超声功率200w，超声2s，停止2s。

本发明的技术效果和优点：本发明提供的一种麝香草酚纳米脂质体，与传统技术相比，本发明具有以下特点：

（1）所用原料多为食品级或天然来源，避免引入有毒试剂，安全性更高；

（2）配方中维生素E和表没食子儿茶素没食子酸酯协同发挥抗氧化作用，防止磷脂氧化，可增加脂质体的稳定性；

（3）制得的麝香草酚纳米脂质体粒径为96-105nm，多分散指数为0.196-0.201，包封率为86.1-89.3%,常温下贮藏12d仍能保持较好的稳定性；

（4）该方法操作简单，较易实现规模化工业生产。

附图说明

图1 为麝香草酚纳米脂质体透射电镜照片(×20000)。

图2为麝香草酚纳米脂质体粒径和包封率随时间变化图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种麝香草酚纳米脂质体，所述麝香草酚纳米脂质体的配方如下：按照质量组份计：其麝香草酚10mg、大豆卵磷脂100mg、二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000 5mg、胆固醇3mg、维生素E 0.5mg、表没食子儿茶素没食子酸酯0.2mg、吐温80 0.16ml。

称取10mg麝香草酚、100mg大豆卵磷脂、5mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000和0.5mg维生素E，经1h磁力搅拌溶于23ml食用酒精中；在真空度为0.1Mpa，温度为 40 ℃条件下减压蒸发除去溶剂，溶质形成均匀薄膜；将溶解有0.2mg表没食子儿茶素没食子酸酯的80ml磷酸盐缓冲液和0.16ml吐温80加入至薄膜中，冰浴超声10min (200W，2s开，2s停)，即得麝香草酚纳米脂质体。

所制得的麝香草酚纳米脂质体的平均粒径为96.39nm，PDI为0.201，平均包封率为88.2%，具体形状为近球形结构。

实施例2

一种麝香草酚纳米脂质体，所述麝香草酚纳米脂质体的配方如下：按照质量组份计：其麝香草酚10mg、大豆卵磷脂80mg、二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000 4mg、胆固醇4mg、维生素E 0.4mg、表没食子儿茶素没食子酸酯0.25mg、吐温80 0.2ml。

称取10mg麝香草酚、80mg大豆卵磷脂、4mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000和0.4mg维生素E，经1.5h磁力搅拌溶于18.8ml食用酒精中；在真空度为0.08Mpa，温度为 40 ℃条件下减压蒸发除去溶剂，溶质形成均匀薄膜；将溶解有0.25mg表没食子儿茶素没食子酸酯的100ml磷酸盐缓冲液和0.2ml吐温80加入至薄膜中，冰浴超声8min (200W，2s开，2s停)，即得麝香草酚纳米脂质体。

所制得的麝香草酚纳米脂质体的平均粒径为98.12nm，PDI为0.196，平均包封率为89.3%，具体形状为近球形结构。

实施例3

一种麝香草酚纳米脂质体，所述麝香草酚纳米脂质体的配方如下：按照质量组份计：其麝香草酚20mg、大豆卵磷脂180mg、二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000 9mg、胆固醇3mg、维生素E 0.9mg、表没食子儿茶素没食子酸酯0.25mg、吐温80 0.16ml。

称取20mg麝香草酚、180mg大豆卵磷脂、9mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇5000和0.9mg维生素E，经2h磁力搅拌溶于41.8ml食用酒精中；在真空度为1Mpa，温度为 40 ℃条件下减压蒸发除去溶剂，溶质形成均匀薄膜；将溶解有0.25mg表没食子儿茶素没食子酸酯的180ml磷酸盐缓冲液和0.36ml吐温80加入至薄膜中，冰浴超声10min (200W，2s开，2s停)，即得麝香草酚纳米脂质体。

所制得的麝香草酚纳米脂质体的平均粒径为102.88nm，PDI为0.208，平均包封率为86.1%，具体形状为近球形结构。

实施例 4 麝香草酚纳米脂质体的粒径及多分散指数的测定

采用PBS缓冲液将脂质体适当稀释后，加至专用比色皿中，采用纳米粒度仪测定其平均粒径及多分散指数。

实施例 5 麝香草酚纳米脂质体包封率的测定

麝香草酚纳米脂质体混悬液倒入125 mL梨形分液漏斗，加入20 mL石油醚（30～60℃），振摇，使其与麝香草酚纳米脂质体充分混匀，静置分层，用旋转蒸发的方式去除石油醚，圆底烧瓶中残渣用乙酸乙酯溶解并定容至25 mL，再取1mL于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度；

以空白脂质体同法制得的乙酸乙酯溶液为空白对照液，测定吸光值A ，根据标准曲线方程，计算未包埋麝香草酚的含量；

计算公式为：包封率=[(总麝香草酚量－未包埋麝香草酚量)/总麝香草酚量]×100%

实施例 6 麝香草酚纳米脂质体的形态观察

将麝香草酚纳米脂质体经PBS缓冲液稀释至适当倍数后，取适量滴于铜网正面，采用滤纸吸干多余样品，再加2%磷钨酸溶液负染4min，再用滤纸吸干多余染液，室温下干燥后采用透射电子显微镜（TEM）观察。

测定结果如图1-2所示。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。