专利名称：提供一种Th1-偏向性应答的免疫纳米疗法的制作方法
技术领域：
本发明涉及多种合成纳米载体组合物，以及相关方法，用于治疗其中希望产生Thl-偏向性免疫应答的疾病。
背景技术：
存在很多其中在介导疾病中免疫系统自身实际上似乎起到重要作用的疾病。这可以发生在当免疫刺激引起活化的CD4T细胞分化为Th2细胞、然后Th2细胞分泌Th2_相关细胞因子时，这些细胞因子例如白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-10jPIL-13。在Th2细胞因子存在下受刺激的B细胞优选通过产生某些抗体同型(特别是IgE)进行响应。针对某些抗原和Th2细胞因子的作用的IgE依赖性免疫应答可能引起与特应性症状有关的临床症状，例如变态反应症、哮喘、以及特应性皮炎。此外，在某些症状(例如某些慢性传染性疾病和癌症)下，希望放大的Thl应答以产生对于这些症状的更好的结果。虽然已知一些用于其特征在于不希望的Th2偏向性免疫应答的症状的疗法，需要改进的疗法。此外，对于其中受试者的免疫系统的Thl-偏向性应答是欠佳或无效的疾病，还需要改进的疗法。因此，对于Th2_介导的疾病以及对于其中希望受试者的免疫系统的增强的Thl偏向性应答的疾病，需要改进的组合物和相关方法来提供改进的疗法。发明概述一方面，本发明涉及用于治疗一种症状的一种组合物，这些组合物包括合成纳米载体，包括(I) 一个免疫特征表面，以及(2) —种偶合到这些合成纳米载体上的Thl偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；其中该免疫特征表面并不包括处于足以激发对与治疗该症状有关的抗原的适应性免疫应答的量的与治疗该症状有关的抗原。另一方面，本发明涉及一种方法，包括识别患有一种症状的受试者；提供一种包括合成纳米载体的组合物，这些纳米载体包括(I) 一种APC靶向特征，以及(2) —种偶合到这些合成纳米载体上的Thl偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；并且将该组合物给予受试者；其中该组合物的给药并不进一步包括同时给予一种与治疗该症状有关的抗原。仍另一方面，本发明涉及一种方法，包括提供一种包括合成纳米载体的组合物，该纳米载体包括一种Thl偏向性免疫刺激剂和一种APC靶向特征；将该组合物给予受试者；并且在不同于将该组合物给予该受试者的时间将一种抗原给予其中希望有Thl偏向性应答的受试者；其中该抗原的给药包括被动给药或主动给药。附图
简要说明图I示出BALF嗜酸细胞的细胞分类计数(占总细胞数的％ )。
图2示出在最终卵清蛋白激发18小时以后，BALF中的细胞因子。发明详细说明在详细说明本发明以前，已理解本发明并不局限于具体举例说明的材料或工艺参数，因为这些当然可以变化。还已理解在此使用的术语只是为了说明本发明的具体实施方案的目的，并不旨在限制使用可替代的术语来说明本发明。在此引用的所有出版物、专利和专利申请，无论在前或在后，都出于所有目的通过引用以其全文结合在此。如在本说明书和附加权利要求中使用的那样，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物，除非该内容清楚地另外指明。例如，引用“一种聚合物”包括两种或更多种这样的分子的混合物，引用“一种溶剂”包括两种或更多种这样的溶剂的混合物，引用“一种粘合剂”包括两种或更多种这样的材料的混合物，并且以此类推。 A.序论本发明的诸位发明人已经意外地并且令人惊讶地发现，通过实践在此披露的本发明，可以克服以上提到的问题和限制。特别是，本发明的诸位发明人已经意外地发现有可能提供组合物和方法，这些方法涉及一种用于治疗一种症状的组合物，这些组合物包括合成纳米载体，包括(I) 一个免疫特征表面，以及(2) —种偶合到这些合成纳米载体上的Thl偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；其中该免疫特征表面并不包括处于足以激发对与治疗该症状有关的抗原的适应性免疫应答的量的与治疗该症状有关的抗原。此外，本发明的诸位发明人已经意外地发现有可能提供组合物和方法，这些方法涉及的方法包括识别患有一种症状的受试者；提供一种包括合成纳米载体的组合物，该纳米载体包括(I) 一种APC靶向特征，以及(2) —种偶合到这些合成纳米载体上的Thl偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；并且将该组合物给予受试者；其中该组合物的给药并不进一步包括同时给予一种与治疗该症状有关的抗原。此外，本发明的诸位发明人已经意外地发现有可能提供组合物和方法，这些方法涉及的方法包括提供一种包括合成纳米载体的组合物，该纳米载体包括一种Thl偏向性免疫刺激剂和一种APC靶向特征；将该组合物给予受试者；并且在不同于将该组合物给予该受试者的时间将一种抗原给予其中希望有Thl偏向性应答的受试者；其中该抗原的给药包括被动给药或主动给药。一种用于预防或治疗其特征在于不希望的Th2偏向性应答、或欠佳的/无效的Thl应答的疾病的方法是对抗Th2细胞的分化和Th2细胞因子作用的免疫干预。可以通过将身体暴露于导致产生Thl细胞和Thl相关细胞因子(包括干扰素Y、IL-12和IL-18)的条件达到这一点。这些条件被称为“Thl偏向性应答。”在变应性疾病的诱导和维持这两者中，并且还在治疗诱导的到Thl应答的转换中，树突细胞被认为起到重要作用。因此，针对促进树突细胞提升Thl应答的能力的树突细胞的治疗代表了用于变态反应症和哮喘的机理性治疗的有希望的方法。在本发明中，本发明的诸位发明人意外地发现，在会正常产生或者是Th2偏向性应答、或者是欠佳的/无效的偏向性应答的条件下，可以利用某些类型的免疫纳米疗法来诱导Thl偏向性应答。通过使用以下包括免疫纳米疗法的组合物来完成这一点，(I)使用APC靶向特征，将这些组合物靶向至抗原递呈细胞，以及(2)并不包括与治疗该症状有关的抗原。改为，抗原并不同时给药；而是通常在不同于给予一种本发明的组合物的时间，单独给予受试者。在某些相关实施方案中，可以或者主动或者被动给予该抗原。在给予一种本发明的组合物以后，Thl偏向性状态一般持续一段时间,该时段对于将与治疗该症状有关的抗原或者主动地、或者被动地给予受试者是足够长的。在实施方案中，该Thl偏向性状态可以长久持续，无论该抗原是否主动地或被动地给予。实例1-7详细说明了本发明的若干不同的具体实施方案，包括本发明的纳米载体、以及它们的应用。实例8详细说明了在治疗实验性哮喘中本发明的一个实施方案的用途。现在将更详细地说明本发明。B.定义“主动给药”是指给予一种物质(例如一种抗原)，通过将该物质直接给予受试者， 或者采取导致受试者暴露于该物质的积极行动。例如，注射、或口服给药，从而将一种变应原或一种慢性传染物抗原给予受试者是主动给药的实施方案。在另一个实施方案中，以导致产生肿瘤抗原(使受试者暴露于该抗原)的方式，从而在受试者中诱导肿瘤细胞死亡，这是主动给药的一个实施方案。“给予”或“给药”是指⑴以药理学上有用的方式，将药理学活性材料(例如本发明的组合物)给予受试者，(2)以药理学上有用的方式，指导将这些材料给予受试者，或(3)以药理学上有用的方式，指导受试者自身给予这些材料。“变应原”是指引起速发型超敏反应的物质，其特征在于结合变应原特异性IgE，并且激活IgE受体细胞，导致Th2型模式的细胞因子应答连同组胺释放。包括在这些速发型超敏反应中的是例如变态反应症和变应性哮喘的适应症。在一个实施方案中，根据本发明的免疫特征表面并不包括一种变应原。“与治疗该症状有关的抗原”是指一种抗原，在将该抗原给予受试者以后，对于它的适应性免疫应答(如区别的，例如来自一种先天免疫应答)会治疗或减轻受试者中的具 体症状。在一个实施方案中，根据本发明的免疫特征表面并不包括与治疗该症状有关的抗原。在一个实施方案中，给予该组合物并不进一步包括给予一种与治疗该症状有关的抗原，其中该抗原可以偶合到纳米载体上亦或不偶合到纳米载体上。在一个实施方案中，在不同于给予该组合物的时间给予与治疗该症状有关的抗原。在实施方案中，被治疗的症状并不需要详细说明，因为要求是该抗原是已知的、或者期待它与治疗该症状有关。“给予对于他Thl偏向性应答是临床有益的受试者的抗原”是指一种会典型地引起来自受试者的Th2型细胞因子应答的抗原，但是对于他，特征在于Thl型细胞因子应答的应答偏向会是临床有用的。在一个实施方案中，在不同于给予该组合物的时间，将对于他Thl偏向性应答是临床有益的受试者的抗原给予受试者。“APC靶向特征”是指本发明的合成纳米载体所包括的一个或多个部分，这一个或多个部分靶向合成纳米载体至专职抗原递呈细胞(“APCs”)(例如但并不局限于树突细胞、SCS巨噬细胞、滤泡树突细胞、以及B细胞)。在实施方案中，APC靶向特征可以包括一个或多个免疫特征表面和/或多个靶向部分，这些靶向部分将已知靶结合在APCs上。在实施方案中，用于在巨噬细胞(“Mphs”)上的已知靶的靶向部分包括特异性地结合任何实体(例如蛋白、脂类、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，这些实体显著表达和/或存在于巨噬细胞上(即被膜下窦-Mph标记)。示例性的SCS-Mph标记包括，但并不局限于，CD4 (L3T4, W3/25, T4) ;CD9(p24，DRAP-I, MRP-1) ;CDlla(LFA_l a , aL^联蛋白链);CDllb(aM 整联蛋白链，CR3，Mol，C3niR，Mac-l) ;CDllc ( a X 整联蛋白，pl50，95，AXb2) ；CDwl2(p90-120) ;CD13(APN，gpl50, EC 3. 4. 11. 2) ;CD14(LPS_R) ；CD15(X-半抗原，Lewis, X，SSEA-1,3-FAL) ;CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3 '磺基 Lewis X)；CD15su(6 磺基唾液酰Lewis X) ;CD16a (FCRIIIA) ;CD16b (FcgRIIIb) ;CDwl7 (乳糖酶基神经銷氛醇，LacCer) ;CD18(整联蛋白 ￠2, CDlla, b, c 0 -亚基)；CD26 (DPP IV ectoeneyme,ADA 结合蛋白)；CD29 (血小板 GPIIa, P -I 整联蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1，Endocam)；CD32(FCyRII) ；CD33(gp67) ;CD35(CR1，C3b/C4b 受体);CD36(GpIIIb，GPIV, PASIV)；CD37 (gp52-40) ；CD38 (ADP-核糖基环化酶，TlO) ；CD39 (ATP 脱氢酶，NTP 脱氢酶-I)；CD40 (Bp50) ;CD43(涎蛋白，增白细胞蛋白);CD44(EMCRII，H_CAM，Pgp-1) ;CD45 (LCA，T200，B220, Ly5) ;CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0(UCHL-1) ;CD46(MCP) ;CD47(gp42，IAP, 0A3,神经纤毛蛋白)；CD47R(MEM-133) ;CD48 (Blast-1，Hulym3，BCM-1，OX-45) ;CD49a(VLA-1 a，a I 整联蛋白)；CD49b (VLA-2 a，gpla, a 2 整联蛋白)；CD49c (VLA-3 a , a 3 整联蛋白)；CD49e (VLA-5 a，a 5 整联蛋白);CD49f (VLA-6 a，a 6 整联蛋白，gplc) ；CD50 (ICAM-3)；CD51 (整联蛋白 a，VNR- a，V玻连蛋白-R a) ；CD52 (CAMPATH-1，HE5) ；CD53 (OX-44)；CD54 (ICAM-I) ;CD55 (DAF) ;CD58(LFA_3) ;CD59(lF5Ag，H19，保护素，MACIF, MIRL, P_18)；CD60a (GD3) ；CD60b (9-0-乙酰基 GD3) ；CD61 (GP Ilia, 3 3 整联蛋白)；CD62L(L-选择素，LAM-I, LECAM-I，MEL-14, Leu8, TQl) ;CD63(UMP，MLAl，gp55, NGA, LAMP-3，ME491)；CD64 (Fe y RI) ；CD65 (神经酰胺，VIM-2) ;CD65s (唾液酸化的-CD65，VIM2) ；CD72 (Ly-19. 2，Ly-32. 2, Lyb-2) ;CD74(Ii，恒定链);CD75 (唾液掩蔽的乳糖胺)；CD75S ( a 2，6 唾液酸化的乳糖胺)；CD80(B7, B7-1, BBl) ；CD81 (TAPA-I) ；CD82(4F9, C33, IA4, KAII, R2)；CD84(p75，GR6) ;CD85a(ILT5，LIR2, HL9) ;CD85d(ILT4，LIR2, MIR10) ;CD85j(ILT2，LIRl，MIR7) ;CD85k(ILT3， LIR5, HM18) ；CD86(B7-2/B70) ;CD87(uPAR) ;CD88(C5aR) ；CD89(IgAFe 受体，FcaR) ;CD91(a2M-R，LRP) ；CDw92(p70) ；CDw93 (GRll) ;CD95(AP0_1，EAS,TNFRSF6) ；CD97(BL-KDD/F12) ;CD98(4F2， FRP-I, RL-388) ;CD99(MIC2， E2) ;CD99R(CD99Mab 限制的);CD100(SEMA4D) ；CD101(IGSF2, P126, V7) ；CD102(ICAM-2) ；CD111(PVRL1,HveC, PRRl， Nectin 1， HIgR) ;CD112(HveB， PRR2, PVRL2,粘合素 2) ;CD114(CSF3R，G-CSRF, HG-CSFR) ;CD115(c-fms，CSF-1R，M-CSFR) ;CD116(GMCSFRa ) ;CDwl19(IFNY R，IFN y RA) ;CD120a(TNFRI，p55) ;CD120b (TNFRII，p75, TNFR p80) ;CD121b (类型 2IL-1R)；CD122(IL2RP) ；CD123(IL-3Ra ) ；CD124 (IL-4R a ) ;CD127(p90，IL-7R，IL_7Ra)；CD128a(IL-8Ra, CXCRl，(暂时重命名为 CD181)) ;CD128b (IL_8Rb，CSCR2,(暂时重命名为 CD182)) ;CD130(gpl30) ；CD131(公共 P 亚基)；CD132(公共 Y 链，IL-2Ry)；CDwl36(MSP-R, RON, pl58-ron) ;CDwl37 (4-1BB，I LA) ;CD139 ;CD141 (血栓调节素，胎儿调节素)；CD147(Basigin，EMMPRIN, M6, 0X47) ;CD148 (HPTP-n，p260, DEP-1) ;CD155(PVR)；CD156a(CD156，ADAM8, MS2) ;CD156b (TACE，ADAMl7, cSVP) ；CDwl56C (ADAMlO) ;CD157(Mo5，BST-1) ;CD162(PSGL-I) ;CD164(MGC-24，MUC-24) ;CD165(AD2，gp37) ;CD168(RHAMM，IHABP， HMMR) ;CD169(唾液酸粘附素，涎免凝集素-I) ;CD170 (涎免凝集素5) ;CD171 (L1CAM，MLE)；CD172(SIRP-1a，MyD-1) ；CD172b(SIRP^) ;CD180(RP105，Bgp95, Ly64) ;CD181 (CXCR1，(以前称为 CDI28a)) ；CD182(CXCR2,(以前称为 CDI28b)) ；CD184(CXCR4, NPY3R)；CD191(CCRl) ；CD192(CCR2) ；CD195(CCR5) ；CDwl97(CCR7(是 CDwl97)) ;CDwl98(CCR8)；CD204(MSR) ;CD205 (DEC-25) ;CD206(MMR) ;CD207(胰岛蛋白);CDw210(CK) ;CD213a(CK)；CDw217(CK) ;CD220(胰岛素 R) ;CD221(IGF1 R) ;CD222 (M6P-R，IGFII-R) ;CD224(GGT)；CD226(DNAM-1, PTAI) ;CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ;CD232(VESP-R) ;CD244(2B4， P38,NAIL) ;CD245(p220/240) ;CD256 (APRIL，TALL2，TNF (配体)超家族，成员 13) ;CD257(BLYS，TALLl，TNF (配体)超家族，成员 13b) ；CD261 (TRAIL-R1, TNF-R 超家族，成员 10a)；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成员 10b) ;CD263 (TRAIL-R3，TNBF-R 超家族，成员 10c)；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成员 10d) ;CD265 (TRANCE-R，TNF-R 超家族，成员 11a)；CD277 (BT3. I，B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ;CD280 (TEM22, END0180) ;CD281 (TLR1, TOLL-样受体 I) ;CD282(TLR2，TOLL-样受体 2) ;CD284(TLR4，TOLL-样受体 4) ;CD295 (LEPR)；CD298(ATP1B3, Na K ATP 酶，P 3 亚基)；CD300a(CMRF-35H) ；CD300c(CMRF-35A)；CD300e (CMRF-35L1) ；CD302 (DCLl) ；CD305 (LAIRl) ；CD312(EMR2) ；CD315(CD9P1)； CD317(BST2) ；CD321 (JAMl) ;CD322(JAM2) ;CDw328 (涎免凝集素 7) ;CDw329 (涎免凝集素9) ；CD68 (gp 110，巨涎蛋白(Macrosialin));和/或甘露糖受体；其中在括号中列出的名字代表可替代的名字。在实施方案中，用于在树突细胞(“DCs”)上的已知靶的靶向部分包括特异性地结合任何实体(例如蛋白、脂类、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，这些实体显著表达和/或存在于DCs上(即一种DC标记)。示例性的DC标记包括，但并不局限于，CDla (R4, T6, HTA-1) ； CDlb (Rl) ;CDlc(M241，R7) ；CDld(R3) ;CDle(R2) ;CDllb(aM 整联蛋白链，CR3, Mol, C3niR, Mac-1) ;CDllc ( a X 整联蛋白，pl50，95，AXb2) ;CDwll7(乳糖酶基神经鞘氨醇，LacCer) ;CD19 (B4) ;CD33 (gp67) ；CD 35 (CR1，C3b/C4b 受体)；CD36(GpIIIb, GPIV, PASIV) ；CD39(ATP 脱氢酶，NTP 脱氢酶-I) ;CD40(Bp50) ;CD45(LCA，T200, B220, Ly5) ;CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0 (UCHL-1) ;CD49d (VLA-4 a，a 4 整联蛋白);CD49e (VLA-5 a，a5 整联蛋白);CD58(LFA_3) ;CD64(FcyRI) ;CD72 (Ly-19. 2，Ly-32. 2, Lyb-2) ;CD73 (Ecto-5，nucloticlase) ；CD74(Ii,恒定链);CD80(B7，B7-1，BBl) ;CD81 (TAPA-I) ；CD83(HB15) ；CD85a(ILT5, LIR3, HL9) ；CD85d(ILT4, LIR2, MIR10)；CD85j(ILT2, LIR1, MIR7) ；CD85k(ILT3, LIR5, HMI8) ；CD86(B7-2/B70) ；CD88(C5aB)；CD97(BL-KDD/F12) ;CD101(IGSF2，P126, V7) ；CD116(GM-CSFRa ) ;CD120a(TMFRI，p55)；CD120b (TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD123(IL-3Ra ) ;CD139 ;CD148(HPTP-打，DEP-1)；CD150(SLAM, IP0-3) ;CD156b (TACE，ADAMl7, cSVP) ；CD157(Mo5, BST-1) ;CD167a(DDR1，trkE, cak) ；CD168 (RHAMM, IHABP, HMMR) ;CD169(唾液酸黏附素，涎免凝集素-I)；CD170(涎免凝集素-5) ;CD171(L1CAM，NILE) ;CD172 (SIRP-1 a，MyD-1) ;CD172b (SIRP 3 )；CD180 (RP105, Bgp95, Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD193(CCR3) ；CD196(CCR6)；CD197(CCR7 (ws CDwl97)) ;CDwl97(CCR7，EBII, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205)；CD206(MMR) ;CD207(胰岛蛋白)；CD208 (DC-LAMP) ；CD209 (DCSIGN) ；CDw218a(IL18Ra )；CDw218b(IL8R^ ) ;CD227 (MUC1，PUM，PEM，EMA) ;CD230(朊病毒蛋白(PrP)) ;CD252 (0X40L，TNF (配体)超家族，成员 4) ;CD258 (LIGHT，TNF (配体)超家族，成员 14) ;CD265 (TRANCE-R，TNF-R 超家族，成员 11a) ;CD271(NGFR，p75, TNFR 超家族，成员 16) ;CD273(B7DC，PDL2)；CD274(B7H1, PDLI) ;CD275(B7H2，ICOSL) ;CD276(B7H3) ;CD277(BT3. 1，B7 家族嗜乳月旨蛋白 3) ;CD283(TLR3，TOLL-样受体 3) ;CD289(TLR9，TOLL-样受体 9) ;CD295 (LEPR)；CD298(ATP1B3, Na K ATP 酶 P 3 亚基)；CD300a (CMRF-35H) ；CD300c (CMRF-35A)；CD301 (MGL1, CLECSF14) ；CD302 (DCLl) ；CD303 (BDCA2) ;CD304(BDCA4) ；CD312(EMR2)；CD317(BST2) ;CD319 (CRACC，SLAMF7) ;CD320(8D6)；以及 CD68(gpllO,巨涎蛋白)；II 类MHC ；BDCA-1 ;涎免凝集素-H ;其中在括号中列出的名字代表可替代的名字。在实施方案中，可以通过特异性地结合任何实体(例如蛋白、脂类、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成靶向，这些实体显著表达和/或存在于B细胞上(即B细胞标记)。示例性的B细胞标记包括，但并不局限于，⑶lc(M241，R7) ;raid(R3) ;OT2(E-花环 R，Tll，LFA-2) ；CD5(T1, Tp67, Leu-1, Ly-1) ；CD6 (T12) ；CD9(p24, DRAP-I, MRP-1)；CDlla(LFA-l a，a L 整联蛋白链);CDllb(aM 整联蛋白链，CR3, Mol，C3niR, Mac-1)；CDllc(aX 整联蛋白，P150，95，AXb2) ;CDwl7(乳糖胺，LacCer) ;CD18(整联蛋白 3 2，CDlla, b, cP -亚基；CD19(B4) ;CD20(B1，Bp35) ;CD21(CR2，EBV-R, C3dR) ;CD22 (BL-CAM，Lyb8，涎免凝集素-2) ；CD23(FceRII, B6, BLAST-2, Leu-20) ;CD24(BBA_1，HSA) ；CD25( Tac抗原，IL-2Ra，P55) ;CD26(DPP IV ectoeneyme, ADA 结合蛋白)；CD27(T14，S152)；CD29(血小板 GPIIa, 3-I 整联蛋白，GP) ；CD31 (PECAM-1, Endocam) ;CD32 (FCyRII)；CD35(CR1, C3b/C4b 受体);CD37 (gp52_40) ;CD38 (ADP 核糖基环化酶，TlO) ;CD39(ATP 脱氢酶，NTP 脱氢酶-I) ;CD40(Bp50) ;CD44(ECMRII，H-CAM，Pgp-1) ;CD45(LCA，T200, B220,Ly5) ;CD45RA ;CD45RB ;CD45RC ;CD45R0 (UCHL-1) ;CD46 (MCP) ;CD47(gp42，IAP，0A3,抗人神经菌毛素)；CD47R(MEM-133) ；CD48 (Blast-1, Hulym3, BCM-1, OX-45) ；CD49b (VLA-2 a，gpla, a 2 整联蛋白)；CD49c (VLA-3 a，a 3 整联蛋白)；CD49d(VLA_4 a，a 4 整联蛋白);CD50(ICAM-3) ；CD52(CAMPATH-1, HES) ；CD53(OX-44) ；CD54(ICAM-I) ；CD55(DAF)；CD58 (LFA-3) ;CD60a (⑶3) ；CD62L(L-选择素，LAM-1, LECAM-I, MEL-14, Leu8, TQl)；CD72 (Ly-19. 2，Ly-32. 2，Lyb-2) ;CD73(Ecto_5 '-核苷酸酶)；CD74(Ii,恒定链)；⑶75 (唾液掩蔽的乳糖胺)<D75S ( a 2，6唾液酸化的乳糖胺)；OT77 (Pk抗原，BLA,CTH/Gb3) ;CD79a(Iga，MBl) ;CD79b(IgP，B29) ；CD80 ；CD81 (TAPA-I) ；CD82(4F9, C33,IA4, KAII, R2) ；CD83(HB15) ；CD84(P75, GR6) ；CD85j (ILT2, LIR1, MIR7) ；CDw92(p70)；CD95(AP0-1, FAS, TNFRSF6) ;CD98 (4F2，FRP-1，RL-388) ;CD99 (MIC2，E2) ;CD100 (SEMA4D)；CD102 (ICAM-2) ;CD108(SEMA7A，JMH 血型抗原)；CDwll9 (IFN Y R，IFN Y Ra) ;CD120a(TNFRI，p55) ; CD 120b (TNFRII, p75, TNFR p80) ；CD121b(类型 2 IL-1R) ;CD122 (IL2R 3 )；CD124(IL-4Ra ) ;CD130 (gpl30) ;CD132(公共 Y 链，IL-2Ry ) ；CDwl37 (4-1BB, I LA)；CD139 ；CD147(Basigin, EMMPRIN, M6, 0X47) ；CD150(SLAM, IP0-3) ；CD162(PSGL-I)；CD164 (MGC-24, MUC-24) ；CD166(ALCAM, KG-CAM, SC-1, BEN, DM-GRASP) ;CD167a(DDR1，trkE, cak) ;CD171(L1CMA，NILE) ;CD175s(唾液酰-Tn(S-Tn)) ;CD180(RP105，Bgp95,Ly64) ；CD184(CXCR4, NPY3R) ；CD185(CXCR5) ；CD192(CCR2) ；CD196(CCR6) ；CD197(CCR7(wasCDwl97)) ；CDwl97(CCR7, EBI1, BLR2) ；CD200(0X2) ；CD205(DEC-205) ;CDw210(CK)；CD213a(CK) ；CDw217(CK) ；CDw218a(IL18Ra ) ；CDw218b(IL18R^ ) ;CD220(胰岛素 R);CD221(IGF1 R) ；CD222(M6P-R, IGFII-R) ；CD224(GGT) ；CD225(Leul3) ;CD226(DNAM-1，PTAI) ;CD227(MUC1，PUM, PEM, EMA) ;CD229(Ly9) ；CD230(朊病毒蛋白(Prp))；CD232 (VESP-R) ;CD245(p220/240) ;CD247(CD3 Zeta 链);CD261(TRAIL-R1，TNF-R 超家族，成员 10a) ；CD262(TRAIL-R2, TNF-R 超家族，成员 10b) ；CD263 (TRAIL-R3, TNF-R 超家族，成员 10c) ；CD264(TRAIL-R4, TNF-R 超家族，成员 10d) ；CD265 (TRANCE-R, TNF-R 超家族，成员 11a) ；CD267(TACI, TNF-R 超家族，成员 13B) ;CD268 (BAFFR，TNF-R 超家族，成员13C) ;CD269(BCMA，TNF-R 超家族，成员 16) ;CD275(B7H2，ICOSL) ;CD277 (BT3. I. B7 家族嗜乳脂蛋白 3) ；CD295 (LEPR) ；CD298 (ATP1B3 Na K ATP 酶 3 3 亚基)；CD300a (CMRF-35H)；CD300c (CMRF-35A) ；CD305 (LAIRl) ；CD307 (IRTA2) ；CD315(CD9P1) ；CD316 (EW12)；CD317(BST2) ;CD319 (CRACC，SLAMF7) ;CD321 (JAMl) ;CD322(JAM2) ;CDw327 (涎免凝集素 6，CD33L) ;CD68(gp 100，巨涎蛋白)；CXCR5 ；VLA-4 ;II 类MHC ;表面 IgM ;表面 IgD ；APRL ;和 /或BAFF-R ;其中在括号中列出的名字代表可替代 的名字。标记的实例包括在其他地方提供的那些。在一些实施方案中，可以通过特异性地结合任何实体(例如蛋白、脂类、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成B细胞靶向，这些实体显著表达和/或存在于经活化的B细胞上(即活化的B细胞标记)。示例性的活化的B细胞标记包括,但并不局限于，CDla (R4, T6, HTA-1) ；CDlb(Rl) ;CD15s (唾液酰 Lewis X) ；CD15u(3/ 磺基 Lewis X)；CD15su(6 磺基-唾液酰 Lewis X) ;CD30 (Ber_H2，Ki_l) ;CD69(AM，EA 1，MLR3, gp34/28,VEA) ;CD70(Ki-24，CD27 配体);CD80 (B7，B7-1，BBl) ;CD86 (B7-2/B70) ；CD97 (BLKDD/F12)；CD125(IL-5Ra) ;CD126 (IL-6R a ) ;CD138 (多配体聚糖-1，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)；CD152(CTLA-4) ;CD252 (0X40L，TNF (配体)超家族，成员 4) ;CD253 (TRAIL，TNF (配体)超家族，成员 10) ；CD279 (PDl) ;CD289(TLR9，T0LL-样受体 9);以及 CD312 (EMR2);其中在括号中列出的名字代表可替代的名字。标记的实例包括在其他地方提供的那些。“慢性传染物抗原”是指一种产生慢性感染的传染物的抗原，该慢性感染特征在于对于抗原，Th2-型模式的细胞因子应答或欠佳的和/或无效的Thl-型应答。在一个实施方案中，根据本发明的免疫特征表面并不包括慢性传染物抗原。在实施方案中，慢性传染物抗原包括衍生自利什曼原虫寄生虫、白色念珠菌、烟曲霉、疟原虫寄生虫、鼠弓形体、分枝杆菌、HIV、HBV、HCV、EBV、CMV和血吸虫的抗原。“同时给予”或“同时给药”是指在给予受试者与治疗该症状有关的抗原24小时或更短时间内、优选在12小时或更短时间内、更优选在6小时或更短时间内将本发明的合成纳米载体给予受试者。同时给药可以通过以相同的剂型或以分开的剂型给药而进行。“偶合的”是指附着到或包含在合成纳米载体内。在一些实施方案中，该偶合是共价的。在一些实施方案中，通过一个或多个键介导共价偶合。在一些实施方案中，该偶合是非共价的。在一些实施方案中，通过电荷相互作用、亲和相互作用、金属配位、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华相互作用、磁相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用、和/或它们的组合来介导该非共价偶合。在实施方案中，使用常规技术，在合成纳米载体内的封装的背景中，可能出现该偶合。在实施方案中，根据本发明，免疫刺激剂、T细胞抗原、以及这些部分，它的免疫特征表面可以每个都是各自的、或者在它们的任何组合中，与一种合成纳米载体偶合。“剂型”是指药物在适合给予受试者的一种介质、载体、媒介物、或装置中。“识别患有一种症状的受试者”是指诊断或检测或查明受试者是否具有或可能具有具体医学症状。“免疫特征表面”是指一个包括多个部分的表面，其中⑴该免疫特征表面排除了一种是抗体的Fe段的部分；并且(2)该部分以对提供基于亲合力的结合到哺乳动物抗原递呈细胞的有效量存在。基于亲合力的结合是基于亲合力效应的结合(这一类型的结合也可以称为“高亲和力”结合)。在一个优选的实施方案中，可以使用体内测定，随后进行如下体外测定确定免疫特征表面的存在(虽然在实践本发明中，还可以使用查明基于一种亲和力效应的结合(即“高亲和力”结合)的存在的其他方法。)体内测定使用两套携带不同荧光标记的合成纳米载体，其中一套合成纳米载体具有免疫特征表面，并且另一套用作对照。为了测试在体内该免疫特征表面是否可以靶向合成纳米载体到抗原递呈细胞，将这两套合成纳米载体按I : I混合，并且注射到小鼠 的足垫中。在纳米载体注射以后I至4小时和24小时之间的一个时间点，通过采集注射小鼠的胭淋巴结引流，分别测量在树突细胞和被膜下淋巴窦巨噬细胞上的合成纳米载体累积。加工淋巴结用于冰冻切片的共聚焦荧光免疫组织学，用对小鼠⑶Ilc(克隆HL3，BDBIOSCIENCES )或小鼠⑶169(来自SEROTEC 的克隆3D6. 112)的荧光抗体复染，并且通过使用合适的图像处理软件(例如ADOBE PHOTOSHOP )的面积法分析。如果与对照纳米载体相比，合成纳米载体包括频繁程度多至少I. 2倍、优选多至少I. 5倍、更优选多至少2倍的与树突细胞和/或被膜下淋巴窦巨噬细胞有关的免疫特征表面，那么建立了通过免疫特征表面的抗原递呈细胞的靶向。在优选的实施方案中，伴随体内测定的体外测定确定在用免疫特征表面所包括的部分、亦或用对于体外抗原递呈细胞表达的表面抗原特异性的抗体(对于人树突细胞来自 Miltenyi BIOTEC 抗 CDlc (BDCA-1)克隆 AD5-8E7，对于小鼠树突细胞:抗 CDllc(aX整联蛋白)克隆HL3，BDBI0SCIENCES ，或对于鼠被膜下淋巴窦巨噬细胞来自SEROTEC 的抗CD169克隆3D6. 112)包被的生物相容性表面上，人或鼠的树突细胞或鼠的被膜下淋巴窦巨噬细胞(共同称为“体外抗原递呈细胞”)的固定，这样(i) 一个对应体外抗原递呈细胞到该表面的最大固定的最佳包被密度，已经用免疫特征表面所包括的部分包被该表面，该最佳包被密度或者不能探测，或者占观察到抗体包被表面的部分的至少10%，优选至少20%，更优选至少25% ;以及(ii)如果通过免疫特征表面，体外抗原递呈细胞的固定是可检测的，那么将被测试的免疫特征表面以免疫特征表面所包括的部分的包被密度支持半最大结合，与支持半最大结合的抗体包被密度相比，上述包被密度高至少2倍，优选高至少3倍，更优选高至少4倍。在pH = 7. 2-7. 4下,免疫特征表面可以是带正电的、带负电的或不带电的。可以由相同部分或不同部分的混合物构成免疫特征表面。在实施方案中，这些免疫特征表面可以包括B细胞抗原。在免疫特征表面中，可能有用的部分的实例包括烟碱及其衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基(例如叔胺)、唾液乳糖、亲和素和/或亲和素衍生物(例如中性链亲和素)、以及任何以上物质的残基。在一个实施方案中，免疫特征表面所包括的部分被偶合到本发明的纳米载体的表面上。在另一个实施方案中，该免疫特征表面被偶合到本发明的纳米载体的表面上。应当注意到，免疫特征表面所包括的部分赋予高亲和力结合。如在本定义中明确定义的那样，并且普遍贯穿本说明书所说明的，并不是所有能够存在于纳米载体上的部分将赋予高亲和力结合。因此，即使一个表面可以包括多个部分(有时称为一个“阵列”)，这仍然不是指这样一个表面固有地是免疫特征表面，缺少数据示出这样一个表面赋予根据本定义和披露的结合。“免疫刺激剂”是指一种调节对抗原的免疫应答的媒介物，但是并不是抗原或者衍生自抗原。如在此使用的那样，“调节”是指诱导、增强、抑制、指导、或重新定向免疫应答。这样的媒介物包括刺激(或促进)对抗原的免疫应答的免疫刺激剂，但不是抗原或衍生自抗原。因此，免疫刺激剂包括佐剂。在一些实施方案中，该免疫刺激剂在纳米载体的表面上，和/或合并在合成纳米载体内。在实施方案中，该免疫刺激剂偶合到合成纳米载体上。 在一些实施方案中，所有合成纳米载体的免疫刺激剂都是彼此相同的。在一些实施方案中，合成纳米载体包括大量不同类型的免疫刺激剂。在一些实施方案中，合成纳米载体包括多种独自的免疫刺激剂，所有这些都是彼此相同的。在一些实施方案中，合成纳米载 体正好包括一个类型的免疫刺激剂。在一些实施方案中，合成纳米载体正好包括两个不同类型的免疫刺激剂。在一些实施方案中，合成纳米载体包括多于两个的不同类型的免疫刺激剂。在一些实施方案中，合成纳米载体包括脂膜(例如脂质双分子层、脂质单分子层、等)，其中至少一种类型的免疫刺激剂与该脂膜偶合。在一些实施方案中，至少一种类型的免疫刺激剂嵌入到该脂膜内。在一些实施方案中，至少一种类型的免疫刺激剂嵌入到脂质双分子层的内腔内。在一些实施方案中，合成纳米载体包括至少一种类型的与该脂膜的内表面偶合的免疫刺激剂。在一些实施方案中，至少一种类型的免疫刺激剂封装在合成纳米载体的脂膜内。在一些实施方案中，至少一种类型的免疫刺激剂可以位于合成纳米载体的多个位置。本领域的一位普通技术人员将认识到以上实例只是很多不同方式的代表，其中多种免疫刺激剂可以与合成纳米载体的不同场所偶合。多种免疫刺激剂可以位于合成纳米载体的各场所的任何组合。“合成纳米载体的最大尺寸”是指沿合成纳米载体的任何轴测量的纳米载体的最大尺寸。“合成纳米载体的最小尺寸”是指沿合成纳米载体的任何轴测量的合成纳米载体的最小尺寸。例如，对于球形(spheriodal)合成纳米载体,合成纳米载体的最大和最小尺寸会是基本相同的，并且会是它的直径的大小。类似地,对于立方体合成纳米载体,合成纳米载体的最小尺寸会是它的高、宽、或长中最小的，同时合成纳米载体的最大尺寸会是它的高、宽、或长中最大的。在一个实施方案中，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75 %、优选至少80 %、更优选至少90 %的合成纳米载体的最小尺寸是大于lOOnm。在一个实施方案中，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75 %、优选至少80 %、更优选至少90%的合成纳米载体的最大尺寸是等于或小于5 ym。优选地，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最小尺寸是大于llOnm、更优选大于120nm、更优选大于130nm、并且仍更优选大于150nm。优选地,基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%、优选至少80%、更优选至少90%的合成纳米载体的最大尺寸是等于或小于3 u m、更优选等于或小于2 u m、更优选等于或小于I y m、更优选等于或小于800nm、更优选等于或小于600nm、并且仍更优选等于或小于500nm。在优选的实施方案中，基于样品中合成纳米载体的总数，样品中至少75%，优选至少80%，更优选至少90%的合成纳米载体的最大尺寸是等于或大于lOOnm、更优选等于或大于120nm、更优选等于或大于130nm、更优选等于或大于140nm、并且仍更优选等于或大于150nm。通过将这些合成纳米载体悬浮在一种液体(通常是水性)介质中，并且使用动态光散射(例如使用一台Brookhaven ZetaPALS仪器)获得合成纳米载体大小的测量值。“非抗原性免疫特征表面”是指当存在于合成纳米载体表面上时，不包括使T细胞或B细胞活化的部分的免疫特征表面，或者当存在于合成纳米载体表面上时，包括使T细胞或B细胞活化的部分,但是这些部分的量不足以使合成纳米载体活化T细胞或B细胞。在一个实施方案中，可以通过对细胞表面“活化标记”的分析来检测人和小鼠淋巴细胞的活化。例如，CD69(非常早期的活化抗原)是在活化的T细胞和B细胞上高度表达的细胞表面分子，但是不存在于静息的非活化的细胞上。使用荧光色素结合的抗CD69抗体并且使用流式细胞计数分析，可以检测来自人外周血单核细胞(PBMC)或来自小鼠脾脏的T细胞和B细胞的活化。与非活化对照淋巴细胞相比，活化的淋巴细胞示出大于2倍的荧光强度增长。在一个实施方案中，根据本发明的免疫特征表面包括非抗原性免疫特征表面。
“被动给药”是指通过指导，或安排受试者以会导致受试者暴露于该抗原的方式引导他们自身，从而给予一种物质(例如一种抗原)。例如，在一个实施方案中，通过指导受试者允许他自身或她自身暴露于存在于环境中的变应原(即“环境变应原”)，发生一种变应原的被动给药。“药学上可接受的赋形剂”是指一种药理学上无活性的物质，该物质被添加到一种本发明的组合物中来进一步协助该组合物的给药。没有限制，药学上可接受的赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、不同的稀释剂、不同的糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油以及聚乙二醇。“受试者”是指一种动物，包括哺乳动物例如人和灵长目动物；鸟；家养动物或家畜(例如猫、狗、绵羊、山羊、牛、马和猪)；实验动物(例如小鼠、大鼠和豚鼠)；鱼；以及类似动物。“一种或多种合成纳米载体”是指在自然界不能找到的并且至少拥有在大小上小于或等于5微米的尺寸的离散物。白蛋白纳米颗粒清楚地包括在合成纳米载体内。
合成纳米载体可以是，但并不局限于，一种或多种脂基纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、金属纳米颗粒、表面活性剂基纳米颗粒、树枝状化合物、巴基球、纳米线、病毒状颗粒、肽或蛋白基颗粒(例如白蛋白纳米颗粒)和/或使用一种纳米材料的组合(例如脂聚合物纳米颗粒)开发的纳米颗粒。合成纳米载体可以具有多种不同的形状，包括但并不局限于球形、立方形、锥形、椭圆形、圆柱形、环形、以及类似形状。根据本发明的合成纳米载体包括一个或多个表面。可以适合用于实践本发明的示例性的合成纳米载体包括(I)在Gref等人的美国专利5，543，158中披露的生物可降解的纳米颗粒，(2) Saltzman等人的公开美国专利申请20060002852中的聚合物纳米颗粒,或(4)DeSimone等人的公开美国专利申请20090028910中的压印构建的纳米颗粒。根据本发明的合成纳米颗粒具有等于或小于约lOOnm、优选地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括具有使补体活化的羟基的表面，或者可替代地包括基本由不是使补体活化的羟基的部分组成的表面。在一个优选的实施方案中，根据本发明的合成纳米颗粒具有等于或小于约lOOnm、优选地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括实质上使补体活化的表面，或者可替代地包括基本由不实质上活化补体的部分组成的表面。在更优选的实施方案中，根据本发明的合成纳米颗粒具有等于或小于约lOOnm、优选地等于或小于IOOnm的最小尺寸，并不包括使补体活化的表面,或者可替代地包括基本由不使补体活化的部分组成的表面。“T细胞抗原”是指通过T细胞中的免疫应答来识别的并且触发T细胞中的免疫应答的任何抗原(例如，经由递呈结合到I类或II类主要组织相容性复合物分子(MHC)上的、或者结合到CDl复合物上的抗原或它的一部分,通过在T细胞或NKT细胞上的T细胞受体来特异性识别的抗原)。在一些实施方案中，是T细胞抗原的抗原也是B细胞抗原。在其他实施方案中，T细胞抗原并不也是B细胞抗原。T细胞抗原一般是蛋白或多肽。T细胞抗原可以是刺激⑶8+T细胞应答、⑶4+T细胞应答、或二者的抗原。因此，在一些实施方案中，这些纳米载体可以有效刺激这两种类型的应答。在一些实施方案中，T细胞抗原是“通用”T细胞抗原(即通过刺激辅助性T细胞，可以产生对无关的B细胞抗原的增强的应答的抗原)。在实施方案中，通用T细胞抗原可以包括一种或多种衍生自破伤风类毒素、爱泼斯 坦-巴尔病毒、流感病毒、或Padre肽的肽。“Thl偏向性免疫刺激剂”是指(I)使来自特征在于Th2_型细胞因子应答的免疫应答偏向至特征在于Thl-型细胞因子应答的应答，或(2)放大欠佳的和/或无效的Thl-型应答的免疫刺激剂。在某些实施方案中，Thl偏向性免疫刺激剂可以是白细胞介素、干扰素、细胞因子等。在特定的实施方案中，Thl偏向性免疫刺激剂可以是对于Toll样受体(TLR)的天然的或合成的激动剂(例如 TLR-I、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9、TLR-10、以及TLR-Il激动剂)。在特定的实施方案中，合成纳米载体合并了对于to 11样受体(TLRs) 7&8的激动剂("TLR 7/8激动剂”)。它的效用是Tomai等人的美国专利6，696，076中披露的TLR 7/8激动剂化合物，包括但是不局限于咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺。优选的Thl偏向性免疫刺激剂包括咪喹莫特和R848。在特定的实施方案中，合成纳米载体合并了对于Toll样受体(TLR)_9的配体，例如包括CpGs的免疫刺激DNA分子，它诱导类型I干扰素分泌，并且刺激T细胞和B细胞活化，导致增加的抗体产生和细胞毒性的T细胞应答(Krieg等人，CpG motifsin bacterial DNA trigger direct B cell activation. Nature. 1995. 374 :546-549 ；Chu 等人，CpG oligodeoxynucleotides act as adjuvants that switch on T helper
I(Thl)immunity. J. Exp. Med. 1997. 186 1623-1631 ；Lipford 等人，CpG-containingsynthetic oligonucleotides promote B and cytotoxic T cell responses to proteinantigen a new class of vaccine adjuvants. Eur. J. Immunol. 1997. 27 :2340-2344 ；Roman 等人，Immunostimulatory DNA sequences function as T helper-l-promotingadjuvants. Nat. Med. 1997. 3 :849-854 ；Davis 等人，CpG DNA is a potent enhancerof specific immunity in mice immunized with recombinant hepatitis B surfaceantigen. J. Immunol. 1998. 160 :870-876 ;Lipford 等人，Bacterial DNA as immune cellactivator. Trends Microbiol. 1998. 6 :496-500)。在实施方案中，CpGs 可以包括旨在增强稳定性的修饰(例如硫代磷酸酯键)，或其他修饰(例如修饰的碱基)。参见，例如美国专利5，663，153.6, 194，388.7, 262，286、或7，276，489。在某些实施方案中，为了剌激免疫性而不是耐受性，合成纳米载体合并了促进DC成熟(对于引发幼稚T细胞而言是需要的)以及细胞因子(例如类型I干扰素，它促进抗体应答和抗病毒免疫性)的产生的免疫刺激齐U。在一些实施方案中，免疫刺激剂可以是TLR-4激动剂(例如细菌脂多糖(LPS)、VSV-G、和/或HMGB-1)。在一些实施方案中，免疫刺激剂是细胞因子，它是由细胞释放的小的蛋白或生物因子(在5kD-20kD的范围内)，并且具有关于细胞-细胞相互作用、通讯以及其他细胞的行为的特定效应。在一些实施方案中，免疫刺激剂可以是从坏死细胞释放的促炎刺激物(例如尿酸盐晶体)。在一些实施方案中，免疫刺激剂可以是补体级联的活化组分(例如⑶21、⑶35、等)。在一些实施方案中，免疫刺激剂可以是免疫复合物的活化组分。这些免疫刺激剂还包括补体受体激动剂(例如结合到⑶21或⑶35上的分子)。在一些实施方案中，该补体受体激动剂诱导了纳米载体的内源补体调理素作用。免疫刺激剂还包括细胞因子受体激动剂(例如细胞因子)。在一些实施方案中，该细胞因子受体激动剂是小分子、抗体、融合蛋白、或适体。在实施方案中，免疫刺激剂还可以包括免疫刺激RNA分子(例如但并不局限于dsRNA 或聚 I: C (TLR3 刺激剂)、和 / 或在 F. Heil 等人，“Species-Specific Recognitionof Single-Stranded RNA via Toll-like Receptor 7 and 8” Science 303(5663)，1526-1529 (2004) ； J. Vollmer 等人，“Immune modulation by chemically modifiedribonucleosides and oligoribonucIeotidesWO 2008033432 A2 ；A. Forsbach 等人，“Immunostimulatory oligoribonucIeotides containing specific sequencemotif (s) and targeting the Toll-like receptor 8 pathwayWO 2007062107A2 ；E.Uhlmann 等人，“Modified oligoribonucIeotide analogs with enhancedimmunostimulatory activity” U. S. Pat. Appl. Publ. US 2006241076 ；G. Lipford 等人，“Immunostimulatory viral RNA oligonucleotides and use for treating cancer andinfections” WO 2005097993 A2 ;G. Lipford 等人，“Immunostimulatory G, U-containingoligoribonucleotides, compositions, and screening methods^ WO 2003086280 A2 中披露的那些。在一些实施方案中，本发明提供了包括与一种或多种佐剂一起配制的疫苗纳米载体的药物组合物。如在此使用的那样，术语“佐剂”是指并不构成特异性抗原，但是促进对给予的抗原的免疫应答的试剂。在一些实施方案中，疫苗纳米载体是与一种或多种佐剂(例如凝胶型佐剂(例如氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙、等)、微生物佐剂(例如包括CpG基序的免疫调节DNA序列；免疫刺激RNA分子；内毒素例如单磷酰基脂A ;外毒素例如霍乱毒素、大肠杆菌不耐热毒素、以及百日咳毒素；胞壁酰二肽、等)；油乳液和乳化剂基佐剂(例如弗氏佐剂、MF59[Novartis]、SAF、等)；微粒佐剂(例如脂质体、生物可降解微球、皂苷等)；合成佐剂(例如非离子嵌段共聚物、胞壁酰肽类似物、聚磷腈、合成多核苷酸、等)，和/或它们的组合)一起配制的。“不同于给药的时间”或“不同于给予该组合物的时间的时间”是指或者在给药前或者在给药后多于约30秒、优选或者在给药前或者在给药后多于约I分钟、更优选或者在给药前或者在给药后多于5分钟、仍更优选或者在给药前或者在给药后多于I天、仍更优选 或者在给药前或者在给药后多于2天、仍更优选或者在给药前或者在给药后多于I周、并且仍更优选或者在给药前或者在给药后多于I个月的时间。
“肿瘤抗原”是指在其中存在肿瘤的受试者中诱导特异性免疫应答的肿瘤的细胞表面抗原。在一个实施方案中，根据本发明的免疫特征表面并不包括肿瘤抗原。“载体效应”是指对于合成纳米载体、而不是对于与治疗该症状有关的合成纳米载体上的抗原建立不需要的免疫应答。当该合成纳米载体的材料由于它的化学组成或结构从而能够刺激强体液免疫反应时，可以发生载体效应。在一种情况下，诱导一种载体效应的合成载体将用除了与治疗该症状有关的抗原外的抗原“淹没”免疫系统，结果是对相关抗原的弱应答。在另一种情况下，所不需要的免疫应答是对纳米载体自身的强应答，这样使得对于在相同的受试者中的随后使用，该纳米载体是无效的，并且可能甚至是危险的。因此，在某些实施方案中，并不是主要或基本从引起载体效应的材料(例如像病毒外壳蛋白)形成合成纳米载体的一个或多个表面。然而应当理解，强免疫原性材料(例如病毒外壳蛋白)可以用于制造本发明的合成纳米载体，并且在其中可以避免载体效应的情况下，然后可以修饰这些合成纳米载体自身来减少或消除载体效应。例如载体效应诱导材料(例如用于病毒状颗粒的病毒外壳蛋白)可以被安置在远离该合成纳米载体的表面的地方，或者用改变免疫的分子(例如聚乙二醇)包被，用来使纳米载体的实际表面免疫原性更低，并且因此避免 会另外发生的载体效应。C.本发明的免疫纳米疗法的组合物根据本发明，可以使用宽泛种类的合成纳米载体。在一些实施方案中，合成纳米载体是球体或扁球体。在一些实施方案中，合成纳米载体是扁平的或盘状的。在一些实施方案中，合成纳米载体是立方体或立方形的。在一些实施方案中，合成纳米载体是卵形或椭圆形的。在一些实施方案中，合成纳米载体是圆柱体、椎体、或锥形。通常希望使用一群在大小、形状、和/或构成方面较一致的合成纳米载体，这样每一合成纳米载体具有类似特性。例如，至少80 %、至少90 %、或至少95 %的合成纳米载体可以具有落在5%、10%或20%的平均直径或平均尺寸内的最小尺寸或最大尺寸。在一些实施方案中，一群合成纳米载体可以关于大小、形状、和/或构成是不均匀的。合成纳米载体可以是实心的或空心的，并且可以包括一个或多个层。在一些实施方案中，相对于其他一层或多层，每一层具有独特的构成和独特的特性。为了给出但是一个实例，合成纳米载体可以具有一个核/壳结构，其中核是一层(例如一个聚合物核)并且壳是一个第二层(例如一个脂质双分子层或单分子层)。合成纳米载体可以包括多个不同的层。在一些实施方案中，合成纳米载体可以任选地包括一种或多种脂。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括一种脂质体。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括一个脂质双分子层。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括一个脂质单分子层。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括一种微胶粒。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括一个核，该核包括被一个脂质层(例如脂质双分子层、脂质单分子层、等)环绕的聚合物基质。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括被一个脂质层(例如脂质双分子层、脂质单分子层、等)环绕的非聚合物核(例如金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒、骨颗粒、病毒性颗粒、蛋白、核酸、碳水化合物、等)。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括一种或多种聚合物基质。在一些实施方案中，可以由包被层(例如脂质体、脂质单分子层、微胶粒、等)环绕这样一种聚合物基质。在一些实施方案中，合成纳米载体的不同元件可以与该聚合物基质偶合。在一些实施方案中，一个免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激剂可以与聚合物基质共价缔合。在一些实施方案中，由一个连接物介导共价缔合作用。在一些实施方案中，一个免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激剂可以与聚合物基质非共价缔合。例如，在一些实施方案中，一个免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激剂可以被封装在聚合物基质内、被聚合物基质环绕、和/或被分散遍及聚合物基质。可替代地或额外地，一个免疫特征表面、靶向部分、和/或免疫刺激剂可以通过疏水性相互作用、电荷相互作用、范德华力、等与聚合物基质缔合。由此在药物递送领域中，用于从其形成聚合物基质的宽泛种类的聚合物和方法是已知的。通常，一种聚合物基质包括一种或多种聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包括两种或更多种单体的共聚物。在序列方面，共聚物可以是随机的、嵌段的，或者包括随机序列和嵌段序列的组合。典型地，根据本发明的聚合物是有机聚合物。 适合用于本发明的聚合物的实例包括，但并不局限于聚乙烯、聚碳酸酯(例如聚(1,3- 二噁烷-2酮))、聚酐(例如聚(癸二酸酐))、聚羟基酸(例如聚(P -羟基烷酸酯))、聚丙基延胡索酸酯(polypropylfumerate)、聚己内酯、聚酰胺(例如聚己内酰胺)、聚缩醒、聚醚、聚酯(例如聚丙交酯、聚乙二醇)、聚(原酸酯)、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯、以及聚胺。在一些实施方案中，根据本发明的聚合物包括在21C.F.R. § 177. 2600下已经由美国食品与药品管理局(FDA)批准用于人的聚合物，包括但并不局限于聚酯(例如聚乳酸、聚(乳酸乙醇酸共聚物)、聚己内酯、聚戊内酯、聚(1，3_二噁烷-2酮))；聚酐(例如聚(癸二酸酐))；聚醚(例如聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；以及聚氰基丙烯酸酯。在一些实施方案中，聚合物可以是亲水的。例如，聚合物可以包括阴离子基团(例如磷酸根、硫酸根、羧酸根)；阳离子基团(例如季胺基团)；或极性基团(例如羟基、硫醇基团、胺基团)。在一些实施方案中，包括亲水的聚合物基质的合成纳米载体在合成纳米载体内产生亲水环境。在一些实施方案中，聚合物可以是疏水的。在一些实施方案中，包括疏水的聚合物基质的合成纳米载体在合成纳米载体内产生疏水环境。在合成纳米载体内，选择亲水性或疏水性聚合物可以影响要合并(例如偶合)材料的性质。在一些实施方案中，聚合物可以用一个或多个部分和/或官能团改性。根据本发明，可以使用多个部分或官能团。在一些实施方案中，可以用聚乙二醇(PEG)、用碳水化合物、和/或用衍生自多糖类的非环状聚缩醒来将聚合物(Papisov, 2001, ACS SymposiumSeries, 786 :301)改性。在一些实施方案中，可以用脂类或脂肪酸基团改性聚合物。在一些实施方案中，脂肪酸基团可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸、或廿四烷酸中的一种或多种。在一些实施方案中，脂肪酸基团可以是棕榈烯酸、油酸、异油酸、亚麻酸、a-亚麻酸、Y-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、或芥酸中的一种或多种。在一些实施方案中，聚合物可以是聚酯，包括共聚物，这些共聚物包括乳酸和乙醇酸单元(例如聚(乳酸乙醇酸共聚物)和聚(聚丙交酯乙交酯共聚物))，在此统称为“PLGA”；以及包括乙醇酸单元的均聚物，在此称为“PGA”，以及乳酸单元(例如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯、以及聚-D，L-丙交酯)，在此统称为“PLA”。在一些实施方案中，示例性的聚酯包括，例如多羟基酸；PEG共聚物和丙交酯与乙交酯的共聚物(例如PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物)，以及它们的衍生物)。在一些实施方案中，聚酯包括，例如聚酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己内酯)、聚(己内酯)-PEG共聚物、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物、聚(亚乙基亚胺)、聚(亚乙基亚胺)-PEG共聚物、聚(L-丙交酯赖氨酸共聚物)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[a - (4-氨基丁基)-L-乙醇酸]、以及它们的衍生物。在一些实施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是一种生物相容的并且生物可降解的乳酸和乙醇酸的共聚物，并且多种形式的PLGA特征在于乳酸乙醇酸的比率。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸、或D，L-乳酸。可以通过改变乳酸乙醇酸的比率调整PLGA的降解速 率。在一些实施方案中，根据本发明，将使用的PLGA特征在于约85 15、约75 25、约60 40、约50 50、约40 60、约25 75、或者约15 85约的乳酸乙醇酸比率。在一些实施方案中，聚合物可以是一种或多种丙烯酸聚合物。在某些实施方案中，丙烯酸聚合物包括，例如丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物、聚腈基丙烯酸酯、以及包括一种或多种以上聚合物的组合。该丙烯酸聚合物可以包括具有低含量的季铵基团的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的充分聚合的共聚物。在一些实施方案中，聚合物可以是阳离子聚合物。通常，阳离子聚合物能够缩合和/或保护核酸(例如DNA、RNA、或它们的衍生物)带负电的链。含有胺的聚合物(例如聚(赖氨酸)(Zauner 等人，I"8, Adv. Drug Del. Rev. , 3O :97 ;以及 Kabanov 等人，I995，Bioconjugate Chem. ,6 :7)、聚(亚乙基亚胺)(PEI ;Boussif■等人，1995,Proc. Natl. Acad.Sci.，USA, 1995，92 :7297)、以及聚(酰胺基胺)树枝状化合物(Kukowska-Latallo等人，1996, Proc. Natl. Acad. Sci.，USA, 93 :4897 ；Tang 等人，1996, Bioconjugate Chem.，7 :703 ；以及Haensler等人，1993,Bioconjugate Chem. ,4 :372))在生理pH下是带正电的，在多种细胞系中与核酸形成离子对，并且介导转染。在一些实施方案中，聚合物可以是带有阳离子侧链的可降解的聚酯(Putnam等A 1999, Macromolecules, 32 :3658 ；Barrera 等人，1993, J. Am. Chem. Soc. , 115 11010 ；Kwon 等人，1989, Macromolecules, 22 :3250 ；Lim 等人，1999, J. Am. Chem. Soc.，121 :5633 ；以及Zhou等人，1990, Macromolecules, 23 :3399)。这些聚合物的实例包括聚(L-丙交酯 L-赖氨酸共聚物)(Barrera 等人，1993, J. Am. Chem. Soc. , 115 :11010)、聚(丝氨酸酯)(Zhou 等人，1990, Macromolecules, 23 :3399)、聚(4-轻基-L-脑氨酸酯)(Putnam 等人,1999，Macromolecules, 32 :3658 ;以及 Lim 等人，1999，J. Am. Chem. Soc.，121 :5633)、以及聚(4-轻基-L-月甫氨酸酉旨)(Putnam 等人，1999,Macromolecules, 32 :3658 ；以及 Lim 等人，1999, J. Am. Chem. Soc.，121 :5633)。
在本领域，这些和其他聚合物的特性以及用于制备它们的方法是熟知的(参见，例如美国专利 6，123，727 ;5，804，178 ;5，770，417 ;5，736，372 ;5，716，404 ;6，095，148 ；5，837，752 ;5，902，599 ;5，696，175 ;5，514，378 ;5，512，600 ;5，399，665 ;5，019，379 ；5，010，167 ;4，806，621 ;4，638，045 ;以及 4，946，929 ；ffang 等人，2001, J. Am. Chem. Soc.，123 :9480 ；Lim 等人，2001, J. Am. Chem. Soc. , 123 :2460 ；Langer, 2000, Acc. Chem. Res.，33 94 ；Langer, 1999, J. Control. Release,62 :7 ；以及 Uhrich 等人，1999, Chem. Rev. ,99 3181) o 更一般地，在 Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Aminesand Ammonium Salts, Ed. by Goethals, Pergamon Press,1980 中；在 Principles ofPolymerization by Odian,John Wiley & Sons,Fourth Edition,2004中；在ContemporaryPolymer Chemistry by Allcock et al.,Prentice-Hall, 1981中；^Deming et al. ,1997,Nature, 390 :386 中；以及在美国专利 6，506，577,6, 632，922,6, 686，446、以及 6，818，732中说明了用于合成某些合适的聚合物的多种方法。在一些实施方案中，聚合物可以是直链的或分支的聚合物。在一些实施方案中，聚合物可以是树枝状化合物。在一些实施方案中，聚合物可以是实质上彼此交联的。在一些实施方案中，聚合物可以实质上不交联。在一些实施方案中，聚合物可以根据本发明进行使 用而不经过交联步骤。进一步理解，本发明的合成纳米载体可以包括嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物、和/或任何以上及其他聚合物的加合物。本领域的那些技术人员将认识到，在此列出的聚合物代表根据本发明可以使用的聚合物的示例性的、而不是全面的清单。在一些实施方案中，合成纳米载体可以不包括聚合组分。在一些实施方案中，合成纳米载体可以包括金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒、等。在一些实施方案中，非聚合物的合成纳米载体是非聚合组分的聚集体(例如金属原子(例如金原子)的聚集体)。在一些实施方案中，合成纳米载体可以任选地包括一种或多种两亲实体。在一些实施方案中，两亲实体可以促进产生具有增加的稳定性、改进的均匀性、或增加的粘度的合成纳米载体。在一些实施方案中，两亲实体可以与脂质膜(例如脂质双分子层、脂质单分子层、等)的内表面有关。根据本发明，在本领域已知的很多两亲实体可以适合用于制造合成纳米载体。这样的两亲实体包括，但并不局限于，磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC) ;二油烯基磷脂酰基乙醇胺(DOPE) ;二油烯基氧丙基三乙基铵(DOTMA) ;二油酰基磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰基甘油(DPPG);十六烷醇；脂肪醇(例如聚乙二醇(PEG));聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性脂肪酸(例如棕榈酸或油酸)；脂肪酸；脂肪酸甘油单酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脱水山梨糖醇三油酸酯(Span 85)甘氨胆酸酯；脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Span 20);聚山梨醇酯20 (Tween 20);聚山梨醇酯60 (Tween 60);聚山梨醇酯65 (Tween 65);聚山梨醇酯80 (Tween 80);聚山梨醇酯85 (Tween 85);聚氧乙烯单硬脂酸酯；表面活性素；poloxomer ;脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如脱水山梨糖醇三油酸酯)；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)；心磷脂；磷脂酸；脑苷脂；双十六烷基磷酸酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；硬脂酰胺；十二烷胺；十六烷胺；乙酰基棕榈酸酯；蓖麻油酸甘油酯；十八酸十六烷基酯；肉豆蘧酸异丙酯；四丁酚醛(tyloxapol);聚(乙二醇)5000磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-单硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性剂特性的合成的和/或天然的洗涤剂；脱氧胆酸酯；环糊精；离液序列高的盐；离子对试剂；以及它们的组合。两亲实体组分可以是不同两亲实体的混合物。本领域的那些技术人员将认识到，这是具有表面活性剂活性的物质的示例性的、而不是全面的清单。在产生根据本发明将被使用的合成纳米载体中可以使用任何两亲实体。 在一些实施方案中，合成纳米载体可以任选地包括一种或多种碳水化合物。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以是衍生的天然碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物包括单糖或二糖，包括但并不局限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖(cellbiose)、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺、以及神经氨酸。在某些实施方案中，碳水化合物是一种多糖，包括但并不局限于支链淀粉、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基纤维素(HC)、甲基纤维素(MC)、右旋糖酐、环葡聚糖、糖原、淀粉、羟乙基淀粉、角叉菜聚糖、多聚糖(glycon)、直链淀粉、壳聚糖、N，0-羧甲基壳聚糖、褐藻胶和海藻酸、淀粉、甲壳质、肝素、魔芋、葡萄甘露聚糖(gluc0_annan)、石脐素、肝素、透明质酸、凝胶多糖、以及黄原胶。在某些实施方案中，该碳水化合物是一种糖醇，包括但并不局限于甘露醇、山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、以及乳糖醇。在一个实施方案中，本发明的合成纳米载体包括聚合物基质、免疫特征表面，该免疫特征表面包括烟碱、以及包括R848的Thl偏向性免疫刺激剂，其中通过封装在合成纳米载体内的方式，该R848偶合到合成纳米载体上。在一个实施方案中，本发明的组合物包括以上提到的合成纳米载体，与按适合给予受试者的剂型存在的药学上可接受的赋形剂结合在一起。在以上实施方案中，这些合成纳米载体是球形的，具有全部平均为250nm的最大尺寸、最小尺寸、和直径。在另一个实施方案中，本发明的合成纳米载体包括聚合物基质、包括通过吸附偶合到合成纳米载体表面上的抗CDllc抗体的靶向部分、以及包括R848的Thl偏向性免疫刺激剂，其中通过封装在合成纳米载体内的方式，该R848偶合到合成纳米载体上。在一个实施方案中，本发明的组合物包括以上提到的合成纳米载体，与按适合给予受试者的剂型存在的药学上可接受的赋形剂结合在一起。在以上实施方案中，这些合成纳米载体是圆柱形的，具有300nm的最大尺寸和150nm的最小尺寸。根据本发明的组合物包括与药学上可接受的赋形剂结合的本发明的合成纳米载体。可以使用常规药学制造和配料技术制造该组合物，以达到有用的剂型。在一个实施方案中，本发明的合成纳米载体悬浮在无菌盐溶液中，用于与防腐剂一起注射。D.制造和使用本发明的免疫纳米疗法的方法可以使用宽泛种类的本领域已知的方法制备合成纳米载体。例如，可以通过如纳米沉淀、使用流体通道的流动聚焦、喷雾干燥、单和双乳液溶剂蒸发、溶剂萃取、相分离、研磨、微乳液步骤、微型品制造、纳米制造、牺牲层、简单和复杂凝聚法的方法，以及本领域的那些普通技术人员熟知的其他方法形成合成纳米载体。可替代地或额外地，已经说明了用于单分散半导体，传导性的、磁性的、有机的、以及其他纳米材料的水性和有机溶剂合成(Pellegrino 等人，2005, Small, I 48 ；Murray 等人，2000, Ann. Rev. Mat. Sci.，30 :545 ；以及Trindade等人，2001, Chem. Mat. , 13 :3843)。在文献中已经说明了附加方法(参见，例如 Doubrow, Ed. , “Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy,，，CRCPress, Boca Raton, 1992 ；Mathiowitz 等人，1987, J. Control. Release, 5 :13 ；Mathiowitz等人，1987, Reactive Polymers, 6 :275 ；以及 Mathiowitz 等人，1988, J. Appl. PolymerSci.，35 755,以及还有美国专利 5578325 和 6007845)。在某些实施方案中，通过纳米沉淀工艺或喷雾干燥来制备合成纳米载体。可以改变在制备合成纳米载体中使用的条件以产生具有希望的大小和特性(例如疏水性、亲水性、外部形态学、“粘性”、形状、等)的颗粒。制备合成纳米载体的方法和使用的条件(例如溶剂、温度、浓度、空气流速、等)可以取决于有待偶合到合成纳米载体上的材料和/或该聚合物基质的构成。如果通过任何以上方法制备的颗粒具有在希望的范围外的大小范围，那么可以按大小分类这些颗粒，例如使用一个筛。可以按多种不同的方式达到偶合，并且可以是共价的或非共价的。这些偶合可 以安排在一个表面上或安排在本发明的合成纳米载体内。本发明的合成纳米载体的元件(例如免疫特征表面所包括的部分、靶向部分、聚合物基质、以及类似物质)可以直接彼此偶合，例如通过一个或多个共价键，或者可以借助一个或多个连接物进行偶合。可以从Saltzman等人的公开美国专利申请2006/0002852、DeSimone等人的公开美国专利申请2009/0028910、或Murthy等人的公开国际专利申请W0/2008/127532 Al改变官能化合成纳米载体的附加方法。根据本发明，可以使用任何合适的连接物。连接物可以用于形成酰胺键、酯键、二硫键、等。连接物可以含有碳原子或杂原子(例如氮、氧、硫、等)。在一些实施方案中，连接物是脂肪族的或杂脂肪族的连接物。在一些实施方案中，该连接物是聚烷基连接物。在某些实施方案中，该连接物是聚醚连接物。在某些实施方案中，该连接物是聚乙烯连接物。在某些特定实施方案中，该连接物是聚乙二醇(PEG)连接物。在一些实施方案中，该连接物是可切割的连接物。为了给出但是一些实例，可切割的连接物包括蛋白酶可切割的肽连接物、核酸酶敏感的核酸连接物、脂肪酶敏感的脂质连接物、糖苷酶敏感的碳水化合物连接物、PH敏感的连接物、低氧敏感的连接物、可以光切割的连接物、不耐热的连接物、可以酶切割的连接物(例如可以酯酶切割的连接物)、超声波敏感的连接物、可以X射线切割的连接物、等。在一些实施方案中，该连接物不是可切割的连接物。多种方法可以用于偶合连接物或合成纳米载体的其他元件与该合成纳米载体。一般的策略包括被动吸附(例如经由静电相互作用)、多价螯合作用、特异性结合对的成员之间的高亲和力非共价结合、共价键形成、等(Gao等,2005, Curr. Op. Biotechnol. ,16 :63)。在一些实施方案中，可以使用点击化学来缔合材料与合成纳米载体。可以采用非共价特异结合相互作用。例如，可以用生物素官能化一种颗粒、亦或一种生物分子，该生物素具有其他被链霉亲和素官能化的物质。这两部分彼此非共价特异性结合并且具有高亲和力，因此缔合颗粒和生物分子。可以类似地使用其他特异性结合对。可替代地，组氨酸标记的生物分子可以与结合镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)的颗粒缔合。对于关于偶合的额外综合信息，参见期刊Bioconjugate Chemistry,由American Chemical Society 出版，Columbus OH, PO Box 3337, Columbus, OH,43210 ；“Cross-Linking,，，Pierce Chemical Technical Library,在 Pierce 网址和 1994-95Pierce Catalog中的初次出版中可得，以及其中引用的参考文献；Wong SS, Chemistry ofProtein Conjugation and Cross-linking, CRC Press Publishers, Boca Raton,1991 ;以及 Hermanson, G. T. , Bioconjugate Techniques, Academic Press, Inc. , San Diego,1996。可替代地或额外地，合成纳米载体可以被偶合到免疫特征表面、靶向部分、免疫刺激剂、和/或其他直接或间接经由非共价相互作用的元件。非共价相互作用包括但并不局限于电荷相互作用、亲和相互作用、金属配位、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华相互作用、磁相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用、和/或它们的组合。这些偶合可以安排在一个表面上或安排在本发明的纳米载体内。已理解可以按任何合适的方式制造这些本发明的组合物，并且本发明绝不局限于可以使用在此说明的方法生产的组合物。选择适当方法可以要求关注有关的具体部分的特性。 在一些实施方案中，在无菌条件下制造本发明的合成纳米载体。这可以确保生成的组合物是无菌的并且非传染性的，因此在与非无菌组合物比较时改进了安全性。这提供了有价值的安全措施，特别是当接受合成纳米载体的受试者具有免疫缺陷、遭受感染，和/或对感染敏感时。在一些实施方案中，本发明的合成纳米载体可以被冻干并储存在悬浮液中、或作为冻干的粉末，这取决于针对不失活的延长时段的配制策略。可以通过多种给药途径给予本发明的组合物，包括但并不局限于肠胃外的(例如皮下、肌内、静脉内、或真皮内)；口服的、经鼻的、经粘膜的、直肠的、眼的、或经皮的给药。使用本发明的组合物可以治疗的适应症包括但并不局限于那些适应症，在这些适应症中从Th2模式细胞因子释放偏向Thl模式细胞因子释放是所希望的。这样的适应症包括特应性症状，例如但并不局限于变态反应症、变应性哮喘、或特应性皮炎；哮喘；慢性阻塞性肺病(C0PD，例如肺气肿或慢性支气管炎)；以及由于慢性传染物(例如慢性利什曼病、念珠菌病或血吸虫病)的慢性感染，以及由原形体、鼠弓形体、分枝杆菌、HIV、HBV、HCV、EBV或CMV、或以上的任何一种、或以上的任何亚类引起的感染。其他使用本发明的组合物可以治疗的适应症包括但并不局限于其中受试者的Thl应答是欠佳的和/或无效的适应症。可以使用本发明增强受试者的Thl免疫应答。这些适应症包括不同的癌症，以及具有缺乏免疫力的或欠佳的免疫性的人群，例如婴儿、老年人、癌症病人、接受免疫抑制药物或辐射的个体、血液透析病人以及具有遗传的或原发性免疫机能障碍的那些人。在本发明的一个方面，本发明的组合物以与常规免疫疗法不同的方式发挥作用。在常规免疫疗法中，同时给予抗原和免疫刺激剂。相反，在本发明的实施方案中，对于它而言希望适应性免疫应答的抗原不被合并到本发明的组合物中。在优选的实施方案中，从本发明的免疫特征表面排除这样的抗原，这样使得免疫特征表面并不包括与治疗该症状有关的抗原。进一步，在本发明的实施方案中，给予本发明的组合物并不进一步包括给予一种与治疗该症状有关的抗原，其中该抗原可以偶合到纳米载体上、亦或不偶合到纳米载体上。在某些实施方案中，在不同于给予该组合物的时间，给予对于它而言希望Thl偏向性应答的抗原；其中该抗原的给药包括被动给药或主动给药。
在每一实例中，不希望与给予一种或多种抗原在时间上分开给予的一种或多种免疫刺激剂提供针对给予一种或多种抗原的Thl偏向性应答。E.实例实例I :PLA_R848 结合物向装备有搅拌棒和冷凝器的双颈圆底烧瓶添加咪唑喹啉瑞喹莫德(R_848、100mg，3. 18X10_4摩尔)、D/L丙交酯(5. 6gm, 3. 89X10_2摩尔)和无水硫酸钠(4. Ogm)。在50°C，真空下干燥该烧瓶和内容物8小时。然后用氩气冲洗该烧瓶并且添加甲苯(IOOmL)。在设定在120°C的油浴中搅拌该反应直至丙交酯已经溶解，然后经由移液管添加乙基己酸锡(75mg，60UL)。然后在氩气下持续加热16小时。在冷却以后，添加水(20mL)并且持续搅拌30分钟。用添加的甲苯(200mL)稀释该反应，并且然后用水洗涤(200mL)。然后依次用含有5%浓盐酸的10%氯化钠溶液(200mL)洗涤该甲苯溶液，随后用饱和碳酸氢钠(200mL)洗涤。TLC(硅石，10%在二氯甲烷中的甲醇)示出该溶液不含有游离的R-848。在硫酸镁上干燥该溶液，过滤并在真空下蒸发以给出3. 59克聚乳酸-R-848结合物。在碱中水解一部分聚合物，并且通过HPLC检查R-848含量。通过与R-848浓度相对HPLC反应的标准曲线比较，确定该聚合物含有4. 5Img R-848每克聚合物。通过GPC确定该聚合物的分子量为约19，000。
实例2 :烟碱-PEG-PLA结合物按以下步骤合成3-烟碱-PEG-PLA聚合物首先，将来自JenKem 的具有3.5KD分子量的单氨基聚(乙二醇)(0. 20gm，5. 7X10—5摩尔)和过量的4-羧基可替宁(0.126gm，5. 7X10—4摩尔)溶解于二甲基甲酰胺(5. OmL)中。搅拌该溶液并且添加二环己基碳二亚胺(0. 124gm,6. 0X10_4摩尔)。在室温下搅拌这一溶液过夜。添加水(0. IOmL)并且继续搅拌额外的15分钟。通过过滤除去二环己基脲的沉淀，并且在真空下蒸发滤液。在二氯甲烷(4. OmL)中溶解剩余物并且将这一溶液添加到乙醚(IOOmL)中。在冰箱中冷却该溶液2小时，并且通过过滤分离沉淀的聚合物。在用乙醚洗涤以后，在高真空下干燥该固体白色聚合物。产量为0. 188gm。不经进一步纯化，将这一聚合物用于下一步。 在氮气下将该可替宁/PEG聚合物(0. 20gm，5. 7X10_5摩尔)溶解于干四氢呋喃(IOmL)中，并且搅拌该溶液，同时添加在四氢呋喃中的氢化铝锂溶液(1.431^的2.0皿，2. 85X10_3摩尔)。添加氢化铝锂引起该聚合物沉淀为凝胶状块。在缓慢流的氮气下，加热该反应至80°C，并且允许四氢呋喃蒸发。然后在80°C下加热剩余物2小时。冷却以后，小心添加水(0. 5mL)。一旦氢释放已经停止，添加在二氯甲烷中的10%甲醇(50mL)，并且搅拌该反应混合物直至该聚合物溶解。通过Celite⑧牌硅藻土(从EMD Inc.可得，如Celite 545，区域#CX0574-3)过滤这一混合物，并且在真空下蒸干滤液。在二氯甲烷(4. OmL)中溶解剩余物并且将这一溶液缓慢添加到乙醚(IOOmL)中。聚合物分离为白色絮凝固体，并且通过离心分离。在用乙醚洗涤以后，在真空下干燥该固体。产量为0. 129gm。接下来，将PEG/烟碱聚合物(0. 081gm，2. 2X10—5摩尔)、D/L丙交酯(0. 410gm,2. 85X10_3摩尔)和无水硫酸钠(0. 380gm)加料至一个装备有搅拌棒和回流冷凝器的IOOmL圆底烧瓶。在55°C，在真空下干燥这些反应物8小时。然后用氩气冷却并冲洗该烧瓶并且然后添加干燥的甲苯(10mL)。将该烧瓶置于设定在120°C的油浴中，并且一旦丙交酯已经溶解，添加乙基己酸锡(5. 5mg, I. 36X10_5摩尔)。允许该反应在120°C继续进行16小时。在冷却至室温以后，添加水(15mL)并且持续搅拌30分钟。添加二氯甲烷(200mL)，并且在分液漏斗中搅动以后，允许这些相沉降。分离二氯甲烷层，并且在无水硫酸镁上干燥。在过滤以除去干燥剂以后，在真空下蒸发滤液以给出作为一种无色泡沫的聚合物。在四氢呋喃(IOmL)中溶解该聚合物，并且在搅拌下将这一溶液缓慢添加到水(150mL)中。通过离心分离沉淀的聚合物，并且在二氯甲烷(IOmL)中溶解该固体。在真空下除去二氯甲烷，并且在真空下干燥剩余物。3-烟碱-PEG-PLA聚合物产量为0. 38gm。实例3 :预言的纳米载体配制品-变态反应症根据Gerster等人的美国专利5,389,640的实例99中提供的合成,合成瑞喹莫德(aka R848)。根据实例2制备PLA-PEG-烟碱结合物。通过使用D，L-丙交酯(MW =约15KD-18KD)的开环聚合制备PLA。通过NMR证实PLA结构。从VWR scientific购买聚乙烯醇(Mw= 11KD-31KD, 85 水解)。从 Bachem Americas Inc. (3132 Kashiwa Street,Torrance CA 90505.区域#4064565)获得卵清蛋白肽323-339。这些用于制备以下溶液I 在二氯甲烷中的瑞喹莫德@7. 5mg/mL 2.在二氯甲烷中的 PLA-PEG-烟碱 @100mg/mL3.在二氯甲烷中的 PLA@100mg/mL4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10mg/mL5.在水中的聚乙烯醇@50mg/mL。在小管形瓶中结合溶液#1 (0. 4mL)、溶液#2 (0. 4mL)、溶液#3 (0. 4mL)和溶液#4(0. ImL)，并且使用一台Branson数字超声波仪250在50%振幅声处理该混合物40秒。向这一乳液添加溶液#5 (2. OmL)，并且使用一台Branson数字超声波仪250在35%振幅声处理40秒，形成第二乳液。添加这一乳液至一个含有水(30mL)的烧杯，并且在室温下搅拌这一混合物2小时以形成纳米载体。用水(14mL)稀释一部分纳米载体分散体(I. OmL)，并且在一台具有100KD的薄膜截留的Amicon Ultra离心过滤设备中，通过离心将其浓缩。在体积约为250 u L时，添加水(15mL)，并且使用该Amicon设备将这些颗粒再一次浓缩至约250 u L0以相同方式，用磷酸盐缓冲盐水(pH = 7.5，15mL)进行二次洗涤，并且用磷酸盐缓冲盐水稀释最终浓缩物至总体积为I. OmL0这给出浓度为约2. 7mg/mL的最终纳米载体分散体。然后通过肌肉注射，将这些合成纳米载体给予受试者。指导该受试者，允许他们自身随后暴露于环境变应原，例如豕草花粉。在暴露于环境变应原后，通过另一次暴露于环境变应原激发该受试者。记录针对环境变应原激发的任何产生的Thl-偏向性应答。实例4 :预言的纳米载体配制品-变态反应症根据Gerster等人的美国专利5，389，640的实例99中提供的合成,合成瑞喹莫德(aka R848)。使用生成PLA-C00H(目标MW= 15-18KD)的D，L-丙交酯开环聚合制备羧基化聚乳酸。通过NMR证实结构。使用甲氧基-PEG(聚乙二醇甲醚,来自Aldrich Chemical的项20509，大约PEG的MW = 2KD)制备PLA-PEG-甲氧基聚合物，甲氧基-PEG用于引发D，L-丙交酯的开环聚合(最终聚合物丽目标=18-20KD)。通过NMR证实结构。从BachemAmericas Inc. (3132 Kashiwa Street, Torrance CA 90505.区域 #4064565)获得卵清蛋白肽323-339。从VWR scientific购买聚乙烯醇(Mw= 11KD-31KD，85%水解)。这些用于制备以下溶液
I.在二氯甲烷中的瑞喹莫德@7. 5mg/mL2.在二氯甲烷中的PLA-PEG-甲氧基@100mg/mL3.在二氯甲烷中的 PLA-C00H@100mg/mL4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10mg/mL5.在水中的聚乙烯醇@50mg/mL。
在小管形瓶中结合溶液#1 (0. 4mL)、溶液#2 (0. 4mL)、溶液#3 (0. 4mL)和溶液#4(0. ImL)，并且使用一台Branson数字超声波仪250在50%振幅声处理该混合物40秒。向这一乳液添加溶液#5 (2. OmL)，并且使用一台Branson数字超声波仪250在35%振幅声处理40秒，形成第二乳液。添加这一乳液至一个含有水(30mL)的烧杯，并且在室温下搅拌这一混合物2小时以形成纳米载体。用水(14mL)稀释一部分纳米载体分散体(I. OmL)，并且在一台具有100KD的薄膜截留的Amicon Ultra离心过滤设备中，通过离心将其浓缩。在体积约为250 ii L时，添加水(15mL)，并且使用该Amicon设备将这些颗粒再一次浓缩至约250 u L0以相同方式，用磷酸盐缓冲盐水(pH = 6. 5，15mL)进行二次洗涤，并且用磷酸盐缓冲盐水(pH = 6. 5)稀释最终浓缩物至总体积为5. OmL。这给出浓度为约0. 6mg/mL的最终纳米载体分散体。向该纳米载体分散体添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N’ -乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC，200mg)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS，70m)，并且在室温培养这一混合物1/2小时。通过离心，用PBS洗涤这些纳米载体三次。在最后一次洗涤后，用PBS稀释这些颗粒至I. OmL的体积，以给出具有3. Omg/mL的大致浓度的NHS-活化纳米载体的悬浮液。向这一悬浮液添加抗-⑶Ilc抗体(50 V- Li5 V- g/mL,从Miltenyi Biotec可得的抗-QHlc抗体克隆MJ4-27G12)。在冰箱中培养该悬浮液过夜。通过在PBS中离心，洗涤生成的取代的纳米载体三次。在最后一次洗涤后，用PBS稀释这些颗粒至I. OmL的体积，以给出具有2. 7mg/mL的大致浓度的抗-CD169取代的纳米载体的悬浮液。然后通过肌肉注射，将这些合成纳米载体给予受试者。指导该受试者，允许他们自身随后暴露于环境变应原，例如豕草花粉。在暴露于环境变应原后，通过另一次暴露于环境变应原激发该受试者。记录针对环境变应原激发的任何产生的Thl-偏向性应答。实例5 :预言的纳米载体配制品-变态反应症根据如下美国公开专利申请2009/0028910的修改的传授制备合成的梯形纳米载体通过倾倒含有I-羟基环己基苯基甲酮的PFPE- 二甲基丙烯酸酯(PFPE-DMA)到具有200-nm梯形图案的硅基质上产生有图案的全氟聚醚(PFPE)模具。聚(二甲基硅氧烷)模具用于限定该液体PFPE-DMA在希望的区域内。同时在氮气吹扫下，该装置然后经受UV光(365nm) 10分钟。然后从硅母料释放充分固化的PFPE-DMA模具。分别地，聚(乙二醇)(PEG)二丙烯酸酯(n = 9)与lwt%的光敏引发剂，I-羟基环己基苯基甲酮共混。以基于纳米载体中总聚合物重量lwt%的量添加瑞喹莫德(R848，根据Gerster等人的美国专利5，389，640的实例99中提供的合成而合成)，将其添加到这一 PEG- 二丙烯酸酯单体溶液，并且充分混合该组合。通过在一台干燥器中，经由汽相沉积，用三氯(1H，1H，2H，2H-全氟辛基)硅烷处理用“piranha”溶液(I I浓硫酸30%过氧化氢(aq)溶液)清洁的硅晶片20分钟，产生平的、均匀的、非-润湿表面。在这以后，然后将50 y L的PEG 二丙烯酸酯/R848/类毒素溶液置于处理的硅晶片上，并且将有图案的PFPE模具置于它的顶部。然后将该基质置于模制装置中，并且施用小的压力以推出过量PEG- 二丙烯酸酯/R848/类毒素溶液。同时在氮气吹扫下，该整个装置然后经受UV光(365nm)十分钟。然后从该模具移出这些合成纳米载体,并且添加到一个盛有5￥〖％在丙酮中的羰基二咪唑溶液的烧瓶中。轻轻搅拌这些合成纳米载体24小时，随后从该丙酮溶液分离合成纳米载体，并且在室温下悬浮在水中。向这一悬浮液添加过量抗-CDlIc抗体(从Miltenyi Biotec可得的克隆MJ4-27G12)，并且加热该悬浮液至37摄氏度，并且轻轻搅拌24小时。然后从该悬浮液分离这些标记的合成纳米载体。然后通过肌肉注射，将这些合成纳米载体给予受试者。指导该受试者，允许他们自身随后暴露于环境变应原，例如豕草花粉。在暴露于环境变应原后，通过另一次暴露于环境变应原激发该受试者。记录针对环境变应原激发的任何产生的Thl-偏向性应答。实例6 :预言的纳米载体配制品-癌症根据Gerster等人的美国专利5，389，640的实例99中提供的合成,合成瑞喹莫德(aka R848)。通过使用D，L-丙交酯(MW =约15KD-18KD)的开环聚合制备PLA。通过NMR证实结构。使用甲氧基_PEG(聚乙二醇甲醚，来自Aldrich Chemical的项20509，大约PEG的丽=2KD)制备PLA-PEG-甲氧基聚合物，甲氧基-PEG用于引发D，L-丙交酯的开环聚合(最终聚合物MW目标=18-20KD) o通过NMR证实结构。从Bachem Americas Inc. (3132Kashiwa Street, Torrance CA 90505.区域 #4064565)获得卵清蛋白肽 323-339。从 VWRscientific购买聚乙烯醇(Mw = 11KD-31KD，85%水解)。这些用于制备以下溶液I.在二氯甲烧中的瑞喹莫德@7. 5mg/mL2.在二氯甲烷中的PLA-PEG-甲氧基@100mg/mL3.在二氯甲烷中的 PLA@100mg/mL4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10mg/mL5.在水中的聚乙烯醇@50mg/mL。在小管形瓶中结合溶液#1 (0. 4mL)、溶液#2 (0. 4mL)、溶液#3 (0. 4mL)和溶液#4(0. ImL)，并且使用一台Branson数字超声波仪250在50%振幅声处理该混合物40秒。向这一乳液添加溶液#5 (2. OmL)，并且使用一台Branson数字超声波仪250在35%振幅声处理40秒，形成第二乳液。添加这一乳液至一个含有水(30mL)的烧杯，并且在室温下搅拌这一混合物2小时以形成纳米载体。用水(14mL)稀释一部分纳米载体分散体(I. OmL)，并且在一台具有100KD的薄膜截留的Amicon Ultra离心过滤装置中，通过离心将其浓缩。在体积约为250 ii L时，添加水(15mL)，并且使用该Amicon装置将这些颗粒再一次浓缩至约250 u L0以相同方式，用磷酸盐缓冲盐水(pH = 7.5，15mL)进行二次洗涤，并且用磷酸盐缓冲盐水稀释最终浓缩物至总体积为I. OmL0这给出浓度为约2. 7mg/mL的最终纳米载体分散体。然后通过肌肉注射，将这些合成纳米载体给予具有一种实体瘤的受试者。在注射这些纳米载体四十八小时以后，受试者暴露于足够的辐射以引起实体瘤的破裂。记录产生的任何抗-肿瘤细胞毒性的T-细胞。实例7 :预言的纳米载体配制品-慢性利什曼病根据如下美国公开专利申请20060002852的修改的传授制备合成纳米载体10mg/ml的亲和素与在含有2%脱氧胆酸盐缓冲剂PBS中的10倍过量的NHS-棕榈酸反应。简短地声处理该混合物，并且在37摄氏度轻轻混合12小时。为了除去过量脂肪酸和水解的酯，针对含有0. 15%脱氧胆酸盐的PBS透析反应物。使用修改的双乳液法用于制备脂肪酸PLGA颗粒。在这一方法中，在IOOii L的PBS中，以基于纳米载体中总聚合物重量lwt%的量添加瑞喹莫德(R848，根据Gerster等人的美国专利5，389，640的实例99中提供的合成而合成)，将其滴加到涡动的PLGA溶液(在2ml MeCl2中IOOmg PLGA)中。然后在冰上，以10-秒钟间隔声处理这一混合物三次。这时，缓慢添加4ml的亲和素-棕榈酸酯/PVA混合物(在2ml的5 % PVA中的2ml亲和素-棕榈酸酯)到PLGA溶液中。然后在冰上，以10-秒钟间隔声处理这一混合物三次。在声处理以后，滴加该材料到搅拌中的IOOml的0. 3% PVA中。在恒定的室温下，这一混合物经受有力搅拌4小时，以蒸发二氯甲烷。然后通过以12，OOOg的速度离心15分钟，接下来用去离子水洗涤三次，纯化生成物乳液。按以下方法制备生物素酰化的抗-CDllc抗体。刚好在使用前，以lmg/ml的浓度 将生物素-NHS溶解在DMSO中。以1/10的稀释，添加抗-CDllc抗体(从Miltenyi Biotec可得的克隆MJ4-27G12)到该溶液中，并且在用于生物素-NHS的pH7. 5-8. 5的条件下，在冰上培养30分钟，或者在室温培养2小时。PBS或HEPES可以用作缓冲剂。用Tris猝灭该反应。然后在室温下，在水中悬浮生成的合成纳米载体，并且添加过量的生物素酰化的抗-⑶169抗体(50 u Li5 u g/mL,如以上说明制备)至该悬浮液。加热该悬浮液至37摄氏度，并且轻轻搅拌24小时。然后从该悬浮液分离这些标记的合成纳米载体。然后通过肌肉注射，将这些合成纳米载体给予患有慢性利什曼病的受试者，该病的特征在于细胞因子表达的Th2_偏向性模式。记录产生的任何适当的抗体。实例8 :使用具有R848的纳米载体治疗哮喘含有R848的合成纳米载体用于确定含有R848的纳米载体是否可以用于将哮喘应答从Th2表型改性为Thl表型。在第0天，用卵清蛋白预先致敏小鼠(BALB/c ;每组5只小鼠)，以及在第14天，向腹膜内地(i.p.)用在200 ii L PBS中的20iig卵清蛋白和2mgImject 帆(Pierce, Rockford, IL)预先致敏小鼠(组3_9 ;参见按用于说明实验组小鼠的表I和表2，以及包括纳米载体组合物的各自处理。对照小鼠接受i. p的200 u L PBS (组I)、亦或接受i.P的在200 ii L PBS中的2mg Imject 矾(组2)。在第27、28、和29天，用PBS (对于处理的阴性对照)(组1-4)、CpG (0D 1826，i.p.在100 y L中30 y g ;对于处理的阳性对照)(组5)、具有R848的烟碱-纳米载体(i. p.在100 ii L中100 y g)(组6)、具有R848的烟碱-纳米载体(鼻内地(i. n.)在60 ii L中100 y g)(组7)、无R848的烟碱-纳米载体(i.p.在IOOii L中的IOOiig)(组8)处理小鼠，亦或用无R848的烟碱-纳米载体(i.n.在60 ii L中的IOOii g)(组9)处理小鼠。具有R848的烟碱-纳米载体含有4. 4%R848。结合R848至PLGA (Mw 4. IkD)。一般根据实例1_3的传授制造该纳米载体聚合物组合物，并且包括25% PLA-PEG-烟碱和75% PLA聚合物(是来自Boehringer Ingelheim的R202H，亦或是来自Lakeshore Biomaterials的100DL 2A ;这两个版本都具有20kD的Mw和游离羧酸末端)。为了测量肺白细胞浸润，在第28、29、和30天，用i.n.在60 y L PBS中的50yg卵清蛋白激发小鼠(组2和4-9)。对照小鼠(组I和3)接受i. n. 60 u L PBS0在第32天，最后一次卵清蛋白激发48小时以后，处死小鼠并且收集样品。为了细胞因子分析，在第31天(在最后一次卵清蛋白激发18小时以后)收集样品。用ImL含有3mM EDTA的PBS灌洗肺3次来收集用于细胞离心涂片器的支气管肺泡灌洗液(BALF)，用于细胞分类计数和细胞因子分析。用Diff-Quik (Dade Behring)染色BALF的细胞离心涂片器切片，并且进行细胞分类计数。在_20°C储存BALF的剩余物，直至需要用于细胞因子分析。按照制造商(BDBiosciences and R & D Systems)的说明书，通过 ELISA 测量 BALF 细胞因子(IL_12p40、IL-4、IL-13、和 IL-5)。
权利要求
1.一种用于治疗一种症状的组合物，该组合物包括 合成纳米载体，包括(I) 一个免疫特征表面，以及(2) —种偶合到这些合成纳米载体上的Thl偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂； 其中该免疫特征表面并不包括处于足以激发对与治疗该症状有关的抗原的一种适应性免疫应答的量的与治疗该症状有关的抗原。
2.如权利要求I所述的组合物，其中该免疫特征表面不包括与治疗该症状有关的抗原。
3.如权利要求I所述的组合物，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种变应原。
4.如权利要求I所述的组合物，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种肿瘤抗原。
5.如权利要求I所述的组合物，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种慢性传染物抗原。
6.如权利要求I所述的组合物，其中该免疫特征表面包括一个非抗原免疫特征表面。
7.如权利要求I所述的组合物，其中这些合成纳米载体进一步包括一种T-细胞抗原。
8.如权利要求I所述的组合物，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
9.如权利要求I所述的组合物，其中该Thl偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一种或多种。
10.如权利要求I所述的组合物，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
11.如权利要求I所述的组合物，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
12.如权利要求I所述的组合物,其中基于一个样品中合成纳米载体的总数,该样品中至少75%的合成纳米载体的最小尺寸是大于lOOnm。
13.如权利要求12所述的组合物，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种变应原。
14.如权利要求12所述的组合物，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种肿瘤抗原。
15.如权利要求12所述的组合物，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种慢性传染物抗原。
16.如权利要求12所述的组合物，其中该免疫特征表面包括一个非抗原免疫特征表面。
17.如权利要求12所述的组合物,其中这些合成纳米载体进一步包括一种T-细胞抗原。
18.如权利要求12所述的组合物，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
19.如权利要求12所述的组合物，其中该ThI偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-I中的一种或多种。
20.如权利要求12所述的组合物，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
21.如权利要求12所述的组合物，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
22.—种方法,包括 将如权利要求I所述的组合物给予受试者。
23.如权利要求22所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种变应原。
24.如权利要求22所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种肿瘤抗原。
25.如权利要求22所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种慢性传染物抗、原。
26.如权利要求22所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一个非抗原免疫特征表面。
27.如权利要求22所述的方法，其中这些合成纳米载体进一步包括一种T-细胞抗原。
28.如权利要求22所述的方法，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
29.如权利要求22所述的方法，其中该Thl偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一种或多种。
30.如权利要求22所述的方法，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
31.如权利要求22所述的方法，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
32.如权利要求22所述的方法，其中基于一个样品中合成纳米载体的总数，该样品中至少75%的合成纳米载体的最小尺寸是大于lOOnm。
33.如权利要求32所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种变应原。
34.如权利要求32所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种肿瘤抗原。
35.如权利要求32所述的方法，其中与治疗该症状有关的抗原包括一种慢性传染物抗原。
36.如权利要求32所述的方法，其中该免疫特征表面包括一个非抗原免疫特征表面。
37.如权利要求32所述的方法，其中这些合成纳米载体进一步包括一种T-细胞抗原。
38.如权利要求32所述的方法，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
39.如权利要求32所述的方法，其中该Thl偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一种或多种。
40.如权利要求32所述的方法，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
41.如权利要求32所述的方法，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
42.一种方法，包括识别患有一种症状的受试者； 提供一种包括合成纳米载体的组合物，这些合成纳米载体包括(I) 一个APC祀向特征，以及(2) —种偶合到这些合成纳米载体上的Thl偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；并且 将该组合物给予该受试者； 其中给予该组合物并不进一步包括同时给予一种与治疗该症状有关的抗原。
43.如权利要求42所述的方法，其中这些合成纳米载体进一步包括一种T-细胞抗原。
44.如权利要求42所述的方法，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
45.如权利要求42所述的方法，其中该ThI偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑 并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2_桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一种或多种。
46.如权利要求42所述的方法，其中该APC靶向特征包括一个免疫特征表面。
47.如权利要求46所述的方法，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
48.如权利要求42所述的方法，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
49.如权利要求42所述的方法，其中基于一个样品中合成纳米载体的总数，该样品中至少75%的合成纳米载体的最小尺寸是大于lOOnm。
50.如权利要求49所述的方法，其中在不同于给予该组合物的时间给予与治疗该症状有关的抗原。
51.如权利要求49所述的方法，其中这些合成纳米载体进一步包括一种T-细胞抗原。
52.如权利要求49所述的方法，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
53.如权利要求49所述的方法，其中该ThI偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2_桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-I中的一种或多种。
54.如权利要求49所述的方法，其中该APC靶向特征包括一个免疫特征表面。
55.如权利要求54所述的方法，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
56.如权利要求49所述的方法，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
57.—种方法,包括 提供一种包括合成纳米载体的组合物，这些合成纳米载体包括一种Thl偏向性免疫刺激剂和一个APC靶向特征； 将该组合物给予受试者；并且 在不同于向该受试者给予该组合物的时间，将给予对于他一个Thl偏向性应答是临床有益的一种抗原给予该受试者； 其中该抗原的给药包括被动给药或主动给药。
58.如权利要求57所述的方法，其中这些合成纳米载体包括一种聚合物基质。
59.如权利要求57所述的方法，其中该ThI偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一种或多种。
60.如权利要求57所述的方法，其中该APC靶向特征包括一个免疫特征表面。
61.如权利要求57所述的方法，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残基。
62.如权利要求57所述的方法，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
63.如权利要求57所述的方法，其中基于一个样品中合成纳米载体的总数，该样品中 至少75%的合成纳米载体的最小尺寸是大于lOOnm。
64.如权利要求63所述的方法，其中该合成纳米载体包括一种聚合物基质。
65.如权利要求63所述的方法，其中该ThI偏向性免疫刺激剂包括咪唑并喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-融合的环烷基咪唑并吡啶胺、以及1，2-桥接咪唑并喹啉胺、CpG、免疫刺激RNA、脂多糖、VSV-G、或HMGB-1中的一种或多种。
66.如权利要求63所述的方法，其中该APC靶向特征包括一个免疫特征表面。
67.如权利要求63所述的方法，其中该免疫特征表面包括烟碱和它的衍生物、甲氧基基团、带正电的胺基、唾液乳糖、以及亲和素和/或亲和素衍生物、以及任何以上物质的残 基。
68.如权利要求63所述的方法，其中这些合成纳米载体包括球状的、立方体的、圆柱体的、椎体的、或锥形的合成纳米载体。
全文摘要
在此披露了合成纳米载体组合物，以及相关方法，用于治疗其中希望产生Th1-偏向性免疫应答的疾病。一方面，本发明涉及用于治疗一种症状的一种组合物，所述组合物包括合成纳米载体，包括(1)一个免疫特征表面，以及(2)一种偶合到这些合成纳米载体上的Th1偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；其中该免疫特征表面并不包括处于足以激发对与治疗该症状有关的抗原的适应性免疫应答的量的与治疗该症状有关的抗原。另一方面，本发明涉及一种方法，包括识别患有一种症状的受试者；提供一种包括合成纳米载体的组合物，这些纳米载体包括(1)一种APC靶向特征，以及(2)一种偶合到这些合成纳米载体上的Th1偏向性免疫刺激剂；以及一种药学上可接受的赋形剂；并且将该组合物给予受试者；其中该组合物的给药并不进一步包括同时给予一种与治疗该症状有关的抗原。仍另一方面，本发明涉及一种方法，包括提供一种包括合成纳米载体的组合物，该纳米载体包括一种Th1偏向性免疫刺激剂和一种APC靶向特征；将该组合物给予受试者；并且在不同于将该组合物给予该受试者的时间将一种抗原给予其中希望有Th1偏向性应答的受试者；其中该抗原的给药包括被动给药或主动给药。
文档编号A61P39/00GK102686244SQ201080017898
公开日2012年9月19日 申请日期2010年4月21日 优先权日2009年4月21日
发明者格雷森·B·利甫福德, 罗伯特·L·布拉茨勒 申请人:西莱克塔生物科技公司