专利名称：唾液酸类似物及其在制备抗流感病毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及化学技术领域，尤其涉及一组唾液酸类似物；本发明还涉及所述化合物在制备抗病毒药物中的应用。
背景技术：
流感是一种常见的呼吸道疾病，可以使病人身体虚弱、引起多种并发症，有时需要入院治疗并可能致死，传染性强，对于年老体弱的抵抗力比较弱的人，很容易相互感染，引起一定范围的流行。每年流感流行可引起三百万到五百万的严重病例，并导致30万—50万人死亡。年龄大于65岁、小于两岁免疫力差的人是可能发生严重病情和死亡的高危人群。
甲型流感病毒具有广泛的宿主范围和分段的基因组，在其感染和复制的过程中容易发生基因突变或基因重配形成新的变种，这是流感病毒抗原性具有高度变异性的根本原因，人类很难对其产生稳定而持久的免疫能力。目前使用的流感疫苗对流感样疾病的预防仅达60％-75％，对老年人或伴发基础疾病者保护力仅为40％。目前临床应用的对流感病毒有效的药物主要有M2离子通道阻滞剂和神经氨酸酶抑制剂两大类。
M2离子通道阻滞剂是传统的治疗甲型流感病毒药物，有金刚烷胺(Amantadine，分子式C10H17N.HCl)和金刚乙胺(Rimantadine，分子式C12H21N.HCl)两种，我国仅有金刚烷胺应用于临床。这两种药物通过改变宿主细胞的表面电荷，抑制病毒穿入敏感细胞和释放核酸的过程，从而抑制病毒的繁殖。但该类药物副作用大，易出现耐药毒株的传播，使用两药治疗流感，约三分之一患者出现耐药毒株，并存在交叉耐药现象。一般在治疗开始后2-3天耐药，而且只对甲型流感有疗效，因此限制了其在临床上的应用。M2离子通道蛋白抑制药比神经氨酸酶抑制药更容易造成耐药病毒株的出现和传播，原因是其M蛋白位点的单个氨基酸点突变，这使病毒M2蛋白跨膜区的氨基酸发生改变，抗药变异株以亚群存在。美国疾病控制和预防中心(CDC)一项关于金刚烷胺类药物耐药性的报告指出，2003年—2005年间，此类药物的耐药性出现了显著增长，从1.9％增至12.3％。就美国而言，耐药性已经从2004年的1.9％增高至2004-2005年流感季节前6个月期间的14.5％。药物的滥用使我国此类药物耐药性已上升至70％。
神经氨酸酶抑制剂选择性地抑制神经氨酸酶的活性，阻止子代的病毒颗粒在宿主细胞的复制和释放，从而有效地预防流感和缓解症状。其作用在于结构中亲脂基团与酶的疏水部分相结合，使病毒失去分解唾液酸的能力，阻断复制后的病毒颗粒通过呼吸道黏液层；阻止流感病毒向周围细胞的继续扩散。
扎那米韦(Zanamivir)是由葛兰素史克公司开发上市的第一个新型的抗流感病毒的神经氨酸酶抑制剂，分子式为C12H20N4O7，化学名为4-胍基-2-脱氧-2，3-二脱氢-N-乙酰神经氨酸(抗病毒化合物的制备方法，1991.4.24，CN1036849C)。扎那米韦是基于神经氨酸酶三维结构设计出来的唾液酸类似物，能选择性地抑制流感病毒神经氨酸酶的活性。它作用于神经氨酸酶功能团相对稳定的保守位点，对病毒的各种变异株均有作用。扎那米韦口服利用度低，体内分布容积小，肾脏清除快，只能作为局部用药，经鼻腔内给药或吸入给药。生物利用度分别为10％和20％。临床试验证实扎那米韦能显著减少流感主要症状持续的平均时间(12.5天)，流感患者在发病30-36小时内的给与扎那米韦疗效明显，并且可以减少病程中解热镇痛药物的用量(李卓荣.广谱高效抗流感病毒新药扎那米韦.国外医学抗生素分册，2001，22(4)183-187)。Gulareva等(Dunn C.J.，Goa K.I.Zanamivira review of itsuse in influenza.Drugs，1999，58(4)761-784)在离体实验中证实，扎那米韦能特异性地抑制神经氨酸酶9种亚型中的甲型禽流感病毒的神经氨酸酶，另外它还对H5N1感染的小鼠有保护作用。这些实验都表明扎那米韦有对抗人类新型甲型流感病毒的可能。其主要缺点包括口服生物利用度差而且易被快速排泄，在临床上只能采用鼻腔或者口腔吸入给药；其常见不良反应为鼻喉部不适、恶心腹泻、头痛咳嗽、眩晕、鼻出血等。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有显著抑制流感病毒的活性的唾液酸类似物。
本发明的另一个目的是提供所述化合物在制备抗病毒药物中的应用。
本发明首先以扎那米韦为先导化合物，对其分子结构中的C6位侧链进行改造，得到C6位带氨基侧链、C6位侧链带有亲水性羟基的新型扎那米韦类似物。对上述化合物进行了体外抗病毒活性研究。结果显示，本发明所述化合物在体外表现出显著抑制流感病毒的活性。该项研究成果，为今后该类化合物的结构改造提示了方向。
本发明化合物结构通式如式(I)所示
其中，R1为氨基或胍基，R2为乙酰胺基。
R’为含氮和/或氧的侧链，选自如下基团 a.通式(Ia)所示基团
其中，A为C或0；R3为氢，羟基，C1-4烷氧基，芳香烷氧基等；R4、R5可以相同也可以不同，为氢，C1-4烷基，C1-4烷氧基等；A为0时，R3不代表任何原子。
b.通式(Ib)所示基团
其中，R6、R7可以相同也可以不同，为C1-4烷基，C1-4多羟基取代的烷基等。
c.通式(Ic)所示基团
其中，n＝1，2，3，4，5。
d.通式(Id)所示基团
其中Y为0、NH。
e、其他基团，选自如下之一
或
或
或
本发明上述通式(I)化合物的制备以唾液酸为起始原料，通过氨化还原反应和羟醛缩合反应对扎那米韦的C6侧链进行改造，合成目标分子。
本发明化合物优选为 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 (2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羟基叔丁基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸 或如下化合物 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸 (3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(4-羟基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸 (2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((3S，4S)-3，4-二羟基吡咯-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸 (2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((2S，4R)-4羟基-2-羟甲基吡咯-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸 本发明上述化合物可制作成为药物组合物，其以含有治疗有效量的上述化合物为活性成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体，采用现有制药工艺即可得到。
本发明提供的上述药物组合物的各种剂型，可以按照药学领域的常规生产方法制备，例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。
本发明所述化合物及其药物组合物可用于制备抗流感病毒药物。
本发明化合物经测定具有显著抑制流感病毒的活性，因此，本发明化合物有望应用于制备抗流感病毒药物。
具体实施例方式 下面通过实施例对本发明内容做进一步描述 制备例1(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲醛-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备a)(4S，5R)-5-乙酰氨基-4-叠氮基-6-醛基-5，6-二氢-4H-吡喃-2-羧酸甲酯的制备 制法参见J.CHEM.PERKIN TRANS I 1995.1173-1180. b)(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲醛-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物N-乙酰基-2，4-二脱氧-2，3-脱氢-4α-叠氮基-D-神经氨酸甲酯加入到甲醇/水(v/v＝3:1)混合液中，冰水浴下搅拌至完全溶解，慢慢加入NaIO4后，允许温度慢慢升至室温并且继续搅拌大概16小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟踪原料消失，蒸去溶剂后加入无水甲醇，用无水硫酸镁干燥后再次蒸干溶剂，得黄褐色黏稠物，收率为90.3％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 9.69-9.56(d，CHO，J＝20.1Hz)，6.15(d，NH，J＝8.0Hz)，4.76(d，3-CH，J＝2.6Hz)，4.66-.456(m，6-CH)，4.15(m，5-CH)，4.11-4.10(dd，4-CH，J＝2.6，0.1Hz)，3.884(s，NHCOCH3)，2.01(s，COOCH3). 实施例1(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
将(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯200mg(0.75mmol)和六氢吡啶76.5mg(0.9mmol)加入到25ml圆底烧瓶中，加入无水甲醇5ml，氮气保护下室温搅拌至固体溶解，加入冰醋酸1滴，继续搅拌10min后，加入NaBH3CN 57mg(0.9mmol)，室温下搅拌16小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟踪原料消失，加入少量饱和NaHCO3水溶液，二氯甲烷萃取后，无水硫酸钠干燥，旋转蒸去溶剂得黄褐色粘稠物，硅胶柱纯化色谱(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黄色透明液(8a)，收率为26％。
ESI-MS m/z338.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.51(d，NH，J＝9.4Hz)，5.99-5.98(d，3-CH，J＝.3Hz)，4.38(m，6-CH，)，4.26-4.24(m，5-CH)，4.16-4.14(t，4-CH，J＝7.3，0.4Hz)，3.82(s，COOCH3)，2.78-2.77(d，7-CH，J＝6.4Hz)，2.70-2.68(d，7-CH，J＝6.7Hz)，2.63～2.59(t，NCH2CH2，J＝3.9Hz)，2.53-2.50(t，NCH2CH2，J＝3.5Hz)，2.02(s，CH3CONH)，1.65-1.59(m，NCH2CH2)，1.47-1.42(m，NC H2CH2CH2) 13C-NMR(400MHZ，CDCl3)δ ppm 170.49(COOCH3)，162.23(CH3CONH)，144.54
，107.15(3-C)，75.79(6-C)，58.47(5-C)，56.74(COOCH3)，55.89(NCH2CH2)，52.64(7-C)，49.67(1-4)，25.63(NCH2CH2)，23.79(NCH2CH2CH2)，23.25(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
将中间体(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解于无水甲醇中，加入催化量Lindlar催化剂，在H2保护下室温搅拌2小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟踪原料消失，加入适量硅藻土，砂芯漏斗过滤，旋转蒸干滤液得黄色透明物，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)得黄色透明液体，收率为63.8％。。
ESI-MS m/z312.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 7.13(d，NH，J＝14.1Hz)，6.00-5.99(d，3-CH，J＝10Hz)，3.79(m，6-CH，3.77(s，COOCH3)，3.76(m，5-CH，)，3.50-3.48(t，4-CH，J＝10.4，10Hz)，2.80-2.71(d，7-CH2，J＝3.9Hz)，2.68-2.67(t，NCH2CH2，J＝4.1Hz)，2.49-2.47(t，NCH2CH2，J＝3.4Hz)，2.05(s，CHNCOCH3)，1.64-1.59(m，NCH2CH2，J＝4.1，3.4Hz)，1.50-1.48(m，NCH2CH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
将黄色透明物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解在THF/H2O(v/v＝3/1)混合溶剂中，搅拌下加入等当量的1N KOH水溶液，继续搅拌1小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)跟踪原料消失，旋转蒸去溶解，于残留物中加入2ml无水甲醇，轻轻震荡后过滤，滤液用磺酸树脂调节至微酸性，过滤，蒸干滤液，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为51.3％。
ESI-MS m/z298.6(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O.)δ ppm 5.57-5.56(d，NH，J＝8.1Hz)，4.46(d，3-CH，J＝5.0Hz)，4.08-4.03(m，6-CH)，3.53-3.47(m，5-CH，)，3.40-3.37(dd，4-CH，J＝5.0，0.5Hz)，2.82-2.76(d，7-CH，J＝5.0Hz)，2.72(t，NCH2CH2，J＝4.8Hz)，2.71(t，NCH2CH2，J＝4.7Hz)，2.58-2.56(d，7-CH，J＝6.0Hz)，2.49(t，NCH2CH2，J＝3.8Hz)，1.90(s，CH3CON)，1.52(m，NCH2CH2CH2)，1.37(m，NCH2CH2CH2). 实施例2(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与4-羟基哌啶参照实施例1(a)的实验操作获得，硅胶柱色谱纯化条件(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，收率为22.6％。
ESI-MS m/z354.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 6.24-6.22(d，NH，J＝8.2Hz)5.98-5.97(d，3-CH，J＝12.4Hz)，4.36-4.22(m，6-CH)，4.17-4.15(m，NCH2CH2CHO)，3.80(s，COOCH3)，3.68-3.66(m，5-CH)，2.88(dd，4-CH，J＝12.4，5.1Hz)，2.78-2.73(dd，7-CH2，J＝6.3Hz)，2.63-2.54(dd，NCH2CH2，J＝2.9Hz)，2.31-2.21(m，NCH2CH2)，1.99(s，CH3CONH)，1.89-1.88(m，NCH2CH2)，1.62-1.58(m，NCH2CH2). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ 170.27(COOCH3)，162.17(CH3CONH)，144.46(2-C)，106.70(3-C)，76.21(6-C)，67.44(NCH2CH2CHO)，57.19(5-C)，56.13(7-C)，51.34(4-C)，29.35(2×NCH2CH2CHO)，34.46(2×NCH2CH2CHO)，23.25(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)，收率为41.9％。
ESI-MS m/z328.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，CDCl3.)δ ppm 7.24(s，NH)，6.21(s，3-CH)，5.51-5.45(m，6-CH)，5.44(m，CHOH)，5.41(m，5-CH)，5.00-4.95(m，4-CH)，4.85(m，NCH2CH2)4.78-4.66(m，NCH2CH2)，4.64(m，7-CH)，4.55-4.45(m，7-CH)，3.61(m，NCH2CH2)，3.53(s，CH3CONH)，3.30-3.27(m，NCH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为51.3％。
ESI-MS m/z314.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O.)δ ppm 5.73-5.73(d，3-CH，J＝7.5Hz)，4.39-4.33(m，6-CH)，4.02-4.00(m，NCH2CH2CHO)，3.97-3.95(m，5-CH)，3.84-3.74(dd，4-CH，J＝7.5，0.5Hz)，3.41(m，OH)，3.31-3.29(t，NCH2CH2J＝5.1Hz)，3.25-3.22(m，7-CH2，J＝4.6，1.4Hz)，3.14-3.11(t，NCH2CH2)，2.90(m，7-CH2，J＝5.9，1.4Hz)，2.04(s，CH3CONH)，2.02-2.00(m，NCH2CH2)，1.87-1.78(m，NCH2CH2). 实施例3(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与甲乙胺参照实施例1(a)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)，得黄色透明液，收率为30.8％。
ESI-MS m/z312.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.64-6.58(d，NH，J＝9.5Hz)，5，98-5.95(d，3-CH，J＝7.4Hz)，4.42-4.40(m，6-CH)，4.25-4.26(m，5-CH)，4.12-4.03(dd，4-CH，J＝7.4，0.5Hz)，3.81(s，COOCH3)，2.88-2.84(dd，7-CH2，J＝6.1Hz)，2.78-2.73(q，CH3CH2N)，2.39(s，NCH3)，2.03(s，CH3CONH)，1.12-1.09(t，CH3CH2N，J＝6.6Hz). 13C-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 179.54(COOCH3)，162.06(CH3CONH)，144.52(2-C)，107.13(3-C)，76.22(6-C)，56.74(7-C)，56.55(5-C)，52.63(COOCH3)，52.00(CH3CH2N)，49.54(4-C)，41.78(CH3N)，23.23(CH3CONH)，11.43(CH3CH2N). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得黄色透明液体，收率为43.6％。
ESI-MS m/z386.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 7.18-7.17(d，NH，J＝13.4Hz)，6.00-5.99(d，3-CH，J＝9.6Hz)，4.29-4.27(m，6-CH)，3.82-3.80(m，5-CH)，3.78(s，COOCH3)，3.60-3.58(dd，4-CH，J＝9.6，0.8Hz)，3.02-2.88(dd，7-CH2，J＝5.0，0.5Hz)，2.86-2.80(q，CH3CH2N)，2.50(s，NCH3)，2.06(s，CH3CONH)，1.18-1.13(t，CH3CH2N，J＝6.7Hz). a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基))氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝4:1，v/v)，得到黄白色粉末，收率为42.1％。
ESI-MS m/z272.6(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δppm5.78(d，3-CH，J＝8.8Hz)，4.20(m，6-CH)，4.16(m，5-CH)，3.57-3.52(dd，4-CH，J＝8.8，2.3Hz)，3.47-3.31(dd，7-CH2，J＝2.9，0.6Hz)，3.30-3.21(q，CH3CH2N)，2.85(s，NCH3)，2.02(s，CH3CONH)，1.32-1.29(t，CH3CH2N，J＝7.9Hz). 实施例4(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3乙酰氨基-4-叠氮基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与二乙胺参照实施例1(a)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)，得黄色透明液，收率为40.1％。
ESI-MS m/z326.4(M+H)+. 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 6.24(d，NH，J＝7.8Hz)，6.01-6.00(d，3-CH，J＝7.4Hz)，4.44-4.40(t，6-CH，J＝6.0，0.6Hz)，4.28-4.24(m，5-CH)，4.16-4.11(dd，4-CH，J＝7.4Hz)，3.82(s，COOCH3)，2.94-2.81(dd，7-CH2，J＝6.0，0.5Hz)，2.75-2.70(q，2×NCH2CH3)，2.02(s，CH3CONH)，1.10-1.06(t，2×NCH2CH3，J＝6.6Hz). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.74(COOCH3)，161.98
，107.41(3-C)，76.37(6-C)，56.09(7-C)，53.09(5-C)，52.60(COOCH3)，49.42(4-C)，47.40(2×CH3CH2N)，23.21(CH3CONH)，10.51(2×CH3CH2N). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得黄色透明液体，收率为72.4％。
ESI-MS m/z300.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，CDCl3)δ ppm 7.54-7.52(d，NH，J＝14.6Hz)，6.03(d，3-CH，J＝9.6Hz)，4.54-4.51(dd，6-CH，J＝5.1，2.6Hz)，3.89-3.82(m，5-CH2)，3.80(s，COOCH3)，3.63-3.61(dd，4-CH，J＝9.6，0.8Hz)，3.26-3.22(m，7-CH2)，3.13-2.94(q，2×NCH2CH3)，2.11(s，CH3CONH)，1.13-1.23(t，2×NCH2CH3，J＝8.0Hz). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1
的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝4:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为52.5％。
ESI-MS m/z286.4(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 8.48(d，NH，J＝16.0Hz)，5.83-5.82(d，3-CH，J＝5.6Hz)，4.78(m，6-CH)，4.47-4.43(m，5-CH2)，4.42(dd，4-CH，J＝5.6，0.2Hz)，3.70-3.69(d，7-CH2，J＝4.3Hz)，3.67-3.66(q，NCH2CH3)，3.61-3.59(q，NCH2CH3)，3.58-3.56(d，7-CH2，J＝4.8Hz)，3.36(s，CH3CONH)，2.11(t，CH3CH2N，J＝6.0Hz)，1.94(3H，t，CH3CH2N，J＝6.8Hz). 实施例5(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与二乙胺参照实施例1(a)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黄色透明液，收率为28％。
ESI-MS m/z358.8(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 7.11-7.03(d，NH，J＝11.2Hz)，5.95-5.94(d，3-CH，J＝6.6Hz)，4.32(m，6-CH)，4.29(m，5-CH)，4.12-4.00(dd，4-CH，J＝6.6，0.6Hz)，3.80(s，COOCH3)，3.59-3.56(t，2×CH2OH，J＝3.4Hz)，2.84(m，7-CH2)，2.73-2.63(t，2×NCH2CH2，J＝3.4Hz)，2.01(s，CH3CONH). 13C-NMR(400MHz，CDC13.)δ ppm 170.99(COOCH3)，162.51(CH3CONH)，144.37(2-C)，107.51(3-C)，76.72(6-C)，57.45(2×CH2OH)，57.11(2×NCH2CH2)，54.96(5-C)，52.82(7-C)，49.90(COOCH3)，23.13(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得黄色透明液体，收率为72.4％。(附图7) ESI-MS m/z332.8(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 6.02-6.01(d，3-CH，J＝9.5Hz)，4.17-4.12(m，6-CH)，3.80(s，COOCH3)，3.79-3.76(m，5-CH)，3.74-3.64(m，2×CH2OH)，3.63-3.61(m，4-CH)，2.93-2.91(d，7-CH2)，2.86-2.73(m，2×CH2CH2N)，2.04(s，CH3CONH). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为42.1％。
ESI-MS m/z356.5(M+K)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 5.67-5.67(d，3-CH，J＝8.6Hz)，4.03(m，6-CH)，3.71-3.48(m，2×CH2OH)，3.61-3.59(m5-CH)，3.50-3.48(m，4-CH)，2.85-2.74(m，2×CH2CH2N)，2.71-2.66(m，7-CH2)，2.03(s，CH3CONH)。
实施例6(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与3-甲氨基-1，2-丙二醇参照实施例1(a)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黄色透明液，收率为23.6％。
ESI-MS m/z358.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.66-6.64(.d，NH，J＝9.4Hz)，5.99-5.98(d，3-CH，J＝9.9Hz)，4.37-4.36(m，6-CH)，4.29-4.27(m，5-CH)，4.00-3.98(m，CH2OH)，3.81(s，COOCH3)，3.75-3.74(m，CH2OH)，3.70-3.66(m，NCH2CHOH)，3.51-3.47(t，4-CH，J＝9.9，3.1Hz)，2.87-2.82(dd，7-CH2，J＝6.0，0.9Hz)，2.63-2.60(dd，7-CH2，J＝6.9，0.9Hz)，2.63-2.57(m，NCH2CHOH)，2.37(s，NCH3)，2.00(s，NHCO CH3). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.39(COOCH3)，162.12 .(CH3CONH)，144.38(2-C)，106.64(3-C)，76.01(6-C)，67.88(NCH2CHOH)，64.34(CH2OH)，59.86(NCH2CH)，56.79(7-C)，54.14(5-C)，52.74(COOCH3)，50.83(4-C)，43.70(NCH3)，23.21(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷:MeOH＝4:1，v/v)得到黄色透明液体，收率为44.9％。(附图8) ESI-MS m/z332.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，D2O)δ ppm 6.12-6.11.(d，3-CH，J＝9.1Hz)，4.30-4.30(m，6-CH)，4.02-4.00(m，5-CH)，3.87(s，COOCH3)，3.84-3.73(t，4-CH，J＝9.1，0.7Hz)
3.71-3.68(m，CH2OH)，3.67-3.63(m，CH2OH)，3.59-3.55(m，NCH2CHOH)，3.13-3.07(dd，7-CH2，J＝4.6，0.6Hz)，2.98-2.94(dd，7-CH2，J＝5.3，0.6Hz)，2.83-2.80(m，NCH2CHOH)，2.57(s，NCH3)，2.11(s，NHCOCH3). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得到黄白色粉末，收率为32.2％。
ESI-MS m/z318.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 8.47(d，NH，J＝18Hz)，5.80-5.79(d，3-CH，J＝7.6Hz)，4.44-4.41(m，6-CH)，3.95-3.94(m，5-CH)，3.90-3.89 .(dd，4-CH，J＝7.6，0.2Hz.)，.3.64-3.63(m，CH2OH)，3.60-3.59(m，CH2OH)，3.40-3.37(m，7-CH2)，3.28(m，NCH2CHOH)，3.14-3.10(m，NCH2CHOH)，2.84(s，NCH3)，2.10(s，NHCOCH3). 实施例7(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
将(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯200.0mg(0.75mmol)和2，6-二甲基吗啡啉三氟乙酸盐96.6mg(0.9mmol)加入到25ml圆底烧瓶中，加入无水甲醇5ml，氮气保护下室温搅拌至固体溶解，加入NaBH3CN 57mg(0.9mmol)，室温下搅拌16小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)跟踪原料(化合物7)消失，加入少量饱和NaHCO3水溶液，二氯甲烷萃取后，无水硫酸钠干燥，旋转蒸去溶剂得黄褐色粘稠物，硅胶柱(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)纯化，得黄色透明液(8g)，收率为45.4％。(附图9) ESI-MS m/z368.0(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.42-6.40(d，NH，J＝9.6Hz)，6.03-6.01(d，3-CH，J＝8.3Hz)，4.13-4.11(m，6-CH)，4.02(m，5-CH)，3.95-3.93(dd，4-CH，J＝8.3，0.3Hz)，3.76(s，COOCH3)，3.60-3.58(m，2×OCHCH3)，2.75-2.63(dd，7-CH2，J＝5.5，0.5Hz)，2.59-2.56(m，NCH2CH)，1.89(s，NCOCH3)，1.83-1.77(m，NCH2CH)，1.08-1.03(m，2×OCHCH3). 13C-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 170.44(COOCH3)，162.01(CH3CONH)，105.26(3-C)，72.28(6-C)，71.61(2×OCHCH3)，59.85
，58.11(5-C)，54.68(7-C)，52.65(COOCH3)，48.17(4-C)，22.95(CH3CONH)，18.95(2×OCHCH3). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4氨基-2(((2S，6R)-2，6-二甲吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝8:1，v/v)得到黄色透明液体，收率为64.7％。
ESI-MS m/z342.3(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm 6.08(.d，NH，J＝8.3Hz)，6.07(d，3-CH，J＝10.7Hz)，4.18(m，6-CH)，4.00-3.98(m，5-CH)，3.79(s，COOCH3)，3.65-3.65(m，2×OCH CH3)，3.39-3.38(dd，4-CH，J＝10.7，2.4Hz)，2.87-2.84(d，7-CH2，J＝5.2，1.0Hz)，2.73-2.66(m，NCH2CH)，2.62-2.61(d，7-CH2，J＝6.4，1.0Hz)，1.95(s，NHCOCH3)，1.91-1.83(m，NCH2CH)，1.14-1.12(m，2×OCHCH3). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲基吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲基吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得到黄白色粉末，收率为66.4％。
ESI-MS m/z:328.3(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O.)δ ppm 5.82-5.81(d，3-CH，J＝10.3Hz)，4.03(t，6-CH，J＝3.6Hz)，3.87-3.83(m，2×OCHCH3)，3.72-3.70(m，5-CH)，3.23-3.3.20(t，4-CH，J＝10.3，1.9Hz)，3.12-3.07(dd，7-CH2，J＝3.6，0.2Hz)，2.83-2.02(m，2×NCH2CH)，1.97(s，NHCOCH3)，1.16-1.10(m，2×OCHCH3). 实施例8(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与4-甲氧基哌啶三氟乙酸盐参照实施例7(a)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黄色透明液，收率为27.2％。
ESI-MS m/z368.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.33-6.31(d，NH，J＝8.4Hz)，5.97-5.91(d，3-CH，J＝7.2Hz)，4.35-4.31(m，6-CH)，4.22-4.20(m，5-CH)，4.16-4.13(dd，4-CH，J＝7.2，0.2Hz)，3.79(s，COOCH3)，3.44-3.44(m，CHOCH3)，3.03(s，CHOCH3)，3.20-3.19(d，7-CH，J＝4.6Hz)，2.82-2.81(d，7-CH，J＝6.1Hz)，2.78-2.57(m，NCH2CH2)，2.36-2.21(m，NCH2CH2)，1.98(s，CH3CONH)，1.86(m，NCH2CH2)，1.58-1.55(m，NCH2CH2). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.34(COOCH3)，162.13(CH3CONH)，144.50(2-C)，106.84(3-C)，76.18(CHOCH3)，75.61(6-C)，57.53(5-C)，49.47(2×NCH2CH2)，29.69(2×NCH2CH2)，23.25(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)得到黄色透明液体，收率为44.8％。
ESI-MS m/z342.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHZ，CD3OD)δ ppm 5.90(1H，d，3-CH)，4.02(1H，t，6-CH)，3.74-3.70(1H，t，5-CH)，3.72(3H，s，COOCH3)，3.58(1H，t，4-CH)，，3.51-3.49(1H，m，CHOCH3)，3.24(3H，s，CHOCH3)，2.83-2.82(2H，dd，7-CH2)，2.73-2.68(2H，t，NCH2CH2)，2.42-2.39(2H，m，NCH2CH2)，1.94(3H，s，CH3CONH)，1.89-1.85(2H，m，NCH2CH2)，1.59-1.56(2H，m，NCH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷:Me0H＝2:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为41.7％。(附
图10) ESI-MS m/z328.2(M+H)+ 实施例9(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与4-苄氧基哌啶三氟乙酸盐参照实施例7(a)的实验操作获得，硅胶柱色谱(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)纯化，得黄色透明液，收率为26％。
ESI-MS m/z444.0(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 7.26-7.18(C6H5)，6.32-6.30(d，NH，J＝8.9Hz)，5.92-5.91(d，3-CH，J＝10.1Hz)，4.45(s，C6H5CH2)，4.31-4.30(m，6-CH)，4，19-4.17(m，CHOCH2)，4.10-4.04(m5-CH)，3.74(s，COOCH3)，3.38-3.35(dd，4-CH，J＝10.1，2.9Hz)，2.82-2.73(t，NCH2CH.2，J＝3.6Hz)，2.70-2.55(t，NCH2CH.2，J＝4.7Hz)，2.34-2.20(m，7-CH2)，1.94(s，CH3CONH)，1.91-1.84(m，NCH2CH2)，1.66-1.57(mNCH2CH2，). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.65(COOCH3)，162.18.(CH3CONH)，.144.47(2-C)，138.70.(1C，C6H5)，128.38(2C，C6H5)，127.53(3C，C6H5)，107.10(3-C)，76.08(CH2C6H5)，69.82(6-C)，57.72(CHOCH2)，56.59(5-C)，53.47(COOCH3)，52.67(7-C)，51.26(4-C)，49.53(2C，2×NCH2CH2)，30.86(NCH2CH2)，29.67(NCH2CH2)，23.20(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝9:1，v/v)得到黄色透明液体，收率为55.3％。
ESI-MS m/z418.0(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3.)δ ppm 7.36-7.28(m，C6H5)，6.00-5.99(d，3-CH，J＝11.6Hz)，4.52(s，C6H5CH2)，3.83-3.80(m，6-CH)，3.57(s，COOCH3)，3.57(m，CHOCH2)，3.55(m，5-CH)，3.09(dd，4-CH，J＝11.6，1.8Hz)，3.03-2.98(t，7-CH2，J＝3.2Hz)，2.89-2.85(t，NCH2CH2，J＝2.3Hz)，2.67-2.63(t，NCH2CH2，J＝3.3Hz)，2.07(s，CH3CONH)，2.03-2.00(m，NCH2CH2)，1.84-1.83(m NCH2CH2). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝4:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为74.4％。
ESI-MS m/z404.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 7.44-7.42(m，C6H5)，5.92(d，3-CH，J＝8.3Hz)，4.79(m，6-CH)，4.64-4.59(m，CHOCH2)，4.25(s，C6H5CH2)，3.99(m，5-CH)，3.83-3.80(dd，4-CH，J＝8.3，0.6Hz)，3.52-3.59(m，7-CH2)，3.52-3.44(t，NCH2CH2，J＝5.8Hz)，3.19-3.13(t，NCH2CH2，J＝4.8Hz)，2.07(s，CH3CONH)，2.06-2.02(m，NCH2CH2)，1.99-1.98(m，NCH2CH2). 实施例10(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与4-烯丙氧基哌啶三氟乙酸盐参照实施例7(a)的实验操作获得，硅胶柱色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黄色透明液，收率为28.4％。
ESI-MS m/z394.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 5.25-5.23(d，NH，J＝4.5Hz)，5.98-5.97(d，3-CH，J＝10.0Hz)，5.94-5.87(m，CH2＝CH)，5.29-5.41(m，CH2＝CH)，4.37-4.34(m，CHOCH2)，4.33-4.32(m，6-CH)，4.12-4.11(m，5-CH)，4.03-3.93(m，OCH2CH)，3.81(s，COOCH3)，3.47-3.44(dd，4-CH，J＝10.0，2.6Hz)，2.83-2.77(m，NCH2CH2)，2.64-2.59(m，7-CH2)，2.27-2.25(m，NCH2CH2)，1.99(s，NHCOCH3)，1.80-1.75(m，NCH2CH2CH2)，1.74-1.71(m，NCH2CH2CH2) b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)得到黄色透明液体，收率为21.3％。
ESI-MS m/z370.9(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 7.02-7.01(d，NH，J＝12.8Hz)，5.98(d，3-CH，J＝9.9Hz)，4.01-3.96(m，6-CH)，3.78(s，COOCH3)，3.79-3.73(m，5-CH)，3.50-3.49(dd，4-CH，J＝9.9，1.2Hz)，3.41-3.32(m，CHOCH2CH2)，2.73-2.69(m，NCH2CH)，2.67-2.64(m，7-CH2)，2.44-2.28(m，NCH2CH2)，2.03(s，NHCOCH3)，1.77-1.75(m，NCH2CH2CH2)，1.58-1.48(m，OCH2CH2CH3)，1.45-1.43(m，NC H2CH2CH2)，0.92-0.88(t，OCH2CH2CH3，J＝2.6Hz). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇2:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为31.2％。
ESI-MS m/z356.3(M+H)+ 实施例11(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯通过中间体(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲酰基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯与3-烯丙氧基哌啶三氟乙酸盐参照实施例7(a)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝13:1，v/v)，得黄色透明液，收率为27.5％。
ESI-MS m/z394.5(M+H)+ 1HNMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.24-6.22(d，NH，J＝8.5Hz)，5.97-5.96(d，3-CH，J＝10.5Hz)，5.89-5.88(m，CH2＝CH)，5.28-5.11(m，CH2＝CH)，4.33-4.31(m，CHOCH2)，4.23-4.21(m，6-CH)，4.12-4.11(m，5-CH)，4.15-4.12(m，OCH2CH＝CH2)，3.79(s，COOCH3)，3.35-3.33(dd，4-CH，J＝10.5Hz)，2.83-2.81(m，NCH2CH2)，2.76-2.71(m，NCH2CH2)，2.60-2.57(m，NCH2CH2)，2.27-2.25(m，NCH2CH2)，2.30-2.22(m，7-CH2)，1.98(s，NHCOCH3)，1.87-1.84(m，NCH2CH2CH)，1.60-1.57(m，NCH2CH2CH). 13C-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 170.22(COOCH3)，162.13(CH3CONH)，144.56(2-C)，135.32(CH＝CH2)，116.44(CH＝CH2)，106.99(3-C)，76.25(6-C)，68.80(CH2CH＝CH2)，57.56(CHOCH2)，56.29(5-C)，52.85(COOCH3)，51.87(7-C)，51.40(4-C)，49.66(2×NCH2CH2)，31.34(2×NCH2CH2)，23.21(CH3CONH). b)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例1(b)的实验操作获得，硅胶柱纯化(二氯甲/甲醇＝4:1，v/v)，得黄色透明液体，收率为44.4％。
ESI-MS m/z370.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.89-6.88(d，NH，J＝13.5Hz)，5.99-5.98(d，3-CH，J＝12.1Hz)，4.07-4.06(m，6-CH)，3.78(s，COOCH3)，3.51-3.49(m，5-CH)，3.39-3.33(m，CHOCH2)，2.96-2.95(m，4-CH)，2.83-2.71(m，2×NCH2CH2)，2.53-2.30(m，7-CH2)，2.03(s，NHCOCH3)，1.60-1.57(m，2×NCH2CH2)，1.25(m，OCH2CH2CH3)，0.93-0.91(t，OCH2CH2CH3，J＝3.8Hz). c)(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
化合物(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸参照实施例1(c)的实验操作获得，制备色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝2:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为51.9％。
ESI-MS m/z356.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，D2O)δ ppm 5.96-5.68(d，3-CH，J＝9.4Hz)，4.24(m，6-CH)，3.62-3.62(m，5-CH)，3.60-3.59(m，4-CH)，3.48-3.44(m，CHOCH2CH2)，3.10-3.07(m，7-CH2)，2.91-2.85(m，2×NCH2CH2)，2.69-2.65(m，7-CH2)，2.02(s，NHCOCH3)，2.01-1.98(m，NCH2CH2)，1.74-1.71(m，NCH2CH2)，1.54-1.49(m，OCH2CH2CH3)，0.85-0.82(t，OCH2CH2CH3，J＝2.8Hz). 实施例12(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
将(3R，4S)-3-乙酰胺-4-叠氮-2-甲醛-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯410.0mg(1.53mmol)与L-脯氨酸53mg(0.46mmol)加入25ml圆底烧瓶中，加入DMS010ml常温下搅拌溶解，慢慢加入环戊酮192.5mg(2.29mmol)，继续搅拌24小时，TLC跟踪原料消失，加入5ml纯净水，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并有机层，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥后，旋转蒸发去掉溶剂，残留物用硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯＝7:3，v/v)，得黄色粘稠液，收率52.1％。
b)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
将化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯220.0mg(0.62mmol)用10ml无水甲醇在室温下搅拌溶解在25ml圆底烧瓶中，加入NaBH425.0mg(0.66mmol)，继续搅拌1小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝97:3，v/v)跟踪原料消失，用1N HCl溶液调节pH7，旋转蒸去甲醇，残留液用乙酸乙酯萃取(10ml×3)，无水硫酸钠干燥后，旋转蒸去溶剂，残留物用硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝97:3，v/v)，得化合物，收率为90.9％。
ESI-MS m/z327.5(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 5.75(d，3-CH，J＝9.5Hz)，4.18-4.17(m，6-CH)，3.90(m，5-CH)，3.65(m，CHOH)，3.64(s，COOCH3)，3.38(m，4-CH)，1.90-1.88(m，CH2CH2CH2)，1.83-1.82(m，CHCH2)，1.09(s，NHCOCH3). c)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备
将化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解在无水甲醇中，加入催化量的Lindlar催化剂，抽去反应体系的空气后在氢气的保护下，室温搅拌1小时，TLC(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)跟踪原料消失，加入少量硅藻土，过滤，旋转蒸干滤液，残留物用硅胶柱纯化得到两个产物(38.4％)。
ESI-MS m/z351.1(M+Na)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.93(d，3-CH，J＝11.0Hz)，5.90(m，6-CH)，5.28(m，5-CH)，4.17-4.15(m，4-CH)，3.84-3.80(t，CHCHOH)，3.77(s，COOCH3)，3.56-3.45(m，CH2CHOH)，2.21(m，HOCHCHCHOH)，2.08(s，NHCOCH3)，1.92-1.82(m，CH2CHOH)，1.62-1.56(m，CH2CH2). ESI-MS m/z329.1(M+H)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.96(d，NH，J＝12.2Hz)，5.89-5.88(d，3-CH，J＝8.0Hz)，4.07-4.05(m，6-CH)，3.90(m，5-CH)，3.88-3.86(m，4-CH)，3.76(s，CO OCH3)，3.64-3.63(m，CHCHOH)，3.56-3.55(m，CH2CHOH)，2.21(m，HOCH CHCHOH)，2.07(s，NHCOCH3)，1.70-1.67(m，CH2CHOH)，1.55-1.50(m，CH2CH2). d)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
将化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯溶解在THF/H2O(v/v＝3:1)中，加入等当量的1N KOH水溶液，室温下搅拌至原料消失，旋转蒸去溶剂，在残留物中加入无水甲醇溶解产物后滤去不溶物，加入磺酸树脂调节pH7，过滤滤去树脂后蒸干甲醇，残留物用制备硅胶板纯化(二氯甲烷/甲醇＝6:1，v/v)，得黄白色粉末，收率为29.4％。
ESI-MS m/z358.1(M+K)+ 1H-NMR(400MHz，CDOH)δ ppm 5.60(d，3-CH，J＝6.6Hz)，4.37-4.36(m，6-CH)，3.90(m，5-CH)，3.94(m，4-CH)，3.92(m，CHCHOH)，3.60-3.59(m，CH2CHOH)，2.14-2.11(m，HOCHCHCHOH)，2.04(s，NHCOCH3)，1.91-1.89(m，CH2CHO H)，1.61-1.57(m，CH2CH2). 实施例13(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备 a)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯和(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的制备的制备
选用环己酮，参考化合物实施例12(a)的实验操作获得(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯，收率73.1％，随后用实施例12(b)同样的还原方法获得(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯的粗产品，用硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝15:1，v/v)，得化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯，收率72.4％。
ESI-MS m/z391.1(M+Na)+ 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ ppm 6.65-6.55(d，NH，J＝9.8Hz)，5.95-5.93(d，3-CH，J＝9.0Hz)，4.53-4.51(m，6-CH)，4.21-4.19(m，5-CH)，4.12-4.10(m，CHOH)，3.80(s，COOCH3)，3.70-3.68(dd，4-CH，J＝9.0，2.0Hz)，3.57-3.55(m，CHCOCH2)，2.07(s，NHCOCH3)，1.89-1.66(m，4×CH2). b)(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯和(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
参考实施例12(c)和(d)的实验操作，还原水解(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯和(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸，两步的收率分别是42.7％和40.9％。
ESI-MS m/z341.1(M+H)+ ESI-MS m/z321.1(M+Na)+ 实施例14(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羟基叔丁基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸的制备
选用羟基丙酮与中间体(3R，4S)-3-乙酰胺4-叠氮-2-甲醛-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸甲酯参照实施例12(a)、(b)、(c)和(d)的实验操作，经过羟醛缩合反应、还原羰基、Lindlar催化剂催化还原叠氮、KOH水解等反应获得目标化合物(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羟基叔丁基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸，四步的收率分别是46.5％、40.3％、95％和91.4％。
ESI-MS m/z317.1(M+H)+ ESI-MS m/z341.1(M+Na)+ 制备例2(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-醛基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯的制备 a)(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((1R，2R)-1，2，3-三羟基丙基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-叠氮基-2-((1R，2R)-1，2，3-三羟基丙基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯(3.0g)的甲醇(50mL)中加入林德拉催化剂，并通入氢气。4天后，过滤，滤液减压蒸馏并得到2.2g产品。
b)(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1R，2R)-1，2，3-三羟基丙基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1R，2R)-1，2，3-三羟基丙基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯(2.76g，9.08mmol)的DMF(100mL)溶液中依次加入三乙胺(5mL，36，32mmol)，(BocHN)2CS(5.27g，19.07mmol)和HgCl2(4.93g，18.16mmol)。搅拌过夜，过滤，滤液中加入水并用乙酸乙酯萃取三次。饱和食盐水洗3次。无水硫酸钠干燥，减压蒸馏并得产物4.5g。过硅胶柱(DCM/MeOH(96:4，v/v，50g硅胶)得1.5g产品。
c)(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-醛基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1R，2R)-1，2，3-三羟基丙基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯(0.6g，1.10mmol)的甲醇/水(120mL，31，v/v)溶液中加入NaIO4(0.49g，2.31mmol)。100分钟后，过滤，滤液减压蒸馏以除去甲醇。用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏得产品0.54g. 实施例15(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-甲基-3-乙酰氨基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-醛基-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸酯(0.15g，0.31mmol)的DMSO(10mL)溶液中依次加入环戊酮(1mL)和L-脯氨酸(0.011g，0.093mmol)。8天后，加入水并用乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗3次，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏并得棕色泡沫(0.227g).过硅胶柱(DCM/Ether(92:8，v/v)，7g硅胶)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯(0.065g，0.11mmol)的甲醇(10mL)溶液中加入NaBH4(0.005g)。45分钟后，减压蒸馏除去甲醇，加水后用乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏并得到透明油状物(0.066g)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯(0.039g。0.068mmol)的THF/H2O(5mL，4:1，v/v)溶液中加入LiOH至pH10左右。10分钟后，盐酸(1mol L-1)中和。减压蒸馏除去THF，乙酸乙酯萃取3次，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥。减压蒸馏。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
室温下，向搅拌着的(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸(0.032g，0.057mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入CF3COOH(1mL)，4小时后，减压蒸馏除去溶剂和CF3COOH，得棕色油状物(0.03g)。
实施例16(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备参照实施例1(a)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备参照实施例1(b)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备参照实施例1(c)。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备参照实施例1(d)。
实施例17(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)2(羟基(2-羰基四氢-2H-吡喃基)甲基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羰基四氢-2H-吡喃基)甲基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备参照实施例1(a)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备参照实施例1(b)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备参照实施例1(c)。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备参照实施例4(d)。
实施例18(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(4-羟基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备 a)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羟基哌啶-3-基)(羟基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羟基哌啶-3-基)(羟基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备参照实施例1(a)。
b)(3R，4S)-甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备
甲基-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧基酯的制备参照实施例1(b)。
c)(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羟基哌啶-3-基)(羟基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
(3R，4S)-4-(2，3-二(叔丁氧羰基)胍基)-2-((1-叔丁氧羰基)-4-羟基哌啶-3-基)(羟基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备参照实施例1(c)。
d)(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(4-羟基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(4-羟基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸的制备参照实施例1(d)。
实施例19
取三醇1(122.2mg，0.224mmol)溶于18ml甲醇和6ml水，加入高碘酸钠(105mg，2.2equiv)，室温下搅拌24小时。减压出去绝大部分甲醇，余下部分加入乙酸乙酯，进行萃取，乙酸乙酯层用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压除去溶剂得到定量反应的产物醛2，2直接投入下一步反应无需进一步的纯化。
醛2(51.7mg，0.099mmol)溶于2ml无水乙氰，加入胺6(11mg，1.1equiv)在2ml甲醇中的溶液，混合均匀后，加入约0.2g无水硫酸镁，室温下搅拌1小时，向反应混合物加入7mg氰基硼氰化钠。一小时后过滤，减压出去溶剂，硅胶柱纯化得到32mg白色固体3，收率约57％。
酯3(32mg，0.056mmol)溶于2ml四氢呋喃，加入0.1ml 1N氢氧化钠溶液，室温下搅拌2小时；加入离子交换树脂，调整pH至约6.0。减压蒸干得到白色固体，溶于2ml二氯甲烷，加入0.5ml三氟醋酸，2h后减压蒸干得到产品，HPLC纯化，收率约70％。
下面对本发明化合物对流感病毒抑制活性进行测试 流感病毒神经氨酸酶测定方法 实验材料NA酶液流感病毒感染鸡胚的尿囊液 酶促反应体系330mmol/L的MES缓冲液(pH3.5) 200μmol/L的MUNANA 4mmol/L的CaCl2溶液 终止液14mmol/L的NaOH溶液(14mmol/L，83％的乙醇) 奥司他韦1mmol/L 酶活性测定 NA酶液(不同稀释浓度) 40μl MES(330mmol/L) 10μl CaCl2(4mmol/L) 10μl MUNANA(200μmol/L) 10μl H2O 30μl 混匀孵育15min后 终止液150μl EX＝355nm XM＝460nm 注为了验证酶反应系统是否正常，可以不加终止液，测定荧光值的动力曲线。
NA抑制剂筛选实验操作 1、奥司他韦或化合物110，1100，11000，110000稀释 2、反应步骤NA酶液 30μl奥司他韦或化合物 10μl 混匀后孵育30min，加入以下成分MES(330mmol/L)10μlCaCl2(4mmol/L)10μlMUNANA(200μmol/L)10μlH2O30μl 混匀后孵育15min，加入终止液150μl 混匀后测定荧光值EX＝355nm XM＝460nm 3、数据分析GraphPad Prism Demo分析。
目标化合物活性测定结果如下表所示
从以上测试结果可以看出，当化合物的C4为胍基时，其活性显著增加，而且实施例15，16，17，18的化合物的活性均高于扎纳米韦，实施例19化合物的活性接近于扎纳米韦，都有望开发为新药。
权利要求
1.唾液酸类似物，其结构如以下通式I所示
其中R1为氨基或胍基，R2为乙酰胺基，R’为含氮和/或氧的侧链，选自以下通式所示基团a.通式(Ia)所示基团，结构如下
其中，A为C或0，R3选自如下之一氢、羟基、C1-4烷氧基、芳香烷氧基，R4和R5选自如下之一氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基；A为0时，R3不代表任何原子；
b.通式(Ib)所示基团，结构如下
其中，R6和R7为C1-6烷基或C1-6多羟基取代的烷基；
c.通式(Ic)所示基团，结构如下
其中，n＝1，2，3，4，5；
d.通式(Id)所示基团，结构如下
其中X与Y为0或S或CH2或NH；n＝1，2，3，4，5；
e.如下基团之一
或
或
或
2.权利要求1所述的唾液酸类似物，其特征在于所述唾液酸类似物选自如下之一
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(4-羟基哌啶-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((甲基(乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((二乙基氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(2，3-二羟基乙基(甲基)氨基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(((2S，6R)-2，6-二甲吗啡啉)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-甲氧基哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4氨基-2-((4-(苄氧基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((4-(烯内基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2S，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-((3-(烯丙基)哌啶)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羰基环戊基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(羟基(2-羰基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸；
(2R，3R，4S)-3-乙酰氨基-4-氨基-2-(1，3，4-三羟基叔丁基3，4-二氢-2H-吡喃-6-甲酸。
3、权利要求1所述的唾液酸类似物，其特征在于所述唾液酸类似物选自如下之一
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环戊基)甲基)3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸；
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基环己基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸；
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(2-羟基四氢-2H-吡喃基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸；
(3R，4S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(羟基(4-羟基哌啶-3-基)甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸；
(2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((3S，4S)-3，4-二羟基吡咯-1-甲基)-3，4-二氢2H-吡喃-6-羧酸；
(2S)-3-乙酰胺基-4-胍基-2-(((2S，4R)-4-羟基-2-羟甲基吡咯-1-甲基)-3，4-二氢-2H-吡喃-6-羧酸。
4、权利要求1或2或3所述的唾液酸类似物的药用组合物。
5、权利要求1或2或3所述的唾液酸类似物在制备抗流感病毒药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种具有显著抑制流感病毒的活性的唾液酸类似物，并提供了所述化合物在制备抗病毒药物中的应用。本发明首先以扎那米韦为先导化合物，对其分子结构中的C6位侧链进行改造，得到C6位带氨基侧链、C6位侧链带有亲水性羟基的新型扎那米韦类似物。对上述化合物进行了体外抗病毒活性研究。结果显示，本发明所述化合物在体外表现出显著抑制流感病毒的活性。因此，本发明唾液酸类似物有望应用于制备抗流感病毒药物。
文档编号A61K31/433GK101362744SQ20081019878
公开日2009年2月11日 申请日期2008年9月26日 优先权日2008年9月26日
发明者张健存, 仪明君, 燕 刘, 宇 赵, 凌 陈 申请人:中国科学院广州生物医药与健康研究院