专利名称：作为抗癌剂的新的2-芳基-4-喹诺酮的亲水性衍生物的制作方法
专利说明作为抗癌剂的新的2-芳基-4-喹诺酮的亲水性衍生物 发明领域 本发明涉及新的2-芳基-4-喹诺酮磷酸酯衍生物，及中间体2-硒吩-4-喹诺酮及2-苯基-4-喹诺酮的N，N-二烷基胺烷基衍生物，尤其是有关它们治疗人癌症的用途。
背景技术：
喹诺酮衍生物起初被发现是作用于细菌DNA促旋酶的药剂，因此被开发为一种抗菌剂。最近，DNA拓扑异构酶II显示出可作为此类喹诺酮化合物的药理学靶点。我们已经合成了一系列取代的2-苯基-4-喹诺酮(A)，其明显的具有一种新颖的抗有丝分裂的功能[Kuo，S.C.，Lee，H.Z.，Juang，J.P.，Lin，Y.T.，Wu，T.S.，Chang，J.J.，Lednicer，D.，Paull，K.D.，Lin，C.M.，Hamel，E.Synthesis and cytotoxicity of 1，6，7，8-substituted-(4′-substituedphenyl)-4-quinolones and related compoundsidentification as antimitoticagents interacting with tubulin.J.Med.Chem.1993，36，1146-56；Li，L.，Wang，H.K.，Kuo，S.C.，Wu，T.S.，Mauger，A.，Lin.C.M.，Hamel，E.Lee，K.H.Antitumor agents.155.Synthesis and biological evaluation of 3′，6，7-substitued-phenyl-4-quinolones as antimicrotubule agents.J.Med.Chem.1994，37，3400-7]。接着，我们又合成了很多相关类似物，例如2-苯基萘啶-4-酮(B)[Chen，K.，Kuo，S.C.，Hsieh，M.C.，Mauger，SA.，Lin，C.M.，Hamel，E.，Lee，K.H.Antitumor agents.174.2′，3′，4′，5，6，7-substituted2-phenyl-1，8-naphthyridin-4-onestheir synthesis，cytotoxicity，and inhibitionof tubulin polymerization.J.Med.Chem.1997，40，2266-75]，2-苯基-4-喹唑啉酮(C)[Xia，Y.，Yang，Z.Y.，Hour，M.J.，Kuo，S.C.，Xia，P.，Bastow，K.F.，Nakanishi，Y.，Namrpoothiri，P.，Hackl，T.，Hamel，E.，Lee，K.H.AntitumorAgents.Part 204Synthesis and Biological Evaluation of substituted 2-ArylQuinazolinones，Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，1193-6；Hour，M.J.，Huang，L.J.，Kuo，S.C.，Xia，Y.，Bastow，K.F.，Nakanishi，Y.，Hamel，E.，Lee，K.H.6-Alkylamino-and 2，3-dihydro-3′-methoxy-2-phenyl-4-quinazolinonesand related compoundstheir synthesis，cytotoxicity，and inhibition of tubulinpolymerization.J.Med.Chem.2000，43，4479-87]，及四氢-2-苯基-4-喹诺酮(D)[Xia，Y.，Yang，Z.Y.，Xia，P.，Bastow，K.F.，Tachibana，Y.，Kuo，S.C.，Hamel，E.，Hackl.T.，Lee，K.H.Antitumor agents.181.Synthesis andbiological evaluation of 6，7，2′，3′，4′-substituted-1，2，3，4-tetrahydro-2-phenyl-4-quinolons as a new class of antimitotic antitumor agents.J.Med.Chem.1998，41.1155-62]，建立了初步的构效关系(SAR)。在这些类似物中，我们发现为数不少的化合物具有有效的细胞致毒活性，例如3′，6-二取代的2-苯基-4-喹诺酮(A-1)等[Li，L.，Wang，H.K.，Kuo，S.C.，Wu，T.S.，Lednicer，D.，Lin，C.M.，Hamel，E.，Lee，K.H.Antitumor agents.150.2′，3′，4′，5′，5，6，7-substituted2-phenyl-4-quinolones and related compoundstheir synthesis，cytotoxicity，and inhibition of tubulin polymerization.J.Med.Chem.1994，37，1126-35]。然而，大部份这些具有有效的细胞致毒活性化合物的亲脂性较强，因而不适合体内及体外的临床研究。因此，我们尝试在2-芳基-4-喹诺酮的架构上合成出亲水性衍生物来改善药物动力学性质，以适合用于体内及体外的临床研究。
发明简述 本发明的较佳实施例包括(但不限于)下列项目 1.一种具有下列化学式Ia、Ib或Ic的2-芳基-4-喹诺酮磷酸酯衍生物，
其中 R2′，R3′，R4′，R5′和R6′独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
其中n为0～4的整数，Y为O或S，X为F，Cl或Br，且R8和R9独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，其中n及Y如上所定义，且m为0～4的整数； R2，R3，R4和R5独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
或R3和R4一起为-Y(CH2)nY-，其中n、Y、X、R8及R9如上所定义；且R1及R1′独立地为H、Li+、Na+、K+、N+R8R9R10R11或苄基，其中R10及R11独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，且n、m、Y、R8及R9如上所定义。
2.如前述第1项的磷酸酯衍生物，其具有化学式Ia。
3.如前述第2项的磷酸酯衍生物，其中R2′、R3′、R4′、R5′及R6′全部为H；或R2′、R3′、R4′、R5′及R6′中之一为F、OCH3或(CH2)nNR8R9，且其它的为H，其中n、R8及R9如第1项所定义。
4.如前述第2项的磷酸酯衍生物，其中R2、R3、R4及R5全部为H；或R2、R3、R4及R5中之一为F、OCH3、Y(CH2)nCH3或(CH2)nNR8R9，且其它的为H；或R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-，其中n、Y、R8及R9如第1项所定义。
5.如前述第2项的磷酸酯衍生物，其中R1及R1′均为H或均为Na+。
6.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R2及R5为H，且R3及R4一起为-O(CH2)O-；且R2′、R3′、R4′及R5′全部为H，且R6′为F。
7.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R2及R5为H，及R3及R4一起为-O(CH2)O-；且R2′、R3′、R4′及R6′全部为H，且R5′为F。
8.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R4为F，且R2、R3及R5为H；且R2′、R3′、R4′、R5′及R6′全部为H。
9.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R2、R3、R4及R5全部为H；及R2′、R3′、R4′、R5′及R6′全部为H。
10.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R4为OCH3，且R2、R3及R5为H；且R5′为F，且R2′、R3′、R4′及R6′为H。
11.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)O-；且R2′、R3′、R4′及R6′全部为H，且R5′为OCH3。
12.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R4为CH2N(C2H5)2，且R2、R3及R5为H；且R6′为F，且R2′、R3′、R4′及R5′为H。
13.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R4为CH2N(C2H5)2，且R2、R3及R5为H；且R2′、R3′、R4′、R5′及R6′全部为H。
14.如前述第5项的磷酸酯衍生物，其中R4为OCH3，且R2、R3及R5为H；且R5′为CH2N(C2H5)2，且R2′、R3′、R4′及R6′为H。
15.如前述第1项的磷酸酯衍生物，其具有化学式Ib。
16.如前述第15项的磷酸酯衍生物，其中R2、R3、R4及R5全部为H；或R2、R3、R4及R5中之一为F或OCH3，且其它的为H；或R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-，其中n如第1项所定义。
17.如前述第15项的磷酸酯衍生物，其中R2′、R3′、R4′、R5′及R6′全部为H；或R2′、R3′及R4′中之一为F或OCH3，及其它的为H。
18.如前述第15项的磷酸酯衍生物，其中R1及R1′为苄基。
19.如前述第18项的磷酸酯衍生物，其中R2′、R3′、R4′、R2及R5全部为H，及R3及R4一起为-O(CH2)O-。
20.一种用于杀灭实体癌细胞的药物组合物，包含治疗有效量的如前述第1至19项中任一项所述的2-芳基-4-喹诺酮磷酸酯衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成份，和与之混合的用于该活性成份的药学上可接受的载体或稀释剂，其中该实体癌包含人乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾脏癌、胃癌、前列腺癌、回肠癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、鼻咽表皮样癌、肝癌或白血病。
21.如前述第20项的药物组合物，其中该实体癌为人乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾脏癌、肝癌或白血病。
22.如前述第21项的药物组合物，其中该实体癌为人乳腺癌或结肠癌。
23.一种具有下列化学式IIb或IIc的2-硒吩基-4-喹诺酮化合物，
其中 R2′、R3′和R4′独立地为H，(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3，Y(CH2)nYH，Y(CH2)nNR8R9、X或(CH2)nNR8R9， 其中n为0～4的整数，Y为O或S，X为F、Cl或Br，及R8和R9独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，其中n及Y如上所定义，及m为0～4的整数； R2、R3、R4和R5独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
或R3和R4一起为-Y(CH2)nY-，其中n、Y、X、R8及R9如上所定义。
24.如前述第23项的化合物，其中R2、R3、R4及R5全部为H；或R2、R3、R4及R5中之一为F或OCH3，且其它的为H；或R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-，其中n如前述第23项所定义。
25.如前述第24项的化合物，其中；或R2′、R3′及R4′中之一为F或OCH3，且其它的为H。
26.如前述第23项的化合物，其具有化学式IIb。
27.如前述第26项的化合物，其中R2′、R3′、R4′、R2及R5全部为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-。
28.一种用于杀灭实体癌细胞的药物组合物，包含治疗有效量的如前述第23至27项中任一项所述的2-硒吩基-4-喹诺酮化合物或其药学上可接受的盐作为活性成份，和与之混合的用于该活性成份的药学上可接受的载体或稀释剂，其中该实体癌包含人乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾脏癌、胃癌、前列腺癌、回肠癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、鼻咽表皮样癌、肝癌或白血病。
29.如前述第28项的药物组合物，其中该实体癌细胞为人乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾脏癌、肝癌或白血病。
30.一种具有下列化学式IIa的2-苯基-4-喹诺酮化合物
其中 R2′、R3′、R4′、R5′和R6′独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
其中n为0～4的整数，Y为O或S，X为F，Cl或Br，及R8和R9独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，其中n及Y如上所定义，且m为0～4的整数； R2、R3、R4和R5独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
或R3和R4一起为-Y(CH2)nY-，其中n、Y、X、R8及R9如上所定义； 当R2、R3、R4和R5中之一是(CH2)qNR8R9，或者R2′、R3′、R4′、R5′和R6′中之一是(CH2)qNR8R9时，其中的q为1～4的整数及R8及R9如上所定义。
31.如前述第30项的化合物，其中R4是(CH2)qNR8R9，且R2、R3和R5是H，其中q，R8及R9如前述第30项中所定义。
32.如前述第30项的化合物，其中R5′是(CH2)qNR8R9，且R2′、R3′、R4′和R6′是H，其中q、R8及R9如前述第30项中所定义。
33.如前述第31项的化合物，其中R4是CH2N(C2H5)2，R6′是F，且R2′、R3′、R4′和R5′是H。
34.如前述第31项的化合物，其中R4是CH2N(C2H5)2，且R2′、R3′、R4′、R5′和R6′全部是H。
35.如前述第32项的化合物，其中R4是OCH3、R2、R3和R5是H，R5′是CH2N(C2H5)2，且R2′、R3′、R4′和R6′全部是H。
36.一种用于杀灭实体癌细胞的药物组合物，包含治疗有效量的如前述第30至35项中任一项所述的2-苯基-4-喹诺酮化合物或其药学上可接受的盐作为活性成份，和与之混合的用于该活性成份的药学上可接受的载体或稀释剂，其中该实体癌包含人乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾脏癌、胃癌、前列腺癌、回肠癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、鼻咽表皮样癌、肝癌或白血病。
37.如前述第36项的药物组合物，其中该实体癌为白血病。
附图的简要说明
图1显示小鼠移植瘤模型中，化合物I-1及I-1-b对MCF-7肿瘤的生长抑制作用。将MCF-7细胞注射于雌性SCID小鼠，转染诱导肿瘤移植。将SCID小鼠随机区分成五组，2至5组分别以腹腔内注射(i.p.)化合物I-1(15mg/kg、30mg/kg)及I-1-b(22.5mg/kg、45mg/kg)，一周给药三次。与对照组比较，数据以肿瘤重量平均值(克)±S.E.M表示，p＜0.05。
图2显示化合物I-1-b对动物存活率的影响，其中CT-26肿瘤细胞被腹腔注射入Balb/c小鼠，七天后使用化合物I-1-b进行治疗(5mg/kg/天及10mg/kg/天QD×7)。
图3显示喹诺酮衍生物对人乳腺癌细胞活性的影响。将MCF7细胞以DMSO(对照组)或不同浓度(0.125μM至10μM)的喹诺酮衍生物处理48小时，接着以MTT分析测量细胞的活性。三次试验的结果取平均值并以平均值±标准误差表示。
发明详述 如以下实施例1到6所示，当2-苯基-4-喹诺酮(I-1至I-6)在碱存在下与焦磷酸四苄酯反应以得到对应的磷酸二苄酯(I-1-a至I-6-a)。化合物(I-1-a至I-6-a)在醇里的催化氢化反应能产生对应的磷酸单酯(I-1-b至I-6-b)，它们能被继续用于产生水可溶性盐(I-1-c至I-6-c)。
实施例1
2-(2′-氟苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-1-a) 对溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-1(64.5mg，0.23mmol)的溶液在搅拌及0℃下加入氢化钠(13.7mg，0.57mmol)，1小时后加入焦磷酸四苄酯(100mg，0.19mmol)并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，滤液于真空下及低于35℃的温度下被浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，在真空下浓缩而得到化合物I-1-a(69.1mg，67％)。
MP 101-104℃ 1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ8.01-8.02(m，1H，H-5′)，7.77(s，1H，H-5)，7.16-7.43(m，14H，H-3，H-3′，H-4′，H-6′，Ph)，7.05(s，1H，H-8)，6.12(s，2H，OCH2O)，5.26(s，2H，-CH2-Ph)，5.20(s，2H，-CH2-Ph) MS(m/z)544(ES+) C30H25FNO6P分析计算值C，66.30；H，4.27；N，2.58.实测值C，66.28；H，4.35；N，2.55. 2-(2′-氟苯基)-6，7-亚甲基二氧喹啉-4-基-磷酸酯(I-1-b) 将化合物I-1-a(97.7mg，0.18mmol)的无水甲醇(10ml)悬浮液于室温及10％的Pd/C(50mg)存在下氢化10分钟。收集催化剂及沉淀物并将之溶解于10％的NaHCO3水溶液，接着过滤。以稀盐酸(HCl)酸化该滤液，过滤收集生成的固体，再以丙酮洗涤以得到化合物I-1-b(63.5mg，97.2％)。
MP＞300℃ 1H-NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.93-7.98(m，1H，H-5′)，7.74(s，1H，H-5)，7.49-7.54(m，1H，H-4′)，7.32-7.41(m，4H，H-3，H-8，H-3′，H-6′)，6.22(s，2H，OCH2O). MS(m/z)362(ES-) C16H13FNO6P分析计算值C，52.91；H，3.05；N，3.86.实测值C，52.73；H，3.10；N，3.81. 2-(2′-氟苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸钠盐(I-1-c) 将化合物I-1-b加入到20ml Amberlite IR-120(Na+型)及20ml水的混合物中，接着于室温搅拌6小时。然后过滤去除Amberlite，接着冷冻干燥得到化合物I-1-c(49.1mg，69％). 1H-NMR(D2O，200MHz)δ7.48-7.66(m，2H，H-4′，H-6′)，7.40(s，1H，H-8)，7.31-7.35(m，1H，H-5)，7.11-7.19(m，2H，H-3′，H-5′)，7.03(s，1H，H-3)，5.92(s，2H，OCH2O). 实施例2
2-(3′-氟苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-2-a) 将氢化钠(13.7mg，0.57mmol)在0℃下加入溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-2(64.5mg，0.23mmol)的搅拌溶液中。1小时后加入焦磷酸四苄酯(100mg，0.19mmol)并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，并且将滤液于真空下及低于35℃的温度下浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，并且于真空下浓缩而得到化合物I-2-a(85.6mg，83％)。
MP 94-96℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.61-7.78(m，2H，H-2′，H-4′)，7.48-7.56(m，1H，H-5′)，7.24-7.45(m，13H，H-5，H-8，H-6′，Ph)，7.10(s，1H，H-3)，6.21(s，2H，OCH2O)，5.29(s，2H，-CH2-Ph)，5.24(s，2H，-CH2-Ph) MS(m/z)544(ES+) C30H25FNO6P分析计算值C，66.30；H，4.27；N，2.58.实测值C，66.25；H，4.34；N，2.55. 2-(3′-氟苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸酯(I-2-b) 于室温及10％的Pd/C(50mg)存在下将化合物I-2-a(97.7mg，0.18mmol)的无水甲醇(10ml)悬浮液氢化10分钟。收集催化剂及沉淀物并将之溶解于10％的NaHCO3水溶液，接着过滤。以稀盐酸(HCl)酸化该滤液，过滤收集生成的固体，再以丙酮洗涤以得到化合物I-2-b(60.8mg，93.1％)。
MP＞300℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.91(s，1H，H-2′)，7.87(s，1H，H-4′)，7.83(s，1H，H-5′)，7.50-7.62(m，2H，H-5，H-8)，7.25-7.36(m，2H，H-5′，H-6′)，6.24(s，2H，OCH2O). MS(m/z)362(ES-) C16H13FNO6P分析计算值C，52.91；H，3.05；N，3.86.实测值C，52.86；H，3.12；N，3.79. 2-(3′-氟苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸钠盐(I-2-c) 化合物I-2-b被加入到20ml Amberlite IR-120(Na+型)及20ml水的混合物中，接着于室温搅拌6小时。然后将所述混合物过滤去除Amberlite，并且接着冷冻干燥得到化合物I-2-c(68.2mg，71％). 1H-NMR(D2O，200MHz)δ7.26-7.78(m，5H，H-5，H-8，H-2′，H-5′，H-6′)，6.90-6.96(m，2H，H-3，H-4′)，6.03(s，2H，OCH2O). 实施例3
6-氟-2-苯基喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-3-a) 在0℃下将氢化钠(13.7mg，0.57mmol)加入到溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-3(55.0mg，0.23mmol)的搅拌溶液中。1小时后焦磷酸四苄酯(100mg，0.19mmol)被加入并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，并且将滤液于真空下及低于35℃的温度下浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，并且在真空下浓缩而得到一无色油状化合物I-3-a(84.4mg，89％)。
1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.07-8.14(m，1H，H-8)，7.92-7.97(m，2H，H-2′，H-6′)，7.67-7.77(m，2H，H-3′，H-5′)，7.40-7.50(m，10H，Ph)，5.31(s，2H，-CH2-Ph)，5.27(s，2H，-CH2-Ph) MS(m/z)500(ES+) C29H23FNO6P分析计算值C，69.74；H，4.64；N，2.80.实测值C，69.75；H，4.60；N，2.81. 6-氟-2-苯基喹啉-4-基-磷酸酯(I-3-b) 于室温及在10％的Pd/C(50mg)存在下将化合物I-3-a(89.8mg，0.18mmol)的无水甲醇(10ml)悬浮液氢化10分钟。收集催化剂及沉淀物并将之溶解于10％的NaHCO3水溶液，接着过滤。以稀盐酸(HCl)酸化该滤液，过滤收集生成的固体，再以丙酮洗涤以得到化合物I-3-b(50.5mg，88％)。
MP＞300℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.07-8.14(m，3H，H-8，H-2′，H-6′)，7.95(s，1H，H-5)，7.70-7.74(m，2H，H-3′，H-5′)，7.50-7.56(m，3H，H-3，H-7，H-4′) MS(m/z)318(ES-) C15H11FNO4P分析计算值C，56.44；H，3.47；N，4.39.实测值C，56.42；H，3.49；N，4.30。
6-氟-2-苯基喹啉-4-基-磷酸钠盐(I-3-c) 化合物I-3-b被加入到20ml Amberlite IR-120(Na+型)及20ml水的混合物中，接着于室温下搅拌6小时。过滤去除Amberlite，接着冷冻干燥得到化合物I-3-c(41.9mg，73％)。
1H-NMR(D2O，200MHz)δ7.20-7.83(m，5H，H-5，H-7，H-8，H-2′，H-6′)，7.25-7.31(m，4H，H-3，H-3′，H-4′，H-5′)。
实施例4
2-苯基喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-4-a) 在0℃下将氢化钠(13.7mg，0.57mmol)加入到溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-4(50.8mg，0.23mmol)的搅拌溶液中，1小时后焦磷酸四苄酯(100mg，0.19mmol)被加入并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，并且将滤液于真空下及低于35℃的温度下浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，在真空下浓缩而得到一无色油状化合物1-4-a(71.3mg，78％)。
1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.05(d，J＝8.2Hz，1H，H-5)，7.73-7.98(m，5H，H-6，H-7，H-8，H-2′，H-6′)，7.58(d，J＝8.0Hz，1H，H-4′)，7.48-7.51(m，3H，H-3，H-3′，H-5′)，7.29-7.40(m，10H，Ph)，5.31(s，2H，-CH2-Ph)，5.27(s，2H，-CH2-Ph) MS(m/z)482(ES+) C29H24NO6P分析计算值C，72.34；H，5.02；N，2.90.实测值C，71.89；H，5.13；N，2.88. 2-苯基喹啉-4-基-磷酸酯(I-4-b) 将化合物I-4-a(86.8mg，0.18mmol)的无水甲醇(10ml)悬浮液于室温及在10％的Pd/C(50mg)存在下氢化10分钟。收集催化剂及沉淀物并将之溶解于10％的NaHCO3水溶液，接着过滤。以稀盐酸(HCl)酸化该滤液，过滤收集生成的固体，并且以丙酮洗涤以得到化合物I-4-b(48.9mg，90.3％)。
MP＞300℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.80-8.12(m，4H，H-5，H-8，H-2′，H-6′)，7.49-7.78(m，6H，H-3，H-6，H-7，H-3′，H-4′，H-5′)，7.78(s，1H，H-7)，7.66(t，J＝8.0Hz)，7.42-7.50(m，4H，H-3，H-3′，H-4′，H-5′) MS(m/z)300(ES-) C15H12NO6P分析计算值C，59.81；H，4.02；N，4.65.实测值C，59.52；H，4.13；N，4.72. 6-氟-2-苯基喹啉-4-基-磷酸钠盐(I-4-c) 化合物I-4-b被加入到20ml Amberlite IR-120(Na+型)及20ml水的混合物中，接着于室温下搅拌6小时。过滤去除Amberlite，接着冷冻干燥得到化合物I-4-c(41.2mg，74％)。
1H-NMR(D2O，200MHz)δ8.21(d，J＝8.2Hz，1H，H-5)，7.80-7.89(m，3H，H-8，H-2′，H-6′)，7.78(s，1H，H-7)，7.66(t，J＝8.0Hz)，7.42-7.50(m，4H，H-3，H-3′，H-4′，H-5′) 实施例5
6-甲氧基-2-(3′-氟苯基)-喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-5-a) 对溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-5(61.9mg，0.23mmol)的溶液在搅拌及0℃下加入氢化钠(13.7mg，0.57mmol)。1小时后焦磷酸四苄酯(100mg，0.19mmol)被加入并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，并将滤液于真空下及低于35℃的温度下浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，并且在真空下浓缩而得到一无色油状化合物I-5-a(85.4mg，85％)。
1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.98(d，J＝9.4Hz，1H，H-8)，7.74-7.83(m，3H，H-5，H-7，H-5′)，7.43-7.54(m，1H，H-6′)，7.41-7.48(m，1H，H-2′)，7.20-7.22(m，H-3)，5.31(s，2H，-CH2-Ph)，5.27(s，2H，-CH2-Ph)，3.78(s，3H，OCH3). MS(m/z)530(ES+) C30H25FNO5P分析计算值C，68.05；H，4.76；N，2.65.实测值C，67.32；H，4.33；N，2.78. 6-甲氧基-2-(3′-氟苯基)-喹啉-4-基-磷酸酯(I-5-b) 将化合物I-5-a(95.2mg，0.18mmol)的无水甲醇(10ml)悬浮液于室温及10％的Pd/C(50mg)存在下氢化10分钟。收集催化剂及沉淀物并将之溶解于10％的NaHCO3水溶液，接着过滤。以稀盐酸(HCl)酸化该滤液，过滤收集生成的固体，再以丙酮洗涤以得到化合物I-5-b(56.5mg，89.9％)。
MP＞300℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.93-7.89(m，4H，H-5，H-7，H-8，H-5′)，7.45-7.58(m，1H，H-6′)，7.35-7.41(m，2H，H-2′，H-4′)，7.20-7.32(m，1H，H-3)，3.81(s，3H，OCH3) MS(m/z)348(ES-) C16H13FNO5P分析计算值C，55.02；H，3.75；N，4.01.实测值C，54.90；H，3.89；N，4.35. 实施例6
2-(3′-甲氧基苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-6-a) 在0℃下将氢化钠(13.7mg，0.57mmol)加入到溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-6(67.9mg，0.23mmol)的搅拌溶液中，1小时后焦磷酸四苄酯(100mg，0.19mmol)被加入并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，并且将滤液于真空下及低于35℃的温度下浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，在真空浓缩而得到一无色油状化合物I-6-a(88.6mg，84％)。
1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.60(s，1H，H-6′)，7.55(s，1H，H-2′)，7.25-7.40(m，14H，H-5，H-8，H-4′，H-5′，Ph)，6.21(s，2H，OCH2O)，5.28(s，2H，-CH2-Ph)，5.24(s，2H，-CH2-Ph)，3.80(s，3H，OCH3) MS(m/z)556(ES+) C31H26NO7P分析计算值C，67.02；H，4.72；N，2.52.实测值C，68.15；H，4.68；N，2.61. 2-(3′-甲氧基苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸酯(I-6-b) 将化合物I-6-a(97.74mg，0.18mmol)的无水甲醇(10ml)悬浮液于室温及10％的Pd/C(50mg)存在下氢化10分钟。收集催化剂及沉淀物并将之溶解于10％的NaHCO3水溶液，接着过滤。以稀盐酸(HCl)酸化该滤液，过滤收集生成的固体，再以丙酮洗涤以得到化合物I-6-b(63.5mg，94％)。
MP＞300℃ MS(m/z)374(ES-) C17H14NO7P分析计算值C，54.41；H，3.76；N，3.73.实测值C，53.86；H，3.66；N，3.81. 2-(3′-甲氧基苯基)-6，7-亚甲二氧基喹啉-4-基-磷酸钠盐(I-6-c) 化合物I-6-b被加入到20ml Amberlite IR-120(Na+型)及20ml水的混合物中，接着于室温下搅拌6小时。过滤去除Amberlite，接着冷冻干燥得到化合物I-6-c(53.9mg，76％)。
1H-NMR(D2O，200MHz)δ7.56(s，1H，H-6′)，7.25-7.42(m，4H，H-5，H-8，H-2′，H-5′)，7.12(s，1H，H-4′)，6.95(s，1H，H-3)，6.00(s，2H，OCH2O)，3.62(s，3H，OCH3) 在下面的实施例7中，一种新的中间体化合物2-硒吩基-4-喹诺酮(I-7-d)被合成。2-硒吩基-4-喹诺酮(I-7-d)与焦磷酸四苄酯在碱存在下反应而得到对应的磷酸二苄酯(I-7-e)。
实施例7
硒吩-2-羧酸(I-7-a) 将TMEDA(25.5ml，170.0mmol)及正丁基锂(66.1ml的2.5M的己烷溶液，152.8mmol)加入到溶解于乙醚(150ml)的硒吩(20g，152.8mmol)溶液中。所得到的溶液被加热回流1.5小时，接着于丙酮/CO2浴中冷却，再将压碎的固态二氧化碳(40g，909.1mmol)加入。使得反应混合物返回到室温，并且加入10％KOH溶液骤冷。水层被以8M的盐酸(HCl)酸化至pH3，用乙醚萃取，以盐水洗涤、MgSO4干燥、过滤、真空干燥而得到化合物I-7-a(24.6g，92.1％)。
MP 122-124℃ 1H-NMR(CDCl3-d1，200MHz)δ8.92(s，1H，-COOH)，8.37(dd，J＝1.0Hz，5.6Hz，1H，H-3)，8.13(dd，J＝0.8Hz，3.8Hz，1H，H-5)，7.37(dd，J＝3.8Hz，5.6Hz，1H，H-4). MS(m/z)175.0(EI+) C5H4O2Se分析计算值C，34.31；H，2.30.实测值C，34.33；H，2.28. N-(5-乙酰基苯[d][1，3]二氧-6-基)硒吩-2-羰酰胺(I-7-c) 将化合物I-7-a(2g，11.40mmol)以二氯亚砜(4.1ml，56.18mmol)回流氯化20小时以得到化合物I-7-b，未进行进一步纯化，接着将化合物I-7-b与2-胺基-(4，5-亚甲二氧基)-苯乙酮(1.63g，9.12mmol)及三乙胺(2ml，14.80mmol)于100ml甲苯中反应，并且回流3小时。反应混合物被真空浓缩，所得到的固态物质被连续的以乙醇洗涤，再于80℃干燥2小时而获得粗化合物I-7-c(2.7g，74％)。
MP 198.5-198.8℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ12.85(s，1H，NHCO)，8.52(d，J＝5.1Hz，1H，H-3′)，8.16(s，1H，H-4)，7.93(d，J＝3.8Hz，1H，H-5′)，7.61(s，1H，H-7)，7.49-7.46(m，1H，H-4′)，6.13(s，2H，OCH2O)，2.58(s，3H，CH3). MS(m/z)336.2(EI+) C14H11NO4Se分析计算值C，50.01；H，3.30；N，4.17.实测值C，50.11；H，3.32；N，4.15。
2-(2′-硒吩基)-6，7-(亚甲二氧基)-4-喹诺酮(I-7-d) I-7-c(2.7g，8.0mmol)被悬浮于100ml叔丁醇中。叔丁醇钾(4.49g，40mmol)接着被加入，并且该混合物被加热回流24小时。然后，混合物被冷却至室温，接着被倒入于100ml的NH4Cl水溶液。得到黄棕色固体，收集后以蒸馏水洗涤得到化合物I-7-d(3.1g，85％)。
MP＞300℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.27(s，1H，H-3′)，7.83(s，1H，H-5′)，7.39(t，J＝4.5Hz，1H，H-4′)，7.31(s，1H，H-5)，7.14(s，1H，H-8)，6.11(s，3H，H-3，OCH2O). MS(m/z)318.2(EI+) C14H9NO3Se分析计算值C，52.85；H，2.85；N，4.40.实测值C，52.87；H，2.82；N，4.45. 2-(2′-硒吩基)-6，7-(亚甲二氧基)-4-喹啉-4-基-磷酸二苄酯(I-7-e) 在搅拌及0℃下将氢化钠(30mg，1.25mmol)加入到溶于无水的四氢呋喃(10ml)的化合物I-7-d(100.0mg，0.32mmol)的溶液，1小时后焦磷酸四苄酯(204.6mg，0.38mmol)被加入并继续搅拌20分钟。
将混合物过滤，并将滤液于真空下及低于35℃的温度下浓缩。残留物被溶解于二氯甲烷，以碳酸氢钠水溶液洗涤、再以MgSO4干燥，在真空下浓缩而得到一固体。将该固体使用硅胶柱层析处理，以CH2Cl2洗脱而得到浅黄色化合物I-7-e(151.8mg，82％)。
MP 110.5-110.8℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.24(d，J＝5.6Hz，1H，H-3′)，7.65(d，J＝3.8Hz，1H，H-5′)，7.57(s，1H，H-5)，7.05(s，1H，H-8)，7.39-7.26(m，11H，H-4′，Ph)，6.19(s，2H，OCH2O)，5.28(s，2H，-CH2-Ph)，5.24(s，2H，-CH2-Ph).MS(m/z)580(ES+) 280H22NO6PSe分析计算值C，58.14；H，3.83；N，2.42.实测值C，57.28；H，3.56；N，2.59. 实施例8
6-甲基-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(I-8-a) 对甲苯胺(2.14g，0.02mole)、苯甲酰基乙酸乙酯(4.9g，0.025mole)及多聚磷酸(PPA)的混合物在130℃及搅拌下被加热。反应完成后，该反应混合物被冷却至室温并以4M NaOH溶液中和。得到的黄色固体被滤出并以水洗涤，干燥后以乙醇重结晶而得到白色的固体化合物I-8-a(2.9g，48.9％)。
MP 290.2-291.5℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ11.55(1H，s，H-1)，7.88(1H，s，H-5)，7.79-7.82(2H，m，H-2′，H-3′)，7.66(1H，d，J＝8.5Hz，H-8)，7.54-7.57(3H，m，H-3′，H-4′，H-5′)，7.48(1H，d，J＝8.5Hz，H-7)，6.31(1H，s，H-3)，2.40(3H，s，CH3) MS(m/z)235(EI+) C16H13NO分析计算值C，81.68；H，5.57；N，5.95.实测值C，81.60；H，5.63；N，5.88. 4-(苄氧基)-6-甲基-2-苯基喹啉(I-8-b) I-8-a(700mg，3mmole)被溶解于无水的DMF(30ml)，将NaH(360mg，15mmole)分批加入于室温搅拌30分钟。苄基氯化物(750mg，6mmole)接着被滴入，于室温搅拌过夜。该反应混合物被倒入于冰水中并以CH2Cl2萃取。有机层以水洗涤，以MgSO4干燥及挥发其中的溶剂。残留物以硅胶柱进行层析，并以正己烷/乙酸乙酯(3∶1)混合液洗脱，且以正己烷/CH2Cl2重结晶而得到白色结晶I-8-b(536mg，54.9％)。
MP 138.6-139.3℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.23-8.26(2H，m，H-2′，H-6′)，7.88-7.91(2H，m，H-5，H-8)，7.37-7.62(9H，m，H-7，H-3′，H-4′，H-5′，Ph)，5.51(2H，s，OCH2Ph)，2.48(3H，s，CH3) C23H19NO分析计算值C，84.89；H，5.89；N，4.30.实测值C，84.93；H，5.85；N，4.33. N-{[4-(苄氧基)-2-苯基喹啉-6-基]甲基}-N-乙基乙胺(I-8-d) 将I-8-b(650mg，2mmol)、N-溴代-丁二酰亚胺(NBS，360mg，2mmol)及2，2′-偶氮双(异丁腈)(AIBN，30mg，0.19mmol)加入一干燥的圆底烧瓶内，再通入氩气冲洗。将50ml的无水的苯加入至该反应混合物，于氩气气氛下及室温下搅拌30分钟，并随后于80℃回流1小时，冷却至室温后得到I-7-c，在未进一步纯化下以二乙胺(3.0ml，29.0mmole)处理，再回流1小时。挥发去除其中的溶剂后，以乙酸乙酯及50ml的10％HCl进行分层，接着其中的酸性层以10％的NaHCO3中和至pH7-8，再以乙酸乙酯萃取(100ml×5)。有机层以MgSO4干燥并挥发其中的溶剂。残留物进一步以硅胶柱进行层析，并以CH2Cl2/甲醇(3∶1)混合液洗脱，并以正己烷/乙酸乙酯重结晶而得到淡黄色固体I-8-d(120mg，15.1％)。
MP 107.7-108.6℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.22(2H，m，H-2′，H-6′)，8.01(1H，s，H-5)，7.91(1H，d，H-8)，7.33-7.69(9H，m，H-7，H-3′，H-4′，H-5′，Ph)，5.49(2H，s，OCH2Ph)，3.65(2H，s，CH2N(CH2CH3)2)，2.43(4H，q，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2)，0.93(6H，t，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2) MS(m/z)396(EI+) C27H28N2O分析计算值C，81.78；H，7.12；N，7.06.实测值C，81.68；H，7.03；N，7.15. 6-[(二乙基胺基)甲基]-2-苯基喹啉-4(1H)-酮(I-8-e) I-8-d(120mg，0.3mmol)被溶解于冰醋酸(5ml)。HBr(3ml)被接着加入同时将溶液加热至60℃，混合物于90℃加热3小时。反应完成后，将反应混合物倒入水中，并以乙酸乙酯萃取。酸性层被加入10％的NaHCO3中和至pH7-8，并以乙酸乙酯萃取(100ml×5)。有机层以MgSO4干燥，并且挥发其中的溶剂。残留物以正己烷/乙酸乙酯重结晶而得到灰色固体I-8-d(55mg，59.9％)。
MP 227.9-229.7℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.96(1H，s，H-5)，7.78(2H，m，H-2′，H-6′)，7.69(1H，d，H-8)，7.50-7.58(4H，m，H-7，H-3′，H-4′，H-5′)，6.31(1H，s，H-3)，3.55(2H，s，CH2N(CH2CH3)2)，2.41(4H，q，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2)，0.92(6H，t，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2) MS(m/z)306(EI+) C20H22N2O分析计算值C，78.40；H，7.24；N，9.14.实测值C，78.43；H，7.35；N，9.08. 实施例9
2-(2-氟苯基)-6-甲基喹啉-4(1H)-酮(I-9-a) 将对甲苯胺(2.14g，0.02mole)、2-氟-苯甲酰基乙酸乙酯(5.25g，0.025mole)及多聚磷酸(PPA)的混合物在130℃及搅拌下加热。反应完成后，该反应混合物被冷却至室温并以4M NaOH中和之。得到的黄色固体被滤出并以水洗涤，干燥后以乙醇重结晶而得到白色的固体化合物I-9-a(2.6g，51.3％)。
MP 259.1-259.9℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.86(1H，s，H-5)，7.64(1H，td，J＝7.58，H-4′)，7.47-7.57(3H，m，H-7，H-8，H-6′)，7.30-7.43(2H，d，J＝7.02，dd，J＝7.36，H-3′，5′)，6.12(1H，s，H-3)，2.36(3H，s，CH3) MS(m/z)253(EI+) C16H22FNO分析计算值C，75.88；H，4.78；N，5.53.实测值C，75.94；H，4.70；N，5.46. 4-(苄氧基)-2-(2-氟苯基)6-甲基喹啉(I-9-b) I-9-a(750mg，3mmole)被溶解于无水的DMF(30ml)，并将NaH(360mg，15mmole)分批加入于室温搅拌30分钟。苄基氯化物(750mg，6mmole)接着被滴入，于室温下搅拌过夜。该反应混合物被倒入于冰水中并以CH2Cl2萃取。有机层以水洗涤，以MgSO4干燥并挥发其中的溶剂。残留物进一步以硅胶柱进行层析，并以正己烷/乙酸乙酯(3∶1)混合液洗脱，且以正己烷/CH2Cl2重结晶而得到白色结晶I-9-b(515mg，50.0％)。
MP 91.5-92.8℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.84-7.97(3H，m，H-5，H-8，H-4′)，7.26-7.58(10H，m，H-3，H-7，H-3′，H-5′，H-6′，Ph)，5.38(2H，s，OCH2Ph)，2.45(3H，s，CH3) MS(m/z)343(EI+) 分析计算值C23H18FNOC，80.45；H，5.28；N，4.08.实测值C，80.51；H，5.29；N，4.17. N-{[4-(苄氧基)-2-(2-氟苯基)喹啉-6-基]甲基}-N-乙基乙胺(I-9-d) 将I-9-b(680mg，2mmol)、N-溴代-丁二酰亚胺(NBS，360mg，2mmol)及2，2′-偶氮双(异丁腈)(AIBN，30mg，0.19mmol)加入一干燥的圆底烧瓶内，再通入氩气冲洗。将50ml的无水的苯被加入该反应混合物中，于氩气气氛下及室温下搅拌30分钟，接着于80℃回流1小时，随后冷却至室温后得到I-9-c，在未进一步纯化下以二乙胺(3.0ml，29.0mmole)处理，再回流1小时。挥发去除其中的溶剂后，以乙酸乙酯及50ml的10％HCl进行分层，并且接着其中的酸性层以10％的NaHCO3中和至pH7-8，以乙酸乙酯萃取(100ml×5)。有机层以MgSO4干燥并挥发其中的溶剂。残留物以硅胶柱进行层析，并以CH2Cl2/甲醇(3∶1)混合液洗脱，且以正己烷/乙酸乙酯重结晶而得到黄色固体I-9-d(120mg，15.1％)。
MP 51.2-51.5℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.04(1H，s，H-5)，7.84-7.96(2H，m，H-8，H-5′)，7.69(1H，dd，H-4′)，7.28-7.54(9H，m，H-3，H-7，H-3′，H-6′，Ph)，5.41(2H，s，OCH2Ph)，3.68(2H，s，CH2N(CH2CH3)2)，2.46(4H，q，J＝7，CH2N(CH2CH3)2)，0.94(6H，t，J＝7，CH2N(CH2CH3)2) MS(m/z)414(EI+) 分析计算值C27H27FN2OC，78.23；H，6.57；N，6.76.实测值C，78.25；H，6.67；N，6.74. 6-[(二乙基胺基)甲基]-2-(2-氟苯基)喹啉-4(1H)-酮(I-9-e) I-9-d(120mg，0.3mmol)被溶解于冰醋酸(5ml)。HBr(3ml)被接着加入同时将溶液加热至60℃，混合物于90℃加热3小时。反应完成后，将反应混合物倒入水中，并以乙酸乙酯萃取。酸性层被加入10％的NaHCO3中和至pH7-8，并以乙酸乙酯萃取(100ml×5)。有机层以MgSO4干燥，挥发其中的溶剂。残留物以正己烷/乙酸乙酯重结晶而得到灰色固体I-9-e(58mg，59.6％)。
MP 184.2-184.7℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ11.9(1H，s，H-1)，7.97(1H，s，H-5)，7.52-7.69(4H，m，H-7，H-8，H-4′，H-6′)，7.31-7.43(2H，m，H-3′，H-5′)，6.12(1H，s，H-3)，3.57(2H，s，CH2N(CH2CH3)2)，2.40(4H，q，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2)，0.92(6H，t，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2) MS(m/z)324(EI+) C20H21FN2O分析计算值C，74.05；H，6.53；N，8.64.实测值C，73.94；H，6.62；N，8.67. 实施例10
3-甲基-苯甲酰基-乙酸乙酯(1-10-a) 在剧烈搅拌的NaH(564mg，48.5mmol)和CO(OC2H5)2(5.73g，48.5mmol)的无水甲苯(50ml)悬浮液中，于回流状态下滴入3-甲基乙酰苯(4.33g，32.3mmole)的甲苯溶液。在添加完成后该混合物被回流及搅拌30分钟。该混合物于冷却至室温后以冰酯酸加以酸化，加入冰水再以甲苯萃取。有机层以MgSO4干燥并挥发去除其中的溶剂。残留物以硅胶柱进行层析，并以CH2Cl2/正己烷(3∶2)混合液洗脱而得到淡黄色液体I-10-b(3.13g，46.9％)。
1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.68-7.72(2H，m，H-4，H-6)，7.32-7.36(2H，m，H-2，H-3)，4.16(2H，q，J＝7，CH2CH3)，3.94(2H，s，H-10)，2.38(3H，s，CH3)，1.2(3H，t，J＝7，CH2CH3) MS(m/z)206(EI+) C12H14O3分析计算值C，69.88；H，6.84；实测值C，69.72；H，6.95. 6-甲氧基-2-间-甲苯基喹啉-4(1H)-酮(I-10-b) 将对甲氧基苯胺(2.14g，0.02mole)、I-10-a(5.1g，0.025mole)及多聚磷酸(PPA)的混合物于搅拌下及130℃加热。反应完成后该混合物被冷却至室温并以4M NaOH中和之。过滤出黄色固体、水洗、干燥及以乙醇重结晶而得到淡紫色固体化合物I-10-b(2.6g，25.8％)。
MP 262.2-264.1℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ7.70(1H，d，H-8)，7.55-7.60(2H，m，H-5，7)，7.25-7.47(4H，m，H-2′，H-4′，H-5′，H-6′)，6.33(1H，s，H-3)，3.80(3H，s，OCH3)，2.37(3H，s，CH3) MS(m/z)265(EI+) C17H15NO分析计算值C，76.79；H，5.70；N，5.28.实测值C，76.81；H，5.62；N，5.34. 4-(苄氧基)-6-甲氧基-2-间-甲苯基喹啉(I-10-c) I-10-b(795mg，3mmole)被溶解于无水的DMF(30ml)，并且于室温下将NaH(360mg，15mmole)分批加入并搅拌30分钟。苄基氯化物(750mg，6mmole)接着被滴入，于室温下搅拌过夜。该反应混合物被倒入于冰水中并以CH2Cl2萃取。有机层以水洗涤，以MgSO4干燥并挥发其中的溶剂。残留物以硅胶柱进行层析，并以正己烷/乙酸乙酯(3∶1)混合液洗脱，并且以正己烷/CH2Cl2重结晶而得到白色结晶I-10-c(530mg，49.7％)。
MP 133.0-134℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.00(1H，s，H-5)，7.96(1H，d，H-8)，7.89(1H，d，J＝8Hz，H-7)，7.32-7.58(6H，m，H-3，H-2′，H-5′，H-6′，Ph)，7.22(1H，d，J＝7Hz，H-4′)，5.50(2H，s，OCH2Ph)，3.83(3H，s，OCH3)，δ2.38(3H，s，CH3) MS(m/z)355(EI+) C24H21NO2分析计算值C，81.10；H，5.96；N，3.94.实测值C，81.9；H，5.81；N，3.97. N-{[3-(4-(苄氧基)-6-甲氧基喹啉-2-基)苯基]甲基}-N-乙基乙胺(I-10-e) 将I-10-c(530mg，2mmol)、N-溴代-丁二酰亚胺(NBS，360mg，2mmol)及2，2′-偶氮双(异丁腈)(AIBN，30mg，0.19mmol)加入到一干燥的圆底烧瓶内，再通入氩气冲洗。50ml的无水的苯被加入该反应混合物中，于氩气气氛下及室温下搅拌30分钟，接着于80℃回流1小时，冷却至室温后得I-10-d，在未进一步纯化下以二乙胺(3.0ml，29.0mmole)处理，再回流1小时。挥发去除其中的溶剂后，以乙酸乙酯及50ml的10％HCl溶液进行分层，接着其中的酸性层以10％的NaHCO3溶液中和至pH7-8，再以乙酸乙酯萃取(100ml×5)。萃取的有机层以MgSO4干燥并挥发其中的溶剂。残留物以硅胶柱进行层析，并以CH2Cl2/甲醇(3∶1)混合液洗脱，并以正己烷/乙酸乙酯重结晶而得到黄色固体I-10-e(25mg，2.9％)。
MP 89.2-89.5℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ8.13(1H，s，H-3).7.87-8.04(2H，m，H-7，8)，7.34-7.43(10H，m，H-3，H-2′，H-4′，H-5′，H-6′，Ph)，5.51(2H，s，OCH2Ph)，3.84(3H，s，OCH3)，3.69(2H，s，CH2N(CH2CH3)2)，2.53(4H，q，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2)，0.99(6H，t，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2) MS(m/z)426(EI+) C28H30N2O2分析计算值C，78.83；H，7.90；N，6.57.实测值C，78.95；H，7.14；N，6.48. 2-{3-[(二乙基胺基)甲基]苯基}-6-甲氧基喹啉-4(1H)-酮(I-10-f) I-10-e(42mg，0.1mmol)被溶解于冰醋酸(5ml)。HBr(3ml)被接着加入同时将溶液加热至60℃，混合物于90℃加热3小时。反应完成后，将反应混合物倒入水中，并以乙酸乙酯萃取。酸性层被加入10％的NaHCO3溶液中和至pH7-8，再以乙酸乙酯萃取(100ml×5)。有机层以MgSO4干燥，挥发其中的溶剂。残留物以正己烷/乙酸乙酯重结晶而得到灰色固体I-10-f(20.8mg，61.9％)。
MP 152.1-152.7℃ 1H-NMR(DMSO-d6，200MHz)δ11.76(1H，s，H-1)，7.67-7.74(3H，m，H-5，H-8，H-6′)，7.46-7.49(3H，m，H-7，H-2′，H-4′)，7.27(1H，dd，H-5′)，6.27(1H，s，H-3)，3.80(3H，s，OCH3)，3.67(2H，s，CH2N(CH2CH3)2)，2.53(4H，q，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2)，0.97(6H，t，J＝7Hz，CH2N(CH2CH3)2). C21H24N2O2分析计算值C，74.97；H，7.19；N，8.33.实测值C，74.81；H，7.33；N，8.31. 抗癌活性 化合物I-1及I-1-b对体内抗肿瘤活性的作用 (I)化合物I-1及I-1-b对MCF-7肿瘤移植模型的作用 I-1材料与方法 雌性GALB/cAnN-Foxnl.E SCID小鼠(18至20克；6至8周龄)，购自国家动物中心，并且依动物中心管理办法豢养于增压通风笼中。肿瘤移植前两天以皮下注射(s.c.)植入0.7毫克的雌二醇(estradiol)，每天各一次。MCF-7细胞(2×106)以皮下注射移种于小鼠右腰，肿瘤约150立方毫米时，随机将30只肿瘤携带小鼠分成五组，分别以载体(PBS)、I-1或I-1-b进行治疗。第一组仅接受载体。第二至五组分别给予如下腹腔内注射(i.p.)治疗每周三次I-1(15mg/kg)、I-1(30mg/kg)、I-1-b(22.5mg/kg)和I-1-b(45mg/kg)。小鼠每周称重并用测径器测量肿瘤。肿瘤体积以以下公式计算L+W/2，其中L为长、W为宽。在治疗期的最后一天，实验小鼠被处死，将肿瘤切除、秤重及切片，并将所述肿瘤切片包埋于OCT化合物，并于-70℃冻存。
I-2结果 体内检测I-1或I-1-b的作用。将MCF-7细胞(2×106)以皮下注射(s.c.)各自注入于三十只雌性SCID小鼠。将小鼠随机分成五组(每组六只)，并且以单独载体、I-1(15或30mg/kg)、I-1-b(22.5、45mg/kg)治疗。如图1所示，该体内肿瘤模型显示与对照组相比，以45mg/kg的I-1-b治疗的小鼠，其肿瘤体积显著减少(P＜0.001)。这些结果证实，在小鼠移植瘤模型中，I-1-b能明显抑制MCF-7肿瘤的生长。
(II)化合物I-1及I-1-b对CT-26大肠直肠癌腹膜内模型的抗肿瘤作用 II-1材料与方法 30只雄性的6周龄的Balb/c小鼠，购自国家动物中心，并且依动物中心管理办法豢养于增压通风笼中。在开始时(第0天)将CT-26细胞(1×106)注入腹腔。将动物随机分配用于抗肿瘤作用研究(n＝10)。肿瘤植入7天后，对于取出的小鼠口服给予5mg/kg和10mg/kg的I-1-b(QD×7)。监测小鼠的存活率与体重。
II-2结果 II-2-1治疗后小鼠外观 给予赋型剂的对照组小鼠有腹水现象，而口服给予I-1-b(5mg/kg/天，QD×7)与I-1-b(10mg/kg/天，QD×7)的小鼠则可缓解和减少腹水现象。
II-2-2小鼠服药后的平均寿命延长效果 如图2所示，给予赋型剂的对照组小鼠于给药后40天全部死亡，而那些给予化合物I-1-b(5mg/kg/天，QD×7)和I-1-b(10mg/kg/天，QD×7)的小鼠则分别于给药后45天和50天全部死亡。剂量为(10mg/kg QD×7)其平均寿命延长140％，且剂量为(5mg/kg QD×7)其平均寿命延长120％。最大耐受量未被获得。
细胞活性分析(MTT分析) 将细胞接种于24孔盘(2×104细胞/孔)，培养过夜。随后以DMSO(对照组)或不同浓度的测试化合物处理并孵育48小时。以MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)来检测测试化合物对细胞生长的作用。简而言之，每孔加入40μl的MTT溶液(2mg/ml，Sigma Chemical Co.)至最终体积为500μl，并于置于37℃孵育1小时。去除上清液，并以溶解在200μl DMSO中的代谢活力细胞来形成MTT甲状结晶。最后，在酶联免疫吸附分析(ELISA)的读取器中，检测其在O.D.550nm下的吸光度。
结果 测试化合物I-1-b、I-2-b、I-3-b、I-4-b、I-5-b、I-7-d、I-7-e对抗人乳腺癌MCF-7细胞的毒性作用 化合物I-1-b，I-2-b，I-3-b，I-4-b，I-5-b，I-7-d，I-7-e的细胞毒性作用在人乳腺癌MCF-7细胞中被评估。如图3所示，这些化合物以0.125至10μM治疗导致细胞活性的剂量依赖性的降低。这些结果说明化合物I-1-b、I-2-b、I-3-b、I-4-b、I-5-b、I-7-d、I-7-e显示出抗MCF-7细胞的显著细胞毒性作用。所以，2-芳基喹啉的这些衍生物被建议为用于癌症治疗的有潜力的治疗药物。
化合物I-7-d的细胞毒性活性 在HCT-116、Hep G2、NCI-H226、A549、A498和HL-60细胞中检测化合物I-7-d的体外细胞毒性活性。如表1中所示，化合物I-7-d对所述六种癌症细胞系中的大部份显示显著抑制作用，并且最明显的是对HCT-116及HL-60细胞最具活性。化合物I-7-d对HCT-116的IC50为0.9μM且对HL-60的IC50为0.5μM。化合物I-7-d是被开发成为新型抗癌药物的有力候选化合物。
表1
*六种癌细胞以化合物I-7-d处理48小时，接着细胞被收集并以MTT法分析。
*IC50的值代表导致50％成长抑制效果的浓度。
*HCT-116，结肠癌细胞系；Hep G2，肝癌细胞系；NCI-H226，非小细胞肺癌细胞系；A549，肺癌细胞系；A498，肾癌细胞系；HL-60，白血病癌细胞系。
化合物I-8-e，I-9-e及I-10-f的杀细胞活性 化合物I-8-e，I-9-e及I-10-f对HL-60细胞进行体外细胞致毒活性试验。如表2所示，化合物I-8-e及I-9-e对HL-60癌细胞系显示显著抑制性。化合物I-8-e对HL-60的IC50为15μM且I-9-e对HL-60的IC50为5.8μM。化合物I-9-e很可能被开发成为一种新型的抗癌药。
表2 *HL-60细胞以化合物I-8-e，I-9-e及I-10-f处理48小时，接着细胞被收集并以MTT法分析。
*IC50的值代表导致50％成长抑制效果的浓度。
*HL-60，白血病癌细胞系。
权利要求
1.一种具有下列化学式Ia、Ib或Ic的2-芳基-4-喹诺酮磷酸酯衍生物，
其中
R2′，R3′，R4′，R5′和R6′独立地为H，(CH2)nCH3，(CH2)nYH，Y(CH2)nCH3，Y(CH2)nYH，Y(CH2)nNR8R9，X，(CH2)nNR8R9，
其中n为0～4的整数，Y为O或S，X为F、Cl或Br，且R8和R9独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，其中n及Y如上所定义，且m为0～4的整数；
R2，R3，R4和R5独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
或R3和R4一起为-Y(CH2)nY-，其中n、Y、X、R8及R9如上所定义；并且
R1及R1′独立地为H、Li+、Na+、K+、N+R8R9R10R11或苄基，其中R10及R11独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，且n、m、Y、R8及R9如上所定义。
2.根据权利要求1所述的磷酸酯衍生物，其具有化学式Ia。
3.根据权利要求2所述的磷酸酯衍生物，其中R2′、R3′、R4′、R5′及R6′全部为H；或R2′，R3′，R4′，R5′及R6′中之一为F、OCH3或(CH2)nNR8R9，及其它的为H，其中n、R8及R9如权利要求1中所定义。
4.根据权利要求2所述的磷酸酯衍生物，其中R2，R3，R4及R5全部为H；或R2，R3，R4及R5中之一为F、OCH3、Y(CH2)nCH3或(CH2)nNR8R9，且其它的为H；或R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-，其中n、Y、R8及R9如权利要求1所定义。
5.根据权利要求2所述的磷酸酯衍生物，其中R1及R1′均为H或均为Na+。
6.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R2和R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)O-；且R2′，R3′，R4′及R5′全部为H，且R6′为F。
7.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R2及R5为H，且R3及R4一起为-O(CH2)O-；且R2′，R3′，R4′及R6′全部为H，且R5′为F。
8.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R4为F，且R2，R3及R5为H；且R2′，R3′，R4′，R5′及R6′全部为H。
9.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R2，R3，R4及R5全部为H；且R2′，R3′，R4′，R5′及R6′全部为H。
10.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R4为OCH3，且R2，R3及R5为H；且R5′为F，且R2′，R3′，R4′及R6′为H。
11.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)O-；且R2′，R3′，R4′及R6′全部为H，且R5′为OCH3。
12.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R4为CH2N(C2H5)2，且R2，R3及R5为H；且R6′为F，及R2′，R3′，R4′且R5′为H。
13.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R4为CH2N(C2H5)2，且R2，R3及R5为H；且R2′，R3′，R4′，R5′及R6′全部为H。
14.根据权利要求5所述的磷酸酯衍生物，其中R4为OCH3，且R2，R3及R5为H；且R5′为CH2N(C2H5)2，且R2′，R3′，R4′及R6′为H。
15.根据权利要求1所述的磷酸酯衍生物，其具有化学式Ib。
16.根据权利要求15所述的磷酸酯衍生物，其中R2，R3，R4及R5全部为H；且R2，R3，R4及R5中之一为F或OCH3，且其它的为H；或R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-，其中n如权利要求1所定义。
17.根据权利要求15所述的磷酸酯衍生物，其中R2′，R3′，R4′，R5′及R6′全部为H；或R2′，R3′及R4′中之一为F或OCH3，及其它的为H。
18.根据权利要求15所述的磷酸酯衍生物，其中R1及R1′为苄基。
19.根据权利要求18所述的磷酸酯衍生物，其中R2′，R3′，R4′，R2及R5全部为H，及R3及R4一起为-O(CH2)O-。
20.一种用于杀灭实体癌细胞的药物组合物，该组合物包含治疗有效量的如权利要求1至19中任一项所述的2-芳基-4-喹诺酮磷酸酯衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成份，以及与之混合的用于该活性成份的药学上可接受的载体或稀释剂，其中所述实体癌细胞包含人乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、胃癌、前列腺癌、回肠癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、鼻咽表皮样癌、肝癌或白血病。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述实体癌细胞为人乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾脏癌、肝癌或白血病。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述实体癌细胞为人乳腺癌或结肠癌。
23.一种具有下列化学式IIb或IIc的2-硒吩基-4-喹诺酮化合物，
其中
R2′、R3′和R4′独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X或(CH2)nNR8R9，
其中n为0～4的整数，Y为O或S，X为F，Cl或Br，且R8和R9独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，其中n及Y如上所定义，且m为0～4的整数；
R2、R3、R4和R5独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9，
或R3和R4一起为-Y(CH2)nY-，其中n、Y、X、R8及R9如上所定义。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中R2、R3、R4及R5全部为H；或R2、R3、R4及R5中之一为F或OCH3，且其它的为H；或R2及R5为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-，其中n如权利要求23中所定义。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中R2′、R3′及R4′均为H；或R2′、R3′及R4′中之一为F或OCH3，且其它的为H。
26.根据权利要求23所述的化合物，其具有化学式IIb。
27.根据权利要求26所述的化合物，其中R2′、R3′、R4′、R2及R5全部为H，且R3和R4一起为-O(CH2)nO-。
28.一种用于杀灭实体癌细胞的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的如前述权利要求23至27中任一项所述的2-硒吩基-4-喹诺酮化合物或其药学上可接受的盐作为活性成份，和与之混合的用于该活性成份的药学上可接受的载体或稀释剂，其中所述实体癌细胞包含人乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾脏癌、胃癌、前列腺癌、回肠癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、鼻咽表皮样癌、肝癌或白血病。
29.根据权利要求28所述的药物组合物，其中所述实体癌细胞为人乳腺癌、结肠癌、肺癌、肾脏癌、肝癌或白血病。
30.一种具有下列化学式IIa的2-苯基-4-喹诺酮化合物
IIa
其中
R2′、R3′、R4′、R5′和R6′独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH，Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9，
其中n为0～4的整数，Y为O或S，X为F，Cl或Br，且R8和R9独立地为H、(CH2)nYH、(CH2)nN(CnH2n+1)(CmH2m+1)或(CH2)nCH3，其中n及Y如上所定义，且m为0～4的整数；
R2、R3、R4和R5独立地为H、(CH2)nCH3、(CH2)nYH、Y(CH2)nCH3、Y(CH2)nYH、Y(CH2)nNR8R9、X、(CH2)nNR8R9、
或R3和R4一起为-Y(CH2)nY-，其中n、Y、X、R8及R9如上所定义；
当R2、R3、R4和R5中之一是(CH2)qNR8R9，或者R2′、R3′、R4′、R5′和R6′中之一是(CH2)qNR8R9时，其中的q为1～4的整数及R8及R9如上所定义。
31.根据权利要求30所述的化合物，其中R4是(CH2)qNR8R9，及R2、R3和R5是H，其中q、R8及R9如权利要求30中所定义。
32.根据权利要求30所述的化合物，其中R5′是(CH2)qNR8R9，且R2′、R3′、R4′和R6′是H，其中q，R8及R9如权利要求30中所定义。
33.根据权利要求31所述的化合物，其中R4是CH2N(C2H5)2，R6′是F，且R2′、R3′、R4′和R5′是H。
34.根据权利要求31所述的化合物，其中R4是CH2N(C2H5)2，且R2′、R3′、R4′、R5′和R6′全部是H。
35.根据权利要求32所述的化合物，其中R4是OCH3，R2、R3和R5是H，R5′是CH2N(C2H5)2，且R2′、R3′、R4′和R6′全部是H。
36.一种用于杀灭实体癌细胞的药物组合物，包含治疗有效量的如前述权利要求30至35中任一项所述的2-苯基-4-喹诺酮化合物或其药学上可接受的盐作为活性成份，和与之混合的用于该活性成份的药学上可接受的载体或稀释剂，其中所述实体癌细胞包含人乳腺癌、结肠癌、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肾脏癌、胃癌、前列腺癌、回肠癌、神经胶质母细胞瘤、骨癌、鼻咽表皮样癌、肝癌或白血病。
37.根据权利要求36所述的药物组合物，其中所述实体癌细胞为白血病。
全文摘要
2-芳基-4-喹诺酮与焦磷酸四苄酯反应形成磷酸二苄酯，接着进行氢化反应将二苄基以氢取代，再与Amberlite IR-120(Na+型)反应而形成二钠盐。初步筛选结果显示，此类磷酸酯具有有效的抗癌活性。本发明也合成了新的中间体化合物2-硒吩基-4-喹诺酮及2-苯基-4-喹诺酮的N，N-二烷基胺烷基衍生物。这些中间体化合物也表现出有效的抗癌活性。
文档编号A61K31/675GK101583280SQ200780044796
公开日2009年11月18日 申请日期2007年12月7日 优先权日2006年12月7日
发明者郭盛助, 邓哲明, 李国雄, 黄丽娇, 周立琛, 张志祥, 孙仲铭, 吴天赏, 潘秀玲, 魏宗德, 李正常, 锺景光, 杨家欣, 陈建廷, 黄敬哲, 黄士鸣 申请人:中国医药大学