专利名称：开心果用于制备ace抑制剂的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于食品领域，具体地说，是关于开心果用于制备血管紧张素转化酶 (Angiotensin Converting Enzyme, ACE)抑制剂的应用。
背景技术：
开心果(pistacia vera L.),又名阿月浑子,是漆树科(Anacardiaceae)黄连木属 (Pistacia)的多年生落叶小乔木，是木本油料、干果、药用等多种用途的经济树种。阿月浑子这一名称来源于波斯语‘Peste’或‘Piste’，已有5000年的栽培历史。目前，世界上的主要开心果生产国有美国、伊朗、土耳其、希腊、叙利亚、阿富汗等国家。中国新疆等地也有栽培生产。每100克开心果含有47%的果壳，53%的果仁。开心果果仁中蛋白质含量为21 %， 脂肪含量为46%，碳水化合物含量为26%，纤维素含量为10%，钙含量为O. 11%，镁含量为0.1% (魏玉君等，阿月浑子生产现状及引种前景[J]，河南林业科技，2004，6，24 (2) 32-34;韩中海等，开心果的开发利用价值及建园技术[J]，安徽农业科学，2005，33 (10) 1828-1829 ;杨恒等，开心果的生物学特性及主要品种简述[J],陕西林业科技,2002 (4) 54-56 ;李建红，美国阿月浑子现状[J]，甘肃农业，2003(11) :75-76 ；USDA SR 18,2005. USDA National Nutrient Database for Standard Reference[N], Release 21 (2008). http://www. nal. usda. gov/fnic/food-comp/)。ACE(血管紧张素转化酶,Angiotensin Converting Enzyme)在人体内的作用是把血管紧张素 I (Angiotensin I Converting Enzyme)转化成血管紧张素 II (Angiotensin II Converting Enzyme)，而血管紧张素II为强烈的血管收缩物质，可使血管收缩，从而使体内血压升高。此外，ACE还可以失活体内调节血压的缓激肽，也从而使体内血压升高。ACE是一种金属肽酶，含有2个结合Zn2+的位点，即所谓“必须结合位点 (Obligatory Binding Site)”。Zn2+结合位点是ACE催化反应的活性基团所在部位。各种 ACE抑制物的共同作用是与ACE活性部位的Zn2+结合，使之失活。降血压肽是由数个氨基酸组成的肽，是对ACE活性区域亲和力较强的竞争性抑制剂，它们与ACE的亲和力比血管紧张素转化酶I (AngI)或舒缓激肽更强，而且也较不容易从 ACE结合区释放，降低ACE活性或使其失去活性，从而阻碍ACE催化血管紧张素I转化成血管紧张素II，使血管不收缩，以及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程，起到降血压的作用。到目前为止，未发现有关于利用开心果制备ACE抑制物或降血压药物的报道。
发明内容
本申请的发明人在长期研究开心果的用途的过程中发现，开心果果仁的水解产物具有明显的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。因此，本发明的目的在于提供一种开心果用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。根据本发明，所述开心果为开心果的果仁经蛋白酶水解、酸性水解或碱性水解后的产物。根据本发明的优选实施例，所述开心果的果仁包括脱脂和未脱脂的果仁。根据本发明的优选实施例，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、 木瓜蛋白酶、风味酶、菠萝蛋白酶以及胰蛋白酶。根据本发明的优选实施例，所述酸性水解的pH为2 6。根据本发明的优选实施例，所述碱性水解的pH为8 11。基于开心果具有抑制血管紧张素转化酶活性的作用，开心果可进一步用于开发具有降血压功能的食品或保健品。本发明为开心果的开发利用开辟了一条全新的途径，具有非常广泛的应用前景。
具体实施例方式以下结合具体实施例，对本发明的降血压多肽的制备方法作进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于实施本发明而非用于限定本发明的范围。以下实施例中，ACE抑制活性的测定原理及方法步骤如下开心果果仁蛋白水解物(多肽)的ACE抑制活性测定采用体外模拟测定，体外ACE 抑制率测试原理为底物马尿酰组氨酰亮氨酸(HHL)在酶ACE的催化作用下，可以生产马尿酸(Hip)和二肽，通过液相的方法测定马尿酸的含量，进而可以间接测定ACE酶的酶活；而 ACE抑制剂放入存在可以抑制ACE酶的活性，致使Hip的生成减少，从而间接反应了 ACE抑制肽的活性。测试方法步骤如下选取EP管作为反应器，编号0、1、2、3等，0号管加入5(^1^去离子水为对照，I、2、3等管加入50 μ L的ACE抑制剂，同时各管内加入50 μ L的底物HHL， 37°C温浴5min，然后加入10 μ L的ACE启动反应，在37°C水浴中反应40min，反应结束后， 加入100 μ L IM HCl终止反应。反应液进行高速离心，过4. 5μπι的滤头，然后进行高效液相色谱(HPLC)测定。HPLC条件是15%乙腈85%/Κ (O. 1% TFA)，检测波长228nm，柱温 30°C，上样量 IOyL ;ACE抑制率(X)按下式计算X = (A 对照-Al) /A 对照 X 100 %式中X—ACE抑制率)A对照一对照组生成Hip的峰面积Al—实验组生成Hip的峰面积实施例1-12、脱脂开心果果仁多肽水解物的制备取开心果，去壳，取果仁，捣碎研磨，收集，取一定量的开心果粉末，加乙醇脱脂3h， 反复水洗去乙醇，干燥，得脱脂开心果果仁粉。按表I所示，对获得的脱脂开心果果仁粉分别用不同的蛋白酶、酸性溶液和碱性溶液处理，具体如下酶水解称取IOg粉末加IOOml水，按照表I的蛋白酶水解条件，调pH值至相应的酶反应PH条件，加入相应的酶O. I % (w/v)，在相应的反应温度下水浴酶解2 5hr，搅拌，终止反应，水解物离心(12000r/min，IOmin)，取上清液，在_40°C冷冻干燥，收集水解物粉末。酸、碱水解称取IOg粉末加IOOml去离子水，分别用IM HCl和IM NaOH调pH值至2、4、6、8、10、11，50°C水浴6 9hr，离心取上清液，终止反应，水解物离心(12000r/min, IOmin)，取上清液在_40°C冷冻干燥，收集水解物粉末。表I、蛋白酶、酸、碱水解条件
权利要求
1.开心果用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。
2.如权利要求I所述的应用，其特征在于，所述开心果为开心果的果仁经蛋白酶水解、 酸性水解或碱性水解后的产物。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述开心果的果仁包括脱脂和未脱脂的果仁。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味酶、菠萝蛋白酶以及胰蛋白酶。
5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述酸性水解的pH为2 6。
6.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述碱性水解的pH为8 11。
7.开心果用于制备降血压食品或保健品的应用，其特征在于，所述降血压食品或保健品用于抑制血管紧张素转化酶的活性。
全文摘要
本发明公开了一种开心果用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。优选的，所述开心果为开心果的果仁经蛋白酶水解、酸性水解或碱性水解后的产物。本发明为开心果的开发利用开辟了一条全新的途径，具有非常广泛的应用前景。
文档编号A61K38/01GK102586375SQ20121004468
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月24日 优先权日2012年2月24日
发明者吴燕玲, 方明, 李鹏, 杜磊, 谢静莉, 魏东芝 申请人:华东理工大学